从β类淀粉样蛋白等氧化损伤角度探讨健脾填精方对轻度认知障碍的作用机制

目的:通过研究健脾填精方对轻度认知障碍(Mild Cognitive Impairment,MCI)患者血清中β类淀粉样蛋白(Aβ1-42)等氧化产物的影响,探讨本方作用机制;观察健脾填精方治疗MCI的临床疗效及安全性。方法:采用随机双盲方法,将100例MCI病人分成两组,治疗组50例应用"健脾填精方"(由人参、天麻、白术、巴戟天、黄连等组成),对照组50例应用"安慰剂",两组总疗程均为6月,检测两组患者用药前后血清中Aβ1-42、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乙酰胆碱酯酶(AchE)的浓度,观察治疗前后简易精神状态检查表(MMSE)、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)、日常生活能力量表(ADL)及中医症状积分值。结果:用药前后的MMSE、MoCA积分均显著提高,差异均有显著统计学意义(P<0.01);治疗组治疗前后ADL积分显著改善,差异有显著统计学意义(P<0.01);治疗组用药前后主要中医症状明显改善,两者差异有显著统计学意义(P<0.01);用药后治疗组较对照组血清Aβ1-42、MDA、AchE含量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);SOD含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:健脾填精颗粒剂可以从改善血清β淀粉样蛋白的代谢功能、提高机体抗氧化损伤能力等角度增强MCI患者的记忆功能,提高生活质量,对延缓MCI的发展具有一定的临床意义。

半导体激光疗法对轻度认知障碍病人β-类淀粉样蛋白的影响

1目的 观察半导体激光辐照疗法 (L ISCL T)对轻度认知障碍 (MCI)病人血清β-类淀粉样蛋白 (β-AP)的影响。2方法 选择临床确诊的 MCI病人进行半导体激光 (波长 6 70 nm ,功率 7～ 10 m W)鼻腔照射治疗 ,采用放射免疫分析法 (RIA )对 MCI病人治疗前后血清中的β- AP含量进行检测 ,并与对照组进行比较。3结果 治疗组血清β- AP较对照组明显增高 ,差异有显著意义 (t=3.48,P<0 .0 1) ;L ISCL T治疗 10次后 ,β- AP明显降低 ,与治疗前相比差异有显著意义 (t=3.5 7,P<0 .0 1)。4结论 L ISCL T可影响β- AP的代谢过程 ,对延缓 MCI的发展具有一定的临床意义。

β-类淀粉样蛋白放免分析法及其在老年痴呆症中的初步应用

本文利用 β 类淀粉样蛋白 (β -AP)片断与甲状腺球蛋白经戊二醛偶联为免疫原 ,免疫新西兰兔 ,6个月后获得抗体 ,建立了高灵敏度的 β -AP放射免疫分析法。批内和批间CV分别为 8%和 14%。平均回收率为96 %。 41名正常人血清 β AP浓度为 39± 5 .5 pg/mL。 6 0例老年痴呆症患者 ,血清β AP浓度明显高于对照组 (P<0 .0 1)。本文结果表明 ,测定血清 β -AP浓度 ,可作为一项检查老年痴呆症的指标。

从β类淀粉样蛋白等氧化损伤角度探讨健脾填精方对轻度认知障碍的作用机制

目的通过研究健脾填精方对轻度认知障碍(MCI)患者血清中β类淀粉样蛋白(Aβ1-42)等氧化产物的影响,探讨本方作用机制;观察健脾填精方治疗MCI的临床疗效及安全性。方法采用随机双盲方法,将100例MCI患者分成两组,治疗组50例应用健脾填精方治疗,对照组50例应用安慰剂治疗,两组总疗程均为6个月,检测两组患者用药前后血清中Aβ1-42、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乙酰胆碱酯酶(AchE)的浓度,观察治疗前后简易精神状态检查表(MMSE)、蒙特利尔认知评估量表(Mo-CA)、日常生活能力量表(ADL)及中医症状积分值。结果治疗组治疗后MMSE、MoCA积分均显著提高(P<0.01),ADL积分、中医症状积分明显改善(P<0.01);用药后治疗组较对照组血清Aβ1-42、MDA、AchE含量明显降低,SOD含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论健脾填精颗粒剂可以从改善血清β淀粉样蛋白的代谢功能,提高机体抗氧化损伤能力等角度增强MCI患者的记忆功能,提高生活质量,对延缓MCI的发展具有一定的临床意义。

还脑益聪方对老龄大鼠学习记忆及脑组织β类淀粉样蛋白和P物质水平的影响

目的:观察还脑益聪方对老龄大鼠学习记忆功能及脑组织β类淀粉样蛋白(β-AP)和P物质(S.P)水平的影响。方法:以Morris水迷宫试验检测老龄大鼠的空间学习记忆能力,将学习记忆减退的40只大鼠用随机表分成4组,每组10只。即模型(记忆减退老龄大鼠)对照组、还脑益聪方大剂量(13.68 g生药/kg)组、小剂量(6.84 g生药/kg)组和阳性药物对照组(盐酸多奈哌齐片,0.45 mg/kg)组,另取学习记忆能力正常老龄大鼠10只为正常对照组,给与等量水,其余灌胃给药8周。观察测定老龄大鼠的空间学习记忆能力和脑组织匀浆测定β-AP和P物质含量,并检测大鼠血清超氧化物岐化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量,以HE染色观察大鼠脑组织形态学的病理变化。结果:模型组老龄大鼠在水迷宫中的游泳时间、路径长度明显延长。给药8周后,还脑益聪方大、小剂量组大鼠游泳持续时间、路径长度较模型组显著缩短,寻找平台的方式有所改进。和正常老龄大鼠组比较,模型组大鼠MDA含量显著升高,SOD活力显著降低。与模型组比较,给药组大鼠脑组织的β-AP含量下降和P物质水平增加,血清SOD水平显著升高(P<0.01),脑组织形态结构得到改善。结论:还脑益聪方可降低β-AP在老龄大鼠脑组织的沉积,保护脑组织海马形态的完整性,从而改善老龄大鼠空间学习记忆能力。

α_1-抗糜蛋白酶对类淀粉样蛋白Aβ_(1-42)诱导细胞表达核转录因子的影响

目的研究α_1 抗糜蛋白酶(ACT)与类淀粉样蛋白Aβ_(1-42)在体外形成复合物的性质,以及该复合物对神经母细胞瘤细胞(Kelly)表达核转录因子过氧化物酶体增殖子激活受体γ(PPARγ)和核因子κB(NFκB)的影响。方法Aβ_(1-42)与ACT溶液以10∶1mol/L混合,用琼脂糖凝胶电泳检测2h和24h反应产物Aβ_(1-42)/ACT(2h)、Aβ_(1-42)/ACT(24h),电泳迁移率检测法(EMSA)检测Aβ_(1-42)/ACT复合物对Kelly细胞表达PPARγ和NFκB的影响。结果Aβ_(1-42)与ACT分子之间可以结合形成复合物,而且复合物的功能随反应时间的不同而不同与对照组细胞相比,Aβ_(1-42)/ACT(2h)使Kelly细胞对PPARγ和NFκB的表达分别增加158% (P<0 05)和77% (P<0 05),而Aβ_(1-42)/ACT(24h)和Aβ_(1-42)、ACT单个分子则无类似作用。结论PPARγ和NFκB是调节人体炎性反应过程的重要细胞核转录因子,与阿尔茨海默病(AD)的病理改变相关。ACT通过与Aβ_(1-42)结合影响两种细胞因子的表达,可能是AD中神经系统炎性反应平衡失调的病理通路之一,提示对AD的发病有影响。

慢性乙醇中毒脑β-淀粉样前体蛋白与外伤性蛛网膜下腔出血死亡的关系

目的观察大鼠慢性乙醇中毒下脑组织轻微伤后β-淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,β-APP)的表达,探讨乙醇中毒与外伤性蛛网膜下腔出血(traumatic subarachnoid haemorrhage,TSAH)死亡的相关性。方法雄性SD大鼠60只,随机分为灌水组、灌水打击组、灌酒组、灌酒打击组。灌酒组以食用酒连续灌胃4周,打击组予脑震荡打击,各组大鼠脑组织行HE、免疫组织化学染色,组织病理图像系统量化分析检测结果。结果灌水组脑无异常;灌水打击组全脑神经元轻度水样变性;灌酒组脑表面可见血管纹理,神经纤维排列稍疏松、间隙增大;灌酒打击组脑表面弥漫性淤血,脑干周围多见厚层斑片状TSAH,轴索不规则断裂。灌酒组额叶、海马、小脑、脑干β-APP IOD值高于灌水打击组及灌酒打击组。结论慢性乙醇中毒脑组织的耐受性明显下降,轻微损伤情况下即可引起致死性TSAH和神经病理学变化。

二苯乙烯苷对淀粉样前体蛋白/早老蛋白-1双转基因小鼠脑组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和淀粉样前体蛋白表达的影响

目的观察二苯乙烯苷(TSG)对淀粉样前体蛋白(APP)/早老蛋白-1(PS1)双转基因小鼠脑组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、APP表达水平的影响,探讨其防治AD的可能机制。方法 2014年10月,将50只SPF级、雄性、APP/PS1双转基因小鼠按照随机数字表法分为模型组、石杉碱甲组、TSG低剂量组、TSG中剂量组、TSG高剂量组,每组10只。并选取10只SPF级、雄性、C5B7L/6J小鼠为正常对照组。石杉碱甲组小鼠灌胃给予石杉碱甲0.020 mg/kg,TSG低剂量组、TSG中剂量组、TSG高剂量组小鼠分别灌胃给予TSG 0.033、0.100、0.300 g/kg,模型组、正常对照组小鼠灌胃给予0.9%氯化钠溶液10.000 ml/kg;1次/d,连续给药60 d。采用免疫组化法检测各组小鼠脑皮质和海马区caspase-3阳性细胞数,Western blotting法检测各组小鼠脑组织APP表达水平。结果正常对照组、石杉碱甲组、TSG低剂量组、TSG中剂量组、TSG高剂量组小鼠脑皮质、海马区caspase-3阳性细胞数少于模型组(P<0.05);TSG低剂量组、TSG中剂量组、TSG高剂量组小鼠脑皮质、海马区caspase-3阳性细胞数与石杉碱甲组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。正常对照组、石杉碱甲组、TSG低剂量组、TSG中剂量组、TSG高剂量组小鼠脑组织APP表达水平均低于模型组(P<0.05);TSG低剂量组、TSG中剂量组、TSG高剂量组小鼠脑组织APP表达水平与石杉碱甲组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TSG对APP/PS1双转基因小鼠有明显的治疗作用,其防治AD的机制可能与抑制caspase-3和APP表达、减少β淀粉样蛋白产生、减缓神经元凋亡等机制有关。

N-甲基-D-天冬氨酸受体抑制剂盐酸美金刚对老年性痴呆大鼠β-淀粉样前体蛋白及β分泌酶表达的影响

目的探讨N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体抑制剂盐酸美金刚对老年性痴呆(AD)大鼠β-淀粉样前体蛋白(APP)及β分泌酶(BACE1)表达的影响。方法 30只SD大鼠随机数字表法分为假手术组、模型组、治疗组(盐酸美金刚组);除假手术组外,其余两组大鼠海马注射10μgβ-淀粉样蛋白(Aβ)1-40构建AD大鼠模型,治疗组大鼠腹腔注射10 mg·kg^(-1)·d^(-1)盐酸美金刚,其余两组给予等量生理盐水,连续给药14 d,并于第1、3、7、14天采用Morris水迷宫实验检测大鼠的空间学习记忆能力,于14 d处死大鼠取血及海马组织。ELISA法检测血清及海马组织中Aβ含量,western blot及RT-PCR法检测海马组织中APP和BACE1蛋白及mRNA表达量。结果与假手术组比较,模型组大鼠水迷宫潜伏期延长,Aβ含量显著提高,APP及BACE1蛋白及mRNA含量显著提高,均差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,治疗组大鼠水迷宫潜伏期缩短,Aβ含量显著降低,APP及BACE1蛋白及mRNA含量显著下降,均差异有统计学意义(P<0.01)。结论盐酸美金刚能通过阻断APP裂解,从而抑制AD大鼠海马组织中Aβ沉积。

硒对人神经母细胞瘤细胞β-淀粉样蛋白表达影响

目的探讨亚硒酸钠对人神经母细胞瘤细胞β-淀粉样蛋白（Aβ）表达的影响。方法将人神经母细胞瘤细胞和稳定表达淀粉样前体蛋白的人神经母细胞瘤细胞培养6-8d,先后用不同浓度的亚硒酸钠和4-羟基壬烯酸（HNE）各处理24h后收获细胞。用直接荧光法检测α-、β-、γ-分泌酶活性;用酶联免疫吸附试验检测细胞中分泌型β-淀粉样蛋白（sAPPβ）、Aβ-40和Aβ-42的表达;用Western Blotting和Real-time PCR技术分别测量淀粉蛋白前β位分解酶1（BACE1）蛋白和mRNA的表达。结果亚硒酸钠处理后细胞中β-、γ-分泌酶活性降低,差异具有统计学意义（F=31、16,P〈0.05）;sAPPβ、Aβ-40、Aβ-42表达减少,差异具有统计学意义（F=56,t=13、12,P〈0.01）;BACE1蛋白和mRNA的表达减少,差异具有统计学意义（F=9 161、213,P〈0.01）。结论亚硒酸钠可能通过限制HNE介导的BACE1的表达降低Aβ的产生。

基于蛋白质类淀粉样聚集的表面功能化

表面改性在各个领域都扮演着重要的角色,其在不改变材料本身性质的前提下,赋予材料新的性能和更高的价值.然而制约先进界面材料进一步应用发展的一个关键难题为缺少一种简单温和、高效环保和无色透明的普适性界面改性体系.自类淀粉样蛋白质用于界面改性被报道以来,该体系引起了学术界的广泛关注和研究,一系列不同形态结构的蛋白质基材料如纳米薄膜、纳米纤维、大颗粒聚集体(产物)、水凝胶及气凝胶等被成功发展.本综述首先阐述了蛋白质类淀粉样聚集的基本原理,然后总结了蛋白质类淀粉样聚集作为表面改性体系在生物医用涂层、分离/透析、生物矿化、柔性电子、智能织物、化学催化和环境污染物去除等方向的应用,最后指出该体系存在的不足并对未来发展方向进行了展望.

siRNA干扰跨膜转运蛋白21的表达对KO小鼠胚胎成纤维细胞γ分泌酶活性的影响

目的探讨跨膜转运蛋白21(TMP21)对γ分泌酶活性的影响。方法将淀粉样前体蛋白基因缺陷型KO小鼠胚胎成纤维细胞[MEF(KO)]分为转染组(T)和对照组(C),转染组转染载有TMP21小分子干扰RNA(siRNA)的质粒,对照组转染空质粒。每组均制备包含细胞全膜蛋白的样品(T1、C1),经CHAPSO进一步溶解后超速离心制备所得纯化全膜蛋白样品(T2、C2),用γ分泌酶组分早老蛋白1(PS-1)特异性抗体免疫沉降C2或T2后获得的γ分泌酶样品(IPT2、IPC2)。蛋白质印迹法检测各类样品中γ分泌酶重要组分TMP21、PS-1和Nicastrin(NCT)蛋白表达量;应用ELISA法检测β淀粉样肽40和β淀粉样肽42的生成总量。结果蛋白质印迹法检测显示,TMP21蛋白表达量在转染组样品IPT2中为5294±247ng/ml,在对照组样品IPC2中为19110±579ng/ml,组间差异有统计学意义(P<0.05);各类样品中PS-1与NCT蛋白表达量无明显变化;TMP21可与PS-1共沉降。ELISA法检测显示,转染组样品IPT2与饱和浓度底物C99反应生成的β淀粉样肽40和β淀粉样肽42总量为348±18pg/ml,对照组样品IPC2为与饱和浓度底物C99反应生成的β淀粉样肽40和β淀粉样肽42总量为342±18pg/ml,组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论TMP21可能为γ分泌酶的组分之一。在TMP21蛋白低表达状态下γ分泌酶活性升高,提示TMP21为γ分泌酶的负调控因子之一。

淀粉样前体蛋白在恶性肿瘤中的作用及研究进展

淀粉样前体蛋白（amyloid precursor protein,APP）及其家族成员类淀粉样前体蛋白1和2（amyloid precursor-like protein 1/2,APLP1/2）是高度保守的Ⅰ型跨膜糖蛋白,表达于各种组织细胞中。近年来报道,APP和APLP2在多种恶性肿瘤细胞中表达升高,并与癌症的发生、进展密切相关,从而受到越来越多的关注。APP与肿瘤坏死因子受体超家族中的死亡受体6（death receptor 6,DR6）参与癌细胞的增殖、转移和侵袭。了解APP在恶性肿瘤中的表达及作用将为临床在癌症的诊断及治疗上提供新的方法和理论依据,有望成为抗癌药物候选作用靶点。

β-淀粉样蛋白前体蛋白裂解酶1相关干预策略在阿尔采末病治疗的研究进展

阿尔采末病(AD)是一种进行性的神经退行性疾病,其发病原因是脑内β淀粉样蛋白(Aβ)的聚集和沉积。Aβ是由淀粉样蛋白前体经β-分泌酶和γ-分泌酶剪切代谢生成,而β-淀粉样蛋白前体蛋白裂解酶1(BACE1)是该过程的限速酶,抑制BACE1的活性可减少Aβ的产生,因此BACE1成为人们关注治疗AD的热门靶点。本文对近年来BACE1靶点在阿尔采末病治疗中的研究和进展进行综述。

胰岛素信号通路磷脂酰肌醇-3激酶／丝氨酸苏氨酸蛋白激酶对海马神经元β-淀粉样前体蛋白裂解酶1表达的影响

目的通过胰岛素和磷脂酰肌醇-3激酶（P13K）抑制剂渥曼青霉素（wortmannin，WORT）对P13K／丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（P13K／Akt）信号通路的激活和抑制作用，观察P13K／Akt信号通路对海马神经元β-淀粉样前体蛋白裂解酶1（BACEI）表达的影响。方法40只sD大鼠随机分为空白对照组、假手术组、胰岛素组和WORT组（每组10只），海马立体定向注射胰岛素和PDK抑制剂WORT。免疫组织化学和Westernblot法检测P13K／Akt信号传导相关蛋白以及BACEI的表达水平。结果注射胰岛素的海马P13K信号通路下游信号分子较对照组：Akt表达增加（0．952±O．060与0．835±0．029，t=4．9150，P=0．0001），Aktser473位点磷酸化（pAkt）水平上调（0．800±O．075与0．657±0．025，t：4．5598，P=0．0002），糖原合成激酶-3α（GSK-3α）磷酸化水平降低（0．604±0．062与0．726±0．041，t=3．5871，P=0．0018），而成熟的BACEl及其裂解产物p分泌酶C末端（母-CTF）表达下调。WORT组的P13K下游信号分子Akt、pAkt表达明显被抑制，磷酸化GSK-3仪表达增加，同时成熟的BACE1（1．004±0．096）和β-CTF（1．031±0．048）的表达较对照组（分别0．498±O．064，0．786±O．101）上调（分别t=11．5980，P=0．0000；t=4．2194，P=0．0004）。结论胰岛素信号通路P13K／Akt可以调节BACE1的表达和活性并参与阿尔茨海默病的发病机制。

外源性H_2 S通过调节β-位淀粉样前体蛋白裂解酶1表达对PC12细胞APP/Aβ代谢的影响

目的观察外源性硫化氢对嗜铬细胞瘤细胞β-位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)的调节作用,进而探讨其对淀粉样前体蛋白/β-位淀粉样蛋白代谢途径的影响。方法用硫氢化钠作外源性H_2S供体,实验设空白对照组、NaHS 50 μmol/L组、NaHS 100μmol/L组和NaHS 200 μmol/L组,按分组浓度处理PC12细胞24 h后,RT-PCR和Western blot法检测细胞内BACE1 mRNA及蛋白表达,并用Western blot法继而检测APP代谢过程中关键蛋白APP、C99、C83表达变化,ELISA法检测细胞培养液中Aβ40和Aβ42水平。结果 NaHS在实验浓度范围内从基因与蛋白两个水平上呈剂量依赖性下调BACE1表达,并下调C99、Aβ40和Aβ42蛋白表达,上调C83蛋白,各NaHS组分别与对照组比较,差别均有统计学意义(P<0.05),而对APP蛋白表达没有影响,各组间比较差别无显著性(P>0.05)。结论外源性H_2S具有通过调节PC12细胞BACE1表达下调APP/Aβ代谢的作用。

α7尼古丁受体基因抑制对SH—SY5Y细胞β淀粉样蛋白生成的影响

目的通过RNA干扰技术抑制神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y细胞）中胡神经型尼古丁乙酰胆碱受体（nAChR）的基因表达，以了解α7nAChR对β淀粉样蛋白（AB）的影响，进一步探讨阿尔茨海默病的发病机制。方法SH-SY5Y细胞转染α7nAChR的小干扰RNA（siRNA），用real-timePCR法和蛋白免疫印迹法分别测定细胞中α7nAChR、β分泌酶两个亚型（BACE1和BACE2）在mRNA和蛋白表达水平的变化；用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定Aβ1-42含量的变化。结果转染α7nAChRsiRNA后，与对照组相比，α7nAChRmRNA及蛋白表达水平分别降低了84％和79％（P〈0．01）；BACElmRNA及蛋白表达水平分别升高了527％和71％（P〈0．01）；BACE2mRNA及蛋白表达水平分别降低了58％和75％（P〈0．01）；Aβ1-42含量升高了208％（P〈0．01）。结论α7nAChR基因表达抑制后Aβ含量明显升高，其机制可能与BACE1表达上升和BACE2表达抑制有关，这种改变可能与阿尔茨海默病的发病有一定的关系。

阿尔茨海默病患者AD7C-NTP和Aβ42检测的价值探讨

目的探讨尿中阿尔茨海默病相关神经丝蛋白和血中β淀粉样蛋白42（Aβ42）在阿尔茨海默病、血管性痴呆患者和健康老人含量的变化及其诊断价值。方法采用酶联免疫吸附测定法检测140例标本尿中神经丝蛋白及血中A1342的含量，其中早期阿尔茨海默病组16例、中晚期阿尔茨海默病组34例，血管性痴呆组50例，智能正常老年对照组40例，并进行统计比较和相关性分析。结果早期、中晚期阿尔茨海默病组尿液中神经丝蛋白含量分别为：4．08±0．86ng／m1，15．88±6．01ng／ml，明显高于智能正常组0．53±0．29ng／m1，差异有统计学显著性意义（q值依次为3．86，15．35，P值均〈0．05），且神经丝蛋白的含量与痴呆程度呈正相关；早期阿尔茨海默病组血中AB42：146．06±5．73pg／ml，明显高于智能正常组：92．44±3．24pg／ml，差异有统计学显著性意义（q=56．62，P〈0．05），但中晚期组：84．36±2．65pg／ml，与智能正常组差异无统计学显著性意义（q=2．7，P〉0．05）。结论阿尔茨海默病患者尿中神经丝蛋白含量增加并与疾病的严重程度相关，测定其含量对诊断及病情评估有重要的价值。血中Aβ42对早期阿尔茨海默病诊断及评估具有重要意义，但随疾病的进展Aβ42的诊断价值不及神经丝蛋白。