类甲基转移酶3通过促进叉头框蛋白O3的N6-甲基腺苷修饰及其表达参与糖尿病诱导的内皮细胞凋亡

目的探讨类甲基转移酶3(METTL3)通过促进叉头框蛋白O(FOXO)3的N6-甲基腺苷修饰(m6A)及其表达参与糖尿病诱导的内皮细胞凋亡的机制。方法构建晚期糖基化终末产物(AGE)诱导的人主动脉内皮细胞(HAEC)损伤模型,将HAEC分为6组:细胞对照组、细胞AGE组、细胞对照+阴性对照小干扰RNA(siRNA)组、细胞AGE+阴性对照siRNA组、细胞AGE+FOXO3 siRNA组、细胞AGE+METTL3 siRNA组,每组设置3个平行组。采用甲基化RNA免疫沉淀测序(MeRIP-Seq)及生物信息学技术检测并分析其m6A修饰谱,采用RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)检测FOXO3 mRNA的m6A修饰水平,采用流式细胞术检测细胞凋亡,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测FOXO3 mRNA表达水平,Western blotting法检测FOXO3和METTL3蛋白水平。6只6周龄载脂蛋白E基因敲除雄性小鼠按随机数字表法分为单纯动脉粥样硬化组和糖尿病动脉粥样硬化组,每组均为3只。通过Western blotting检测小鼠FOXO3、METTL3蛋白表达,采用免疫荧光共定位检测小鼠FOXO3、METTL3在内皮细胞中的表达。采用两独立样本t检验进行组间比较。结果与细胞对照组相比,细胞AGE组的总m6A修饰及FOXO3的m6A修饰显著升高(P<0.001),FOXO3和METTL3的蛋白表达显著升高(P<0.05)。与单纯动脉粥样硬化组相比,糖尿病动脉粥样硬化组小鼠主动脉斑块区域内皮细胞的FOXO3和METTL3的蛋白表达显著升高(P<0.05)。与细胞AGE+阴性对照siRNA组相比,细胞AGE+FOXO3 siRNA组的凋亡显著降低(P<0.01)。与细胞AGE+阴性对照siRNA组相比,细胞AGE+METTL3 siRNA组FOXO3的m6A修饰(P<0.001)及FOXO3蛋白表达均显著下降(P<0.05),且凋亡显著降低(P<0.001)。结论AGE诱导的HAEC中m6A修饰发生了显著变化,METTL3通过促进FOXO3 mRNA的m6A修饰并调控其表达,从而参与糖尿病诱导的血管内皮细胞凋亡。

类甲基化转移酶3(METTL3)在免疫细胞和造血干细胞中的作用研究进展

腺嘌呤第6位氮原子上发生的甲基化修饰(m6A)是真核生物mRNA中最常见的甲基化修饰,m6A作为一种动态可逆修饰,参与众多生物学过程.类甲基化转移酶3(METTL3)是构成m6A甲基转移酶复合体的核心组分,负责催化RNA发生m6A修饰.近年的研究发现,METTL3通过调控m6A水平,调节T淋巴细胞的分化和功能的维持、巨噬细胞的活化和极化以及树突状细胞的激活等过程,进而调控免疫反应和有关疾病的发生和发展;同时很多研究也报导,METTL3在内皮造血转化、造血干细胞的自我更新、增殖分化以及细胞周期调控方面也具有重要作用,这为临床上治疗血液系统的有关疾病提供了新思路.

组蛋白去乙酰化酶2在帕金森病中的作用及机制研究

目的旨在探究组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)通过类甲基化转移酶3(METTL3)/细胞因子信号抑制因子3(SOCS3)轴调控帕金森病(PD)中神经元死亡的作用机制。方法SH-SY5Y细胞分组:Control组、MPP^(+)组、MPP^(+)+HDAC2抑制剂组、MPP^(+)+HDAC2抑制剂+sh-NC组、MPP^(+)+HDAC2抑制剂+sh-METTL3组。观察各组细胞在细胞死亡、细胞活性、HDAC2、METTL3、SOCS3、组蛋白H3赖氨酸18乳酸化(H3K18la)方面的差异。比较oe-NC组及oe-METTL两组SOCS3的m6A修饰水平、METTL3在SOCS3上的富集程度、METTL3表达、SOCS3表达、SOCS3 mRNA稳定性。结果MPP^(+)组与Control组相比,HDAC2基因和蛋白相对表达量升高(P<0.05),细胞死亡率升高(P<0.05),细胞活性及H3K18la在METTL3上的富集程度降低(P<0.05),METTL3、H3K18la、SOCS3均下调(P<0.05)。MPP^(+)+HDAC2抑制剂组与MPP^(+)组相比,细胞死亡率降低(P<0.05),细胞活性及H3K18la在METTL3上的富集程度升高(P<0.05),METTL3、H3K18la、SOCS3上调(P<0.05)。MPP^(+)+HDAC2抑制剂+sh-NC组与MPP^(+)+HDAC2抑制剂组在细胞死亡率、细胞活性、METTL3表达、SOCS3表达上无差异(P>0.05)。MPP^(+)+HDAC2抑制剂+sh-METTL3组与MPP^(+)+HDAC2抑制剂+sh-NC组相比,细胞死亡率升高(P<0.05),细胞活性降低(P<0.05),METTL3及SOCS3表达下调(P<0.05)。Oe-METTL3与oe-NC组比较,SOCS3的m6A修饰水平及METTL3在SOCS3上的富集程度升高(P<0.05),METTL3及SOCS3升高(P<0.05),SOCS3 mRNA稳定性升高(P<0.05)。结论在PD中HDAC2通过诱导METTL3组蛋白去乳酸化抑制METTL3表达,这一机制引起SOCS3的m6A修饰水平降低,并导致SOCS3表达下调,进而促进PD发病。

类DNA甲基转移酶蛋白3(DNMT3L)基因SNP rs2070565多态性与少精症的相关性

目的:研究类DNA甲基转移酶蛋白3(DNMT3L)基因rs2070565多态性与少精症的相关性。方法:应用PCR-RFLP分析方法,在198名少精症患者(少精症组)和249名正常的男性个体(正常对照组)中,对DNMT3L基因rs2070565位点的基因频率和基因型频率分布进行调查。结果:在少精症和正常男性中rs2070565位点的等位基因频率分布存在差异,少精症组中等位基因A的频率显著高于正常对照组(20.7%vs 14.9%,P=0.03)。结论:DNMT3L基因rs2070565位点的多态性与少精症相关,等位基因A可能增加少精症的易感性。