大叶落地生根类糖原合成激酶KdSK基因的克隆与表达分析

类糖原合成酶激酶(SKs)属于丝氨酸/苏氨酸类蛋白激酶,在植物器官发育、激素信号传导过程中十分重要,并参与生物胁迫、非生物胁迫的应答过程。大叶落地生根中的胎生苗发育过程,同时具备胚胎发生和器官发生的特征,是研究无性生殖的理想模型。为了更好地理解大叶落地生根中胎生苗发育的分子机制,该研究利用RACE-PCR技术,从大叶落地生根中克隆了1个新的基因KdSK。该基因具有423个氨基酸残基,分子量为47.79 kD,等电点为8.37,其开放阅读框长为1 272 bp。其蛋白与黄瓜的同源性最高,属于植物类GSK3/shaggy蛋白激酶家族的第Ⅳ类,与苜蓿(MSK4)蛋白在进化关系上最近,且与拟南芥(AtSK4-1、AtKSK4-2)聚为一枝。保守域结构分析表明,KdSK蛋白具有明显的蛋白激酶的结构域,包括蛋白激酶的ATP结构域和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活化结构域。实时荧光定量PCR分析表明,该蛋白基因在大叶落地生根的根中表达量最高,且受渗透胁迫(甘露醇)的诱导上调表达。该研究首次从大叶落地生根中克隆出KdSK基因,该研究结果为进一步研究该基因的功能打下了基础。

瑞芬太尼痛觉过敏大鼠糖原合成酶激酶-3β表达水平的变化

目的探讨切口痛一瑞芬太尼痛觉过敏大鼠脊髓糖原合成酶激酶（GSK）-3β表达水平的变化。方法尾静脉置管成功的雄性sD大鼠32只，体质量240～260g，随机数字表法分为4组（n=8），瑞芬太尼组（R组）、切口痛组（I组）、瑞芬太尼＋切口痛组（R＋I组）和对照组（C组）。于麻醉前24h、麻醉后2、6、24和48h，分别采用Von-Frey丝法和热板法测定机械刺激缩足阈值（邢汀）和热刺激缩足潜伏期（PWL），最后一次测定痛阈后处死大鼠，取脊髓L4；节段，采用实时定量聚合酶链式反应法测定脊髓GSK-3βmRNA表达水平的变化，采用免疫印迹（Westernblot）法测定脊髓GSK．3B及pGSK-3p表达水平的变化并计算pGSK-3β／GSK-3p比值。结果R组、I组、R＋I组均发生痛觉过敏，且R＋I组痛觉过敏的程度高于R组和I组。4组中R＋I组GSK-3βmRNA表达水平最高，是C组的4．4倍，GSK．3p表达水平最高，是C组的3．7倍，且pGSK．3β／GSK-3p比值最小，与C组比较，减少了57．0％（P〈0．05）。结论术中应用瑞芬太尼麻醉可加重切口痛导致的痛觉过敏；切口痛．瑞芬太尼痛觉过敏大鼠脊髓GSK-3BmRNA表达升高，GSK．3B表达水平升高，且pGSK-3β／GSK-3β比值减小，该变化可能参与了切口痛．瑞芬太尼痛觉过敏形成的机制。

糖原合成酶激酶3β在乙型重型肝炎肝衰竭中的作用研究

目的探讨细胞内信号分子糖原合成酶激酶（GSK）30在HBV引起的重型肝炎肝衰竭发生过程中的作用。方法收集2009年至2011年北京佑安医院就诊患者中慢性乙型肝炎患者（12例，慢乙型肝炎患者组）和HBV感染引起的重型肝炎肝衰竭患者（12例，乙型重型肝炎肝衰竭组）以及正常人（8例，对照组）的肝组织资料，进行各项临床检测指标的统计分析，用细胞裂解液匀浆提取蛋白，用GSK3D活性测定试剂盒检测肝组织中GSK3D活性，用Westernblot方法检测p-GSK3、GSK3、β-肌动蛋白的表达；制备石蜡切片进行免疫荧光检测。用LSD-t检验进行组间比较，P〈0．05为差异有统计学意义。结果Westernblot结果显示，与对照组相比，慢性乙型肝炎患者组GSK3β第9位丝氨酸磷酸化程度上升，活性下降，重型肝炎肝衰竭患者组GSK3β第9位丝氨酸磷酸化程度显著下降，即GSK3β活性显著上升（P=0．0342）；同时，免疫荧光方法对各组样本进行检测结果显示乙型重型肝炎肝衰竭组GSK3D磷酸化水平显著下降，证明其活性明显增高；最后，GSK3D活性检测试剂盒进行GSK3β活性检测，与Westernblot和免疫荧光结果相一致，重型肝炎肝衰竭患者中GSK3β涪性显著增加，与对照组相比，P=0．0289。结论GSK3活性在重型肝炎肝衰竭发生过程中被激活，因此其是重型肝炎肝衰竭发病机制中的一种重要信号分子，抑制其活性可能在重型肝炎肝衰竭的预防和治疗中发挥一定的作用。

α-硫辛酸对血糖波动状态下2型糖尿病大鼠血管内皮细胞功能及PI3K/Akt/GSK-3β通路的影响

目的观察α-硫辛酸(α-LA)对血糖波动状态下2型糖尿病(T2DM)大鼠血管内皮细胞功能及磷脂酰肌醇3磷酸激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合酶激酶3β(GSK-3β)通路的影响,初步探讨其作用机制。方法 2013年7—12月,选取50只清洁级雄性Sprague Dawley(SD)大鼠,采用普通饲料适应性喂养2周后,采用随机数字表法抽取10只作为正常组(NOR组),余下40只大鼠建造T2DM模型,给予高脂饲料6周后,一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)35 mg/kg,然后给予普通饲料2周,并于第10周连续尾静脉采血检测空腹血糖(FBG),计算空腹血糖变异系数(FBG-CV),以FBG>16.7 mmol/L视为造模成功,共造模成功T2DM大鼠36只;NOR组始终给予普通饲料,并在相同时间点一次性腹腔注射等体积的柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液,且运用相同方法检测7次FBG,并计算FBG-CV。将造模成功的T2DM大鼠,以FBG-CV>2倍NOR组FBG-CV为波动高糖组(BHG组,24只,选取FBG-CV较大的20只进行实验),以NOR组FBG-CV<FBG-CV≤2倍NOR组FBG-CV为稳定高糖组(SHG组,12只,选取FBGCV较小的10只进行实验)。采用随机数字表法将BHG组大鼠分为α-LA组(10只)和波动高糖对照组(FHG组,10只)。α-LA组给予高脂饲料,灌服α-LA混悬液;FHG组给予高脂饲料,灌服等体积蒸馏水;NOR组给予普通饲料,灌服等体积蒸馏水;SHG组给予高脂饲料,灌服等体积蒸馏水。干预8周后,检测各组大鼠FBG、空腹血浆胰岛素(FINS)水平,血管内皮细胞损伤指标[肝细胞生长因子(HGF)、一氧化氮(NO)]、氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、糖基化终末产物(AGEs)]水平,PI3K/Akt/GSK-3β通路蛋白[Akt、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、GSK-3β、磷酸化糖原合酶激酶3β(p-GSK-3β)]水平及Akt、GSK-3β激活程度(p-Akt/Akt、pGSK-3β/GSK-3β)。结果 SHG组、FHG组大鼠体质量、FINS水平低于NOR组,FBG水平高于NOR组(P<0.05);α-LA组大鼠体质量低于NOR组,FBG水平高于NOR组(P<0.05);α-LA组大鼠FBG水平低于FHG组,FINS水平高于FHG组(P<0.05)。SHG组、FHG组大鼠HGF、NO、MDA、AGEs水平高于NOR组,SOD水平低于NOR组(P<0.05);SHG组、α-LA组大鼠HGF、NO、MDA、AGEs水平低于FHG组,SOD水平高于FHG组(P<0.05);α-LA组大鼠SOD水平低于NOR组,MDA水平高于NOR组(P<0.05)。SHG组、FHG组大鼠p-Akt水平、p-GSK-3β水平、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β低于NOR组(P<0.05);α-LA组大鼠p-Akt水平、p-Akt/Akt低于NOR组,GSK-3β水平、p-GSK-3β水平高于NOR组(P<0.05);SHG组大鼠p-Akt水平、p-Akt/Akt高于FHG组(P<0.05);α-LA组大鼠p-Akt水平、GSK-3β水平、p-GSK-3β水平、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β高于FHG组(P<0.05)。结论α-LA对血糖波动状态下T2DM大鼠血管内皮细胞功能具有保护效应,其机制与α-LA改善氧化应激、调控PI3K/Akt/GSK-3β通路蛋白表达相关。

阿尔茨海默病小鼠Wnt信号通路相关蛋白表达水平及意义

目的分析阿尔茨海默病(AD)小鼠Wnt信号通路相关蛋白表达水平及意义。方法 96只C57小鼠随机分为实验组和对照组,每组48只。实验组为APP/PS1双转基因小鼠,分为1、3、5及12月龄4组(对应月龄处死),每组12只;对照组为正常C57小鼠,也分为1、3、5及12月龄4组,每组12只。通过Morris水迷宫实验进行学习能力和记忆训练测试。处死小鼠获取脑组织海马标本,观察海马区病理变化。Western blotting检测Wnt信号通路相关蛋白β-连环蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)及海马区突触前蛋白(Synapsin1)、海马区突触后蛋白95(PSD-95)表达水平。结果实验组1、3、5及12月龄小鼠逃避潜伏期、首次跨越原平台时间逐渐延长(P<0.05);且实验组均较对照组同月龄延长(P<0.05)。实验组小鼠随着月龄增加,其细胞数量减少、体积缩小、间隙扩大现象越明显,颗粒细胞及锥体细胞破坏现象越严重,锥体细胞树突均变短。实验组1、3、5及12月龄小鼠β-catenin、GSK-3β蛋白表达水平依次降低,Synapsin1及PSD-95表达水平亦依次降低(P<0.05)。实验组均较对照组同月龄小鼠β-catenin、GSK-3β、Synapsin1及PSD-95蛋白表达水平降低(P <0.05)。结论 AD小鼠Wnt信号通路β-catenin、GSK-3β蛋白表达水平下降,可能与其海马区病理变化及突触前后蛋白表达水平下降相关,Wnt信号通路的失活可能加快AD病理过程。

运动恢复与蛋白质及氨基酸营养

目的:在当今运动员膳食供应中,存在对高蛋白饮食认识上的分歧,明确蛋白质营养对于运动的意义。资料来源:应用计算机检索Pubmed数据库和搜索引擎检索1988-01/2003-12期间氨基酸与运动关系方面的文献,检索词为“Protein,AminoAcid,Exercise”,限定文章语言种类为英文。资料选择:对资料进行初审,选择氨基酸与运动关系方面的研究。资料提炼:共收集相关文献47篇,剔除重复文献,按上述标准纳入22篇,研究性论文中对比、盲法、随机法不限制。资料综合:本文参阅近年来的国外有关研究文献,对近年来被实际运用的一些运动后营养补充策略进行了评价。对于耐力或力量训练的运动员,日均最大蛋白质需求是1.2～1.7g/kg体质量。只要遵循营养原则,其他的热能营养素供应充足,膳食蛋白质就能满足这一蛋白质需求。氨基酸是机体热能的次要来源,通常氨基酸提供的热能只占摄入热能总量的5%。如果在运动恢复的前2～5h内间隔15～30min给予1.2g/kg体质量的碳水化合物,那么补充蛋白质并不能刺激肌糖元合成速度的增加。如果在恢复过程的早期缺少食物或者摄入糖类过少,那么摄入蛋白质或特定氨基酸可以加速肌糖元合成。在高强度运动恢复期前几个小时摄入必须的氨基酸当量为0.1g/kg体质量的饮料,在肌肉组织会产生短暂的正氮平衡。结论:无论是对于急性运动还是长期运动,在运动恢复过程中对于营养补充的时间、蛋白质或氨基酸构成模式仍没有形成定论。仍有两个领域受到广泛关注:一是长时间运动后肌糖元的再合成问题;二是大强度运动后肌肉蛋白更新。

微小RNA-150对鼻咽癌细胞放疗抵抗的影响研究

目的探讨微小RNA（miR）-150对于鼻咽癌细胞放疗抵抗的影响,并分析其机制。方法 2014年1月—2015年6月,建立放疗抵抗的鼻咽癌细胞株CNE-2R。取CNE-2和CNE-2R,通过克隆形成实验计算不同放疗剂量下（0、3、6 Gy）的克隆形成率（PE）、细胞存活率,采用MTS法检测照射1、2、3、4、5 d时的细胞增殖活性,实时定量荧光聚合酶链式反应（Real-time PCR）法检测miR-150、糖原合成酶激酶3β（GSK3β）mRNA水平,Western blotting法检测GSK3β水平。将CNE-2随机分为miR-150模拟物组（转染miR-150模拟物）、微小RNAs（miRs）无关序列组（转染miRs无关序列）,通过荧光素酶报告载体实验检测荧光素酶活性。结果 0 Gy放疗剂量时,CNE-2与CNE-2R的PE、细胞存活率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;3 Gy、6 Gy放疗剂量时,CNE-2R的PE、细胞存活率高于CNE-2（P〈0.05）。照射1-5 d时,CNE-2R的细胞增殖活性高于CNE-2（P〈0.05）。CNE-2R中miR-150水平高于CNE-2,GSK3βmRNA水平低于CNE-2（P〈0.05）。CNE-2R中GSK3β水平低于CNE-2（P〈0.05）。转染GSK3β野生型质粒后,miR-150模拟物组荧光素酶活性低于miRs无关序列组（P〈0.05）;转染GSK3β突变型质粒后,miRs无关序列组与miR-150模拟物组荧光素酶活性比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论miR-150参与了鼻咽癌细胞的放疗抵抗,GSK3β是miR-150的直接靶基因,miR-150-GSK3β轴可能成为一种新的用于合理治疗鼻咽癌的策略。

pGSK-3β和NF-κB在慢性支气管哮喘小鼠气道重塑中的表达水平及意义

目的探讨磷酸化糖原合成酶激酶3β(phosphor-Ser9 glycogen synthase kinase3β,pGSK-3β)和核因子kappa B(nuclear factor kappa B,NF-κB)的表达水平在慢性支气管哮喘气道重塑中的作用。方法 16只雄性BALB/c小鼠随机分为2组:支气管哮喘组与对照组,每组8只,通过卵蛋白致敏和雾化激发制备小鼠慢性支气管哮喘模型,对照组全部以生理盐水代替;2组小鼠分别在末次激发后24h内颈椎脱臼处死,取左肺通过HE染色,光学显微镜观察气道重塑情况;取右肺采用蛋白质印迹方法测定肺组织pGSK-3β、NF-κB、MMP-9的表达量。结果⑴支气管哮喘组出现管壁增厚,平滑肌增生、黏液分泌增加等气道重塑的特征性改变;⑵对照组pGSK-3β、NF-κB、MMP-9的表达水平均小于支气管哮喘组(P<0.05),三者在慢性支气管哮喘小鼠中表达量增加。结论卵蛋白致敏反复雾化激发可导致气道重塑,GSK-3β/NF-κB信号转导途径在支气管哮喘气道重塑中起重要作用。

饱和氢盐水对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞Akt/GSK3β信号通路和心功能的影响

目的 探讨饱和氢盐水对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞Akt/GSK3β信号通路和心功能的影响.方法 选取健康成年清洁级雄性SD大鼠150只,采用随机数字表法将其分为5组（n=30）：空白对照组（Ⅰ组）、假手术组（Ⅱ组）、缺血再灌注组（Ⅲ组）、饱和氢盐水治疗组（Ⅳ组）、生理盐水治疗组（Ⅴ组）.Ⅰ组不做任何处理;Ⅱ组大鼠仅穿线不结扎;Ⅲ组制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型;Ⅳ组于再灌注前5 min给予1 ml/100 g腹腔注射饱和氢生理盐水;Ⅴ组于再灌注前5 min给予1 ml/100 g腹腔注射等量生理盐水.采用BL-420型生物机能实验系统记录大鼠缺血前、缺血30min、再灌后60、120 min,4个时间点的正负左室内压最大变化速率（±dp/dt max）,左室舒张末期压（LVDP）及左室收缩末期压（LVSP）数据.于再灌注60、120 min后取左室心肌组织HE染色观察心肌病理学变化.采用蛋白质印迹法检测心肌细胞蛋白激酶B（Akt）和糖原合成酶激酶-β（GSK3β）的表达.结果 与Ⅰ组、Ⅱ组比较,Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组大鼠缺血30 min,再灌注60、120 min时＋dp/dt max（F=24.61,26.55,25.21）,-dp/dt max（F=20.27,18.57,19.35） LVDP（F=23.53,21.79和19.47）及LVSP（F =21.72,17.75和18.22）显著降低,心肌细胞Akt（F=18.62,17.41）和GSK3β（F=15.27,15.58）表达水平升高.与Ⅲ组、Ⅴ组比较,Ⅳ组大鼠＋dp/dt max（F=24.52和26.95）,-dp/dt max（F =22.71和23.18）,LVDP（F =28.56和26.42）及LVSP（F=23.18和25.39）显著升高,心肌细胞Akt（F=17.89和17.43）和GSK3β（F=14.85和14.29）表达水平降低.与T0比较,Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组T1-3＋ dp/dt max（F=20.15,22.49和23.12）,-dp/dt max（F =20.37,21.83和23.59）,LVDP（F=22.38,21.86,22.75）及LVSP（F=25.01,24.21和25.76）显著下降.与T1比较,Ⅳ组T2-3＋ dp/dt max（F =27.15）,-dp/dt max（F =22.87）,LVDP（F=16.81）及LVSP（F=26.14）显著上升.与T2比较,Ⅳ组T3心肌细胞Akt（F=14.97）和GSK3β（F=15.76）表达水平降低.结论 饱和氢盐水可减轻心肌再灌注损伤从而改善心功能,其机制可能与抑制Akt/GSK3β信号通路有关.

伏立诺他对阿尔茨海默病转基因小鼠认知功能及脑内tau蛋白磷酸化的影响

目的 观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACi）对阿尔茨海默病转基因小鼠认知功能和脑内tau蛋白磷酸化的影响.方法 分别选择12只5XFAD转基因（5XFAD-CC）和野生型（WT）小鼠,采用HDACi伏立诺他（SAHA,每组7只）与溶媒对照（每组5只）处理动物,利用Y-迷宫、Morris水迷宫评估5XFAD-CC小鼠学习和记忆能力,通过蛋白免疫印迹检测α-tubulin乙酰化、tau和糖原合成激酶3β（GSK313）蛋白及其磷酸化水平.结果 SAHA可改善5XFAD-CC小鼠即刻记忆、工作记忆能力,SAHA组进入新奇区域的次数（39.10％ ±2.25％,t=2.688,P=0.031）和停留时间（26.81％ ±0.78％,t=3.271,P=0.017）较溶媒对照组（分别为30.33％±2.32％和19.80％±1.99％）明显增加；同时,SAHA可改善5XFAD-CC小鼠空间参考记忆能力,SAHA组寻找平台的潜伏期较溶媒对照组缩短（F=5.936,P=0.045）及进入原平台所在象限时间增加（31.70％ ±4.21％,t=2.317,P=0.049）.SAHA可增加5XFAD-CC和WT小鼠脑内HDAC6底物α-tubulin乙酰化水平（分别增加26.42％和29.64％）,降低5XFAD-CC小鼠海马tau-pSer396、tau-pSer404和tau-pThr231磷酸化水平（与溶媒对照组比较,分别减少24.22％、48.98％和26.95％）及GSK3β磷酸化水平（31.29％）.结论 SAHA可改善5XFAD小鼠的学习和记忆能力,可能与其降低tau和GSKSB蛋白磷酸化水平有关.

β淀粉样蛋白25-35诱导的大鼠嗜铬细胞瘤细胞凋亡过程中核因子кB激活的调控

目的 探讨β淀粉样蛋白（amyloid-β,Aβ）25-35诱导的大鼠嗜铬细胞瘤细胞（PC12）凋亡过程中核因子кB（nuclear factor кB,NF-кB）的活化与蛋白激酶B（Akt）和糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β）之间的关系.方法 用Aβ（25-35）诱导PC12细胞凋亡,并分析在此过程中Akt、GSK-3β以及NF-кB的活性变化.在Aβ（25-35）诱导PC12细胞凋亡过程中,分别阻断Akt通路和GSK-3β通路,测定细胞活性以及Akt、GSK-3β、NF-кB的关系.结果 Aβ（25-35）诱导细胞凋亡过程中,细胞凋亡率与Aβ（25-35）的用量呈现剂量依赖关系,用0、5、10、20、40μmol/L Aβ（25-35）处理PC12细胞48 h后,细胞的凋亡率分别为（3.01±0.03）%、（3.08±0.03）%、（25.32±0.76）%、（42.88±0.60）%、（60.85±2.39）%.与对照组比较,Aβ（25-35）诱导细胞凋亡过程中NF-кB被激活,而Akt、GSK-3β的活性则均受到抑制.用渥曼青霉素（wortmannin）抑制Akt的活性可引起NF-кB活性的下降.GSK-3β活性上升.用GSK-3β的特异性抑制剂氯化锂（LiC1）抑制其活性,则NF-кB活性同样下降.而对Akt的活性无显著影响.结论 Akt和GSK-3β都是NF-кB的上游调节因子,他们共同调控Aβ（25-35）诱导的PC12细胞凋亡过程中NF-кB的活化.这些结果有助于更好地理解阿尔茨海默病的发病机制,并对其防治提供新的思路.

低物质的量浓度过氧化氢预处理对小鼠骨髓间充质干细胞氧化应激性凋亡的作用及其机制

目的探讨低物质的量浓度过氧化氢预处理对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)氧化应激性凋亡的作用及其机制。方法采用实验研究方法。通过全骨髓培养法从2只2周龄雄性BALB/c小鼠中分离培养BMSC,鉴定后取第3~7代对数生长期细胞进行实验。将细胞按随机数字表法(分组方法下同)分为用相应终物质的量浓度过氧化氢处理的0μmol/L过氧化氢组(即不加入过氧化氢,下同)、25μmol/L过氧化氢组、50μmol/L过氧化氢组、100μmol/L过氧化氢组、150μmol/L过氧化氢组、200μmol/L过氧化氢组、250μmol/L过氧化氢组、300μmol/L过氧化氢组,培养24 h后,用流式细胞术检测细胞凋亡率(样本数为4)。将细胞分为用相应终物质的量浓度过氧化氢处理的0μmol/L过氧化氢组、25µmol/L过氧化氢组、50µmol/L过氧化氢组、100µmol/L过氧化氢组,培养24 h后,用蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达,计算Bcl-2/Bax比值(样本数为3)。将细胞分为用相应终物质的量浓度过氧化氢处理的0μmol/L过氧化氢组、25μmol/L过氧化氢组、50μmol/L过氧化氢组、100μmol/L过氧化氢组、200μmol/L过氧化氢组、300μmol/L过氧化氢组,培养24 h后,用蛋白质印迹法检测糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)及磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)的蛋白表达(样本数为3)。将细胞分为用相应终物质的量浓度过氧化氢处理的0μmol/L过氧化氢组、50μmol/L过氧化氢组、300μmol/L过氧化氢组,以及预先加入50μmol/L过氧化氢刺激12 h再加入300μmol/L过氧化氢的过氧化氢预处理组,培养24 h后,用倒置荧光显微镜(非荧光条件)和免疫荧光法观察细胞形态和生长情况,用流式细胞术检测细胞凋亡率,用蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax、胱天蛋白酶3(caspase-3)、caspase-9、剪切型caspase-3、剪切型caspase-9、GSK-3β及p-GSK-3β蛋白表达,计算Bcl-2/Bax比值,样本数均为3。对数据进行单因素方差分析、Bonferroni检验。结果培养24 h后,与0μmol/L过氧化氢组比较,25μmol/L过氧化氢组、50μmol/L过氧化氢组、100μmol/L过氧化氢组细胞的凋亡率均无明显变化(P>0.05),150μmol/L过氧化氢组、200μmol/L过氧化氢组、250μmol/L过氧化氢组、300μmol/L过氧化氢组细胞凋亡率均明显上升(P<0.01)。培养24 h后,与0μmol/L过氧化氢组比较,25µmol/L过氧化氢组、50μmol/L过氧化氢组细胞Bcl-2/Bax比值均明显增加(P<0.05或P<0.01),100µmol/L过氧化氢组细胞Bcl-2/Bax比值显著减少(P<0.05)。培养24 h后,与0μmol/L过氧化氢组比较,25μmol/L过氧化氢组、50μmol/L过氧化氢组细胞GSK-3β蛋白表达均无明显变化(P>0.05),p-GSK-3β蛋白表达均显著增加(P<0.01);100μmol/L过氧化氢组细胞GSK-3β、p-GSK-3β蛋白表达均无明显变化(P>0.05);200μmol/L过氧化氢组、300μmol/L过氧化氢组细胞GSK-3β蛋白表达均明显增加(P<0.05),p-GSK-3β蛋白表达均显著减少(P<0.05)。培养24 h后,0μmol/L过氧化氢组与50μmol/L过氧化氢组细胞形态及生长情况相近,均正常,与之相比,300µmol/L过氧化氢组细胞变小、变圆,细胞突起变短或消失,细胞核出现空化,细胞脱落明显增多;过氧化氢预处理组大部分细胞形态正常,细胞脱落少于300µmol/L过氧化氢组,细胞核形态正常。培养24 h后,4组间细胞caspase-9蛋白表达相近(P>0.05)。与0μmol/L过氧化氢组比较,50μmol/L过氧化氢组细胞凋亡率以及剪切型caspase-9、caspase-3、剪切型caspase-3的蛋白表达均无明显变化(P>0.05),Bcl-2/Bax比值明显增加(P<0.05);300μmol/L过氧化氢组细胞凋亡率显著升高(P<0.01),剪切型caspase-9、caspase-3、剪切型caspase-3蛋白表达均明显增加(P<0.01),Bcl-2/Bax比值明显减少(P<0.05)。与300μmol/L过氧化氢组比较,过氧化氢预处理组细胞凋亡率显著下降(P<0.01),剪切型caspase-9、caspase-3、剪切型caspase-3的蛋白表达均明显减少(P<0.05或P<0.01),Bcl-2/Bax比值显著增加(P<0.01)。培养24 h后,0μmol/L过氧化氢组、50μmol/L过氧化氢组、300μmol/L过氧化氢组、过氧化氢预处理组细胞GSK-3β、p-GSK-3β蛋白表达分别为1.09±0.14、0.62±0.17、1.35±0.21、0.74±0.34,0.68±0.03、0.85±0.08、0.38±0.10、0.54±0.09。与0μmol/L过氧化氢组比较,50μmol/L过氧化氢组细胞p-GSK-3β蛋白表达明显增加(P<0.05);300μmol/L过氧化氢组细胞GSK-3β蛋白表达明显增加(P<0.05),p-GSK-3β蛋白表达明显减少(P<0.01)。与300μmol/L过氧化氢组比较,过氧化氢预处理组细胞GSK-3β蛋白表达明显减少(P<0.01),p-GSK-3β蛋白表达明显增加(P<0.01)。结论50μmol/L可能是过氧化氢预处理小鼠BMSC的最佳物质的量浓度,50μmol/L过氧化氢预处理通过抑制GSK-3β活性对抗线粒体途经的氧化应激性凋亡。