丹酚酸B促进人软骨细胞生长并上调β-连环蛋白和类细胞介素-1的表达

为探讨中药丹参的主要活性成份丹酚酸B对人软骨细胞系C28112细胞的增殖作用及其调节作用机制中相关因子的初步辨识采用MTS法检测丹酚酸B的对软骨细胞作用的有效浓度;吖碇橙荧光标记软骨细胞的DNA及RNA,观察细胞分裂及形态学改变;Western Blotting(WB)检测β-Catenin及新型软骨生长因子类细胞介素1的蛋白质表达。结果显示MTS法检测加入丹酚酸B后的所有剂量实验组与对照组比较吸光度值均有不同程度的增高,差异均有统计学意义(P<0.01);丹酚酸B实验组可见明显核分裂及较多的双核现象,细胞增生较活跃;半定量WB分析结果显示丹酚酸B实验组比对照组的类细胞介素1蛋白表达量显著升高,β-Catenin蛋白质表达量亦显上调趋势。表明丹酚酸B能促进人软骨细胞的增殖并上调了相关因子的表达。其作用机制可能与丹酚酸B作用于软骨细胞中Wnt信号调节通路,上调信号调节因子β-Catenin表达量,激活靶基因类细胞介素1的转录并促进其表达释放有关。

IRAK1/TRAF6通路在急性髓系白血病发生发展中的作用机制研究

目的探讨白细胞介素-1受体相关激酶(IRAK1)/肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)通路影响急性髓系白血病(AML)发生发展的作用机制。方法选取54例AML患者为研究对象(AML组),30例于本院治疗的缺铁性贫血患者作为对照组,分离所有受试者骨髓单核细胞;体外常规培养人AML细胞系HL-60、KG-1、U937和人正常单核细胞系THP-1;将HL-60细胞分为空白组(转染Lipofectamine 3000试剂)、阴性对照(NC)组(转染空质粒)、IRAK1短发夹RNA(IRAK1 shRNA)组(转染IRAK1 shRNA);实时荧光定量PCR(qPCR)法检测单核细胞及不同细胞系各组中IRAK1、TRAF6 mRNA表达水平;CCK-8法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法检测各组细胞β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及IRAK1/TRAF6通路蛋白表达水平。结果与对照组比较,AML组单核细胞中IRAK1、TRAF6 mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。与THP-1细胞比较,KG-1、U937、HL-60细胞中IRAK1、TRAF6 mRNA表达水平显著升高,且HL-60细胞最高(P<0.05)。与空白组和NC组比较,IRAK1 shRNA组细胞增殖抑制率、凋亡率及Bax蛋白表达显著升高,IRAK1 mRNA、TRAF6 mRNA、β-catenin、CyclinD1、Bcl-2、磷酸化-IRAK1(p-IRAK1)/IRAK1、TRAF6、核因子-кB(NF-кB)蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论IRAK1/TRAF6通路与AML的发生发展有关,抑制IRAK1/TRAF6通路可抑制人AML细胞系HL-60增殖,促进其凋亡,IRAK1/TRAF6可能是AML治疗的潜在靶点。

内毒素耐受大鼠肝组织白细胞介素－1受体相关激酶－4和相关激酶－M的表达及其意义

目的探讨内毒素耐受（ETT）大鼠肝组织IL-1受体相关激酶（IRAK）－4和IRAK—M的表达变化及其意义。方法将66只雄性SD大鼠分为对照组、急性肝功能衰竭（ALF）组和ETT组。ETT组腹腔注射脂多糖（LPS），ALF组注射等量0．75％氯化钠溶液，然后ETT组与ALF组同时腹腔注射D-氨基半乳糖（D-GaIN）及LPS，在注射后2、6、12、24和48h时间点留取大鼠血液及肝脏标本。观察肝组织的病理变化，ELISA法检测TNF-α及IL-6水平，RT—PCR检测IRAK-4、IRAK—M、核因子-κB（NF-κB）（p65）mRNA表达情况。统计学处理采用LSD检验和Dunnet’s t检验。结果ETT组大鼠肝组织病理改变明显轻于ALF组。在2、6、12、24、48h，ALF组大鼠肝组织IRAK-4 mRNA／β-肌动蛋白（β-actin）吸光度比值分别为0．711±0．074、0．904±0．118、1．012±0．098、1．534±0．279、1．451±0．290，IRAK—M mRNA／β-actin吸光度比值分别为0．496±0．018、0．516±0．089、0．503±0．023、0．503±0．057、0．469±0．142；ETT组IRAK—M mRNA／β—actin吸光度比值分别为0．929±0．064、1．111±0．138、1．113±0．027、1．891±0．315、1．710±0．303，IRAK-4 mRNA／β-actin吸光度比值分别为0．619±0．083、0．587±0．033、0．623±0．034、0．720±0．044、0．654±0．041。与ALF组比较，ETT组IRAK—MmRNA表达明显上升，IRAK-4mRNA表达相对降低，两组IRAK-4、NF-κB（p65）及IRAK—M在2、6、12、24、48h均差异有统计学意义（F=17．305、54．921、121．031、67．607、55．279，F=19．506、43．777、110．823、302．681、202．822，F=172．003、59．519、987．055、68．463、96．601，均P〈0．05）。结论诱导ETT可使ALF大鼠肝组织损害减轻，可能与IRAK-4表达下降、IRAK—M表达升高有关。

白细胞介素1受体相关激酶在调控炎症细胞信号转导中的作用及研究进展

过度的炎症过程可以促进人类各种严重疾病的发生,白细胞介素1受体相关激酶(interleukin-1 receptor associated kinases,IRAKs)存在于多种细胞类型中,并能介导包括Toll样受体(toll like receptors,TLRs)在内的各种细胞受体信号。受不同调控的各种IRAKs在介导下游信号传导过程中发挥独特的作用,IRAKs除了调节转录因子的活性外,还可能参与调节与基因转录非直接相关的细胞活动,IRAKs分子和相关的细胞信号网络参与介导不同的生理过程。本文就各种IRAK的调控及其介导炎症细胞信号转导过程的最新进展进行综述。

蛋白酶连结素-1在椎间盘髓核细胞中的表达及作用

目的通过观察蛋白酶连结素-1（protease nexin-1，PN-1）在椎间盘髓核细胞生长及其退变过程中的表达变化及其意义，阐明其可能的信号调控机制。方法分离培养原代人髓核细胞并分对照组，interleukine-1 beta（IL-16）诱导组和TNF-α诱导组共3组。各组分别在3d，7d，14d和21d组织学染色，并进行形态学观察，采用Western blot检测髓核细胞MMPs基因表达变化。将髓核细胞培养于含IL．1B（10ng／m1）的培养液中，加入不同浓度PN-1（0，10，50，100ng／m1），培养24h，收集细胞，提取蛋白，采用western方法检测Interleukin-1 receptor-associated kinase1（IRAKl）、丝裂原活化蛋白激酶38（P38 MAP Kinase，P38）及Phospho-P38 MA PKinase（P-P38）基因表达水平。结果组织学检测发现，在IL-1B诱导细胞退变的过程中，髓核细胞的分裂增殖缓慢，排列紊乱，髓核细胞形态变差，出现明显的坏死，密度稀疏。IL-lB可诱导髓核细胞matrix metalloproteinase（MMPs）的表达，破坏蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的比例，致髓核细胞退变；在髓核细胞退变过程中，PN-1蛋白的表达明显下降；PN-1可通过抑制IL-1B激活的MMP3、MMP9和MMPl3蛋白的表达，提高aggrecan（AGG）和Col-2蛋白表达。外源性PN-1干预可通过抑制IRAKl蛋白的表达和和P-P38蛋白的磷酸化抑制IL-1B激活的IRAKl／Nu-clear factorKB（NF-KB）信号通路，进而抑制髓核细胞的退变。结论PN一1在髓核细胞退变中发挥重要的作用，其拮抗IL-1B激活的IRAKl／NF-KB信号诵足各．抑制MMPs活件．傈护髓核细朐．谫转其很蛮。

姜黄素对THP-1细胞Toll样受体4信号传导通路中相关因子mRNA水平的影响

目的 研究姜黄素对人单核细胞株THP-1 Toll样受体4（TLR4）信号传导通路中相关因子mRNA水平的影响.方法 用不同浓度姜黄素（50、25、12.5 mg/L）预处理THP-1细胞12 h,0.043 mg/L地塞米松处理组作为阳性对照,继而用1 mg/L脂多糖（LPS）刺激诱导细胞4 h,以不做处理的THP-1作为阴性对照,仅用1 mg/L LPS刺激的THP-1作为LPS刺激组.提取细胞总RNA,用RT-PCR方法检测TLR4信号传导通路中TNF受体相关因子（TRAF）6、IL-1受体相关激酶（IRAK1）、核因子κB（NF-κB）mRNA的表达情况.结果 未经处理的THP-1细胞经LPS刺激4 h,可以显著提高TRAF6、IRAK1、NFκB mRNA的表达,与阴性对照组比较,t值分别为38.69、39.13、23.99（P〈0.01）. 50、25 mg/L姜黄素可以明显抑制THP-1细胞经LPS诱导后TRAF6、IRAK1、NF-κB mRNA的表达（P值均〈0.01）,抑制率均在50%以上.结论 一定浓度的姜黄素可以抑制LPS诱导后THP-1细胞TRAF6、IRAK1、NF-κB mRNA的表达,表明姜黄素对TLR4信号传导通路中相关因子mRNA水平有调节作用.

微小RNA-146a在原发性痛风性关节炎患者的变化及其临床意义

目的探讨微小RNA（miR）-146a在原发性痛风性关节炎发病中可能的作用。方法收集55例急性期痛风患者（AG）、42例间歇期痛风患者（IG）、23例OA患者和43名健康体检者的血标本、临床资料及实验室检查指标；采用实时荧光定量PCR（TaqMan探针法）检测PBMCsmiR-146a水平。健康体检者的PBMCs经100μg／ml的单钠尿酸盐晶体刺激12h后，ELISA法检测IL-18，实时荧光定量PCR检测miR-146a及其靶分子白细胞介素-1受体相关激酶（IRAK1）、肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）mRNA的变化。采用SPSS17．0统计软件进行分析，计量资料组间比较采用Wilcoxon秩和检验，尿酸盐刺激后基因表达水平采用t检验，方差分析，变量间的相关关系采用Spearman相关分析。结果①miR-146a在AG组的表达均显著低于IG、OA及健康体检组（0．16±0．43与0．26±0．54与0.31±0．43与0．29＋0．36，P均〈0．05），而IG、OA及健康体检组之间差异无统计学意义（P均〉0．05）；②Speaman相关性分析发现AG组患者PBMCs中miR-146a的表达水平与ESR呈负相关r=-0．355，P=0．031），而与血尿酸等其他实验室指标之间均无相关性（P均〉0．05）；③健康人PBMCs经单钠尿盐酸晶体刺激后IL-1B炎症因子显著增高[（93±5）pg／ml与（21±5）pg／ml；t=10．79，P〈0．01]，miR-146a显著降低（0．248±0．014与0．528±0．046；t=5．76，P=0．0004），TRAF6mRNA显著增加（0．1211±0．0112与0．0243±0．0020；t=8．744，P〈0．01），IRAKlmRNA变化差异无统计学意义（0．090±0．005与0．079±0．005；t=1．539，P=0．162）。结论AG患者miR-146a表达降低可能使其靶向抑制TRAF6mRNA能力减弱，从而导致IL-1β炎症介质增加；miR-146a可能可作为痛风炎症的刹车治疗靶点。

生物制剂在痛风治疗中的应用进展

痛风是嘌呤代谢障碍及尿酸排泄减少引起的代谢性疾病,高尿酸血症是痛风的致病基础。近年来,生物制剂进入人们视野。抗白细胞介素-1(IL-1)类、尿酸氧化酶、肿瘤坏死因子拮抗剂及IL-6受体抗体等药物在治疗痛风的研究中逐渐发展起来,且产生不同程度的疗效。现将国内外痛风治疗的生物制剂及尿酸氧化酶资料进行相关总结,为后续研究提供理论基础。