维甲酸和维甲类X受体各亚型基因在原发性肝癌组织中表达

目的 维甲类药物的分化诱导作用受特定组织表达受体的影响 ,了解肝癌组织表达维甲酸受体和维甲类X受体的表达 ,以便选择特异的维甲类药物治疗肝癌。方法 根据GeneBank的序列 ,设计对RARα、RARβ、RARγ、RXRα、RXRβ、RXRγ基因的 6对引物 ,用RT PCR的方法检测 18例肝癌组织和相应癌周肝硬化组织这些基因的表达。结果 这些基因在肝癌组织表达率分别为 44 4% (8/18) ,16 7%(3/18) ,77 8% (14/18% ) ,88 9% (16 /18) ,77 8% (14/18) ,16 7% (3/18) ;癌周肝硬化组织分别为 2 7 8% (5 /18) ,0 % (0 /18) ,6 1 1% (11/18) ,77 8% (14/18) ,5 5 6 % (10 /18) ,0 % (0 /18)。这些受体亚型表达的阳性率在肝癌组织似高于癌周肝硬化组织 ,但统计学无显著意义 (P >0 0 5 )。以 β actin为内标测定RARs和RXRs的相对表达量 ,RXRβ相对表达量高于癌周肝硬化组织 (配对秩和检验 ,P =0 0 2 0 8)。结论 由于肝癌组织表达有RARs和RXRs,提示除了应用全反式维甲酸治疗肝癌外 ,尚探讨RXRs选择性维甲类药物治疗价值。

维甲类X受体与维甲酸反应元件β_2RARE结合的研究

目的 :确定人真皮成纤维细胞中维甲类 X受体 ( RXR)与维甲酸反应元件 ( β2 RARE)的结合。方法 :培养成纤维细胞 ,反式维甲酸 ( At- RA)刺激细胞不同时段 ,抽提核蛋白 ,3 2 P标记β2 RARE作为探针 ,并加入 RXRα和β抗体 ,进行凝胶阻滞分析。结果 :对照组细胞核蛋白与β2 RARE形成复合体 ;At- RA刺激细胞后 ,迅速诱导产生明显的复合体 。选择两组核蛋白 (对照组和 At- RA刺激 4 h组 ) ,分别加入 RXRα和 β抗体 ,凝胶阻滞分析发现 RXRβ抗体可使这两组核蛋白产生新的上移复合体 SS,RXRα抗体则无此作用。结论 :RXRβ能与 β2 RARE结合 ,它们的结合不受 AT- RA的影响 ;提示 RXRβ可能是作为一辅助因子参与了 RARβ2

污水处理厂出水维甲酸X受体干扰效应研究

应用重组维甲酸X受体(RXR)基因酵母筛选南方某污水处理厂进水、不同工艺出水的维甲酸干扰活性;结合大鼠肝均浆(S9)体外代谢方法,检测样品间接维甲酸干扰活性.结果表明:进水、出水样品均不能诱导RXR介导酶活性,但在高富集倍数下,样品与空白对照相比显著抑制9-顺维甲酸诱导酶活性,表现出维甲酸拮抗效应;在添加S9体外代谢活化后,所有样品均检出类维甲酸干扰活性,部分样品还检测出抗维甲酸活性,表明城市污水样品中存在大量具有类/抗维甲酸干扰活性的化合物.研究结果证实,现行处理工艺对类/抗维甲酸干扰物有一定的去除效果;重组基因酵母结合S9体外代谢活化体系可用于水环境样品类/抗维甲酸干扰效应的快速筛选.

维甲酸类受体、PKC-α在食管鳞癌中的表达及临床意义

目的探讨维甲酸类受体(RAR-α、RAR-β、RAR-γ;RXR-α、RXR-β、RXR-γ)及蛋白激酶C-α(PKC-α)在食管鳞癌(ESCC)中的表达及其临床意义。方法采用组织芯片和免疫组化法分析90例ESCC患者的癌组织及手术切缘正常食管黏膜组织中维甲酸类受体、PKC-α的表达情况。结果①RAR-α、RAR-β、RAR-γ、RXR-α、RXR-β、RXR-γ、PKC-α在ESCC中的阳性表达率分别是35.6%、31.1%、20.0%、58.9%、36.7%、51.1%、62.2%,在正常食管黏膜组织中的阳性表达率分别是42.2%、53.3%、16.7%、46.7%、72.2%、55.6%、44.4%,其中RAR-β、RXR-β在ESCC中呈低表达,PKC-α呈高表达,表达差异有统计学意义(P<0.05),其余4种维甲酸类受体在ESCC与正常食管黏膜之间的表达差异无统计学意义。②RAR-β、RXR-β的表达随着肿瘤分化程度的降低而减少(P<0.01),在有淋巴结转移组中RAR-β表达低于无淋巴结转移组(P<0.05)。RXR-β在临床TNM分期较晚的组(Ⅲ～Ⅳ期)中表达低于分期较早的组(Ⅰ～Ⅱ期)(P<0.05)。PKC-α在临床TNM分期较晚的组(Ⅲ～Ⅳ期)中表达高于分期较早的组(Ⅰ～Ⅱ期)(P<0.05)。结论 RAR-β、RXR-β的低表达及PKC-α的高表达可能与ES-CC的发生、发展、预后密切相关。

维甲酸类受体与食管癌的研究进展

食管癌是常见的消化道恶性肿瘤之一,其发病率逐年提高,确诊即是进展期,预后差[1-3].在我国,每年约有15万人死于食管癌,病死率仅次于肺癌、胃癌、肝癌,居第4位.食管癌的发生、发展过程涉及大量基因表达水平的改变,包括细胞周期调控发生改变,DNA修复,核受体改变等.其中核受体改变就有维甲酸类受体（retinoic aid receptors, RARs）,RARs与食管癌的发生、发展关系密切.1999年Xu等[4]首次研究了RARs与食管癌的关系,指出食管癌的发生可能与维甲酸（retinoicoid, RA）β受体表达缺失有关.近年来已受到国内外学者重视,陆续有文献报道RARs在食管癌的发生、发展中的作用,本文就此进行综述.

受体报告基因实验及其在维甲酸和维甲酸X受体干扰物监测中的应用

受体报告基因实验具有快速、经济、灵敏、方便等诸多优势,在高通量筛选类或抗雌雄激素等通过核受体起作用的环境内分泌干扰物方面得到了广泛的应用。环境中的维甲酸和维甲酸X受体干扰物如有机锡等有着类似的作用机制,研究者也开始采用受体报告基因实验的方法对该类污染物进行筛选与监测。本文综述了受体报告基因实验的技术方法,包括报告基因和宿主细胞的选择,并介绍了该方法在人工合成的维甲酸和维甲酸X受体干扰物筛选以及环境样品中该类污染监测中的应用。综述总结了应用受体报告基因实验检测环境内分泌干扰物研究中的不足并对该方法的未来发展进行了展望,希望为该方法在环境监测和评估中的应用提供新的思路。

维甲酸类化合物的研究进展

维甲酸类化合物通过激活其核受体蛋白来调控核基因的表达， 在细胞的生长、分化和细胞生理凋亡方面起重要作用。不同类型维甲酸核受体蛋白可以调控不同基因的表达，产生不同的药理性质，故定向设计只作用于一种或几种受体的维甲酸类化合物分子，对于研究维甲酸类化合物作用的分子机制、核基因调控的方式和途径，以及合成新作用机制高活性。

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)RXR基因克隆及其在蜕皮过程中的表达分析

本研究通过转录组测序和RACE技术克隆了三疣梭子蟹类维甲酸X受体2(PtRXR2)基因cDNA全长(登录号:KF914662),并通过荧光定量PCR(qRT-PCR)技术研究了该基因在三疣梭子蟹不同组织及不同蜕皮阶段的表达情况。结果表明,(1)PtRXR2基因cDNA全长1718bp,包括5’非编码区(5’-UTR)141bp、3’-UTR 209bp和开放阅读框1368bp,编码455个氨基酸,预测分子量和等电点为49.75kDa和6.79。(2)PtRXR2推导氨基酸序列的Blastp结果显示,PtRXR2与已知甲壳动物RXR的一致性为74%—99%,系统进化树分析表明PtRXR2与其它甲壳动物RXR聚为一支。(3)qRT-PCR结果显示PtRXR2在C期三疣梭子蟹Y器官、鳃、眼柄和大颚器中表达水平较高,肝胰腺中的表达水平最低。其它6个组织中的表达水平居中。(4)不同蜕皮阶段,PtRXR2在Y器官、眼柄和胸神经中均是AB期表达水平最高,E期最低,这可能与上述器官的细胞增殖主要发生在AB期有关;肌肉中的PtRXR2表达水平在AB和C期较高,E和D期最低,与肌肉的生长和营养物质积累主要发生在这两个阶段相对应;肝胰腺中的PtRXR2表达水平在AB期最高,C期最低,这暗示PtRXR2主要参与肝胰腺中的上皮细胞增殖和分化,对于C期的营养代谢调控可能不起关键作用。

中华绒螯蟹RXR基因全长cDNA克隆及表达分析

根据陆地蟹RXR基因保守区序列设计上下游引物,采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)以及cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆中华绒螯蟹RXR基因并进行各组织间的表达分析。序列分析表明,中华绒螯蟹RXR cDNA全长1 517 bp,编码433个氨基酸。经BLASTn和BLASTx分析表明,中华绒螯蟹RXR基因的氨基酸序列与陆地蟹RXR基因的氨基酸序列相似性最高,为96%。系统进化树分析显示,中华绒螯蟹RXR的氨基酸序列与陆地蟹RXR聚为一支。荧光定量PCR结果显示,RXR在所有检测的组织中均有表达,且在中华绒螯蟹Y器官中表达量最高,肝胰腺、鳃和肌肉中少量表达,心脏、胃、肠、胸神经节和脑神经节中微量表达。在中华绒螯蟹不同的蜕皮时期,Y器官中RXR表达量在D期最高,与AB期、C期呈显著性差异(P<0.05);肌肉中RXR在AB期表达量最高,与其他蜕皮时期呈显著性差异(P<0.05);肝胰腺和鳃中RXR在AB期表达量最高,E期表达量最低,但各蜕皮时期表达量之间差异不显著。

RXRγ、RARβ在9-cis-RA抑制人胃癌SGC7901细胞生长中的作用

目的:探讨维甲类X受体(RXR)γ、RARβ在RXR激动剂9-顺维甲酸(9-cis-RA)抑制人胃癌SGC7901细胞生长中的作用。方法:体外培养SGC7901细胞给予9-cis-RA干预,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术、HE染色、免疫组化染色、Western-blot检测9-cis-RA作用后SGC7901细胞生长情况、凋亡率、细胞周期的改变、RXRγ及RARβ表达情况。结果:SGC7901细胞与9-cis-RA共同培养48h后,肿瘤细胞生长受到抑制,其作用具有浓度及时间依赖性。流式细胞仪检测显示处于G0/G1期的细胞增多,凋亡率增高,免疫组化及Western-blot检测显示20μmol/L的9-cis-RA作用72h后,RXRγ、RARβ蛋白表达增加。结论:9-cis-RA可通过上调RXRγ、RARβ蛋白表达诱导细胞凋亡从而抑制人胃癌SGC7901细胞生长。

ATRA对肺腺癌A549细胞RXRα及CAV1表达和分布的影响

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对肺腺癌A549细胞维甲类X受体α(RXRα)、小窝蛋白1(CAV1)表达和分布的影响。方法 MTT法检测ATRA对A549细胞增殖的影响;免疫荧光法检测RXRα、CAV1在A549细胞中的表达和分布;Western blot法检测ATRA处理A549细胞后对RXRα、CAV1表达的影响。结果 ATRA可抑制A549细胞增殖并呈剂量依赖性;ATRA处理A549细胞3 d后,RXRα表达降低并有向细胞核集中的现象,CAV1表达量降低且在胞膜分布增加。结论 ATRA可抑制A549细胞增殖并影响RXRα和CAV1的表达和分布,下调RXRα和CAV1在A549细胞中的表达并分别使其向核内和胞膜转移,从而可能参与调控细胞增殖。

基于荧光素酶双报告基因系统体外验证长爪沙鼠Cip4基因受RXR及T4调控

目的 探讨核转录因子TRB、RXR和激动剂T4对长爪沙鼠Cip4基因表达的调控作用。方法 合成长爪沙鼠Cip4基因启动子区序列,构建报告载体p GL3-Cip4;将转录因子TRB、RXR克隆到pc DNA3. 1表达载体上。将p GL3-Cip4,pc DNA3. 1-TRB,pc DNA3. 1-RXR和pRL-TK(参照质粒)载体共转染到HEK-293细胞,构建Cip4基因的荧光素酶双报告系统。观察质粒用量、TRB的激动剂甲状腺素T4等处理对转录活性的影响。结果 以长爪沙鼠Cip4启动子区为启动序列的双荧光素酶报告基因系统在(启动子+转录因子):pRL-TK=20∶1、总质粒量为2μg时转染效率最高,并具有最高的荧光素酶活性。检测结果显示,仅加入TRB不改变Cip4的转录水平(P>0. 05),仅加入RXR可以增加Cip4的转录水平(P<0. 05),RXR与T4共同作用可上调Cip4的转录水平(P<0. 001)。TRB与T4共同作用可下调Cip4活性(P<0. 05)。RXR、TRB、T4共存时,Cip4的转录水平显著下调(P<0. 01)。结论本研究证实了T4、TRB及RXR共调控长爪沙鼠Cip4基因的转录,模拟了配体激活型转录因子TRB/RXR活化目的基因Cip4的转录,同时证实了Cip4的转录活化与RXR信号通路密切相关,为揭示甲状腺素在人类NAFLD中的作用机制奠定了基础。本报告基因系统可用于配体激活型转录因子调控Cip4基因表达的机理分析及相关药物的筛选。

过氧化物酶体增长因子活化受体γ与维甲酸类X受体在胆管癌中的表达及其对预后的影响

目的 探讨胆管癌组织中过氧化物酶体增长因子活化受体γ（PPARγ）和维甲酸类X受体（RXRα）蛋白的表达与胆管癌临床病理特征的关系及其对预后的影响.方法 采用免疫组化法检测69例胆管癌以及12例非肿瘤胆管黏膜上皮组织中PPARγ与RXRα的表达情况,并分析其与临床病理参数及预后的关系.结果 69例胆管癌组织、12例非肿瘤胆管黏膜上皮组织中PPARγ表达阳性率分别为59.4%、0;69例胆管癌组织、12非肿瘤胆管黏膜上皮组织中RxRα表达阳性率分别为78.3%、20%,差异有统计学意义.PPARγ蛋白的阳性表达与胆管癌TNM分期、淋巴结转移密切相关,PPARγ蛋白阳性表达组胆管癌病人的预后差.PPARγ与RXRα存在明显的正相关关系.结论 PPARγ表达与胆管癌临床病理特征密切相关.PPARγ和RXRα两者可能参与了胆管上皮癌变过程.

子宫颈鳞状细胞癌中过氧化物酶体增殖物激活受体γ、维甲酸类X受体α及环氧合酶2的表达及其意义

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）、维甲酸类X受体α（RXRα）和环氧合酶2（COX-2）在子宫颈鳞状细胞癌（SCC）发生、发展中的可能作用.方法 用免疫组织化学EliVision plus两步法检测17例正常子宫颈鳞状上皮（NCE）、72例子宫颈鳞状上皮内病变（SIL）及42例子宫颈浸润性SCC组织中PPARγ、RXRα和COX-2蛋白的表达情况.结果 PPARγ蛋白在NCE、SIL和SCC组的阳性表达率分别为23.5%（4/17）、58.3%（42/72）和83.3%（35/42）,RXRα蛋白的阳性表达率分别为29.4%（5/17）、54.2%（39/72）和90.5%（38/42）,COX-2在NCE中无明显表达,而在SIL和SCC中的阳性表达率分别36.1%（26/72）和57.1%（24/42）.在SIL中,高级别SIL组PPARγ、RXRα和COX-2的阳性表达率均高于低级别SIL组（均P〈0.05）.在SCC中,有淋巴结转移组COX-2阳性表达率高于无淋巴结转移组（χ2=3.98,P=0.04）.结论 PPARγ、RXRα和COX-2可能均参与了SCC的癌变过程.

维甲酸及其受体

维甲类(Retinoid)是包括自然和合成的与维生素A相关的化合物的总称.维生素A早以被确认对维持生长和分化及支持视力和生殖均至为重要.维生素A代谢为一个醛基一视黄醛和一个酸形式一维甲酸(RA).RA的自然形式是全反式衍生物,全反式维甲酸(Tretinoin,TR).RA有维持生长和分化的能力.作为分化剂,RA能诱导畸胎瘤干细胞、骨髓白血病细胞和成纤维细胞瘤细胞的分化,分化过程伴有基因表达诱导.这些基因的诱导可能是分化过程的基础.作为一种抗肿瘤剂,维甲酸已成功地用于实验动物化学诱导的肺、皮肤、膀胱和乳腺肿瘤.一种维生素A类似物亦显示可抑制放射诱导肿瘤的基因转化.核受体族系 已鉴定出二组受体:维甲酸受体(RAR)α、β、γ和维甲类X受体(RXR)α、β、γ.在人和鼠已克隆出其cDNAs.比较其DNA序列和结构组成,RARs和RXRs同属核受体大家族.

PPARγ和RXR激动剂抑制人卵巢颗粒细胞芳香化酶活性和其mRNA的水平

目的 探讨过氧化酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和维甲类X受体 (RXR)激动剂对人卵巢颗粒细胞芳香化酶活性的调节作用。方法 测定人卵巢颗粒细胞 (KGN)在PPARγ激动剂曲格列酮、吡格列酮和前列腺素J2 以及RXR激动剂LG10 0 2 68处理前后芳香化酶活性、雌酮 (E1)的变化以及P45 0芳香化酶 (P45 0arom)mRNA的表达水平。对P45 0arom启动子Ⅱ进行分析 ,以确定PPARγ和RXR是否直接抑制P45 0arommRNA的转录。结果 (1)PPARγ激动剂和RXR激动剂均能显著抑制芳香化酶活性 ,两者结合使用抑制作用进一步增强并且使E1的生成减少 ;(2 )芳香化酶活性的降低与P45 0arommRNA水平下降有关 ;(3 )PPARγ和RXR激动剂对 1.0kb长的P45 0arom启动子Ⅱ控制的荧光素酶蛋白无调节作用。结论 PPARγ和RXR激动剂对人卵巢颗粒细胞的芳香化酶活性和P45 0arommRNA的水平有抑制作用。

白色脂肪组织向棕色脂肪组织转化——治疗肥胖的新策略

肥胖已成为全球性健康问题,但目前仍没有安全有效的治疗方法。棕色脂肪组织和白色脂肪组织在能量代谢中发挥着截然相反的作用,人们一直试图促使白色脂肪组织向棕色脂肪组织转化,以求开辟治疗肥胖的新途径。本文对白色脂肪组织向棕色脂肪组织转化的发生机制进行总结,并对其相关问题进行了综述。

环境激素对纹沼螺RXR基因表达的影响

维甲酸X受体(RXR)基因在调控软体动物内分泌行为过程中起着关键作用.为揭示环境激素对软体动物RXR基因表达的调控作用,在前期构建纹沼螺转录组基础上,利用RACE技术扩增获得纹沼螺RXR基因cDNA全序列,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对环境激素暴露后纹沼螺RXR基因表达水平进行定量分析.研究结果显示,纹沼螺RXR基因与其他软体动物RXR具有较高的同源性,雌激素处理后RXR基因的表达先被抑制后被促进,雄激素处理后RXR基因的表达先被诱导后被抑制,并且不同暴露浓度组RXR基因表达差异不显著.研究结果表明,环境激素可能对纹沼螺有一定的毒理效应,为从分子水平上深入探究环境激素对软体动物危害机制提供了数据支持及理论基础.

RXRα对正常及形觉剥夺豚鼠屈光状态及眼球生长的调控

目的 通过对豚鼠球旁注射RXRα激动剂或抑制剂,研究RXRα在正常及形觉剥夺豚鼠屈光状态及眼球生长方面的调控作用,从而明确RXRα在屈光发育和近视形成中的作用.方法 实验研究.将245只正常3周龄体质量在100 g左右的三色豚鼠245只,采用直接抽样法分为正常组和形觉剥夺（FDM）组,2组又各分为空白对照组、溶剂组和给药组.溶剂组和给药组豚鼠每天右眼球旁分别注射DMSO或RXRα激动剂Fluorobexarotene或RXRα抑制剂HX531,连续注射4周,对侧眼不做处理.实验前和实验后2、4周分别检测屈光度和眼轴参数.正常组在实验结束后免疫荧光检测巩膜RXRα含量.采用独立样本t检验和单因素方差分析进行数据分析.结果 球旁注射Fluorobexarotene 4周后,豚鼠巩膜RXRα表达增加;球旁注射HX531 4周后,巩膜RXRα表达减少.不论注射RXRα激动剂或是抑制剂,正常组及形觉剥夺组豚鼠屈光状态和眼轴参数变化差异均无统计学意义.结论 球旁注射RXRα激动剂Fluorobexarotene或抑制剂HX531对正常及形觉剥夺豚鼠屈光发育及眼球生长无明显影响,提示单独RXRα对正常以及FDM豚鼠的屈光发育和眼球生长可能没有直接调控作用.