硫酸乙酰肝素对小鼠乳腺肿瘤细胞Caspase-3、bcl-2的表达及Caspase-3活性影响

目的:探讨硫酸乙酰肝素(heparan sulfate,HS)对乳腺肿瘤细胞Caspase-3、bcl-2表达及Caspase-3活性的影响。方法:(1)培养人乳腺上皮癌MCF-7细胞株,生长达汇合期及汇合后期时收集培养液,提取其中的硫酸乙酰肝素链。(2)建立C3H小鼠移植乳腺癌模型,随机分3组,即生理盐水(NS)组、HS组、阿霉素(adriamycin,ADR)组。第2天腹腔注射给药,给药结束第2天处死小鼠,完全剥离瘤体,称瘤重,计算抑瘤率。(3)免疫组化法测定Caspase-3、bcl-2的表达,Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3的活性。结果:(1)HS对小鼠肿瘤生长有抑制作用,HS和ADR组的肿瘤生长抑制率分别为29.98%和46.87%;(2)HS能减少肿瘤bcl-2表达,各组的阳性细胞数为,HS组34.6±2.55、ADR组46.0±3.24、NS组71.5±2.87;(3)HS能促进小鼠肿瘤细胞Caspase-3表达并能增强其生物活性,阳性细胞数为,HS组56.12±2.16、ADR组35.50±2.39、NS组19.75±1.98;各组的Caspase-3活性分别为HS组19.89±1.36、ADR组18.16±0.25、NS组13.15±0.90。结论:HS能通过减少C3H小鼠乳腺癌细胞bcl-2的表达,增加Caspase-3表达和活性来促进肿瘤细胞凋亡,发挥其抗肿瘤作用。

胶原蛋白复合硫酸肝素生物支架材料研制及其扫描电镜观察

目的:研制一种新型神经组织工程生物支架:胶原蛋白-硫酸肝素支架材料,用于神经损伤的修复。方法:将注有胶原蛋白-硫酸肝素悬浊液的硅胶管缓慢浸入-180℃液氮中,冷冻干燥,通过显微物镜、扫描电镜扫描观察所制胶原蛋白-硫酸肝素内部孔隙结构排列规律及走行方向,测量孔的大小。结果:制备的胶原蛋白复合硫酸肝素支架材料具有纵行的、平行排列的微管结构,高度仿生神经的内部空间三维结构。结论:胶原蛋白复合硫酸肝素生物支架材料作为新型神经组织工程材料基体,可用于周围神经损伤的修复。

硫酸乙酰肝素的体外抗黑色素瘤作用

目的:研究硫酸乙酰肝素(heparan sulfate,HS)的体外抗黑色素瘤作用。方法:从培养的人乳腺上皮癌MCF-7细胞提取HS链,将HS以不同终浓度作用于人A375黑色素瘤细胞,倒置显微镜下观察受试细胞的形态变化;MTT法检测细胞生长抑制率;双染法观察其对细胞凋亡的影响;活性检测法测定细胞中酶caspase-3的变化。结果:HS可抑制A375细胞的生长和增殖,诱导细胞凋亡增加,并促进了caspase-3的活化。结论:来源于MCF-7细胞的HS具有较强的体外抗黑色素瘤作用。

低分子肝素对呼吸道合胞病毒肾病大鼠模型的影响

目的研究呼吸道合胞病毒(RSV)感染对肾小球基底膜的损伤机制;低分子肝素(LMWH)对RSV致大鼠蛋白尿及肾小球结构改变的减轻及保护机制。方法以6×106空斑形成单位(PFU)RSV鼻腔滴注及腹腔注射,LMWH400IU/kg腹腔注射接种SD大鼠。实验组A先接种RSV3d,后予LMWH11d;实验组B先予RSV和LMWH的混合悬液3d,后予LMWH11d;实验组C连续予LMWH14d,期间于d4、d5、d6接种RSV;RSV组和对照组分别接种RSV和DMEM3d。观察肾组织形态学改变;分析24h尿蛋白定量及血生化学指标。原位杂交检测肾组织RSVRNA表达。结果1.实验组A、B、C与对照组比较尿蛋白无明显增高,RSV组接种后尿蛋白逐渐增高;2.实验组A、B、C与对照组比较血清蛋白、尿素氮、肌酐、胆固醇均无明显差异(Pa>0.05),而RSV组与实验组A和对照组比较,血清蛋白降低,同其余各组比较,尿素氮增高(P<0.05);3.光镜及电镜下实验组A、B、C与对照组比较,肾小球结构无明显改变,RSV组部分肾小球充血肿胀,足突肿胀、融合;4.原位杂交:实验组A、B、C肾组织原位杂交可见RSV阳性信号表达,但较RSV组弱。结论RSV感染细胞机制是通过阴阳电荷吸引作用与细胞表面硫酸乙酰肝素(HS)链结合。LMWH能与肾脏靶细胞HS竞争结合RSV,有效阻止RSV对大鼠肾细胞的感染,保护肾小球不被破坏,减轻蛋白尿。

N-脱硫酸肝素对大鼠移植肺缺血再灌注损伤的影响

目的评价N-脱硫酸肝素（NNH）对大鼠移植肺缺血再灌注损伤的影响。方法纯种雄性sD大鼠20只，体重280～350g，随机分为2组（n=10），对照组（C组）再灌注即刻静脉注射生理盐水1．2ml／kg；NNH组再灌注即刻静脉注射NNH12mg／kg。在呼吸机支持和显微镜辅助下，利用非内皮化袖套式方法，建立大鼠左肺移植模型。再灌注2h后取肺静脉血进行血气分析，取移植肺组织，计算肺湿，干重比（W／D），测定髓过氧化物酶（MPO）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-8（IL-8）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）mRNA的水平，光镜下观察肺组织的病理学变化。结果与C组比较，NNH组肺静脉血氧分压升高，肺W／D、TNF-α、IL-8和ICAM-1 mRNA水平降低（P〈0．05或0．01），肺静脉血二氧分碳分压和MPO活性差异无统计学意义（P〉0．05）。光镜下NNH组肺组织中性粒细胞浸润和水肿程度均比C组轻。结论静脉注射NNH12mg/kg可减轻大鼠移植肺缺血再灌注损伤，与降低肺组织炎性反应有关。

乙酰肝素酶促进脑缺血后血管发生

乙酰肝素酶（heparanase，Hpa）是哺乳动物体内唯一能降解硫酸乙酰肝素蛋白多糖的β-D-葡萄糖醛酸内切酶。研究证实，Hpa可促进多种病理生理学过程的血管发乍，但有关脑缺血后Hpa表达和作用的研究仍然较少。文章重点介绍rHpa与脑缺血后血管发生的关系。