人类一条新的类蛋白质二硫键异构酶cDNA的克隆和表达

利用 SMART技术构建了人胎脑 c DNA文库 ,通过大规模测序筛选出一条 16 45 bp的人类 c DNA。此c DNA含有一个 888bp的开放阅读框 (ORF) ,编码一个 2 96个氨基酸的蛋白质 ,预测分子量 34 .0 KD。与目前数据库中序列比较 ,该 c DNA编码的蛋白质与蛋白质二硫键异构酶的同源性达 36 % ,命名为类蛋白质二硫键异构酶(PDI- L)基因。多组织 Northern blot分析显示 PDI- L c DNA在心、脑、肝、肾等组织中均有表达。该 c DNA的读框片段正确插入到改造后的 p BV2 2 0表达载体中 。

羽衣甘蓝类蛋白质二硫键异构酶PDIL1-2的基因克隆及蛋白表达分析

以羽衣甘蓝(Brassica oleracea var.acephala)自交不亲和系(S13-bS13-b)为试材,利用RT-PCR和RACE的方法从柱头中分离类蛋白质二硫键异构酶BoPDIL1-2基因。将BoPDIL1-2编码区的序列构建到原核表达载体pET-14b上,并转化到大肠杆菌中进行原核表达与纯化;用纯化后的蛋白免疫小鼠,制备BoPDIL1-2多克隆抗体;通过免疫印迹法检测BoPDIL1-2在不同组织及不同发育阶段柱头的表达情况。氨基酸序列比对分析结果显示,羽衣甘蓝BoPDIL1-2与油菜BnPDIL1-2、拟南芥AtPDIL1-2的一致性分别是97.3%和85.5%。SDS-PAGE结果显示,在分子量58 kD处有BoPDIL1-2蛋白特异性地诱导表达。免疫印迹结果显示BoPDIL1-2在羽衣甘蓝柱头中特异表达,而且在柱头发育早期表达量较低,在开花期柱头表达量较高。