表皮生长因子蛛毒素受体7次跨膜结构域1通过血管内皮生长因子信号通路调控胃癌迁移的机制研究

目的探究表皮生长因子蛛毒素受体7次跨膜结构域1(ADGRL4)通过血管内皮生长因子(VEGF)信号通路调控胃癌迁移的机制。方法将正常胃黏膜上皮细胞GES⁃1、胃癌细胞SGC⁃7901、HGC⁃27、Hs⁃746T传代培养后,检测ADGRL4表达量。将胃癌SGC⁃7901细胞分为对照组、过表达组、沉默组。对照组转染空载体,过表达组转染ADGRL4上调质粒,沉默组转染ADGRL4沉默质粒。分析并比较3组胃癌细胞侵袭、迁移数及VEGF信号通路蛋白表达量。结果与正常胃黏膜上皮细胞GES⁃1比较,胃癌细胞SGC⁃7901、HGC⁃27、Hs⁃746T中ADGRL4表达量均上升(P<0.05);与胃癌细胞HGC⁃27、Hs⁃746T比较,胃癌细胞SGC⁃7901中ADGRL4表达量较高(P<0.05),故选择SGC⁃7901进行后续实验。与对照组比较,过表达组ADGRL4表达量上升,沉默组ADGRL4表达量下降(P<0.05);与过表达组比较,沉默组ADGRL4表达量下降(P<0.05),说明ADGRL4转染成功。与对照组比较,过表达组细胞侵袭数、迁移数、基质金属蛋白酶(MMP)⁃2、MMP⁃9、VEGF、血管内皮生长因子受体⁃2(VEGFR⁃2)表达量上升,E⁃钙黏蛋白(E⁃cadherin)表达量下降,沉默组细胞侵袭数、迁移数、MMP⁃2、MMP⁃9、VEGF、VEGFR⁃2表达量下降,E⁃cadherin表达量上升(P<0.05);与过表达组比较,沉默组细胞侵袭数、迁移数、MMP⁃2、MMP⁃9、VEGF、VEGFR⁃2表达量下降,E⁃cadherin表达量上升(P<0.05)。结论胃癌细胞经下调ADGRL4干预后,侵袭、迁移数减少,迁移、侵袭相关蛋白表达量得到调节,其机制可能与VEGF通路受到抑制有关。

类表皮生长因子域7促进颅脑损伤模型大鼠脑微循环的修复与重建

背景:研究表明血管内皮细胞受损与创伤性脑损伤的血脑屏障功能障碍密切相关,类表皮生长因子域7(EGF-likedomain7,EGFL7)是促进血管生成的重要因子,尚不可知EGFL7能否通过激活脑血管新生从而促进大脑创伤修复。目的:探讨EGFL7促进脑损伤后大鼠损伤脑组织中血管新生的具体机制。方法:健康成年雄性SD大鼠42只,随机分为2组,颅脑损伤组(n=36)运用改良Feeney法撞击大鼠脑硬膜建立颅脑损伤模型,假手术组(n=6)仅暴露完整脑硬膜;依照损伤后取标本时间分为颅脑损伤1,6,24h以及3,7,14d共6个亚组,每亚组各6只。经过神经功能损伤评分可用后,取挫伤灶及周围脑组织进行后续实验。另取18只SD大鼠随机分为3组,建立颅脑损伤模型,颅脑损伤1h后运用立体定向注射仪分别向大鼠脑室内注射腺病毒rAd-vector、rAd-EGFL7及rAd-EGFL7+PI3K/Akt通路抑制剂LY294002,每组6只。干预12h后取材检测。结果与结论:①RT-PCR、Westernblot及免疫组织化学染色检测显示:颅脑损伤大鼠脑组织中EGFL7、CD34表达显著上调,且随损伤后时间的增加而上调,EGFL7在颅脑损伤3d达到最大(P<0.05),EGFL7与CD34两者的表达趋势相一致,微血管生成数目在颅脑损伤7d到达最高;②大鼠颅脑损伤后1h颅内rAd-EGFL7微量注射12h后,损伤脑组织中EGFL7、CD34表达显著上调(P<0.05),同时pAkt、cyclinD1显著增加,FOXO1显著下降(P<0.05);③大鼠颅脑损伤后颅内同时注射rAd-EGFL7和PI3K/Akt信号通路抑制剂12h后,EGFL7表达变化不明显,但CD34表达显著受抑制(P<0.05),同时微血管生成数目显著减少(P<0.05);④结果证实,EGFL7在脑损伤组织中表达上调,其高表达可能与损伤脑组织中血管生成相关。EGFL7过表达激活PI3K/Akt信号通路从而促进损伤脑组织中的血管新生。

肾组织血小板反应蛋白1型结构7A域及神经表皮生长因子样蛋白-1 检测在M型磷脂酶A2受体阴性膜性肾病中的临床意义

目的探讨肾组织血小板反应蛋白1型结构7A域(THSD7A)及神经表皮生长因子样蛋白-1(NELL1)检测在M型磷脂酶A2受体(PLA2R)阴性膜性肾病中的诊断及治疗指导意义。方法选取浙江中医药大学附属杭州市中医院2014至2021年肾穿刺活检确诊为PLA2R阴性膜性肾病共116例,通过免疫组织化学方法检测肾组织THSD7A及NELL1的阳性表达情况,比较各组间临床病理特征及治疗与预后。结果116例PLA2R阴性膜性肾病中THSD7A阳性23例,NELL1阳性9例,其中两者双阳性1例。THSD7A阳性较阴性者IgG4阳性率更高(P=0.010);膜性肾病Ⅰ期占比更少,Ⅱ期占比更多(P=0.002);基底膜增厚更明显(P=0.034)。NELL1阳性较阴性者C1q及IgG2的阳性率更低(P=0.029,P=0.001);炎细胞浸润更多(P=0.033);多部位沉积物更少(P=0.001);基底膜增厚更不明显(P<0.001);不典型膜性肾病比例更低(P=0.010)。继发因素分析显示THSD7A阳性者有1例确诊为乙状结肠癌,NELL1阳性者均未发现恶性肿瘤。生存分析提示THSD7A阳性组肾病复合缓解率(完全缓解或部分缓解)显著低于阴性组(P=0.016),而NELL1阳性组肾病复合缓解率显著优于阴性组(P=0.015),两指标单一阳性组间比较显示NELL1单一阳性组肾病复合缓解率显著优于THSD7A单一阳性组(P<0.001)。结论THSD7A及NELL1阳性膜性肾病更倾向于原发性膜性肾病,且无恶性肿瘤提示价值,但对膜性肾病患者的预后具有一定的预测价值。

类表皮生长因子域7在创伤性脑损伤后脑组织中的表达变化及意义

目的探讨类表皮生长因子域(EGFL)7在创伤性脑损伤(TBI)后脑组织中的表达变化及意义。方法研究采用大鼠TBI模型,分别通过Western印迹分析和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测TBI后1 h、6 h、24 h、3 d、7 d和14 d的EGFL7表达。采用免疫组化检测挫伤周围皮层和海马区的EGFL7、Ⅰ型跨膜蛋白(CD34)表达。应用Transwell小室技术研究EGFL7基因沉默对神经干细胞(NSC)和内皮细胞(HUVEC)共培养系统的CD34、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化(p)-AKT蛋白表达。结果EGFL7 mRNA和蛋白水平在TBI后24 h显著升高(P<0.05),第3天达峰值,并持续至少14 d(P<0.05)。免疫组化检测结果显示,与假手术组相比,TBI大鼠挫伤周围皮层和海马区EGFL7和CD34阳性细胞显著增加(P<0.01)。EGFL7-siRNA表达载体转染组NSC-HUVEC共培养系统的CD34、AKT、p-AKT、PI3K蛋白相对表达均较对照组显著降低(P<0.05)。结论EGFL-7可能通过PI3K/AKT通路参与TBI后神经干细胞的血管生成。

Toll样受体4和类表皮生长因子域7在肾上腺皮质癌中的表达及其意义

目的探讨Toll样受体4(TLR4)和类表皮生长因子域7(EGFL7)在肾上腺皮质癌(ACC)中的表达及其临床意义。方法选取手术切除且具有完整临床资料的肾上腺皮质肿瘤石蜡封片标本48例,其中良性组20例,恶性组(ACC组)28例。采用免疫组化技术,检测并分析良、恶性肾上腺皮质肿瘤中TLR4和EGFL7的表达情况。结果 TLR4在ACC组中呈高表达状态(20/28,71.43%),在良性组中阳性表达率较低(5/20,25.00%),ACC组与良性组之间TLR4的表达有显著统计学差异(P<0.01);EGFL7在ACC组中的阳性表达率为64.29%(18/28),良性组中为20.00%(4/20),两者之间有显著性差异(P<0.05)。结论 TLR4和EGFL7在ACC中阳性表达率较高,可作为鉴別良、恶性肾上腺皮质肿瘤的分子标记物,有望为抗肿瘤靶向治疗在ACC中的应用提供相应的理论依据。

MiR-126体外调控人脐静脉内皮细胞中表皮生长因子-7基因的表达

目的研究miR-126对类表皮生长因子域7(EGFL-7)基因表达的调控作用。方法设计并构建靶向于EGFL-7的miR-126表达质粒,用脂质体转染人脐静脉内皮细胞株ECV-304,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Westernblotting检测EGFL7的mRNA及蛋白表达水平。结果用miR-126重组质粒转染ECV-304后经qRT-PCR检测发现:转染后pEGFP-N1-GFP/miR-126转染组EGFL7mRNA平均表达水平随时间总体呈降低趋势,48h的表达量最低。Westernblot检测发现:重组质粒转染后plegfp-N1-miR-126转染组内皮细胞中EGFL7蛋白相对于β-actin的比率为0.111,相对于空白对照组(0.336)减少了67%,而空质粒转染组(0.314)相对于空白对照组仅减少了6.5%。结论MiR-126可下调内皮细胞中EGFL-7蛋白水平的表达,为下一步研究EGFL7与肿瘤血管发生机制之间的关系提供了实验依据。

大肠癌中heregulin、表皮生长因子受体-2及基质金属蛋白酶-7表达及相关性

目的探讨heregulin、表皮生长因子受体(Erb B)-2及基质金属蛋白酶(MMP)-7在大肠癌中蛋白和基因的表达及其相关性。方法收集47例大肠癌根治术后新鲜标本为研究对象,用Western印迹法检测heregulin、Erb B-2及MMP-7在肠癌组织、癌旁组织及远癌组织的蛋白表达,用RT-PCR法检测Erb B-2及MMP-7在三组的mRNA表达;比较分析三者与大肠癌临床病理特征的关系。结果 heregulin和Erb B-2在肠癌组织的蛋白表达较癌旁组织显著增多(P<0.01),而癌旁组织比远癌组织的表达也有所增加(P<0.05)。MMP-7在肠癌组织的表达较癌旁组织增多,差异显著(P<0.01),远癌组织未见表达;肠癌组织中heregulin、Erb B-2及MMP-7的蛋白表达两两之间存在正相关关系。Erb B-2在肠癌组织的mRNA表达显著高于远癌组织(P<0.05);MMP-7的mRNA表达在肠癌组织显著高于癌旁组织(P<0.01),远癌组织未见表达。heregulin、Erb B-2及MMP-7的蛋白表达与大肠癌的分级、Dukes分期和淋巴结转移存在相关性。结论 heregulin、Erb B-2及MMP-7在大肠癌中过度表达;heregulin磷酸化激活Erb B-2后可能通过复杂的下游信号通路介导MMP-7表达上调,三者共同在大肠癌的浸润侵袭中发挥重要作用;heregulin及Erb B-2有望成为判断大肠癌恶性进展的重要指标。

表皮生长因子受体和Kirsten鼠肉瘤基因及棘皮动物微管相关类蛋白4-间变性淋巴瘤激酶融合基因突变在肺腺癌组织中的表达及其临床意义

目的评估表皮生长因子受体(EGFR)基因、Kirsten鼠肉瘤(KRAS)基因及棘皮动物微管相关类蛋白4-间变性淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因3种肿瘤驱动基因在肺腺癌组织中的表达并分析其临床意义。方法收集2014年1月至2017年8月在新疆维吾尔自治区人民医院行手术确诊并术后行EGFR、KRAS基因及EML4-ALK融合基因突变检测的172例肺腺癌患者的肺腺癌组织标本。分析3种肿瘤驱动基因突变与临床相关指标的关系。结果 172例患者中共检测到EGFR基因突变者66例(38.4%),病理分型腺泡型、乳头型及贴壁性,年龄≤60岁、女性、男性未吸烟或轻度吸烟、高分化和中分化患者EGFR基因突变率较高(均P<0.05);共检测到KRAS基因突变者39例(22.7%),病理分型实体性以及微乳头型、年龄>60岁、男性、重度吸烟者、低分化患者KRAS基因突变率较高(均P<0.05);共检测到EML4-ALK融合基因突变14例(8.1%),年龄≤60岁、男性未吸烟和轻度吸烟、高分化和中分化患者EML4-ALK融合基因突变率较高(均P<0.05),EML4-ALK融合基因突变与患者病理分型和性别无关(均P>0.05)。172例肺腺癌患者中,1例患者出现EGFR基因与EML4-ALK基因共同突变,1例患者出现KRAS基因与EML4-ALK基因共同突变,未出现EGFR基因与KRAS基因共同突变。结论患者病理分型、年龄、性别、吸烟状况及肿瘤分化程度与3种肿瘤驱动基因突变有一定的关系,3种肿瘤驱动基因在肺腺癌中很少共同突变。多基因联合作用的肺腺癌患者的抗肿瘤靶向治疗需要更多的研究为临床提供理论依据。

侯仰韶治疗肺癌患者表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂相关性皮疹经验

文章总结导师侯仰韶主任医师治疗肺癌患者表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(Epidermal Growth Factor Receptor–tyrosine Kinase Inhibitors,EGFR-TKIs)相关性皮疹经验。肺癌是世界上常见恶性肿瘤之一,我国肺癌患者的发病率和病死率逐年上升。随着肺癌治疗药物不断的更新换代,EGFR-TKIs已成为表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)基因突变肺癌患者的常规治疗手段,在临床中广泛使用。EGFR-TKIs与传统化疗药物相比,具有更长的生存期、更少的不良反应等优势。但伴随EGFR-TKIs治疗出现的皮疹、瘙痒等不良反应,仍影响着患者的生活质量和服药依从性。中药在肺癌治疗中有独特的优势,能够缓解放化疗、靶向治疗、免疫治疗的不良反应,改善患者症状,延长生存周期。侯仰韶主任医师认为,肺癌患者热毒蕴结于肺,素体亏虚,EGFR-TKIs治疗后,药物毒邪伤及肺脾,湿热内生,透表可发为皮疹。EGFR-TKIs治疗后的肺癌患者主要证型可归属于湿热内蕴兼肺脾气虚证。因此,侯仰韶主任医师以清热解毒、燥湿止痒、健脾益肺为治则,自拟“扶正解毒抑瘤方”,应用于临床。此外,导师在肺癌的治疗中,重视“同病类证类治”的治疗理念,临床中根据患者症状,在自拟方扶正解毒抑瘤方的基础上进行加减化裁,取得良好治疗效果。文章就导师侯仰韶主任医师临床治疗EGFR-TKIs相关性皮疹经验做简要阐述,并附病例1则,予以佐证。

表皮生长因子样结构域-7在宫颈癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的探究表皮生长因子样结构域-7(EGFL7)在宫颈癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法选取2015年2月至2016年3月于大连市第五人民医院妇科住院治疗的宫颈癌患者(n=40)及非宫颈癌患者(n=20)作为研究对象。采集宫颈癌患者宫颈癌组织及非宫颈癌患者正常宫颈组织,采用免疫组化法检测EGFL7在宫颈癌组织及正常宫颈组织中的表达水平,并分析EGFL7表达水平与宫颈癌患者临床病理特征和预后的关系。结果宫颈癌组织中EGFL7阳性表达率为70.00%,高于正常宫颈组织的10.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。EGFL7表达水平与宫颈癌患者脉管浸润相关(P<0.05);与患者年龄、分化程度、组织类型、浸润深度、国际妇产科联盟(FIGO)分期及淋巴结转移无关。EGFL7阳性表达患者中位生存期为15.97个月,短于EGFL7阴性表达患者的26.70个月,差异有统计学意义(P<0.05)。经COX比例风险回归模型分析,脉管浸润及EGFL7高表达均为影响宫颈癌患者预后的独立风险因素(P<0.05)。结论EGFL7高表达于宫颈癌组织,其表达水平与宫颈癌患者FIGO分期及脉管浸润相关,且脉管浸润及EGFL7表达水平均为影响宫颈癌患者预后的独立风险因素,EGFL7有望成为肿瘤治疗的新靶点,可为探究宫颈癌预后分子标志物提供新的参考。

微小核糖核酸-7调控表皮细胞生长因子受体对肝癌细胞增殖和转移的影响

目的探讨微小核糖核酸(miR)-7是否通过靶向调控表皮细胞生长因子受体(EGFR)对人肝癌细胞侵袭和增殖产生影响。方法传代培养HepG2人肝癌细胞,脂质体转染miR-7后使其表达上调或下调。荧光定量聚合酶链反应检测转染效率。蛋白印迹法检测miR-7上调或下调后肝癌细胞EGFR表达变化。溴化噻唑蓝四氮唑(MTT)法检测miR-7上调或下调后肝癌细胞增殖能力。划痕试验检测miR-7上调或下调后肝癌细胞迁移能力。结果脂质体转染HepG2人肝癌细胞可控制miR-7表达,miR-7表达与肝癌细胞EGFR表达呈负相关。miR-7表达上调时,肝癌细胞增殖和迁移变慢;反之,miR-7表达下调时,肝癌细胞增殖和迁移变快。结论 miR-7靶向调节EGFR表达,其表达与肝癌细胞增殖和迁移呈负相关。miR-7可能是未来肝癌治疗新策略的潜在靶点。

老年胃癌组织中表皮生长因子受体、人类表皮生长因子受体2及基质金属蛋白酶7的表达及其相关性

目的探讨老年胃癌组织中表皮生长因子受体(EGFR)、人类表皮生长因子受体(HER)2及基质金属蛋白酶(MMP)7的表达及相关性。方法选择行手术治疗的100例胃癌患者的胃癌组织蜡块标本,从100例胃癌组织蜡块标本上随机抽取50例,提取其癌旁组织作为癌旁对照组。比较EGFR、HER2、MMP7在胃癌组和癌旁组织的关系,并记录其和常见临床病理参数之间的关系。结果在胃癌组织中EGFR、HER2、MMP7的阳性表达率明显比癌旁组织高(P<0.05);EGFR、HER2、MMP7在胃癌组织中的表达和淋巴结转移、不同浸润程度、不同分化程度之间具有显著差异(P<0.05);在胃癌组织中,EGFR、HER2、MMP7的表达均呈现正相关(P<0.05)。结论 EGFR、HER2、MMP7和老年胃癌中许多临床病理特征之间存在着密切的关系,且三者呈协同作用,可作为对病情的诊断、治疗、预后提供参考依据。

miR-409-3b通过下调表皮生长因子蛋白7抑制胃癌侵袭和转移的分子机制

目的:观察mi R-409-3b对胃癌细胞侵袭转移的影响,探讨mi R-409-3b通过下调表皮生长因子蛋白7(epidermal growth factor like domain protein 7,EGFL7)调节胃癌侵袭和转移的具体机制.方法:通过基因芯片技术筛选出胃癌及癌旁组织差异性表达的微小RNA(micro RNA m i R N A);采用生物学信息学技术预测E G F L7调控相关m i R N A,通过对比上述结果,筛选出mi R-409-3b;进一步以mi R-4093b慢病毒及mi R-409-3b mimics过表达mi R-409-3b后,用Western blot检测胃癌细胞中的EGFL7的表达变化;采用Transwell侵袭实验及划痕实验检测mi R-409-3b慢病毒感染后细胞体外侵袭能力的变化;q RT-PCR检测80例胃癌患者癌组织和癌旁组织中mi R-409-3b的表达差异,并分析mi R-409-3b的表达与胃癌患者临床病理之间的关系.结果:基因芯片及生物信息学预测发现m i R-409-3b在胃癌组织中低表达,同时又可能调控E G F L7,双荧光素酶实验证实m i R-409-3b可以结合在E G F L7上,m i R-409-3b慢病毒及mi R-409-3b mimics过表达m i R-409-3b都能在蛋白水平下调E G F L7;m i R-409-3b家族3条m i R N A的q RT-P C R结果表明癌旁组织相对含量高于胃癌组织;Tr a n s w e l l侵袭实验结果表明:m i R-409-3b与感染空载慢病毒相比感染能显著降低胃癌细胞穿的能力.体外划痕实验的结果表明,经LV-mi R-409-3b感染空载慢病毒比BGC-823细胞的迁移能力明显升高.进一步统计结果表明,mi R-409-3b与淋巴结转移有关(P<0.05),mi R-409-3b的C/P值在无远处转移的病例组织比具有远处转移的病例组织中明显升高(P<0.05).结论:mi R-409-3b可以在转录后水平调控EGFL7的表达,从而抑制胃癌细胞的侵袭和转移.

血管内皮生长因子表皮生长因子受体和人表皮生长因子受体-2在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子受体(EGFR)及人表皮生长因子受体-2(HER-2)在结直肠癌中的表达及其与临床病理特征的关系和意义。方法采用免疫组织化学法检测结直肠癌、绒毛状腺瘤、管状腺瘤及正常组织中VEGF、EGFR和HER-2的表达,分析各组间表达的差异及其与临床病理参数的关系。结果在结直肠癌、绒毛状腺瘤、管状腺瘤和正常结直肠组织中VEGF的阳性率分别为74%(51/69)、61%(17/28)、27%(4/15)、0(0/15),各组间表达的差异有统计学意义(χ2=33.663,P=0.000);EGFR的阳性率分别为43%(30/69)、21%(6/28)、20%(3/15)、0(0/15),各组间表达的差异有统计学意义(χ2=13.877,P=0.003);HER-2的阳性率分别为17%(12/69)、0(0/28)、0(0/15)、0(0/15),各组间表达的差异有统计学意义(χ2=11.140,P=0.011)。②在结直肠癌,VEGF阳性率与淋巴结转移(χ2=7.442,P=0.006)、分化程度(χ2=5.519,P=0.023)有关,与患者性别(χ2=0.099,P=0.754)、年龄(χ2=1.998,P=0.158)、部位(χ2=0.209,P=0.648)无关;EGFR阳性率与淋巴结转移(χ2=5.113,P=0.024)、分化程度(χ2=4.495,P=0.034)有关,与患者性别(χ2=0.090,P=0.765)、年龄(χ2=0.193,P=0.660)、部位(χ2=1.002,P=0.317)无关;HER-2的表达与患者的性别(χ2=0.451,P=0.502)、年龄(χ2=0.793,P=0.373)、部位(χ2=0.019,P=0.889)、分化程度(χ2=0.721,P=0.396)、淋巴结转移(χ2=0.613,P=0.434)均无关。③VEGF、EGFR和HER-2表达在结直肠癌中表达两两呈正相关(r=0.388,P=0.001;r=0.273,P=0.023;r=0.292,P=0.015)。结论 VEGF、EGFR和HER-2的表达与结直肠癌的发生发展密切相关,VEGF、EGFR和HER-2表达在结直肠癌中表达两两呈正相关,联合检测三者的表达能更准确地评估结直肠癌的生物学特征及预后。

基于MFCC方法计算表皮生长因子受体与4-苯胺基喹唑啉结合的量子力学机制

基于最近发展的分子碎片共轭帽(molecular fractionation with conjugate caps,MFCC)方法,表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)与其抑制剂的相互作用能得以用完整的量子力学来计算,主要包括上市的Iressa[第一代美国食品及药物管理局(Food and Drug Administration,FDA)通过的药物]和4-苯胺基喹唑啉类抑制剂Tarceva(已上市)、CI-1033与EKI-785。对EGFR的完整体系(超过5 000个原子)与4-苯胺基喹唑啉类抑制剂之间的结合作用采用了量子力学计算方法。结合体系的量子能量计算,用Hartree-Fock与密度泛函理论(density functional theory,DFT)2种方法,EGFR与Tarceva之间的相互作用能基于它们两者复合物的晶体结构得到,而其他抑制剂与EGFR的相互作用能则通过分子对接软件预测的构型进行计算。利用MFCC方法,获得了量子相互作用能谱,清楚地给出了EGFR每个氨基酸片段与4-苯胺基喹唑啉类抑制剂之间的单个相互作用能。量子研究发现,4-苯胺基喹唑啉类抑制剂与EGFR的结合通过1个氢键和静电相互作用。Iressa、Tarceva、CI-1033、EKI-785与EGFR的结合能计算值分别为-40.23、-53.09、-33.92、-31.47kcal/mol(1cal=4.184J)。研究表明,Tarceva比第一代FDA通过的药物Iressa有更强的结合能力,而CI-1033、EKI-785则表现出一般的结合作用,另外,与MFCC计算的相互作用能谱相比,有一些相互作用在力场作用能谱中被明显高估。

表皮生长因子受体和抑制剂之间分子对接的研究

研究了表皮生长因子受体（EGFR）和4-苯胺喹啉类抑制剂之间的相互作用模式.表皮生长因子受体的三维结构通过同源蛋白模建的方法得到,而抑制剂和靶酶结合复合物结构则通过分子力学和分子动力学结合的方法计算得到.从模拟结果得到的抑制剂和靶酶之间的相互作用模式表明范德华相互作用、疏水相互作用以及氢键相互作用对抑制剂的活性都有重要的影响.抑制剂的苯胺部分位于活性口袋的底部,能够与受体残基的非极性侧链产生很强的范德华和疏水相互作用.抑制剂双环上的取代基团也能和活性口袋外部的部分残基形成一定的范德华和疏水性相互作用.而抑制剂喹唑啉环上的氮原子能和周围的残基形成较强的氢键相互作用,对抑制剂的活性有较大的影响.计算得到抑制剂和靶酶之间的非键相互作用能以及抑制剂和靶酶之间的相互作用信息能够很好地解释抑制剂活性和结构的关系,为全新抑制剂的设计提供了重要的结构信息.

转化生长因子-α

转化生长因子-α是人类发现的第一个多肽类的有丝分裂原-皮生长因子家族的重要成员。其在人体表更新较快的组织、多种肿瘤及发育阶段的胚胎组织中均有表达。在肿瘤患者的血、尿、脑脊液及细胞培养液中可检测到。其前体可作为子宫容受性的标记分子。

小干扰RNA对人内皮细胞株类表皮生长因子域7基因表达抑制作用的实验研究

目的研究小干扰RNA(siRNA)对类表皮生长因子域7(egfl7)基因表达的抑制作用。方法利用Ambion公司设计合成的以egfl7为靶标的siRNA,通过脂质体将siRNA转入人脐静脉内皮细胞株,以未转染siRNA细胞和转染无关siRNA细胞为对照,利用MTS[3-(4,5-dimethylthiaz-2-yl)- 5(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfopheny)-2H-tetrazolium,inner salt]法检测siRNA对细胞存活率的影响,同时检测乳酸脱氢酶和三磷酸腺苷,观察siRNA对细胞生长的影响,RT-PCB法检测egfl7 mRNA水平的改变,Western blot检测egfl7蛋白表达的变化。结果siRNA各组与对照组细胞存活率差异均有统计学意义(P<0．05),乳酸脱氢酶及三磷酸腺苷释放量差异也存在统计学意义(P< 0．01)。转染24 h后,siRNA组egfl7 mBNA与对照组相比差异有统计学意义(P<0．01),同时egfl7蛋白表达也被明显抑制(P<0．01)。其中siBNA1的抑制效率最高。结论体外转录合成的siRNA可抑制人脐静脉内皮细胞egfl7基因的表达。

类表皮生长因子域7在高体积分数氧致新生大鼠新型支气管肺发育不良中的表达及其意义

目的观察类表皮生长因子域7(EGFL7)在高体积分数氧(高氧)致新生大鼠新型支气管肺发育不良(BPD)中的表达,探讨EGFL7在新型BPD发生发展中的可能作用。方法足月新生SD大鼠64只在出生12 h内,根据吸入氧浓度的不同随机分为实验组和对照组。实验组持续暴露于600 mL.L-1氧气中,对照组吸入空气。分别取2组大鼠生后4 d、7 d、10 d和14 d肺组织标本,HE染色观察其肺组织病理改变,免疫组织化学方法检测其血小板内皮细胞表面黏附分子-1(PECAM-1)的表达,以PECAM-1阳性染色的内皮细胞面积与肺实质细胞总面积的百分比代表肺微血管密度,采用实时荧光定量-PCR技术和W estern blot法分别检测其EGFL7 mRNA和蛋白表达。结果 1.实验组600 mL.L-1氧气暴露14 d后,大鼠肺组织结构发生类似新型BPD的病理改变。2.PECAM-1蛋白主要表达于肺微血管内皮细胞的胞质中,实验组PECAM-1蛋白和肺微血管密度均下降,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05,0.01)。3.实验组新生大鼠肺组织EGFL7 mRNA和蛋白表达在出生4 d、7 d、10 d、14 d均低于对照组(Pa<0.05,0.01)。4.实验组EGFL7蛋白水平与肺微血管密度呈正相关(r=0.432,P<0.01)。结论 EGFL7参与了新型BPD发生发展的整个过程,可能与肺微血管发育障碍有关。

内皮细胞类表皮生长因子域7对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的探讨人脐静脉内皮细胞株(HUVEC)中类表皮生长因子功能域7(EGFL7)对共培养的人主动脉平滑肌细胞(AoSMC)凋亡的影响以及可能的信号转导通路。方法利用细胞共培养池行HUVEC与AoSMC共培养,将EGFL7的特异siRNA转染HUVEC细胞,利用MTS法检测HUVEC中EGFL7基因的有效沉默对共培养的AoSMC细胞存活率的影响;并合成无关siRNA作为阴性对照组(neg组),以未转染siRNA的细胞为空白对照组(con组)。同时利用分光光度法检测其对AoSMC细胞乳酸脱氢酶(LDH)、三磷酸腺苷(ATP)以及细胞凋亡蛋白酶(Caspase-3)表达的影响;应用RT-PCR检测共培养AoSMC的bcl-2及bax mRNA表达水平的改变。结果与neg组及con组相比,干扰HUVEC细胞EGFL7表达12 h后,AoSMC存活率无明显变化(P>0.05),而干扰24、36、48 h后,存活率显著降低(P<0.05);干扰12、24、36、48 h后,AoSMC细胞线粒体ATP释放量减少、培养基中LDH含量及Caspase-3表达量均增加(P<0.05)。RT-PCR检测结果显示,与neg组及con组相比,干扰siRNA转染HUVEC细胞24、36、48 h,共培养的AoSMC凋亡基因bcl-2表达水平轻度降低(P<0.05);但Bax表达水平在相应干预时间点均无明显改变(P>0.05)。结论内皮细胞株EGFL7基因沉默时,可导致平滑肌细胞凋亡;EG-FL7通过bcl-2相关信号通路调节SMC凋亡,而与Bax基因表达无关。