黄瓜类钙调蛋白CML8与性型分化主效基因编码蛋白的互作分析

【目的】为探索类钙调蛋白CMLs是否参与黄瓜性型分化过程,以便进一步完善性型分化调控网络提供参考。【方法】通过克隆黄瓜CML8、ACS1G、ACS2及ACS11基因,qPCR检测CML8基因在不同花型中的表达量,酵母双杂交检测CML8与黄瓜性型分化主效基因编码蛋白间的互作情况。【结果】克隆得到黄瓜CML8基因,完整ORF 441 bp,编码146 aa,不含信号肽;不含跨膜域,为胞外蛋白,含4个具有Ca^(2+)结合能力的EF-hand结构域,不含内含子,亚细胞定位在细胞膜和细胞质;克隆得到黄瓜性型分化关键基因F(ACS1G)、M(ACS2)及A(ACS11),序列比对表明三者的基因序列及编码蛋白序列与黄瓜数据库中的一致,且在雌花、雄花和两性花3种不同花型中的表达量差异显著,在雄花中差异极显著;酵母双杂交试验表明,CML8均可与ACS1G和ACS2发生互作,而不能与ACS11发生互作。【结论】成功克隆得到黄瓜CML8基因,且CML8可与ACS1G和ACS2发生互作,可能参与黄瓜性型分化过程,本研究首次探索类钙调蛋白参与植物性型分化过程,期望为钙信号系统参与植物性型分化提供参考。

蓖麻类钙调蛋白基因RcCML42克隆与表达载体构建

为了探究类钙调蛋白基因家族成员在蓖麻体内的作用及表达模式,在蓖麻体内挖掘家族基因CML42,并对其进行克隆与表达分析。以哲蓖三号植株为试验材料,克隆获得RcCML42完整编码区序列(CDS),利用生物信息学方法对RcCML42基因序列进行分析,包括编码氨基酸、蛋白分子量及等电点、跨膜结构域、氨基酸序列一致性等内容。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)技术,检测RcCML42基因在蓖麻植株根、茎、叶位置不同时间点的特异性表达情况。结果显示,RcCML42 CDS长度为597 bp,编码198个氨基酸,含有3个EF-hand钙结合结构域。蛋白分子量为22.27 ku,等电点为4.55,不存在跨膜结构域。氨基酸序列一致性分析表明,RcCML42与巴西橡胶树一致性最高,达86.84%。qRT-PCR结果显示,RcCML42基因在蓖麻根、茎、叶组织中均有表达,在经NaCl处理后,RcCML42在根中的表达量呈现先下降后上升的趋势。RcCML42在茎中12 h高度表达,在叶中为8 h高度表达。且在茎中的表达量显著高于其在根、叶中的表达。CML是植物体内最重要的一类钙感受器,通过与钙调素结合蛋白结合进而对植物细胞进行调控。当植物受到环境中NaCl侵害时,CML可以参加体内钙离子的调节,进而减轻盐胁迫对植物体的损害。综上,推测RcCML42在盐胁迫条件下的蓖麻信号转导中起重要作用。

原核生物中的类钙调蛋白

钙是重要的生命元素之一，真核生物中普遍存在介导钙信号的钙调蛋白已有深入的研究，证明钙调蛋白是细胞复杂调控系统中的一个重要成员，但是在原核生物中是否也存在类似的蛋白因子却一直说法不一。自８０年代初在大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）中首次发现类钙调蛋白（ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ－ｐｒｏｔｅｉｎ）以来，已在多种原核生物中陆续发现了类钙调蛋白的存在，证明其可能参与了原核生物的孢子形成，细胞分裂，生物固氮，异型胞形成和兰细菌光合作用等多种调控功能。文章综述了近年来这一领域的部分研究成果。

微小隐孢子虫类钙调蛋白基因的克隆与原核表达

为了对微小隐孢子虫(C.parvum)类钙调蛋白(CML)基因进行原核表达,分析重组表达蛋白的反应原性。以C.parvum卵囊cDNA为模板,用PCR方法扩增得到C.parvum CML基因。将CML基因连接到克隆载体pMD18-T,获得重组质粒pMD-CML,经限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,连接到经相同内切酶酶切的表达载体pGEX-6p-1上,构建重组表达质粒,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达。利用GST亲和树脂法纯化重组表达蛋白,对纯化的重组蛋白进行Western blot分析。结果表明,成功构建了重组原核表达质粒pGEX-CML,重组质粒转化菌经IPTG诱导后成功地表达出了分子质量约为51ku的重组蛋白rCML,纯化的蛋白rCML能与感染兔隐孢子虫(C.cuniculus)的兔血清发生特异性反应,具有很好的反应原性。

类钙调磷酸酶B亚基蛋白GhCBL3-A01调控棉花黄萎病抗性的功能分析

【目的】解析类钙调磷酸酶B亚基蛋白(calcium B-like protein,CBL)基因GhCBL3-A01在棉花抗黄萎病反应中的功能,为棉花抗病育种提供基因资源。【方法】从棉花基因组数据库获得GhCBL3-A01基因的同源序列,进行生物信息学分析。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)、茉莉酸甲酯(methyl jasminate,MeJA)和H2O2处理的棉株中GhCBL3-A01基因的表达量变化。利用病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术研究GhCBL3-A01在棉花抗黄萎病中的功能。通过检测活性氧积累以及相关基因的表达量,初步分析GhCBL3-A01的作用机制。【结果】陆地棉中GhCBL3-A01及其3个同源蛋白均含有3个CBL家族典型的EF-hand结构域。大丽轮枝菌、MeJA和H2O2处理后,GhCBL3-A01的表达量显著升高。VIGS沉默GhCBL3-A01导致病株率和病情指数显著降低,茎秆维管束褐变程度减轻,有病菌繁殖的茎段数量明显减少,增强了棉株对黄萎病的抗性。GhCBL3-A01基因沉默棉株叶片中活性氧积累增多,防御相关基因PR1、NPR1、PR4和PDF1.2以及茉莉酸信号通路关键基因AOS1、OPR3、MYC2和LOX2的表达量增加。【结论】GhCBL3-A01通过调控防御相关基因、茉莉酸信号通路基因的表达和活性氧积累负调控棉花对黄萎病的抗性,是提高棉花黄萎病抗性的候选基因。

微小隐孢子虫类钙调蛋白基因真核表达质粒的构建及在Hela细胞中的表达

为了构建微小隐孢子虫类钙调蛋白(calmodulin-like protein,CML)基因的真核表达质粒,并在Hela细胞中实现表达,以微小隐孢子虫卵囊cDNA为模板,通过PCR扩增CML基因,插入到克隆载体pMD18-T中。对经鉴定的pMD-CML重组质粒进行双酶切,将目的基因连接到经同样内切酶双酶切的真核表达载体pVAX1上。重组质粒经双酶切分析和测序鉴定后,用FuGENE HD转染试剂介导的方法,将重组表达质粒转染Hela细胞,用Western-blot技术和间接免疫荧光法检测外源基因的表达。结果显示,成功构建了微小隐孢子虫CML基因的真核表达质粒pVAX-CML,重组质粒在Hela细胞中实现了表达,表达产物具有良好的反应原性,为研究CML的特性和功能、寻找新的防控技术奠定了基础。

类钙调蛋白在植物生长发育及逆境胁迫中的功能研究进展

作为Ca^(2+)信号系统的重要家族成员,类钙调蛋白(CMLs)参与植物的各种生理生化过程,包括生长发育、生物胁迫、非生物胁迫和激素作用等。本文就类钙调蛋白在植物生长发育过程中功能的研究进展进行系统的综述,并对类钙调蛋白相关领域的研究进行展望,以期为CMLs的深入研究提供参考。

杜仲类钙调蛋白基因EuCML5的克隆及表达分析

在前期构建的杜仲基因组数据库的基础上,克隆得到了类钙调蛋白(Calmodulin-like protein,CML)基因EuCML5。分析发现EuCML5开放阅读框长度为282 bp,编码93个氨基酸,不含跨膜结构和信号肽,属于胞内蛋白,氨基酸序列中含有EF-Hand motif结构,在进化关系上与一些木本植物类钙调蛋白较近。实时荧光定量PCR分析发现,EuCML5在杜仲根中表达较高,茎和叶中表达较低。杜仲苗经过模拟干旱、高盐、茉莉酸甲酯、生长素处理后,EuCML5表达量有不同程度提高,表明EuCML5能够被非生物胁迫和植物生长调节剂诱导表达,并且受钙离子通道抑制剂LaCl3和钙调蛋白拮抗剂TFP抑制。

杜梨类钙调磷酸酶B亚基蛋白PbCBL10基因的克隆和表达特性研究

【目的】为了探明杜梨类钙调磷酸酶B亚基蛋白（CalcineurinB—likeprotein，CBL）基因的序列特征和表达特点，【方法】以杜梨幼苗为试材，运用同源克隆和半定量RT—PCR对PbCBLIO基因进行克隆和表达分析。【结果】结果表明．PbCBLIO基因编码区cDNA长度为801bp，编码的多肽由266个氨基酸组成。该多肽预测的等电点为4．56，估计的相对分子质量为30．45ku。其对应基因组DNA序列长1983bp，包括9个外显子和8个内含子。通过PSORT进行亚细胞定位分析发现PbCBLl0蛋白位于质膜上的几率最大。PbCBLIO基因编码的多肽具有4个钙离子结合域EF手形结构和1个钙调磷酸酶A亚基结合位点。PbCBLl0与番茄S1CBLIO（NP_001239045）和拟南芥AtCBLl0（NP_195026）蛋白间的同源性较高，分别为82％和77％，并与AtCBL10亲缘关系最近。PbCBL10基因在杜梨幼苗根、茎和叶片中均为诱导型表达，50～200mmol·L^（-1）CaCl2、20μmol·L^（-1）ABA、100mmol·L^（-1）NaCl、10％（w／v）PEG6000或180mmol·L^（-1）甘露醇处理后其表达量明显上调。【结论】PbCBLIO基因具备植物CBL基因家族的固有特征，能够响应胞内钙浓度变化，对ABA、盐碱、干旱和渗透胁迫均存在转录响应。

葡萄类钙调磷酸酶B亚基蛋白基因VvCBL4的克隆与表达分析

【目的】在京秀(Vitis vinifera‘Jingxiu’)葡萄中克隆类钙调磷酸酶B亚基蛋白基因Vv CBL4及其启动子,分析Vv CBL4的表达特性与逆境胁迫的关系。【方法】用RACE技术克隆Vv CBL4的全长,实时荧光定量PCR检测Vv CBL4在不同逆境下的表达;用同源克隆技术获得Vv CBL4的启动子,在烟草叶片中瞬时表达分析Vv CBL4启动子的活性。【结果】Vv CBL4全长为959 bp,ORF为642 bp,编码213个氨基酸,具有3个EF手钙结合结构域。Vv CBL4在根部表达量最高,其次是果实。Vv CBL4的转录本能对干旱、低温和盐胁迫处理快速做出响应。Vv CBL4启动子富含与逆境响应相关的顺式作用元件。干旱、低温和盐胁迫处理能够增强启动子活性。【结论】获得Vv CBL4及其启动子序列,Vv CBL4的表达能对逆境胁迫做出响应,Vv CBL4启动子的活性受逆境胁迫诱导,说明Vv CBL4在葡萄逆境胁迫反应中具有重要的作用。

一个钙调蛋白类基因对拟南芥叶片气孔分布的影响

以一个缺磷胁迫诱导的钙调蛋白类基因AtPsiCaM为研究对象,采用拟南芥浸润转基因方法获得了AtPsiCaM基因的35S增强转基因植株。经Northern杂交检测表明,在AtPsiCaM基因的增强转基因株系中,该基因的转录水平明显增强。实验结果表明AtPsiCaM基因降低了增强转基因植株叶片的气孔指数和气孔导度,并且影响了植株的气孔分布。

大麦类钙调磷酸酶B互作蛋白激酶基因克隆及表达分析

采用RT-PCR法从大麦抗旱品种‘甘啤7号’中克隆了1个类钙调磷酸酶B互作蛋白激酶(CIPK)基因HvCIPK1(GenBank登录号为JX679077)。序列分析表明,该基因全长1 359bp,编码的蛋白含有452个氨基酸,分子量为51.05kD,等电点为9.13。推断具有植物CIPK家族典型的功能结构域,在N端有一特异的催化结构域,该结构域在保守的氨基酸DFG和APE之间含有一个催化所需的活性环;同时C端区域存在一个独特的24个氨基酸组成的调节域,即NAF结构域。荧光定量分析结果表明,在PEG、NaCl和ABA处理下,HvCIPK1基因在大麦幼苗叶片中表达显著上调。推测HvCIPK1基因参与多种逆境信号的转导,可能在大麦的多种非生物胁迫响应中起着重要的作用。

RNA干涉方法在拟南芥钙调蛋白类基因研究中的应用

以拟南芥芯片杂交分析中发现的一个低磷条件下诱导的钙调蛋白类基因AtPsiCaM为研究对象,通过RNA干涉使该基因沉默,获得AtPsiCaM基因的转基因干涉植株,以期对该基因进行进一步的功能研究。

钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在心力衰竭发生发展中的作用

近来发现，钙．钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（Calcium—Calmodulin—dependentproteinkinaseII，CaMKⅡ）在诸多心血管疾病的发生发展中起到重要作用。越来越多的证据表明，CaMKII通路的激活会加速某些心血管疾病的发展进程，尤其在心力衰竭中，我们将就两者关系做一综述。

环孢霉素A对肾性高血压大鼠重要脏器钙调神经磷酸酶活性的调控(英文)

背景：近来大量研究表明，钙调神经磷酸酶依赖的信号转导通路在免疫系统、神经系统、心血管系统具有广泛的生物学效应，钙调神经磷酸酶活性改变与多种疾病发生发展密切相关。 目的：通过建立一肾一夹肾性高血压大鼠模型，观察高血压大鼠心脏、脾、肾脏、肺、脑、肝、主动脉等重要组织脏器钙调神经磷酸酶活性变化及环孢霉素A的调控作用。 设计：完全随机分组设计，对照实验。 单位：解放军总医院南四科。 方法：实验于2002-11／2003-06在解放军总医院老年外科实验室完成。选用雄性Wistar大鼠(清洁级)20只。动物随机分为3组：肾性高血压组[n=7，行一肾一夹手术，术后第4天开始给予生理盐水1mK／(kg·d)腹腔注射，9g／L盐水代饮水至4周]，环孢霉素A干预组(n=7，行 肾一夹手术后第4天给予环孢霉素A5mg／(kg·d)腹腔注射，9g／L盐水代饮水至4周)，假手术组(n=6，除不切除右肾及狭窄左肾动脉外，其余操作同手术组，假手术后第4天开始给予生理盐水1mL／(kg·d)腹腔注射，正常饮水至4周)。一肾一夹模型制作方法：将大鼠腹腔注射麻醉后，行右肾切除，左肾用直径0．2mm银夹狭窄左肾动脉。采用tail-cuff测压法测鼠尾收缩压。以对硝基磷酸酚为底物测定术后4周大鼠各组织器官钙调神经磷酸酶活性。两组差异性比较采用成组资料t检验。 主要观察指标：①各组大鼠各重要组织及器官钙调神经磷酸酶活性比较。②各组大鼠术前及术后4周收缩压比较。 结果：大鼠20只均进入结果分析。①收缩压：术前三组大鼠相近(P>0．05)。术后4周环孢霉素A干预组低于肾性高血压组，但差异不明显；肾性高血压组和环孢霉素A干预组大鼠均明显高于假手术组(t=2．54，3．01，P<0．05)。②肾、肺、心、脾、脑组织钙调神经磷酸酶活性：肾性高血压组大鼠明显高于假手术组(t=3．17～7．08，P<0．05)，环孢霉素A干预组明显低于肾性高血压组(t=2．91～7．25，P<0．05)。③肝细胞钙调神经磷酸酶活性：肾性高血压组和环孢霉素A干预组均明显低于假手术组(t=2．63，2．83，<0．05)。④主动脉钙调神经磷酸酶活性：各组大鼠相近。 结论：①肾性高血压大鼠心、脑、肾脏、脾脏、肺脏组织钙调神经磷酸酶活性均有显著升高，环孢霉素A对肾性高血压大鼠上诉各组织脏器钙调神经磷酸酶活性具有广泛的抑制作用。②环孢霉素A无明显降肾性高血压大鼠收缩压作用。

活性氧簇及抗氧化剂对钙调神经磷酸酶作用的研究

目的:研究活性氧簇(ROS)及抗氧化剂对钙调神经磷酸酶的作用。方法:测定并比较对照黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶ROS生成系统作用下及与超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶、甘露醇或二巯基苏糖醇(DTT)共同作用下钙调神经磷酸酶的活性。结果:黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶系统产生的ROS使钙调神经磷酸酶活性下降33.1%。SOD、过氧化氢酶、DTT可显著减少ROS对钙调神经磷酸酶活性的抑制。结论:钙调神经磷酸酶受氧化还原作用调节。

钙调神经磷酸酶在心血管系统中的作用

目的:钙调节神经磷酸酶是目前惟一已知的细胞内钙/钙调素依赖性丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶,在细胞信号传递过程中直接受钙的调节,起去磷酸化作用。就钙调节神经磷酸酶的酶学特性、分布、生物学功能及其与心血管系统的关系作一综述。资料来源:检索Medline1995-01/2005-12及清华同方数据库1994-01/2005-12的相关文章,检索词“calcineurin”,并限定文章语言种类为English。检索词“钙调节神经磷酸酶”,限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,纳入标准:钙调节神经磷酸酶的酶学特性、分布、生物学功能及其与心血管系统关系的实验研究文章。排除标准:重复研究、综述、Meta分析。资料提炼:共收集到95篇关于钙调节神经磷酸酶的酶学特性、分布、生物学功能及其与心血管系统关系的实验研究的文献,30篇符合纳入标准。排除的65篇中包括重复研究、综述、Meta分析。资料综合:①近年发现,钙调节神经磷酸酶-T细胞活化核因子途径广泛存在于心肌骨骼肌、血管平滑肌细胞等,参与心肌和骨骼肌肥大、成纤维细胞增殖的发生。②钙调节神经磷酸酶为一个催化亚单位(CnA)和一个调节亚单位(CnB)组成的异源二聚体,有3种主要同工酶:CaNα,CaNβ,CaNγ。钙/钙调素与钙调节神经磷酸酶结合后诱发CnA构象的改变,致使自身抑制域移位,暴露出活性位点,产生钙调节神经磷酸酶的活化。③钙调节神经磷酸酶使胞浆转录因子NF-ATS脱磷酸化,暴露其核定位信号,NF-ATS得以转位入核,与核内其他转录因子协同调节多种基因的活化。在免疫应答中的重要作用,参与细胞生长,凋亡。④钙调节神经磷酸酶信号通路启动血管发育及后期血管与周围组织之间的有联,钙/钙调节神经磷酸酶/NF-ATC在正常心瓣和心膈形成的信号转导过程中发挥重要作用,对心脏的正常形态学发生至关重要。结论:钙调节神经磷酸酶在心血管系统的正常生理结构与功能的维持以及病理生理过程中均发挥着重要作用。调节神经磷酸酶信号通路在心血管系统生理及病理生理中的反作用的证实,以及对其作用机制、抑制剂的深入研究,对探讨心血管疾病的发病机制、正常心血管功能的调节机制有重要意义。

植物细胞钙靶蛋白的研究进展

简述了植物细胞的钙离子调控过程,对钙调蛋白、钙调磷酸酶B类蛋白和钙离子依赖型蛋白质激酶3类钙靶蛋白的最新研究进展进行了综述。

心肌肥厚大鼠心肌组织中钙调神经磷酸酶抑制因子的信号转导

目的:观察醛固酮诱导心肌肥厚大鼠心肌组织钙调神经磷酸酶抑制因子表达和心肌钙调神经磷酸酶活性及血浆中醛固酮和血管紧素II水平的变化。方法:实验于2003-08/12在解放军总医院老年病研究所实验室完成。选用健康雄性Wistar大鼠21只。随机分为3组,每组7只,分别为正常对照组和心肌肥厚组及环孢素A组。①分组干预:正常对照组:皮下注射等量生理盐水,10g/L盐水饮用,连续14d;心肌肥厚组:皮下注射醛固酮18μg/d,10g/L盐水饮用,连续14d复制心肌肥厚模型。环孢素A组:除皮下注射醛固酮18μg/d外,同时以环孢素A5mg/(kg·d)皮下注射14d,10g/L盐水饮用,连续14d。②心肌组织钙调神经磷酸酶抑制因子测定:钙调神经磷酸酶抑制因子条带的平均密度测定采用凝胶成像分析系统完成。③血浆中醛固酮和血管紧素Ⅱ水平:采用放射免疫方法测定。④心肌钙调神经磷酸酶活性:参照发色底物法改进方法测定。结果:大鼠21只均进入结果分析。皮下注射醛固酮14d后,①血浆醛固酮水平:环孢素A组明显高于心肌肥厚组和正常对照组[(0.75±0.17),(0.28±0.06),(0.21±0.03)ng/L,P<0.05]。②心肌组织钙调神经磷酸酶活性:心肌肥厚组明显高于正常对照组[(0.40±0.09),(0.18±0.58)A410,P<0.05]。③血浆血管紧张素II水平:心肌肥厚组明显低于环孢素A组和正常对照组[(304±106),(1309±925),(448±258)ng/L,P<0.05]。④钙调神经磷酸酶抑制因子的表达:心肌肥厚组明显高于正常对照组和环孢素A组(56.26±3.37,36.26±6.19,44.71±6.58,P<0.01)。结论:①钙调神经磷酸酶抑制因子有拮抗心肌肥厚反应的作用。②在外源性醛固酮诱发大鼠发生心肌肥厚反应过程中,钙调神经磷酸酶的活性增加,而其内源性负性调节蛋白钙调神经磷酸酶抑制因子的表达亦相应增加;应用钙调神经磷酸酶特异性阻断剂环孢素A后,心肌组织内钙调神经磷酸酶的活性呈下降趋势,而钙调神经磷酸酶抑制因子的表达亦相应显著下降,提示钙调神经磷酸酶抑制因子的变化受到钙调神经磷酸酶信号转导系统调控。

苦荞FtCIPK的鉴定及响应干旱高钙胁迫的表达分析

【目的】鉴定苦荞(Fagopyrum tartaricum L.)类钙调磷酸酶B互作蛋白激酶(FtCIPK),并研究干旱与高钙下FtCIPK的表达量变化,为探究苦荞耐干旱高钙的机理与FtCIPK基因功能提供科学参考。【方法】利用生物信息学方法对苦荞FtCIPK基因进行分析,并模拟干旱、高钙和干旱高钙胁迫研究FtCIPK基因的表达模式。【结果】在苦荞8条染色体上共鉴定到5个FtCIPK基因,分别定位于染色体Ft3(2个)、Ft5(1个)和Ft6(2个),cDNA长度为1323~1467 bp,编码氨基酸440~488个,序列高度保守,均含蛋白激酶和NAF结构域。干旱下FtCIPK11在8 h、24 h显著下调,FtCIPK14在24 h极显著下调,FtCIPK10在24 h极显著上调;高钙下FtCIPK11在8 h、24 h极显著下调;FtCIPK10在8 h极显著上调,24 h显著下调;FtCIPK14在8 h极显著下调,24 h极显著上调;FtCIPK5在24 h极显著下调;干旱高钙下FtCIPK10和FtCIPK11在8 h、24 h显著下调,FtCIPK12在8 h、24 h极显著上调,FtCIPK14在24 h显著上调。【结论】说明FtCIPK5能响应高钙,FtCIPK10、FtCIPK11、FtCIPK14能响应干旱、高钙和干旱高钙,FtCIPK12能响应干旱高钙胁迫。相关性分析推测FtCIPK5、FtCIPK10、FtCIPK12、FtCIPK14可与FtCBL3-1,FtCIPK11可与FtCBL1和Ft CBL9,FtCIPK10和FtCIPK14可与FtCBL2互作响应干旱与高钙胁迫。