禹州漏芦总黄酮对类风湿关节炎大鼠治疗机制研究

目的：研究禹州漏芦总黄酮（FELT）对类风湿关节炎大鼠模型的治疗作用及病理机制的影响。方法：50只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、空白对照组和FELT 50 mg／kg组、100 mg／kg组、150 mg／kg组，每组10只。空白对照组采用完全弗氏佐剂于每只大鼠右后足趾皮内注射0．1 mL致炎的方法制备，正常对照组大鼠右后足趾皮内注射0．1 mL磷酸盐缓冲液。采用大鼠关节炎评分法和足爪肿胀评分法评价FELT对类风湿关节炎大鼠的治疗作用，采用实时定量PCR分别检测FELT灌胃治疗对类风湿关节炎大鼠滑膜组织中纤维连接蛋白和基质金属蛋白酶3 mRNA表达的影响，对类风湿关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞（ FLS ）中促凋亡基因Bcl－2相关X蛋白（ Bax ）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（ caspase 3）、抗凋亡基因Bcl－2表达的影响。结果：类风湿关节炎大鼠经FELT 50、100、150 mg／kg 3个剂量灌胃治疗后，其关节炎评分和足爪肿胀评分较空白对照组均显著减少（均P＜0．05）。空白对照组和FELT 50、100、150 mg／kg 3个剂量组关节滑膜组织中纤维连接蛋白平均相对表达量分别为2．53和1．80、1．76、1．67（均P＜0．05）；基质金属蛋白酶3平均相对表达量分别为2．67和1．69、1．46、1．45（均P＜0．05）；FLS中Bax平均相对表达量分别为0．30和0．56、0．58、0．60（均P＜0．05） ，caspase 3平均相对表达量分别为0．29和0．54、0．56、0．59（均P＜0．05） ，Bcl－2平均相对表达量分别为4．04和2．20、2．08、2．08（均P＜0．05）。结论：FELT可以改善类风湿关节炎大鼠关节炎的严重程度，其机制可能与促进FLS凋亡、抑制滑膜组织异常增殖有关。

白细胞免疫球蛋白样受体A3在类风湿关节炎患者外周血CD14^+单核细胞中的表达

目的:分析白细胞免疫球蛋白样受体A3(LILRA3)在类风湿关节炎(RA)患者外周血CD14+单核细胞中的表达。方法:收集2017年2至8月在浙江大学医学院附属第二医院风湿科住院治疗的RA患者53例和21名该院健康体检者的资料。流式细胞术检测CD14^+单核细胞亚群LILRA3表达,并分析其与RA患者的临床特征、实验室指标、自身抗体和疾病活动度的关系。结果:RA患者外周血CD14+单核细胞中LILRA3表达水平较健康对照组升高(P <0. 01)。LILRA3表达与RA患者压痛关节数、肿胀关节数、红细胞沉降率呈正相关(r=0. 280、0. 371、0. 341,P <0. 05或P <0. 01),但与年龄、病程、Sharp评分、C反应蛋白、血常规及免疫球蛋白等指标均无相关性(均P> 0. 05)。类风湿因子和抗环瓜氨酸肽抗体阳性患者LILRA3的表达率高于阴性患者(均P <0. 05)。以28处关节疾病活动指数(DAS28) 5. 1分作为疾病活动度分组的依据,高疾病活动度组LILRA3表达率较中低疾病活动度组升高,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论:RA患者外周血CD14+单核细胞中LILRA3表达升高,且与疾病活动度相关。

痹肿消汤干预胶原诱导性关节炎大鼠滑膜病变的蛋白质组学研究

目的:观察痹肿消汤干预胶原诱导性关节炎大鼠滑膜病变的蛋白质改变,分析痹肿消汤治疗类风湿关节炎可能的作用机制。方法:实验于2004-05/2005-02在中南大学湘雅医院中西医结合研究所实验室、卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室完成。70只SD大鼠随机分为3组,正常组10只,其余60只大鼠采用牛Ⅱ型胶原与完全福氏佐剂诱导SD大鼠实验性关节炎模型,选取造模成功者再随机分为两组,即痹肿消汤组和模型组。痹肿消汤煎液制备:白花蛇舌草15g,肿节风30g,丹参15g,络石藤20g,骨碎补15g,苡米30g等15味中药,双蒸水煎2次,30min/次,两煎混合,G4滤器过滤,于60℃水浴中浓缩成每毫升药液含生药116g。痹肿消汤组灌服痹肿消汤煎液10mL/kg(相当于生药62.1g),2次/d灌服;模型组灌服生理盐水10mL/kg,2次/d灌服。正常组自由进水。应用双向凝胶电泳技术分别分离正常组、模型组及痹肿消汤组大鼠关节滑膜的总蛋白后,经胶体考染显色、图像分析、识别差异表达的蛋白质点,应用MALDI-TOF-MS质谱仪得到相应的肽质量指纹图谱,然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点。结果:纳入实验的70只大鼠,造模不成功被淘汰7只,最终痹肿消汤组26只、模型组27只、对照组10只,共63只大鼠进入结果分析。①建立了正常组、模型组和痹肿消汤组关节滑膜的双向凝胶电泳图谱,其平均蛋白质点数分别为947±39,994±41,1031±52,其匹配率为92%,91%,94.2%。②发现并鉴定了正常组、模型组和痹肿消汤组大鼠滑膜的差异表达大于2倍的蛋白质点55个,这些差异表达蛋白质的功能涉及物质代谢、能量产生、物质转运、抗氧化应激、信号转导及细胞骨架蛋白,随即用免疫印迹的方法差异蛋白质annexin1、aldolaseA在正常组、模型组、痹肿消汤组中的表达,其结果也显示了类似的表达差异。结论:类风湿关节炎模型关节滑膜病变是一个多种蛋白质参与的复杂过程。滑膜组织的比较蛋白质组学分析是一种筛选病变相关蛋白的可靠方法之一。annexin1、aldolaseA可能与实验性关节炎的关节滑膜病变有关;痹肿消汤可能通过对实验性关节炎大鼠滑膜蛋白质表达的调控达到治疗目的。

二氢青蒿素通过Akt信号途径诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡

目的探讨二氢青蒿素诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡的信号机制。方法无菌条件取类风湿关节炎患者膝关节滑膜组织，组织块贴壁法培养关节滑膜细胞。流式细胞仪检测细胞凋亡。Westernblot半定量分析Akt活化。电泳迁移率变动（EM—SA）检测NF—κB活性。结果在2．5～10μmol／L质量浓度范围二氢青蒿素呈剂量依赖性诱导体外培养的关节炎滑膜细胞凋亡。5μmol／L和10μmoL／L的二氢青蒿素与关节滑膜细胞共培养24h显著抑制Akt激酶473位丝氨酸磷酸化及NF—κB的活化。结论二氢青蒿素通过Akt信号途径诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡。

重组血管活性肠肽基因质粒治疗大鼠胶原性关节炎的研究

目的:观察重组血管活性肠肽(pcDNA 3.1+/V IP)质粒治疗胶原诱导的大鼠关节炎(C IA)对血清TNFα-、IL-2、IL-4表达的影响和病理变化,探讨V IP基因治疗类风湿性关节炎的效果及可能机制。方法:以Ⅱ型胶原诱导的大鼠关节炎作为C IA模型,重组血管活性肠肽质粒关节腔内注射治疗C IA,以双抗体夹心酶联免疫吸附法(ABC-EL ISA)检测血清TNFα-、IL-2和IL-4的表达,观察病理变化和整体疗效。结果:①病理切片显示C IA模型组炎性细胞浸润明显,并存在骨和软骨破坏,V IP治疗组可显著减轻关节炎性病理改变;②细胞因子测定显示:与正常组相比,各对照组血清TNFα-、IL-2水平显著升高(P<0.05),IL-4水平减低(P<0.05);与各对照组相比,各重组V IP质粒治疗组血清TNF-α和IL-2表达水平均明显降低(P<0.05),IL-4表达则升高(P<0.05)。结论:血管活性肠肽基因质粒关节腔内注射治疗大鼠C IA具有显著的疗效,有望成为RA的有效治疗手段。