从NF-κB/Bcl-2信号通路调控成纤维样滑膜细胞凋亡角度探讨中医药抑制类风湿关节炎滑膜炎症机制的研究进展

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节滑膜炎症为主要特征的自身免疫性疾病,成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)的抗凋亡是导致该病病情发展的主要因素。如何促进FLS凋亡并抑制炎症反应是目前RA治疗和研究的重点。核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)/B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)信号通路在RA发病过程中发挥了关键作用,其与FLS炎症倾向、抗凋亡等密切相关。研究并探讨NF-κB/Bcl-2信号通路调控FLS凋亡的机制及作用,介绍中医药靶向该通路促进FLS凋亡进而抑制RA滑膜炎症的研究现状,旨在为中医药治疗RA的研究提供一定基础。

独活寄生汤对TNF-α诱导的类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖、凋亡和炎症的影响

目的探究独活寄生汤含药血清对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖、凋亡和炎症的影响及作用机制。方法将MH7A细胞分为正常组(10%空白血清)、模型组(10μg·L^(-1) TNF-α+10%空白血清)、独活寄生汤低(10μg·L^(-1) TNF-α+2.5%含药血清+7.5%空白血清)、中(10μg·L^(-1) TNF-α+5%含药血清+5%空白血清)、高(10μg·L^(-1) TNF-α+10%含药血清)剂量组共5组;MTT法筛选独活寄生汤含药血清给药浓度;EdU染色检测细胞增殖情况;免疫荧光染色检测增殖标志物Ki67表达情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;ELISA法检测细胞中IFN-γ、IL-4、IL-6和IL-10的含量;RT-qPCR和Western blot检测Bax、Bcl-2、caspase-3及TLR4/MyD88/NF-κB信号通路mRNA和蛋白的表达情况。结果与正常组比较,模型组细胞增殖水平明显上升,凋亡水平明显减弱,IFN-γ和IL-6的含量升高,IL-4和IL-10的含量减少,TLR4/MyD88/NF-κB信号通路被激活;经独活寄生汤含药血清低、中、高剂量组干预后,均能有效改善细胞异常增殖情况,增强细胞凋亡,抑制炎性反应和TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的激活。结论独活寄生汤含药血清能够抑制TNF-α诱导的RA-FLS异常增殖和促炎因子的分泌,增强细胞凋亡和抗炎水平,其作用机制可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

siRNA沉默锌指蛋白A20基因促进人类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞焦亡

目的探讨小干扰RNA(siRNA)沉默锌指蛋白A20基因对人类风湿关节炎(RA)成纤维细胞样滑膜细胞(HFLS-RA)焦亡的调节作用。方法培养人HFLS-RA细胞系(MH7A细胞),通过RNA干扰技术靶向敲降人类A20基因,合成siRNA-A20,用脂质体法将siRNA-A20(沉默组)和siRNA-NC(阴性对照组)转染MH7A细胞。RT-qPCR检测细胞中NLRP3和Caspase-1 mRNA的表达;Western blot法检测细胞中NLRP3和Caspase-1蛋白表达;ELISA法检测细胞培养液中IL-1β和IL-18的水平;透射电子显微镜(TEM)检测细胞焦亡。结果siRNA-A20组MH7A细胞中NLRP3和Caspase-1 mRNA和蛋白表达水平与对照组相比均显著增高(P<0.01);siRNA-A20组细胞培养上清液中IL-1β、IL-18浓度与对照组相比均显著增高(P<0.01)。与对照组相比,siRNA-A20组部分细胞肿胀和破裂,细胞膜的完整性也丧失,细胞内出现大面积水肿区,细胞核局部核膜凹陷模糊,异染色质固缩增加,分布不均匀并在核膜周围聚集。结论通过siRNA沉默A20表达后可促进HFLS-RA中NLRP3/Caspase-1介导细胞焦亡,为探讨RA临床治疗新方案提供了实验依据。

类风湿关节炎患者外周血TCRαβ^+CD4^-CD8^-T细胞与FAS介导的凋亡关系研究

目的:检测类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)患者外周血中TCRαβ+细胞、CD4-CD8-细胞、TCRαβ+CD4-CD8-T细胞(Double negative T cells,DNT细胞)及各细胞亚群表面凋亡相关蛋白FAS的表达情况,探讨RA患者TCRαβ+CD4-CD8-T细胞与FAS介导的凋亡之间的关系。方法:选取24例RA患者以及24例同期健康查体者作为研究对象,检测所有研究对象外周血TCRαβ+细胞、CD4-CD8-细胞、TCRαβ+CD4-CD8-T细胞的数量及表面凋亡相关蛋白FAS的表达情况,并分析以上指标与类风湿因子(Rheumatoid factors,RF)、白细胞数(White blood cell,WBC)、急性时相反应蛋白(C-reactive pro-tein,CRP)以及血沉(Erythrocyte sedimentation rate,ESR)之间的相关性。结果:RA患者外周血TCRαβ+细胞、CD4-CD8-细胞与健康对照相似,TCRαβ+CD4-CD8-T细胞数量显著高于健康对照(0.82±0.38 vs.0.57±0.26,P=0.013),TCRαβ+CD4-CD8-T细胞表面的FAS的表达增高(1.23±0.69 vs.0.80±0.45,P=0.016),并与TCRαβ+CD4-CD8-T细胞数量呈显著正相关关系(r=0.809,P=0.000);TCRαβ+细胞及其表面表达的FAS受体、CD4-CD8-细胞及其表面表达的FAS受体、TCRαβ+CD4-CD8-T细胞及其表面表达的FAS受体与RF、WBC、CRP以及ESR之间均无相性(P>0.05)。结论:RA患者外周血中TCRαβ+CD4-CD8-T细胞及其表面表达的FAS受体显著增加,表明TCRαβ+CD4-CD8-T细胞对FAS介导的凋亡敏感性增加,可能会导致免疫反应性T细胞的比例失调。RA患者中TCRαβ+CD4-CD8-T细胞及其表面表达的FAS受体与疾病活动性指标之间无相关关系,TCRαβ+CD4-CD8-T细胞及其表面表达的FAS受体在RA患者的发病机制中的作用还有待于进一步探讨。

PDCD5在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡中表达上调

为了研究程序化细胞死亡因子5(PDCD5)在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡中的作用,在不同的时间加入有效剂量100nmol/L雷公藤内醇酯(triptolide)后,采用实时定量PCR、RT-PCR、Western印迹和直接免疫荧光染色方法检测体外分离培养的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中PDCD5在mRNA和蛋白水平的表达及蛋白表达特征.在雷公藤内醇酯诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的过程中,PDCD5 mRNA表达水平明显地渐次增加,呈现一种明确的时间依赖性递增表达模式,而PDCD5蛋白有时间依赖性表达上调持续16h,并维持在相对恒定水平.直接免疫荧光染色结果显示,在正常体外培养的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中,PDCD5蛋白的表达较弱,且主要分布在细胞浆.经雷公藤内醇酯处理4 h后,大多数细胞有PDCD5蛋白的聚集,直至12h,细胞核周围PDCD5蛋白聚集显著增强.36h后,PDCD5蛋白以核固缩的形式存在于凋亡的RA FLS中,细胞核染色质明显浓缩,片段化并出现了凋亡小体.上述结果表明,在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的过程中,PDCD5表达上调并在凋亡早期出现核转位,PDCD5蛋白核转位要早于凋亡小体形成.PDCD5蛋白核转位是类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的早期事件,PDCD5不仅参与了类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的凋亡过程,而且在类风湿关节炎滑膜增生的凋亡调节中起到重要调节作用.

类风湿性关节炎患者外周血CD4^+T细胞存在凋亡缺陷

目的探讨CD4+T细胞凋亡在类风湿性关节炎(RA)发病机制中的作用。方法 30例RA患者和12例健康对照者分为2组,应用annexinⅤ-FITC/PI双标记结合流式细胞术分析RA患者及对照者CD4+T细胞凋亡水平,实时定量PCR(qRT-PCR)检测凋亡相关蛋白Fas、Fas L、caspase-8、caspase-3、Bcl-2、Bax mRNA相对表达水平,Western blot法测定细胞凋亡蛋白Fas、Fas L及caspase-8、caspase-3的表达;分析RA组凋亡蛋白表达水平与临床活动指标的相关性。结果与健康对照组相比,RA患者CD4+T细胞凋亡减少;与血沉(ESR)、类风湿因子(RF)呈负相关;qRT-PCR结果表明,RA患者CD4+T细胞Fas、caspase-8、caspase-3、Bax mRNA的表达量显著降低、Bcl-2 mRNA表达量增加。Fas表达与中医症状积分呈负相关,Bcl-2与环瓜氨酸肽(CCP)水平呈正相关。Western blot结果显示,RA患者CD4+T细胞Fas、Fas L、caspase-8、caspase-3的表达量较正常组明显降低,Fas与CRP呈正相关、Fas L与晨僵时间呈负相关。结论 RA患者外周血CD4+T淋巴细胞凋亡减少,与多数相关凋亡蛋白的表达降低、Bcl-2表达增强有关。提示RA存在凋亡缺陷,Fas介导的细胞凋亡在RA过程中有一定作用。

类风湿关节炎CD4^+CD28^-T细胞与淋巴细胞凋亡的相关性研究

目的:研究类风湿关节炎(RA)患者外周血CD4+CD28-T细胞比例与淋巴细胞凋亡异常的相关性。方法:采用流式细胞术三色分析法检测50例患者和50例健康志愿者的外周血淋巴细胞中CD4+CD28-T细胞比例;通过加入PHA孵育检测RA病人外周淋巴细胞和正常对照的淋巴细胞对激活诱导细胞死亡(AICD)易感性差异;分析CD4+CD28-T细胞比例与外周血淋巴细胞凋亡率的相关性。结果:RA组CD4+CD28-T细胞比例的均数明显高于健康对照组(7.79%±3.52%vs1.89%±1.78%,P<0.05)。RA组病人外周血淋巴细胞的AICD凋亡率低于健康对照组(11.38%±5.73%vs19.46%±6.32%,P<0.05)。Spearman相关分析结果显示CD4+CD28-T细胞比例与外周血淋巴细胞AICD凋亡率负相关(r=-0.433,P<0.01)。结论:RA患者外周血中CD4+CD28-T细胞比例增多,活化淋巴细胞生存期延长,这可能参与RA的发病机制。

类风湿关节炎患者外周血CD4^+T细胞凋亡及其相关信号蛋白表达的检测和临床意义

目的探讨CD4^+T细胞凋亡在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)发病机制中的作用及其凋亡机制。方法应用流式细胞术分析类风湿关节炎患者及健康对照组外周血CD4^+T细胞凋亡指标AnnexinV水平及凋亡相关信号蛋白Caspase-3,Caspase-8,促凋亡基因Fas和抑凋亡基因Bcl-2表达水平;同时对CD4^+T细胞凋亡相关信号蛋白ESR、RF和DAS 28水平与临床活动相关指标进行相关性分析。结果与健康对照组相比,RA活动期患者CD4^+T细胞数增加[(40.91±2.73)%vs(31.40±2.71)%,P<0.05],CD4^+T cell凋亡指标AnnexinV水平减少[(2.27±1.43)%vs(8.10±2.06)%,P<0.05];RA患者外周血中CD4^+T细胞促凋亡基因Fas表达较健康对照组降低差异无统计学意义[(63.12±4.61)%vs(84.13±1.72)%,P<0.01],抑凋亡基因Bcl-2表达增加[(93.58±2.36)%vs(75.14±5.70)%,P<0.05],Caspase-8减少[(18.54±15.23)%vs(3.02±1.39)%,P<0.05],Caspase-3表达无差异无统计学意义[(2.17±1.19)%vs(2.53±1.46)%,P>0.05];CD4^+T细胞促凋亡基因Fas表达与DAS28评分呈负相关(r=-0.89,P=0.04,P<0.05),Bcl-2与DAS28评分呈正相关(r=-0.97,P=0.00,P<0.01)。结论RA患者CD4^+T细胞数量增多与其凋亡减少有关,这可能是导致该病自身免疫反应不能控制的重要原因之一。RA患者外周血CD4^+T细胞凋亡减少与促凋亡基因Fas表达降低、凋亡相关蛋白Caspase-8表达下降及抑凋亡基因Bcl-2表达增高有关。Fas和Bcl-2的表达可作为评价临床活动性的敏感指标。

独活寄生汤含药血清细胞外囊泡对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的影响

背景:独活寄生汤是治疗类风湿关节炎的经典方剂,但具体作用机制尚不清楚,细胞外囊泡具有细胞间通讯及传递信号的强大功能,可能是该方剂发挥作用的信号载体。目的:探讨独活寄生汤含药血清细胞外囊泡对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。方法:肿瘤坏死因子α体外诱导构建类风湿关节炎滑膜成纤维细胞模型,实验分为5组:正常组、模型组、独活寄生汤含药血清组、独活寄生汤含药血清细胞外囊泡组、生理盐水血清细胞外囊泡组。采用CCK-8法筛选独活寄生汤含药血清及独活寄生汤含药血清细胞外囊泡作用的最佳浓度及时间;ELISA检测细胞上清炎症因子水平;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力及迁移能力;Hoechst染色检测细胞凋亡情况;qRT-PCR及Western blot检测细胞凋亡相关基因及蛋白表达。结果与结论:(1)独活寄生汤含药血清作用的最佳体积分数为10%,独活寄生汤含药血清细胞外囊泡作用的最佳质量浓度为10 ng/mL,二者作用的最佳时间均为24 h;(2)与模型组相比,独活寄生汤含药血清、独活寄生汤含药血清细胞外囊泡及生理盐水血清细胞外囊泡均能抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的炎症因子表达(P<0.05)、划痕愈合(P<0.05)、迁移及侵袭(P<0.05),且独活寄生汤含药血清细胞外囊泡的抑制作用更为突出(P<0.05);(3)独活寄生汤含药血清及独活寄生汤含药血清细胞外囊泡均可促进类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的凋亡;(4)与模型组相比,独活寄生汤含药血清、独活寄生汤含药血清细胞外囊泡及生理盐水血清细胞外囊泡均可增加促凋亡因子Caspase-3、Caspase-9、Bax表达(P<0.05),降低抑凋亡因子Bcl-2表达(P<0.05),且独活寄生汤含药血清细胞外囊泡对凋亡相关因子的调节作用更显著。上述实验结果表明独活寄生汤含药血清细胞外囊泡可以抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的过度增殖、迁移、侵袭并促进其凋亡。

新风胶囊通过调控凋亡相关蛋白促进类风湿关节炎患者外周血CD4^+T细胞凋亡

目的:探讨新风胶囊(XFC)对类风湿关节炎患者外周血CD4^+T细胞凋亡的影响。方法:采用随机、双盲法将28例活动期类风湿关节炎患者分为XFC组15例和来氟米特组(LEF组)13例,采用流式细胞术分析CD4^+T细胞凋亡水平,Western blot法和实时定量PCR检测凋亡相关蛋白及mRNA相对表达水平。结果:与治疗前比较,治疗后XFC组外周血红细胞沉降率(ESR)、C-反应蛋白(CRP)、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体、DAS28、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA水平明显降低(P <0.01),而CD4^+T细胞凋亡水平、Fas mRNA、FasL mRNA、Caspase-8 mRNA、Caspase-3 mRNA、Bax mRNA和Fas、FasL、Caspase-8、Caspase-3蛋白水平明显升高(P <0.01);与LEF组比较,XFC组ESR、CRP、Bcl-2 m RNA表达水平明显降低(P <0.01),CD4^+T细胞凋亡水平、Fas mRNA、FasL mRNA、Caspase-8mRNA、Caspase-3 mRNA、Bax mRNA和Fas、FasL、Caspase-8、Caspase-3表达水平差异无统计学意义(P> 0.05)。结论:XFC通过上调Fas、Fas L、Caspase-8、Caspase-3促凋亡蛋白表达,下调Bcl-2抑制凋亡蛋白表达,促进异常活化的CD4^+T细胞凋亡,从而抑制类风湿关节炎患者机体的免疫炎症反应改善病情。

miR-199a-5p靶向PDCD5基因调控幼年类风湿关节炎软骨细胞的增殖和凋亡

目的:研究miR-199a-5p对幼年类风湿关节炎(JRA)软骨细胞增殖、凋亡的影响和潜在的分子机制。方法:qRT-PCR检测软骨细胞中miR-199a-5p和PDCD5 RNA的表达,Western blot检测PDCD5、增殖相关蛋白CyclinD1、p21和p27以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和cleaved-caspase3的表达,MTT法检测软骨细胞增殖,流式细胞术测定软骨细胞凋亡率,双荧光素酶报告系统验证miR-199a-5p和PDCD5的调控关系。结果:与正常软骨细胞相比,在类风湿关节炎(RA)软骨细胞中miR-199a-5p表达量显著降低(P<0.05),而PDCD5 mRNA和蛋白表达量则显著升高(P<0.05);过表达miR-199a-5p和抑制PDCD5表达均可促进RA软骨细胞增殖,抑制RA软骨细胞凋亡;双荧光素酶报告系统结果表明,miR-199a-5p靶向负调控PDCD5的表达;过表达PDCD5逆转了miR-199a-5p过表达对软骨细胞增殖和凋亡的作用。结论:miR-199a-5p通过靶向调控PDCD5表达调控RA软骨细胞增殖和凋亡,miR-199a-5p是RA的潜在分子靶点。

昆明山海棠与类风湿关节炎滑膜细胞体外增殖和凋亡

背景:昆明山海棠应用于类风湿关节炎治疗已被证实有确切疗效,但对于其作用机制目前尚不明确。目的:验证昆明山海棠对类风湿关节炎滑膜巨噬样细胞和成纤维样细胞体外增殖活性及对其凋亡影响,分析其剂量效应关系。设计、时间及地点:细胞学体外分组对照实验,于2003-08/2007-06在汕头大学医学院第一附属医院中心实验室和南方医科大学细胞生物实验室完成。材料:类风湿关节炎6例及正常滑膜组织3例,来源于汕头大学医学院第一附属医院骨科和南方医院脊柱骨病科患者术中获得的标本。昆明山海棠制备水提取液,含生药0.667g/mL。方法:收集获得的滑膜组织,通过消化法获得原代类风湿关节炎及正常滑膜细胞,第2～4代细胞用免疫磁珠法筛选滑膜CD68+细胞和CD68-细胞,在接种72h后加入实验各组分别在培养液中加入最终体积分数分别为5,10,20mL/L的昆明山海棠药液处理24h和48h。同时设立不加药物的阴性对照及不加细胞空白对照。主要观察指标:相差倒置显微镜、扫描电镜观察细胞形态,用MTT法测定细胞增殖情况,流式细胞仪检测和TUNEL法检测细胞凋亡。结果:分选后滑膜CD68-细胞为成纤维样细胞,滑膜CD68+细胞为滑膜巨噬样细胞。施予干预因素后,各组有部分细胞体积缩小,胞膜皱缩,微绒毛和伪足减少或消失,部分细胞可见团块脱落形成凋亡小体。当昆明山海棠体积分数为2%时,各组细胞均有不同程度抑制,显示昆明山海棠有细胞毒性,对类风湿关节炎滑膜CD68-、CD68+细胞的抑制效应和诱导细胞效应强于同种正常滑膜细胞(P<0.01)。在药物体积分数为1%时,对类风湿关节炎滑膜细胞有明显抑制效应(P<0.01)。昆明山海棠对诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡作用有明显时间依赖性和剂量依赖性,且凋亡率与相同条件下的抑制率表现出较好的直线相关关系(r=0.497,P<0.01)。结论:昆明山海棠对于类风湿关节炎滑膜巨噬样细胞和滑膜成纤维样细胞有诱导凋亡和明显抑制异常增殖作用。在一定浓度下,昆明山海棠对于正常滑膜细胞毒性较小且对类风湿关节炎滑膜细胞的有较明显抑制异常增殖和诱导细胞凋亡的效应。

青藤碱抑制类风湿关节炎滑膜细胞增殖与诱导凋亡的研究

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)特征之一就是滑膜组织表现为增生性侵蚀性生长,其生长性质和病理学行为在许多方面类似于肿瘤组织的特性,对软骨组织造成进行性破坏。因此延缓甚至抑制滑膜细胞异常增殖与诱导其凋亡将成为治疗RA的主要策略之一,具有十分重要的意义。青藤碱(sinomenine,SN)是青风藤中提取的生物碱单体,具有良好的抗炎、镇痛、免疫抑制等药理作用,临床用于治疗类风湿关节炎取得良好疗效。本文主要将近年来有关SN在RA抑制滑膜细胞异常增殖与诱导其凋亡方面的研究作一详细阐述,以期为后续的临床研究提供理论依据。

类风湿关节炎风湿热郁型患者ESR与舌苔微生态及细胞凋亡的关系探讨

目的:通过RA风湿热郁型舌苔、炎症性指标、舌细胞凋亡及微生态指标的观察,分析各指标的变化及关系,探讨舌苔形成机理。方法:30例RA风湿热郁型患者为实验组,20例健康人正常舌象作对照,检测两组ESR、舌苔细菌总数和舌上皮细胞凋亡指数,进行分析比较。结果:实验组ESR、舌苔细菌总数较对照组明显升高(P<0.05),厚苔较薄苔显著(P<0.01);相关分析显示两者呈正相关(P<0.01);而实验组舌苔上皮细胞凋亡指数较对照组明显减少(P<0.05),厚苔较薄苔显著(P<0.01);相关分析显示,舌苔上皮细胞凋亡指数与ESR、细菌总数呈负相关(P<0.01)。结论:RA风湿热郁型患者炎性指标ESR的变化与舌苔细菌总数及舌上皮细胞凋亡指数密切相关,亦与舌苔的薄、厚的变化有关。舌苔的变化与ESR变化一致,反映炎症活动严重程度,ESR越高,舌面细菌总数越高,而舌苔上皮细胞凋亡指数越低。

NF-κB信号通路的阻断对类风湿关节炎滑膜细胞凋亡与炎症的影响

目的探讨核因子(NF)-κB信号通路的阻断对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞凋亡与炎症的影响。方法分离正常滑膜组织及RA滑膜组织中成纤维滑膜细胞(FLS),分为正常FLS组(正常组),RA FLS组(模型组),NF-κB抑制剂(PDTC)低、中、高剂量组(2,5,10μmol/L)(PDTC组)。四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测PDTC对RA FLS细胞活力的影响,Annexin V-FITC流式双染检测各组细胞凋亡情况,酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α,白介素(IL)-1β含量,Western印迹检测各组细胞中环氧化酶(COX)-2,Bax,Bcl-2蛋白的表达。结果与模型组比较,PDTC低、中、高剂量组能显著抑制RA FLS活力,诱导RA FLS凋亡,抑制RA FLS细胞释放TNF-α、IL-1β因子,下调COX-2和Bcl-2表达,上调Bax表达(均P<0.05)。结论阻断NF-κB信号通路能够显著抑制RA FLS细胞炎症并诱导细胞凋亡。

艾拉莫德对类风湿关节炎滑膜细胞凋亡及炎症因子水平的影响

目的:研究艾拉莫德对类风湿关节炎滑膜细胞凋亡及炎症因子水平的影响。方法:分离培养类风湿关节炎滑膜细胞,给予0、600、1200、1800μg/L的艾拉莫德处理后,采用Annexin-V FITC/PI双染法检测细胞凋亡,ELISA法检测培养液中IL-1β、TNF-α含量,Western blot法测定活化的Caspase-3(C-Caspase-3)、Bcl-XL、NF-κBp65蛋白和胞质、线粒体细胞色素C蛋白的表达。结果:不同剂量艾拉莫德处理后,滑膜细胞凋亡率升高,培养液中IL-1β、TNF-α含量下降;胞质细胞色素C蛋白表达水平升高,线粒体细胞色素C蛋白表达水平下降;细胞中C-Caspase-3蛋白表达水平升高,Bcl-XL、NF-κBp65蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论:艾拉莫德可能通过抑制NF-κB诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡,减少炎症因子分泌。

汉黄芩素通过激活活性氧簇介导的p38MAPK信号通路诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡

目的探讨汉黄芩素对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes,RA-FLS)凋亡的影响以及作用机制。方法类风湿关节炎患者关节滑液经原代培养,应用3~5代传代的成纤维样滑膜细胞。按照不同方法处理分为6组:空白对照组、低剂量汉黄芩素组(终浓度为20μg/mL)、中剂量汉黄芩素组(终浓度为50μg/mL)、高剂量汉黄芩素组(终浓度为100μg/mL)、100μg/mL汉黄芩素+NAC组、100μg/mL汉黄芩素+SB203580组。MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率,罗丹明123染色荧光显微镜照相法检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),DCFH-DA染色荧光显微镜照相法检测细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平,Western blot法检测p38MAPK通路相关蛋白的表达。结果与正常对照组相比,各剂量汉黄芩素均能够抑制RA-FLS细胞的增殖,增加其凋亡,降低MMP以及增加ROS水平,激活p38MAPK信号通路,并且呈现剂量依赖性关系。ROS清除剂NAC和p38抑制剂SB203580可以明显降低汉黄芩素诱导的RA-FLS细胞的凋亡,并且5 mmol/L NAC下调汉黄芩素引起的p38MAPK磷酸化。结论汉黄芩素能够诱导RA-FLS细胞凋亡,ROS/p38MAPK信号通路参与了其凋亡的过程。

中医药对类风湿关节炎滑膜细胞凋亡和增殖作用的研究进展

对近年来中医药通过诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡、抑制其增殖的相关文献进行了综述,认为中医药可通过多靶点影响类风湿关节炎滑膜细胞增殖与凋亡,但具体作用机制和临床转化仍有待进一步研究。

海藻多糖对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨海藻多糖对体外培养的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synovialcytes,FLS)凋亡的影响及机制。方法采用改良组织块培养法体外培养RA-FLS。分别采用CCK-8比色法、Hoechst 33258染色法、TUNEL染色法及Western blot检测不同浓度海藻多糖(0、15、20、25mg/mL)干预不同时间(0、3、4、5天)后对RA-FLS增殖、凋亡及Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。结果与0mg/mL海藻多糖组同期比较,15、20、25mg/mL浓度组干预3、4、5天后均可抑制RA-FLS增殖,促进其凋亡(P<0·01),且具有时间和剂量依赖性;15、20、25mg/mL海藻多糖干预4天可上调RA-FLSBax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,促进Caspase-3活化裂解(P<0·05,P<0·01),且呈剂量依赖性。结论海藻多糖在体外呈剂量和时间依赖性抑制RA-FLS增殖,诱导其凋亡,其凋亡机制可能是通过上调细胞内Bax蛋白及下调Bcl-2蛋白表达影响线粒体通路,从而促进Caspase-3活化裂解,导致RA-FLS凋亡。