miR-27a通过TLR4/NF-κB信号通路对类风湿关节炎滑膜细胞生物学行为的影响

目的:探讨miR-27a通过Toll样受体(TLR)4/NF-κB信号通路对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞生物学行为的影响。方法:选择行膝关节置换术的30例RA患者(RA组)和同期因创伤急诊截肢的18例患者(对照组)的滑膜组织,采用qRT-PCR法检测miR-27a的表达。将RA成纤维样滑膜细胞MH7A分为4组:空白对照组,不进行任何处理;TNF-α组,加入终浓度为20μg/L的TNF-α处理24 h;TNF-α+miR-NC组,加入终浓度为20μg/L的TNF-α处理后转染miR-NC;TNF-α+miR-27a mimic组,加入终浓度为20μg/L的TNF-α处理后转染miR-27a mimic,采用qRT-PCR法检测组织或细胞中miR-27a的表达量,CCK-8法检测细胞增殖情况,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡情况,双荧光素酶报告实验验证TLR4 mRNA与miR-27a的靶向关系,Western blot法检测细胞中TLR4、NF-κB、磷酸化TLR4(p-TLR4)和磷酸化NF-κB(p-NF-κB)蛋白的表达情况。结果:对照组和RA组滑膜组织中miR-27a的表达量分别为(1.00±0.08)和(0.36±0.05),RA组低于对照组(P<0.001)。与空白对照组比较,TNF-α组和TNF-α+miR-NC组细胞中miR-27a表达量下降,TNF-α+miR-27a mimic组miR-27a表达量升高;与TNF-α组和TNF-α+miR-NC组比较,TNF-α+miR-27a mimic组细胞中miR-27a表达量升高(P<0.05)。与空白对照组比较,TNF-α组和TNF-α+miR-NC组细胞增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力增强,细胞凋亡率降低;与TNF-α组和TNF-α+miR-NC组比较,TNF-α+miR-27a mimic组细胞增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力减弱,细胞凋亡率升高(P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实TLR4是miR-27a的靶基因。与空白对照组比较,TNF-α组和TNF-α+miR-NC组p-TLR4/TLR4、p-NF-κB/NF-κB升高;与TNF-α组和TNF-α+miR-NC组比较,TNF-α+miR-27a mimics组p-TLR4/TLR4、p-NF-κB/NF-κB降低(P<0.05)。结论:miR-27a可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低RA成纤维样滑膜细胞的增殖、侵袭和迁移能力,促进其凋亡。

来氟米特调控HIF-1α信号通路对类风湿关节炎滑膜细胞自噬的影响

目的探讨来氟米特(LEF)调控低氧诱导因子-1α(HIF-1α)信号通路,对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞相关自噬基因表达的影响。方法取3代RA滑膜细胞,分为空白对照组、LEF组、雷公藤多苷组,空白对照组加入等体积DMEM培养液,药物组分别加入LEF(浓度0.2 mg/ml)、雷公藤多苷(浓度0.03 mg/ml),干预48 h后,采用流式细胞术检测滑膜细胞增殖及凋亡;酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管生成素样蛋白(ANGPTL-4)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,qRT-PCR检测HIF-1αmRNA表达;Western blot检测HIF-1α、Beclin-1、BCL2相互作用蛋白3样(BNIP3)蛋白表达。结果与雷公藤多苷组比较,LEF组滑膜细胞上清液IL-1α、TNF-α、ANGPTL-4、VEGF的表达降低;与空白对照组比较,LEF组、雷公藤多苷组的滑膜细胞HIF-1αmRNA表达均降低,LEF组作用最明显;与空白对照组比较,LEF组、雷公藤多苷组的滑膜细胞HIF-1α、Beclin-1、BNIP3蛋白表达均降低,LEF组作用最明显。结论LEF能抑制RA滑膜细胞炎症因子表达,抑制HIF-1α信号通路,并抑制自噬相关基因Beclin-1、BNIP3的表达,改善滑膜炎症的病理状态。

昆明山海棠与类风湿关节炎滑膜细胞体外增殖和凋亡

背景:昆明山海棠应用于类风湿关节炎治疗已被证实有确切疗效,但对于其作用机制目前尚不明确。目的:验证昆明山海棠对类风湿关节炎滑膜巨噬样细胞和成纤维样细胞体外增殖活性及对其凋亡影响,分析其剂量效应关系。设计、时间及地点:细胞学体外分组对照实验,于2003-08/2007-06在汕头大学医学院第一附属医院中心实验室和南方医科大学细胞生物实验室完成。材料:类风湿关节炎6例及正常滑膜组织3例,来源于汕头大学医学院第一附属医院骨科和南方医院脊柱骨病科患者术中获得的标本。昆明山海棠制备水提取液,含生药0.667g/mL。方法:收集获得的滑膜组织,通过消化法获得原代类风湿关节炎及正常滑膜细胞,第2～4代细胞用免疫磁珠法筛选滑膜CD68+细胞和CD68-细胞,在接种72h后加入实验各组分别在培养液中加入最终体积分数分别为5,10,20mL/L的昆明山海棠药液处理24h和48h。同时设立不加药物的阴性对照及不加细胞空白对照。主要观察指标:相差倒置显微镜、扫描电镜观察细胞形态,用MTT法测定细胞增殖情况,流式细胞仪检测和TUNEL法检测细胞凋亡。结果:分选后滑膜CD68-细胞为成纤维样细胞,滑膜CD68+细胞为滑膜巨噬样细胞。施予干预因素后,各组有部分细胞体积缩小,胞膜皱缩,微绒毛和伪足减少或消失,部分细胞可见团块脱落形成凋亡小体。当昆明山海棠体积分数为2%时,各组细胞均有不同程度抑制,显示昆明山海棠有细胞毒性,对类风湿关节炎滑膜CD68-、CD68+细胞的抑制效应和诱导细胞效应强于同种正常滑膜细胞(P<0.01)。在药物体积分数为1%时,对类风湿关节炎滑膜细胞有明显抑制效应(P<0.01)。昆明山海棠对诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡作用有明显时间依赖性和剂量依赖性,且凋亡率与相同条件下的抑制率表现出较好的直线相关关系(r=0.497,P<0.01)。结论:昆明山海棠对于类风湿关节炎滑膜巨噬样细胞和滑膜成纤维样细胞有诱导凋亡和明显抑制异常增殖作用。在一定浓度下,昆明山海棠对于正常滑膜细胞毒性较小且对类风湿关节炎滑膜细胞的有较明显抑制异常增殖和诱导细胞凋亡的效应。

大黄素对类风湿关节炎滑膜细胞增殖及转移的抑制作用

目的探讨大黄素对体外培养类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞增殖及转移的影响。方法采用组织块提取法和酶消化法体外培养类风湿关节炎滑膜细胞,分别加入不同浓度大黄素培养6、12、24 h,CCK-8法检测增殖能力的变化及时效关系,Transwell法检测处理前后转移能力的变化。结果酶消化法和组织块法分别于14 d和21 d得到原代RA成纤维样滑膜细胞,扩大培养3代后用大黄素处理,CCK-8检测6 h处理后20、40、60、80、100μmol/L大黄素的抑制率依次为0.39±0.11、0.51±0.04、0.55±0.07、0.72±0.18、0.98±0.11。且随着处理时间延长,抑制率增加(P<0.05)。Transwell法检测浓度为20、40、80μmol/L大黄素处理后,处理组穿过小室膜的细胞数明显少于对照组,迁移试验表明,抑制率分别为39.48%、54.76%、82.99%。侵袭试验表明,抑制率分别为25.38%、60.41%、81.73%。与对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论不同浓度的大黄素对体外培养RA-FLSs的转移及增殖能力具有抑制作用,且具有一定的量效和时效关系,为进一步研究大黄素在类风湿关节炎的治疗提供一定的实验室依据。

青藤碱抑制类风湿关节炎滑膜细胞增殖与诱导凋亡的研究

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)特征之一就是滑膜组织表现为增生性侵蚀性生长,其生长性质和病理学行为在许多方面类似于肿瘤组织的特性,对软骨组织造成进行性破坏。因此延缓甚至抑制滑膜细胞异常增殖与诱导其凋亡将成为治疗RA的主要策略之一,具有十分重要的意义。青藤碱(sinomenine,SN)是青风藤中提取的生物碱单体,具有良好的抗炎、镇痛、免疫抑制等药理作用,临床用于治疗类风湿关节炎取得良好疗效。本文主要将近年来有关SN在RA抑制滑膜细胞异常增殖与诱导其凋亡方面的研究作一详细阐述,以期为后续的临床研究提供理论依据。

金边祛风饮对类风湿关节炎滑膜细胞IL-1β、TNF-α及MMP-3表达的影响

目的:实验观察金边祛风饮对类风湿关节炎滑膜细胞IL-1β、TNF-α及MMP-3表达的影响。方法:类风湿关节炎及骨关节炎患者关节滑液经原代培养,应用2代传代的滑膜细胞,分为治疗组(RA)与对照组(OA)。用ELISA法检测金边祛风饮对类风湿关节炎患者滑膜细胞炎症因子IL-1β、TNF-α和MMP-3水平的表达,MTT法测定滑膜细胞增殖率。结果:不同浓度金边祛风饮刺激72小时后,滑膜细胞上清液TNF-α、IL-1β、MMP-3水平均降低,以高、中剂量最明显(P<0.05)。各剂量金边祛风饮均有抑制滑膜细胞生长的趋势(P<0.05),以高剂量最为明显(P<0.01),与对照组比较,有显著性差异(P<0.05)。结论:金边祛风饮能有效抑制类风湿关节炎滑膜细胞IL-1β、TNF-α及MMP-3表达。

苗药金乌健骨方对类风湿关节炎滑膜细胞自噬的调控作用研究

目的:探讨金乌健骨方对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞自噬基因LC3、Beclin-1、Bcl-2、VPS34表达的影响。方法:取3代RA滑膜细胞,加金乌健骨方总提物低、中、高浓度(0.06、0.6、6.0 mg/mL)及雷公藤多苷(0.03 mg/mL)干预24 h后,采用透射电镜观察细胞自噬情况,PCR检测LC3、Beclin-1、Bcl-2、VPS34 mRNA表达水平;Western blot检测LC3、Beclin-1蛋白表达。结果:空白对照组细胞无明显自噬小体或自噬溶酶体,各给药组滑膜细胞胞浆中自噬小体和自噬溶酶体明显增多。与空白对照组比较,除金乌健骨方低浓度组外,各给药组滑膜细胞LC3、Beclin-1、VPS34 mRNA表达均显著降低,Bcl-2 mRNA表达显著升高,LC3、Beclin-1蛋白表达显著降低(P<0.01)。以金乌健骨方高浓度组和雷公藤多苷组作用最明显。结论:苗药金乌健骨方能抑制RA滑膜细胞自噬相关基因LC3、Beclin-1、VPS34的表达,增强Bcl-2的表达水平。

NF-κB信号通路的阻断对类风湿关节炎滑膜细胞凋亡与炎症的影响

目的探讨核因子(NF)-κB信号通路的阻断对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞凋亡与炎症的影响。方法分离正常滑膜组织及RA滑膜组织中成纤维滑膜细胞(FLS),分为正常FLS组(正常组),RA FLS组(模型组),NF-κB抑制剂(PDTC)低、中、高剂量组(2,5,10μmol/L)(PDTC组)。四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测PDTC对RA FLS细胞活力的影响,Annexin V-FITC流式双染检测各组细胞凋亡情况,酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α,白介素(IL)-1β含量,Western印迹检测各组细胞中环氧化酶(COX)-2,Bax,Bcl-2蛋白的表达。结果与模型组比较,PDTC低、中、高剂量组能显著抑制RA FLS活力,诱导RA FLS凋亡,抑制RA FLS细胞释放TNF-α、IL-1β因子,下调COX-2和Bcl-2表达,上调Bax表达(均P<0.05)。结论阻断NF-κB信号通路能够显著抑制RA FLS细胞炎症并诱导细胞凋亡。

白藜芦醇体外抑制类风湿关节炎滑膜细胞的增殖及其机制

目的:检测白藜芦醇(Res)体外对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞增殖的影响,并探讨其可能机制。方法:用不同浓度Res处理RA滑膜细胞24h后,采用四唑蓝(MTT)法检测滑膜细胞的增殖水平;用缺口末端标记法(TUNEL)和流式细胞仪检测其凋亡百分率;采用Western-blot分析caspase-3酶原的裂解;用比色法测定Res(200μmol/L)处理RA滑膜细胞不同时间及不同浓度的Res处理RA滑膜细胞12h后,caspase-3的相对活性。结果:加入不同浓度Res处理RA滑膜细胞24h后,增殖水平均显著低于对照组(P<0.01);对照组与不同浓度Res处理组凋亡细胞百分率比较,差异有统计学意义(P<0.01);用200μmol/LRes分别处理RA滑膜细胞不同时间,caspase-3活性与未处理组比较,差异有统计学意义(P<0.01);用不同浓度的Res处理细胞12h,caspase-3活性成浓度依赖性升高;用不同浓度Res处理培养的RA滑膜细胞24h,caspase-3酶原的表达随药物浓度的增加而减少。结论:Res在体外抑制类风湿关节炎滑膜细胞增殖,诱导细胞凋亡,可能与caspase-3的活化有关。

苗药金乌健骨方对类风湿关节炎滑膜细胞IL-17/IL-17R的影响

目的探讨苗药金乌健骨方总提物对类风湿关节炎滑膜组织成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)白细胞介素6(IL-6)、转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素17(IL^(-1)7)分泌及IL^(-1)7受体(IL^(-1)7R)蛋白的影响。方法采用组织块法体外培养原代RA-FLS;分为金乌健骨方低、中、高剂量组(0.06,0.6,6.0 mg·m L^(-1)),雷公藤多苷组(0.03 mg·m L^(-1))及空白对照组,共5组。采用ELISA法检测IL-6、TGF-β、IL^(-1)7含量;PCR法检测IL^(-1)7R m RNA表达;Western Blot法检测IL^(-1)7R蛋白表达。结果与空白对照组比较,各给药组细胞培养上清液中IL-6、TGF-β、IL^(-1)7的浓度均有不同程度的降低(P<0.01),IL^(-1)7R m RNA及蛋白表达水平均明显下降(P<0.01)。与雷公藤多苷组比较,金乌健骨方高剂量组IL-6、TGF-β、IL^(-1)7水平及IL^(-1)7R蛋白表达量明显降低(P<0.05),金乌健骨方中、高剂量组IL^(-1)7R m RNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论苗药金乌健骨方总提物能够下调RA-FLS中IL-6、TGF-β、IL^(-1)7的分泌,降低IL^(-1)7R m RNA及蛋白表达量。

中医药对类风湿关节炎滑膜细胞凋亡和增殖作用的研究进展

对近年来中医药通过诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡、抑制其增殖的相关文献进行了综述,认为中医药可通过多靶点影响类风湿关节炎滑膜细胞增殖与凋亡,但具体作用机制和临床转化仍有待进一步研究。

通痹灵对类风湿关节炎滑膜细胞血管内皮生长因子mRNA的影响

目的观察通痹灵对体外培养的类风湿关节炎(RA)滑膜细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法行关节腔镜手术取RA患者膝关节滑膜组织消化分离滑膜细胞进行分组培养。空白对照组:含生理盐水+10%胎牛血清的DMEM培养;通痹灵低剂量组:50mg/L通痹灵+10%胎牛血清的DMEM培养;通痹灵高剂量组:200mg/L通痹灵+10%胎牛血清的DMEM培养。提取总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组VEGFmRNA的表达。结果通痹灵高、低剂量组VEGFmRNA表达较对照组明显降低(P<0.05)。结论通痹灵可以下调RA患者滑膜细胞VEGFmRNA表达水平,从而可以通过抑制VEGF表达减轻滑膜血管翳增殖。

核心肽对类风湿关节炎滑膜细胞增殖与凋亡的影响

背景:前期研究发现,在类风湿关节炎关节腔中注入核心肽,可以明显抑制病情活跃度且抑制滑膜的浸润增生。但由于T细胞和滑膜细胞之间联系密切,核心肽是通过直接作用于滑膜细胞还是通过T细胞介导抑制滑膜细胞尚缺乏研究。目的:对比观察核心肽对类风湿关节炎和骨性关节炎滑膜细胞增殖与凋亡的影响。方法:采用酶消化法分离类风湿关节炎和骨性关节炎患者手术切取的病变滑膜组织滑膜细胞,MTT法检测滑膜细胞增殖率。取第3代类风湿性关节炎和骨性关节炎滑膜细胞分5组干预:空白对照组、甲氨蝶呤组、10,25,50μmol/L核心肽组。MTT法检测各组滑膜细胞增殖率变化;采用流式细胞仪检测各组滑膜细胞凋亡情况。结果与结论:类风湿关节炎滑膜细胞体外增殖速度较骨性关节炎滑膜细胞快(P<0.05)。3种剂量的核心肽均可抑制骨性关节炎滑膜细胞的增殖,诱导其凋亡,且具有剂量相关性,高剂量时,核心肽更明显表现出对骨性关节炎滑膜细胞凋亡的诱导作用。而对于类风湿关节炎滑膜细胞,只有中、高剂量核心肽显示出明显的诱导细胞凋亡作用,但未见明显的剂量依赖性。核心肽对类风湿关节炎滑膜细胞的凋亡诱导作用明显小于其对骨性关节炎细胞的凋亡诱导作用。结果提示核心肽对滑膜细胞具有一定的直接作用,高剂量核心肽在体外可抑制类风湿关节炎滑膜细胞的过度增殖,而中、高剂量核心肽可诱导类风湿关节炎滑膜细胞的凋亡。

中性粒细胞增强类风湿关节炎滑膜细胞产生基质金属蛋白酶及其细胞侵袭力

目的:研究中性粒细胞表面CD147分子对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)产生基质金属蛋白酶(MMP)及细胞侵袭力的作用。方法:取自关节镜或骨科手术治疗的RA、骨关节炎(OA)患者的滑膜组织,体外分离培养FLS,通过流式细胞术(FCM)检测细胞表面分子及形态学方法鉴定。采用全反式维甲酸(ATRA)诱导HL-60细胞(人早幼粒白血病细胞株)诱导中性粒细胞分化,并用硝基蓝四氮唑(NBT)还原反应测定其分化程度。进而以FCM测定分化前后的HL-60细胞及FLS表面CD147的表达,并通过明胶酶谱和重组基质侵袭实验检测分化前后HL-60细胞对FLS MMP表达和细胞侵袭能力的作用以及CD147拮抗肽(AP-9)对这种MMP表达和细胞侵袭能力的抑制作用。结果:成功建立了FLS分离培养和HL-60细胞分化的实验体系。培养的FLS具有典型成纤维细胞的形态,均一的高度表达CD90(>98%)而不表达CD14。分化后的HL-60细胞CD147表达上调,RAFLS细胞CD147表达水平低于分化前及分化后HL-60细胞(P<0.05)。明胶酶谱试验显示:①与OA FLS相比,单培养的RA FLS表达较高水平的酶原及活化形式的MMP-2(P<0.05);②分化前/后的HL-60细胞分别与FLS共培养,酶原及活化形式的MMP-2和MMP-9的表达水平较这些细胞单独培养均显著升高(P<0.05),且分化后的HL-60细胞与FLS共培养酶原及活化形式MMP-2表达水平较分化前HL-60细胞与FLS共培养明显升高(P<0.05);③AP-9显著抑制两共培养组中MMP-2和MMP-9的上调作用(P<0.05)。侵袭实验显示:RA FLS侵袭能力高于OA FLS(P<0.05);分化前后的HL-60均可增加RA FLS的侵袭能力(P<0.05),且分化后强于分化前(P<0.05);AP-9可抑制这一促进作用,降低FLS的侵袭能力(P<0.05)。结论:中性粒细胞可能通过CD147促进RA患者滑膜FLS MMP-2、MMP-9的表达和活化,增强FLS的侵袭能力,这种促进作用可被CD147拮抗肽所抑制,将为RA关节软骨和骨损伤机制和治疗的进一步研究提供了重要的线索。

TNF-α诱导类风湿关节炎滑膜细胞NF-κB信号通路活化的探讨

目的研究TNF-α对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜细胞NF-κB信号转导通路活化的影响。方法原代培养类风湿性关节炎滑膜细胞;应用Western blot检测滑膜细胞p65-NF-κB和ΙκBα蛋白的表达变化;应用免疫荧光技术分析NF-κB核移位的变化。结果 TNF-α刺激不同时间后p65-NF-κB蛋白在滑膜细胞核内表达增加,而在胞浆表达减少,30 min时最明显;同时,免疫荧光显示TNF-α可促使NF-κB向滑膜细胞核内移位;TNF-α刺激20 min后ΙκBα蛋白降解明显增加。结论TNF-α诱导类风湿关节炎滑膜细胞NF-κB信号通路活化,可能与类风湿关节炎炎症进程有关。

甲氨蝶呤对类风湿关节炎滑膜细胞增生及细胞周期的影响(英文)

目的研究甲氨蝶呤(MTX)对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞增生及细胞周期的影响,揭示MTX治疗RA的机制.方法应用MTS/PMS比色法和流式细胞术分别测定MTX处理和未处理RA患者滑膜细胞的细胞增生水平和细胞周期.结果加入不同浓度MTX(0.2～2.0 μmol/L),RA患者滑膜细胞接种后第4天起增生水平均显著低于未处理的RA患者滑膜细胞(P＜0.05);细胞周期分析显示加入不同浓度MTX(0.2～2.0μmol/L)后第5、8天,RA患者滑膜细胞停留在G1期的比例要比未处理的RA患者滑膜细胞明显增加(P＜0.05),而S、G2期的细胞比例比未处理的RA患者滑膜细胞则明显减少(P＜0.05);MTX能以剂量依赖性明显抑制滑膜细胞的增生水平.结论MTX在治疗RA时,主要起到对RA患者滑膜细胞的增生及增生相关病理过程的抑制.

乙酰唑胺对类风湿关节炎滑膜细胞增殖及TNF-α及IL-1β的影响

目的观察乙酰唑胺(AZ)对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞(FLS)的增殖影响,及AZ对RA FLS培养上清中TNF-α和IL-1β水平的影响。方法从RA患者关节液中分离滑膜细胞体外培养,不同浓度AZ(10-4,10-6,10-8mol/L)处理RA FLS 24,48,72 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测AZ对RA FLS增殖影响;ELISA法检测AZ处理后培养上清中TNF-α和IL-1β水平。结果不同浓度AZ处理的RA FLS吸光度值比较无统计学差异(P>0.05),随着时间延长,各组间细胞增殖有抑制趋势,与不加药对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);AZ可呈剂量及时间依赖性抑制RA FLS分泌TNF-α和IL-1β(P<0.05)。结论 AZ可以抑制RAFLS增殖及减少RA FLS分泌IL-1β和TNF-α。

甲氨喋呤和雷公藤对类风湿关节炎滑膜细胞产生趋化因子的影响

目的：探讨甲氨喋呤（MTX）和雷公藤多甙（TG）对类风湿关节炎（RA）滑膜细胞产生CC趋化因子受体5配体（CCL5）的影响．方法：分离13例RA和7例骨关节炎（OA）的滑膜细胞行体外培养，并用细胞脂多糖（LPS）诱导CCL5产生，同时加入或不加入不同浓度的MTX或TG．采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定培养上清液中的CCL5水平．结果：RA滑膜细胞体外自发产生CCL5水平高于OA滑膜细胞（P〈0．05）；LPS刺激后，RA和OA滑膜细胞产生CCL5水平均较刺激前显著升高（P均〈0．001），但二者间无显著性差异（P〉0．05）；MTX和TG均可显著抑制RA滑膜细胞产生CCL5，但二者抑制方式不同：MTX剂量在5-20μg／L的剂量范围内呈现剂量依赖性效应，之后随剂量的增大，其抑制作用不再进一步增强．而TG未显示出剂量依赖性抑制效应，仅在剂量达到或超过40彬L时出现比MTX更显著的抑制作用．TG抑制CCL5产生与其所致的滑膜细胞死亡相关．结论：RA滑膜细胞产生CCL5增高，MTX和TG均可显著抑制CCL5的产生，其中TG抑制CCL5产生与其细胞毒作用有关．

血栓素A_2受体通过介导环氧酶2的合成增强类风湿关节炎滑膜细胞的增殖作用

目的:研究血栓素A2受体(thromboxane A2receptor,TXA2R)作为环氧酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)下游产物对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜细胞增殖力和COX-2表达的影响。方法:利用细胞增殖与毒性检测试剂盒(MTS)检测TXA2R拮抗剂SQ29548和激动剂U46619对RA关节滑膜细胞MH7A增殖力的影响作用,并用real-time PCR检测它们对COX-2 mRNA表达的影响;利用BrdU细胞增殖检测法观察MH7A细胞在转染COX-2小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)后细胞增殖受抑制的情况及额外施加U46619的可能影响。结果:SQ29548和U46619分别具有抑制和促进MH7A细胞增殖力与COX-2 mRNA表达的作用,且U46619可在一定程度上重建由COX-2 siRNA所抑制的MH7A细胞增殖力。结论:TXA2通过其受体TXA2R既可控制COX-2的表达,又可介导COX-2的细胞增殖效应,有可能作为RA治疗较为理想的新靶标。

二氢青蒿素通过Akt信号途径诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡

目的探讨二氢青蒿素诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡的信号机制。方法无菌条件取类风湿关节炎患者膝关节滑膜组织，组织块贴壁法培养关节滑膜细胞。流式细胞仪检测细胞凋亡。Western blot半定量分析Akt活化。电泳迁移率变动（EMSA）检测NF—kB活性。结果在2．5—10umol／L质量浓度范围二氢青蒿素呈剂量依赖性诱导体外培养的关节炎滑膜细胞凋亡。5umoL／L和10umol／L的二氢青蒿素与关节滑膜细胞共培养24h，显著抑制Akt激酶473位丝氨酸磷酸化及NF-kB的活化。结论二氢青蒿素可通过Akt信号途径诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡。