猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30毒株与JXA1-R疫苗株荧光定量PCR鉴别检测方法的建立及应用

为鉴别检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)类NADC30毒株HNhx和JXA1-R疫苗株,根据类NADC30毒株HNhx和JXA1-R疫苗株非结构蛋白2(Nsp 2)基因序列差异,设计特异性引物和探针,建立TaqMan荧光定量PCR和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。结果显示,2种方法中,标准品在10^(3)~10^(8)拷贝/μL均具有良好线性关系,标准曲线R^(2)值均在0.990以上;基于TaqMan探针法的荧光定量PCR方法,JXA1-R株、HNhx株的最低检出量分别为10^(4)、10^(3)拷贝/μL,SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的最低检出量均为100拷贝/μL;重复性分析结果显示,批内和批间试验的变异系数均小于1.5%,呈现出良好重复性。综上,成功建立了鉴别检测类NADC30毒株HNhx和JXA1-R疫苗株的方法,且稳定性好、特异性强,可以为PRRSV的鉴别检测提供技术支持。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)免疫后病毒血症和抗体消长规律

应用高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)对28-30日龄的仔猪进行免疫,前8周每周采血,8周后每2周采血进行疫苗毒核酸检测和抗体水平检测,直至免疫后第16周。结果表明,高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)在血清中存在的最长时间大约为6周;抗体从免疫后第2周开始转阳,至第3周时全部为阳性,并且抗体水平不断上升,至免疫后第10周时平均抗体水平达到最高。

猪繁殖与呼吸综合征病毒变异野毒株与JXA1-R疫苗毒株快速鉴别方法的建立

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)变异野毒JXA1的基因变异序列和疫苗株JXA1-R的基因遗传标志设计合成了2对特异性引物,结合快速RNA抽提试剂和一步法RT-PCR,建立了JXA1变异野毒与JXA1-R疫苗毒的快速鉴别体系,其目的片段大小分别为4002、90 bp,该方法对猪瘟病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒的PCR检测结果均为阴性;对JXA1变异野毒与JXA1-R疫苗毒RNA的最低检测量分别为103、104拷贝/μL。该方法敏感、特异,适用于临床样品的检测。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)免疫后在血清中存在时间的报告

本研究应用高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)对28~30日龄的仔猪进行免疫,前8周每周采血,8周后每2周采血进行疫苗毒核酸检测,直至免疫后第16周。结果表明,高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)在血清中存在的最长时间约为6周,但有的猪呈现间歇性携带疫苗毒。

集约化猪场不同毒株猪繁殖与呼吸综合征弱毒活疫苗免疫后血液中持续带毒及抗体消长规律研究

某地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与中国高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(hp-PRRSV)同源性极高,为了筛选适合该地区病情的疫苗,指导养殖户生产,试验选择hp-PRRS弱毒活疫苗(JXA1-R株)和PRRS弱毒活疫苗(VR-2332株)作为疫苗候选株,选取30日龄、健康状况良好、群体差异性小的断奶仔猪30头,随机分成A、B和C组,每组10头,A组注射hp-PRRS弱毒活疫苗(JXA1-R株),B组注射PRRS弱毒活疫苗(VR-2332株),C组注射相同剂量生理盐水作对照,免疫前和免疫后14、28、42、56、70、84d采集血清,通过淋巴细胞计数、血清病毒核酸检测、血清抗体检测等分析猪体内hp-PRRS弱毒活疫苗(JXA1-R株)和PRRS弱毒活疫苗(VR-2332株)免疫应答情况。试验结果显示,淋巴细胞数量方面,仔猪免疫后,淋巴细胞数量均上升,42d时A、B组均达到最大值,A组为19.3×109/L,B组为16.7×109/L,C组则一直处于原始水平;抗体阳性方面,14d时A组为80%,B组为60%,C组为0,42d时A组为100%,B组为80%,C组为0;病毒核酸阳性率方面,14d时A组为90%,B组为100%,C组为0,42d时,A组为40%,B组为70%,C组为0,70d时,A组为0,B组为20%,C组为0。由此可知,hp-PRRS弱毒活疫苗(JXA1-R株)能快速诱导猪发生免疫应答、产生免疫抗体,抗体持续时间长、效价高、稳定性良好,且疫苗毒在体内存在时间短、减毒时间快、安全性高,对所研究地区猪群免疫具有优越效果。

PRRSV变异株活疫苗和灭活疫苗免疫特性的研究

为进一步研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株疫苗的免疫机理和明确PRRSV变异株活疫苗和灭活疫苗各自的免疫特性,本实验分别采用PRRSV变异株(HuN4)活疫苗和PRRSV变异株(JXA1)灭活苗免疫PRRSV抗原和抗体阴性的健康断奶仔猪,免疫后21d用PRRSV变异株HuN4强毒攻毒,ELISA方法检测血清中PRRSV特异的抗体水平及TNF-α、IFN-α、IL-1、IL-6和CRP细胞因子水平,荧光定量RT-PCR方法检测病毒血症的发生和持续情况,并取主要器官进行病理组织学观察。结果表明:HuN4活疫苗组免疫后14d便可检测到PRRSV特异性抗体,攻毒后5d各细胞因子水平升高,攻毒后21d病毒血症完全消失,免疫后各器官没有明显病理变化,攻毒后临床症状和各组织器官病理变化轻微;JXA1株灭活苗组免疫期间没有检测到PRRSV特异性抗体,攻毒后5d～9d各细胞因子水平升高,攻毒后病毒血症持续存在,免疫后各器官有轻微病理变化,攻毒后临床症状和各组织器官病理变化比HuN4活疫苗组严重,但比对照组明显减轻。本实验表明,HuN4活疫苗能够快速有效的激发机体的体液免疫反应,在抵抗PRRSV变异株HuN4强毒攻毒时,临床症状明显优于JXA1灭活苗。

高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗(JXA1-R株)对猪瘟疫苗免疫效果的影响

高致病性猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株引起的猪的一种急性、热性传染病,各种年龄、品种、性别的猪均可发病,发病率可达100%,死亡率可达50%。可引起母猪流产、产死胎等症状。猪瘟是由猪瘟病毒引起猪的一种急性、热性、高度接触性传染病,主要特征是高热、微血管变性而引起全身出血、坏死、梗塞。以上两种病是目前养猪业的头号大敌,严重影响养猪业的健康发展。

高致病性猪蓝耳病活疫苗免疫效果比较研究

为了对高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HP-PRRS)免疫效果进行比较,选择辽宁地区某养殖场临床健康仔猪60头,随机分为Ⅰ组和Ⅱ组,两组仔猪均于30日龄首次免疫某厂家的Hu N4-F112株活疫苗,Ⅰ组于60日龄进行加强免疫,两组均于180日龄进行最终免疫,每次免疫后30 d采集血样,进行PRRSV抗体水平检测,两组在首免后30日检测抗体,未见明显差异(P>0.05);两组均于210日龄再次检测,两组抗体水平差异显著(P<0.05)。同时选择临床健康仔猪90头,随机分为3组(A组、B组和C组),三组仔猪均于30日龄分别免疫Hu N4-F112株、TJM株及JXA1-R株高致病性猪蓝耳病活疫苗,严格隔离饲养,免疫后30 d后采集血样,进行PPRSV抗体检测,结果表明三种毒株活疫苗对仔猪的免疫效果无明显差异(P>0.05)。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗的免疫效果观察

使用高致病性猪繁殖与呼吸综合征(JXA1-R株)活疫苗对仔猪进行免疫,仔猪无不良临床表现;使用该疫苗对配种前母猪、怀孕80～90d母猪、临产前15d母猪进行免疫,母猪精神、食欲、体温均正常,并在预产期顺利产仔。JXA1-R株活疫苗表现出良好的安全性。使用JXA1-R株活疫苗对猪只进行免疫,7d即产生抗体;对仔猪进行免疫,21d～28d即能抵抗强毒攻击。恩平市种猪场和新兴商品肉猪场使用了JXA1-R株活疫苗,获得了满意的免疫效果,证明高致病性猪繁殖与呼吸综合征(JXA1-R株)活疫苗能预防猪繁殖与呼吸综合征的发生。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)免疫效力及安全性试验报告

笔者检验了国药集团扬州威克生物工程有限公司制备的高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)免疫效力,对SY-007批苗、国内市售某同类疫苗和进口苗进行比较,包括外观、溶解性、病毒含量和安全性和攻毒保护率。结果显示,国药集团扬州威克生物工程有限公司疫苗与市售某国产苗和进口苗在外观上稍有颜色差异,但溶解性无明显差异;国药集团扬州威克生物工程有限公司疫苗与市售某国产苗病毒含量相同,均高于进口苗;3种疫苗对裸鼠和仔猪均具有较好的安全性;国药集团扬州威克生物工程有限公司疫苗的免疫效力与进口苗效果基本一致,且明显好于市售某国产苗。系列试验结果表明,国药集团扬州威克生物工程有限公司生产的高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)产品质量与进口苗相当,优于市售某国产苗。

高致病性猪蓝耳病活疫苗不同剂量的效果比较试验

通过开展高致病性猪蓝耳病活疫苗(JXA1-R株)1头份与2头份免疫剂量的试验,表明1头份与2头份免疫效果相似,均能达到理想的免疫效果,但考虑到免疫初期2头份免疫对仔猪体内抗体的影响及增加了疫苗费用两方面因素,建议选用1头份免疫。

猪高致病性蓝耳病弱毒活疫苗免疫试验

为了更好地指导养殖户应用高致病性蓝耳病活疫苗(JXA1-R株),本中心从淋巴细胞计数、病毒核酸检测、免疫抗体检测等方面,分析了高致病性蓝耳病弱毒活疫苗免疫应答情况。本次试验选取30天龄的杜长大三元断奶仔猪20头,随机分成A、B两组,每组10头。A组注射J XA1-R株活疫苗,B组头注射生理盐水作对照。结果显示该疫苗免疫仔猪28天后,淋巴细胞由7.585×109/L上升到15.28×109/L,免疫抗体阳性率由0%上升到100%,免疫猪病毒核酸检出率由0%上升到90%。揭示了PRRS活疫苗(JXA1-R株)能使仔猪产生较好的免疫应答,疫苗毒感染持续时间多数超过28天。

1株田间自然重组PRRSV类NADC30毒株的分离鉴定及序列分析

为了解田间猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRsv）的流行及变异情况，本研究将PRRSV阳性样品接种到Marc－145细胞并传代后成功分离到1株PRRSV，将其命名为HENZMD-9，并对其全基因序列进行测定和分析。结果显示，HENZMD-9为1株类美国NADC30毒株，并与国内高致病性PRRSV（HP—PRRRSV）毒株的2个片段发生重组，这2个片段分别来自HP—PRRSV JXA1株的细胞传代致弱株JXA1-P80及JXA1P45，分别位于基因组5’端及开放式阅读框lab区域，表明HENZMD-9很有可能与JXA1-R疫苗回复株发生了重组，提示不同类型毒株在田间的共存会加剧PRRSV的演变，从而增加临床防控难度。因此，持续监测PRRSV田间流行及变异动态对PRRSV的防控具有一定的，临床指导意义。

2株与疫苗病毒高度同源的猪繁殖与呼吸综合征病毒的鉴定和致病性分析

为了解河南地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的特征及致病性,对从河南省两个免疫过高致病性PRRSV(HP-PRRSV)减毒活疫苗后不久发病猪场分离的两株PRRSV HENZK-1和HENPDS-2进行了全基因组测序、分析和致病性研究。结果表明,两株PRRSV分离株与HP-PRRSV的细胞传代致弱疫苗株JXA1-P80/JXA1-R高度同源。致病性试验表明,感染HENZK-1和HENPDS-2的仔猪出现明显临床症状,包括高热、食欲减退、呼吸困难等,且肺部出现了肉眼和组织学病变;而同源商品疫苗对照组JXA1-R虽未出现明显临床症状,但日增重降低,肺部有肉眼和组织学病变,并检测、回收到病毒。综上所述,有理由认为HENZK-1和HENPDS-2是由HP-PRRSV疫苗株JXA1-R演化而来,其来源猪群临床发病与其毒力返强、疫苗毒株在解剖和组织学上的损伤和排毒能力有一定关系,但具体原因仍需进一步研究。本研究为谨慎使用高致病性PRRSV减毒活疫苗及PRRS控制策略提供了重要依据。

巴马香猪超前免疫高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗的免疫效果评价

为了评价高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗(JXA1-R)对仔猪超前免疫的免疫效果及安全性,给3头巴马香猪超前免疫弱毒疫苗JXA1-R 1头份/头,以3头同窝仔猪为对照组,接种等量疫苗稀释液,观察疫苗免疫后的临床表现,测定疫苗免疫后的抗体动态变化及排毒情况;免疫后第35天,采用高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(JXA1)攻毒,测定攻毒后的抗体变化、排毒情况及免疫保护作用。结果表明,巴马香猪超前免疫后第14天发生抗体阳转,鼻拭子样品、肛门拭子样品和血清样品中均检测到病毒核酸,同居的阴性对照组中有1头仔猪发生抗体阳转,提示该疫苗存在排毒现象。攻毒前免疫组和对照组的抗体阳性率分别为3/3和1/3;攻毒后免疫组和对照组的免疫保护率分别为3/3和1/3,表明该疫苗具有一定的免疫保护作用,但初生巴马香猪超前免疫后表现生长缓慢,被毛粗乱,提示该疫苗对仔猪具有一定的毒力,不适合用作超前免疫。