猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like株的分离鉴定及基因组分析

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)呈现全球流行,对养猪行业造成巨大的经济损失。为增加PRRSV分离细胞种类的多样性,同时了解新疆地区猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)遗传变异的现状,采用新鲜制备猪骨髓细胞诱导分化成猪骨髓源巨噬细胞,对新疆地区某猪场疑似患有PRRS的肺脏,接种至猪骨髓源巨噬细胞,分离获得1株PRRSV毒株,命名为XJYQ-2021。通过测序得到全基因组序列,对该毒株NSP2氨基酸序列缺失、ORF5及全基因组序列进行同源性、遗传进化及重组分析;利用间接免疫荧光试验进行鉴定,同时对第10、15、20代病毒液绘制生长曲线。结果显示,诱导分化的猪骨髓源巨噬细胞纯度高达90%以上,XJYQ-2021分离株在该细胞生长良好,可见明显细胞病变;通过生长曲线可观察到病毒含量随代次增加而递增,感染48 h左右病毒滴度达到峰值;该分离株基因组全长15030 nt,与美洲型NADC30同源性为90%;XJYQ-2021分离株与VR2332相比,NSP2氨基酸序列与美洲型NADC30具有相同不连续缺失(111+1+19);全基因重组分析结果表明,XJYQ-2021分离株是重组病毒,有一个重组片段,其中NADC30是亲本毒株,与JXA1之间发生重组获得。研究结果可为PRRSV的病毒分离提供优选细胞种类,同时掌握了新疆地区PRRSV流行毒株的遗传进化现状。

猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30株感染的诊断与防控策略

2019年10月初,福建闽南地区某猪场出现疑似猪繁殖与呼吸综合征疫情,主要表现为25日龄断乳仔猪出现发热、采食量下降、扎堆、毛长、喘气等现象。为确定发病原因,将随机采集的血清样品165份送至国内某重点实验室进行猪瘟抗体、猪繁殖与呼吸综合征抗体和猪伪狂犬病野毒抗体检测,采集4份肺等病料对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒进行PCR检测,PCR产物送上海某公司进行基因测序。结果发现,送检的165份样品中,猪伪狂犬病gE抗体阳性率为0%、gB抗体阳性率为96.19%(101/105),猪瘟抗体阳性率为84.24%(139/165),猪繁殖与呼吸综合征抗体阳性率为92.73%(153/165);病原学检测结果显示,未检出猪瘟病毒、伪狂犬病病毒,但猪繁殖与呼吸综合征病毒的检出率达100%;测序结果表明,4个样品的PCR产物序列均与NADC30毒株的同源性高达92%~93%。结果提示,该场暴发PRRS是类NADC30毒株感染所致,可采取与类NADC30毒株同源性高的疫苗接种和提高生物安全防控水平等方式对该病进行科学防控。

猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30毒株的流行现状与防控措施

本文介绍猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)国内流行情况、类NADC30毒株的致病性及在福建省的流行情况,探讨相关防控措施。

2016年我国部分地区类NADC30新亚群猪繁殖与呼吸综合征病毒的遗传变异分析

为了解类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）在我国新的流行特点，本研究根据GenBank中美国2012年提交的PRRSV NADC30株全基因组序列设计合成8对引物，通过RT-PCR的方法对本实验室2016年从4个省搜集的临床样品中检测到的15株类NADC30 PRRSVs株进行了全基因组测序，并且结合参考株进行了序列分析。NSP2推导氨基酸的序列比对表明，15株PRRSVs均具有aa323～aa433＋aa484＋aa505～aa523 （111＋1＋19） 131个氨基酸缺失的分子特征；经RDP4和Simplot生物学软件分析表明，15株PRRSVs中14株为重组病毒株，参与重组的亲本病毒株为PRRSV NADC30株，提供重组基因片段的病毒株为HP-PRRSV或以VR2332为代表的经典PRRSV株，这些类NADC30重组病毒株的重组位置、重组的基因片段及重组片段长度均具有多样性，而且重组的位置多位于编码非结构蛋白或次要结构蛋白的基因区域；全基因组遗传演化分析表明，这些病毒株远离国内之前流行的HP-PRRSV，同源性仅为83.4 %～87.2 %，而与其它的类NADC30病毒株位于一个相对独立的分支，以上结果均表明这类病毒株已形成了一个新的亚群，命名为5亚群。本研究中不同地区PRRSV的核苷酸同源性差异较大，仅为88.6 %～99.6 %，并且只有2个病毒株可以感染PAM和MARC-145细胞。本研究表明，以基因缺失和基因重组多样性为主要特征的5亚群PRRSV已在我国流行，其生物学特性有待进一步研究。

猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30毒株的新近流行

猪繁殖与呼吸综合征是严重危害养猪生产的病毒性传染病。自20世纪90年代中期在我国发生和流行以来,已经20余载。据田间流行优势毒株的不同,可大致分为三个阶段:经典毒株流行阶段(1995-2006年)、高致病性变异株流行阶段(2006-2013年)和新近的类NADC30毒株流行阶段(2013年至今)。2013-2014年间与美国分离株NADC30亲缘性较高的一类PRRSV毒株开始在我国暴发流行,其具有与NADC30和MN184等谱系1(lineage 1)毒株相同的nsp2编码区缺失模式。致病性分析及疫苗保护试验结果表明,其致病性介于高致病性毒株与经典株之间,目前商用疫苗对其保护效果不佳。且类NADC30毒株易与其他PRRSV毒株发生重组,产生新的变异株。类NADC30毒株的广泛流行,以及相关重组毒株的叠现,进一步增加了PRRS疫病防控的难度。

2021-2022年我国部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因变异分析

为深入了解我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行和遗传变异情况,2021—2022年,本课题组在我国13个省份约50个养殖场收集了117份临床疑似猪繁殖与呼吸综合征患猪样品,针对PRRSV的ORF5基因进行了遗传变异分析。通过实时荧光定量PCR鉴定PRRSV阳性样品和基因型,应用RT-PCR扩增PRRSV ORF5和ORF7基因,将阳性样本进行测序并开展系统发育学分群和GP5氨基酸突变分析。结果显示,共检出PRRSV-2阳性样品48份(总体阳性率约41%),经测序共获取38条ORF5序列和10条ORF7序列。所有ORF5序列间核苷酸相似性为77.1%~99.8%,ORF7序列间核苷酸相似性为83.3%~98.7%。系统发育学分群显示,谱系1占比60%(29/48,28株NADC30-like毒株,1株NADC34-like毒株),谱系3占比25%(12/48),谱系5.1占比5%(2/48),谱系8.7占比10%(5/48)。GP5氨基酸分析表明,信号肽(aa 1—26)、中和表位C(aa 52—61)及潜在的N-糖基化位点(aa 32—35、aa 44、aa 51)3个区域氨基酸存在显著变异。研究结果表明:多个谱系PRRSV同时在我国流行,谱系1已替代谱系8.7成为主要流行谱系,并分布于我国大多数省份;谱系3仅次于谱系1,主要在华南局部地区流行;谱系8.7毒株检出率较低。需要注意的是,在广东省惠州市检出1株NADC34-like毒株,说明该毒株可能已在华南地区潜在流行。近几年来,PRRSV在我国的流行日趋复杂,谱系1毒株的广泛流行增加了PRRSV的遗传多样性。本研究结果将为制定PRRSV防控策略提供参考。

类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒FJZ03株感染性克隆的构建及鉴定

为构建类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)FJZ03株的感染性克隆,本研究将该株病毒全基因组分成6段,通过同义突变将其中的A14378G,引入了Mlu I酶切位点为分子标记。经RT-PCR分别扩增后,克隆至改造后的载体pSK中构建中间质粒。经测序鉴定各质粒正确后,分段连接至pSK中构建全长cDNA克隆质粒pSKFJZ03。将鉴定正确的pSK-FJZ03转染Marc-145细胞并传代,收集出现CPE后的病毒液,经RT-PCR扩增后的产物经Mlu I酶切和测序鉴定;同时采用激光共聚焦试验鉴定,获得的拯救病毒命名为RvFJZ03。分别测定RvFJZ03在Marc-145细胞与潴肺泡巨噬细胞(PAMs)中的生长曲线,比较拯救病毒与亲本病毒的生长特性。将获得的拯救病毒RvFJZ03在Marc-145细胞中连续传代,对不同代次的重组病毒分别测定病毒效价,并经RT-PCR扩增后通过Mlu I酶切和测序鉴定。测序鉴定结果表明,正确构建了感染性克隆质粒pSK-FJZ03;将其转染Marc-145细胞后并传至第3代出现典型CPE,经激光共聚焦试验、RT-PCR及测序鉴定表明拯救了重组病毒RvFJZ03。不同代次拯救病毒的病毒效价在105.5 TCID50/mL^107.0 TCID50/mL,且不同代次的拯救病毒均能够检测到Mlu I酶切位点。病毒的生长曲线结果显示,拯救病毒RvFJZ03与其亲本病毒在Marc-145和PAMs中的生长曲线相似。本研究构建了FJZ03株感染性克隆,并拯救了重组病毒RvFJZ03,该拯救病毒能够稳定传代并稳定遗传Mlu I分子标记且与亲本病毒的生长特性一致。本研究为探究该类病毒的致病机制提供了技术平台。

猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30株CHsx1401感染性克隆的构建

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是影响全球养猪业的一种重要病原。近年来,国内新出现的类NADC30毒株导致临床PRRS疫情再次出现。本研究旨在构建PRRSV类NADC30毒株CHsx1401的感染性克隆,以期为研究该类毒株遗传变异与演化以及与其他毒株致病性差异的分子机制奠定基础。将类NADC30毒株CHsx1401全长基因组分为4个片段进行RT-PCR扩增,分别将扩增片段克隆到pJET1.2载体构建中间质粒,将4个克隆依次连接并克隆到改造后的低拷贝质粒载体pWSK29中,构建全长cDNA克隆pWSK-CHsx1401,并在全长cDNA克隆的C与D片段之间通过同义突变(T11582G)引入AscⅠ酶切位点,作为遗传标记,用于区分拯救病毒与亲本病毒。采用脂质体LTX将全长cDNA克隆质粒转染至MARC-145细胞拯救病毒。结果表明,成功构建出全长cDNA克隆pWSK-CHsx1401,转染MARC-145细胞后传至第二代可观察到明显的细胞病变(CPE)。经间接免疫荧光、RT-PCR和序列测定鉴定结果表明,从全长cDNA克隆可拯救出病毒。拯救病毒(RvCHsx1401)在MARC-145细胞上可稳定传代,增殖动态与亲本病毒相似,在MARC-145细胞上各时相的病毒滴度略低于亲本病毒。本研究构建的类NADC30毒株CHsx1401的全长cDNA克隆具有感染性,可拯救出病毒;拯救病毒与亲本病毒的体外增殖特性相似,为研究该毒株的变异与演化以及与其他毒株致病性差异的分子机制提供了技术平台。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)对类NADC30 PRRSV免疫保护效果的评价

类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)已成为我国PRRSV的主要流行株,为了评价当前商品化疫苗对类NADC30 PRRSV的免疫保护效果,本研究将12头6周龄仔猪随机分为3组,免疫组和攻毒对照组各5头、空白对照组2头,免疫组肌注高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)10^(5.0)TCID_(50)/头,免疫后21 d,免疫组和攻毒对照组每头各肌注2 mL和滴鼻2 mL类NADC30 PRRSV SD53-1603株(104.0TCID_(50)/mL)。攻毒后观察各组实验猪临床症状,可见攻毒对照组所有猪均发热,持续5 d9 d,免疫组仅2头猪发热1 d2 d。检测各组实验猪体重变化,结果显示,攻毒后免疫组和攻毒对照组体重增长均显著低于空白对照组(p<0.001),但攻毒14 d以后,免疫组体重增长显著高于攻毒对照组(p<0.05)。IDEXX ELISA测定各组猪血清中PRRSV的特异性抗体,结果显示免疫后14 d可以诱导免疫组仔猪产生良好的针对PRRSV的特异性抗体。利用荧光定量PCR测定血清和组织中的病毒载量,结果显示免疫组血清和组织中的病毒载量均极显著低于对照组(p<0.0001)。对PRRSV免疫后及攻毒后各组仔猪各脏器病理学观察,结果可见攻毒对照组与免疫组相比出现明显的剖检和组织病理学变化。以上结果表明,高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)对类NADC30 PRRSV可以提供一定的交叉保护,该研究为评价我国现有疫苗是否对类NADC30 PRRSV具有保护效果提供了参考依据。

一株重组类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及基因组分析

为分离上海地区猪繁殖与呼吸综征病毒(PRRSV)并分析其分子遗传进化关系,对来自该地区某猪场疑似PRRSV感染病猪的2份肺样进行RT-PCR检测,阳性样品接种猪肺泡巨噬细胞(PAMs),将盲传3代后出现细胞病变的PAMs经间接免疫荧光鉴定,通过RT-PCR扩增分离株全基因组序列,测序后与GenBank登录的参考株全基因组序列进行同源性及遗传进化分析,分析了分离株Nsp2、GP5氨基酸序列的遗传进化关系,并对分离株做了重组分析和细胞嗜性试验。结果显示,成功分离出1株PRRSV,命名为SH2019,其全基因组开放阅读框大小为14677 bp,分离株与NADC30的核苷酸同源性最高,属于目前流行于中国的类NADC30 PRRSV,其Nsp2存在131个氨基酸缺失的分子特征;分离株是以谱系1毒株为主要亲本,以谱系3、谱系5或谱系8毒株为次要亲本,在12601~12901 nt(ORF2~ORF4)发生了基因重组的重组毒株,分离株不能感染Marc-145细胞。本研究分离鉴定一株重组类NADC30 PRRSV,可为该地区猪繁殖与呼吸综合征的防控提供参考。

2016-2017年我国华北地区猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30毒株分子遗传演化分析

为了解我国华北地区类NADC30流行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)及遗传变异情况,本研究自2016~2017年采集华北四省市(北京、天津、山东及河北)部分猪场疑似PRRSV样品239份进行RT-PCR检测,对所有阳性样品的ORF5基因测序分析及部分阳性样品病毒分离,并选择1株基因缺失病毒TJjh1602株进行全基因的序列扩增及分析.结果显示:PRRSV检测总阳性率44.35%(106/239),遗传进化显示52.83%(56/106)的流行毒株与类NADC30相近且位于系谱1(lineage 1),其中32.14%(18/56)的类NADC30流行毒株具有相同特征性的氨基酸位点缺失;TJjh1602株全基因长度为15018 nt,与NADC30同源性为95.2%,除具有上述特征性氨基酸位点缺失外,无其他插入或缺失.研究结果推测PRRSV类NADC30毒株在我国华北地区广泛流行,同时已遗传演化成一类具有ORF5缺失分子标签的新型类NADC30毒株,提示需进一步加强对PRRSV新型缺失毒株的流行病学调查及相关致病力研究.

一株类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒的全基因组序列分析

为监测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的基因变异情况,采用RT-PCR方法对某猪场疑似患有猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的猪组织样品进行鉴定,测序获得全基因,并对该毒株的NSP2基因缺失特征同源性和遗传进化及重组情况进行分析。结果显示:该猪场感染猪体的病原体为PRRSV,该毒株被命名为180404-2fei;180404-2fei毒株的NSP2区存在131(111+1+19)个氨基酸的不连续缺失,与报道的类NADC30毒株缺失特征一致;180404-2fei的NSP2基因与NADC30毒株核苷酸和氨基酸同源性分别为92.2%和90.1%,180404-2fei毒株的ORF5基因与NADC30的核苷酸及氨基酸序列同源性分别为93.5%和92.0%;遗传进化和重组分析结果表明,180404-2fei毒株属于NADC30-Like亚群,可能是由NADC30与HP-PRRSV重组而来。本研究通过对一株类NADC30 PRRSV的全基因组序列进行分析,为研究PRRSV的遗传变异和PRRS的防控提供了参考依据。

两株类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)又称为"猪蓝耳病",是一种由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的猪传染性疾病。本研究将采集到的2份疑似患有PRRS的流产胎儿的肺组织研磨后离心,取上清液接种猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM)盲传3代。通过RT-PCR方法和间接免疫荧光方法,对组织样品及细胞培养物进行了鉴定和分型。结果显示本研究成功从2份样品中分离到了类NADC30,且该毒株可以在PAM细胞上增殖。该研究结果为研究类NADC30毒株的重组机制、致病情况及研制预防疫苗提供参考。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4传代致弱株HuN4-F30感染性克隆的构建及拯救病毒致病性分析

为构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Hu N4株传代致弱株Hu N4-F30感染性克隆,本研究利用高保真DNA聚合酶,分6个片段进行病毒全基因组序列扩增,并通过点突变在其基因组10 808位引入Mlu I作为分子标记。通过重叠延伸PCR在5'端上游引入CMV启动子,3'端引入丁型肝炎病毒(HDV)核酶基因和牛生长素多聚腺苷酸化信号(BGH)。将各片段依次连接克隆于改造的p Belo BAC11载体中,构建含有全长HP-PRRSV致弱株c DNA感染性克隆p Belo BAC11-Hu N4-F30,并将全长质粒直接转染Marc-145细胞拯救出病毒。通过核酸鉴定与测序、分子标记鉴定、间接免疫荧光试验和动物致病性试验等进行鉴定。结果表明,拯救的病毒能够通过Mlu I酶切与亲本鉴别,拯救病毒的间接免疫荧光与亲本病毒一致,拯救病毒表现出低致病性。HP-PRRSV Hu N4-F30感染性克隆的构建与病毒的拯救,为进一步研究HP-PRRSV传代致弱机制奠定了基础。

猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30毒株FJZ03的致病性分析

为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒新流行毒株——类NADC30毒株的生物学特性和致病特征,将类NADC30PRRSV FJZ03毒株和HP-PRRSV FJLYDX毒株分别接种30日龄PRRSV和PCV2阴性仔猪,观察、记录和对比各试验组感染猪的临床症状、体温变化、体外排毒情况、病毒血症及组织病变等情况。试验结果显示,FJZ03株能在猪体内快速复制,引起仔猪较高滴度的病毒血症,体温升高和体外排毒时间均早于高致病性毒株FJLYDX,并且引起严重的间质性肺炎和脾萎缩。细胞因子检测结果表明FJZ03组仔猪细胞因子的浓度都有不同程度的升高,与FJLYDX组相比最明显的是产生较高水平的TNF-α和IL^(-1)0。综上表明FJZ03对仔猪具有较强的致病性。

一例类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的诊断及防控

2021年12月初,河北望都县某猪场出现疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)疫情,主要表现为繁殖母猪流产、仔猪高热和呼吸困难等。为确定发病原因,对病死仔猪进行剖检,发现仔猪全身淋巴结肿大、肺脏肿大充血等,采集病猪肺脏、淋巴结和扁桃体等组织样品进行实验室诊断。结果发现,送检的2份样品均为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性,但其它病原核酸均为阴性。以RT-PCR法对该毒株ORF5基因部分序列进行扩增与分析,发现该毒株与类NADC30毒株对应序列同源性较其它基因型PRRSV毒株同源性更高。以上结果提示,该场暴发PRRS是类NADC30毒株感染所致,可采取疫苗接种和提高生物安全防控水平等方式对该病进行科学防控。

猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like分离株致病力分析

为探究天津地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)毒株的流行情况,从天津市某猪场发病猪肺脏组织中分离到1株PRRSV,扩增其Nsp2基因,核苷酸序列比对结果显示该病毒属NADC30分支,与TJnh1501株同源性最高,命名为TJ18114株,并对其感染细胞能力和对猪的致病力进行了研究。结果显示:该毒株能够在Marc145细胞上稳定增殖,引起明显的细胞病变,最佳收获时间为72 h(0.1MOI接种),TCID50为106.445·mL^(-1);用2×10^(5) TCID50·头-1的剂量经肌肉注射结合鼻腔喷雾方式接种45 d杜长大三元猪,猪只感染后24 h体温升高至40℃以上,血液中病毒载量达107.3copies·mL^(-1);感染后7 d PRRSV抗体阳转率100%;感染后15 d猪只消瘦、咳喘,剖检可见间质性肺炎,显微病理观察提示弥漫性肺泡萎缩、炎性浸润;PRRSV荧光定量PCR检测发现病猪的扁桃体、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和淋巴结中均含有较高的病毒。研究结果有助于进一步认识天津地区PRRSV流行毒株的体外增殖规律和临床致病特点,为PRRS的深入研究和防控提供依据。

猪繁殖与呼吸综合征类NADC30与HP-PRRSV毒株RT-PCR鉴别方法的建立与应用

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种能够引起大面积呼吸道疾病并快速传播,导致母猪流产和仔猪死亡的RNA病毒,其特性为变异快,存在毒株间的重组。因此,病原的快速检测和鉴定对于该病的防控十分重要。本试验建立了一种能够区分类高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30与HP-PRRSV毒株的检测方法,根据nsp2基因的高变区的比对结果,选择其保守序列,设计一对检测引物,类NADC30扩增片段大小为334 bp,HP-PRRSV毒株扩增片段大小为514 bp,通过优化反应条件,最终建立了一种一对引物就可以区分检测类NADC30与HP-PRRSV毒株的RT-PCR检测方法。应用本试验所建立的RT-PCR方法对2017年12月至2018年2月采至四川多地区的疑似PRRSV感染发病的46份肺脏进行检测。结果显示,类NADC30检出率为32. 6%,高于HP-PRRSV毒株的检出率(10. 9%)。该方法的建立,为类NADC30和HP-PRRSV毒株的快速鉴别诊断提供了方法,具有重要意义。

猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30毒株流行现状

类NADC30毒株是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的一个新亚型毒株,近年来在我国不少地区被分离发现。不同于经典毒株和高致病性变异株,类NADC30毒株的出现增加了PRRSV流行毒株的复杂性,给猪场生物安全防控带来了新的挑战。

一株针对猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like毒株GP5蛋白的单克隆抗体制备及鉴定

为获得针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NADC30-like毒株GP5蛋白的单克隆抗体,采用表达纯化的PRRSV NADC30-like毒株的GP5蛋白按常规方法免疫小鼠,采用间接免疫荧光方法筛选出1株阳性杂交瘤细胞(命名为3E10),经3次亚克隆后制备腹水并进行纯化鉴定。结果显示:该杂交瘤细胞连续传代20代后细胞上清液的IFA效价仍不低于1∶40。纯化后的单克隆抗体腹水浓度为0.204 mg/mL,亚类鉴定为IgM。特异性检测显示3E10单克隆抗体能与2株PRRSV NADC30-like毒株发生荧光反应,而与4株高致病性PRRSV疫苗毒株、2株经典株PRRSV疫苗毒株以及CSFV、PCV2、BVDV及Marc-145细胞均无荧光反应,显示出较好的应用前景。针对PRRSV NADC30-like毒株GP5蛋白的单克隆抗体的成功制备,为PRRSV NADC30-like诊断试剂的研制提供了坚实基础。