干旱胁迫下八棱海棠PCD特征检测及类caspase基因片段的克隆与分析

【目的】为了探明类caspase蛋白酶参与植物PCD的机制,【方法】以八棱海棠(Malus robusta Rehd.)实生苗为试验材料,对植株进行轻度干旱胁迫,检测叶片PCD的发生,并应用RT-PCR技术克隆类caspase基因。【结果】结果表明,轻度干旱胁迫后3周的叶片出现细胞染色质凝聚、胞质皱缩、细胞核变形等细胞凋亡的形态学特征。提取叶片DNA,观察到DNA呈现明显的"DNA Ladder",表现出典型的细胞程序性死亡的生化特征。在此基础上提取叶片RNA,采用RT-PCR获得长度为555 bp的类caspase基因片段。【结论】经同源性分析该片段与其他果树的同源序列相似性超过80%,提示该区段为保守序列。比对苹果基因组,八棱海棠基因组中存在半胱氨酸蛋白酶基因,该基因为单拷贝,并且存在2个同源基因,这为揭示干旱胁迫下八棱海棠调控PCD的机理及环境适应的分子机制奠定了基础。

八棱海棠类Caspase基因cDNA的克隆及序列分析

以八棱海棠cDNA为模板,采用RT-PCR、巢式PCR、3’RACE、5’RACE技术,获得了类天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白水解酶(Caspase)基因cDNA 1429bp的全长序列。序列分析表明,Caspase基因cDNA序列编码358个氨基酸,N端含有1个23个氨基酸的信号肽。进化树分析显示八棱海棠与山杏在该基因座位上亲缘关系最近,属于一个分支。

山定子抗苹果褐斑病菌侵染过程中 DNA ladder 与类 caspases 活性的检测

接种褐斑病菌分生孢子悬浮液于山定子与富士苹果叶片,接种后1、3 d和5 d取样,提取DNA,检测DNA ladder;提取样品粗蛋白,用特异性荧光底物检测粗蛋白中类caspase活性,探索山定子受褐斑病菌侵染过程中引起的细胞程序性死亡(PCD)与抗性的关系,检测DNA ladder和类caspases活性变化的规律。研究发现:在接种后1、3 d和5 d,山定子和富士苹果叶片中没有明显DNA ladder的产生;受检测的YVADase、DEVDase、IETDase和VEIDase活性在接种后1 d和3 d没有显著变化,但在接种后5 d,活性均降低30%左右,显著低于对照。研究表明,山定子在褐斑病菌侵染过程中并没有DNA ladder产生,但却伴随着类caspase活性的下降。

应激诱导的Caspase-3和Livin在早孕胎盘组织表达的研究

【目的】研究在应激诱导下早孕胎盘组织中caspase3和Livin的表达,探讨Livin的凋亡调节作用。【方法】选取健康早孕而自愿终止妊娠妇女35例,随机分组,相应的应激原作用后行人工流产取绒毛组织,用半定量RTPCR分析绒毛组织中Caspase3mRNA和LivinmRNA的表达。【结果】不同强度的应激原诱导后早孕胎盘组织Caspase3mRNA的表达为(0.814±0.023)(10min组)、(0.842±0.045)(15min组),相比较于(0.190±0.021)(正常组)差异有显著性(P<0.05);LivinαmRNA的表达为(0.4155±0.012)(5min组)、(0.8903±0.079)(10min组)、(0.9113±0.070)(15min组),相比较于(0.2527±0.015)(正常组)差异有显著性(P<0.05);LivinβmRNA的表达与正常组比较差异无显著性(P>0.05)。【结论】在正常早孕胎盘组织中低表达Caspase3的同时相对高表达Livinβ和低表达Livinα,在外界应激原的诱导下Livinα的表达随Caspase3表达的增加而呈平行上升趋势,上调“凋亡阈值”,从而保证了生理和病理状况下早孕胎盘组织滋养层细胞的适度凋亡;因此Livin可能在早孕胎盘组织的凋亡调节中起着内源性安全阈值的作用。

兔骨关节炎软骨细胞中caspase-3表达及其细胞凋亡的研究

【目的】观察兔骨关节炎软骨细胞中caspase-3的表达,探讨其与软骨细胞凋亡的关系。【方法】Hulth法建造兔右膝骨关节炎动物模型。造模4周后,解剖其双侧膝关节,取出关节软骨观察软骨退变情况,观测软骨细胞caspase-3的表达,检测软骨细胞凋亡。【结果】骨关节炎组软骨细胞caspase-3的表达以及软骨细胞凋亡率均高于对照组(P<0.05)。【结论】骨关节炎软骨细胞中caspase-3的高表达,与软骨细胞凋亡密切相关。

caspase-3表达及其与卵巢上皮性肿瘤组织细胞凋亡和增殖的关系

目的 :探讨caspase 3与卵巢上皮性肿瘤发生、发展的关系。方法 :利用免疫组化(SP)法和TdT介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)技术 ,检测 112例卵巢上皮性肿瘤组织中caspase 3和PCNA的表达水平及细胞凋亡情况。结果 :caspase 3在卵巢恶性肿瘤中的表达 ( 4 4 4% ) ,明显低于良性肿瘤 ( 81 8% ,P<0 0 1) ;在低分化卵巢癌中的表达 ( 61 5 % ) ,明显高于高分化卵巢癌 ( 2 3 5 % ,P <0 0 5 ) ;在晚期卵巢癌中的表达 ( 5 7 9% ) ,明显高于早期卵巢癌 ( 2 4 0 % ,P <0 0 5 ) ;在有淋巴结转移癌中的表达 ( 5 6 4% ) ,明显高于无淋巴结转移癌中的表达 ( 3 3 3 % ,P <0 0 5 )。凋亡指数与增殖指数呈正相关 (r =0 467,P <0 0 1) ,与cas pase 3的表达呈正相关 (r =0 5 97,P <0 0 1)。结论 :caspase 3与卵巢上皮性肿瘤的细胞凋亡密切相关 ,参与细胞凋亡的调节机制 ,在卵巢上皮性肿瘤恶变的过程中发挥作用 ,并与恶性程度关系密切 ,有可能成为卵巢癌预后评估的参考。

外源性FasL基因诱导肺癌细胞Caspase-3的表达及凋亡

目的 :研究FasL基因转染肺癌细胞中Caspase 3的表达及与细胞凋亡的关系。方法 :RT PCR、流式细胞术和免疫组化检测Caspase 3在FasL基因转染的A 5 49/FasL细胞中的表达 ,流式细胞术、原位末端标记 (TUNEL)检测细胞凋亡。结果 :Caspase 3在A 5 49母系细胞中低水平表达 ,转基因后的A 5 49/FasL细胞的Caspase 3的表达和活性显著升高 ,P <0 0 1。同时肺癌细胞凋亡率升高( 4 4 0 8%vs 18 15 % ,P <0 0 1)。凋亡率与Caspase 3的活性呈明显正相关关系 ,r =0 64 7,P <0 0 1。肿瘤细胞中的凋亡与其Caspase 3 的表达有明显的关系。结论 :Caspase 3在肺癌发生中起重要作用 ,FasL基因转染的肺癌细胞的凋亡与其Caspase

凋亡相关蛋白Livin及Caspase-3在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义

【目的】探讨凋亡相关蛋白Livin及Caspase-3在膀胱移形细胞癌(BTCC)中的表达及其临床意义。【方法】应用SP免疫组织化学法检测55例膀胱移行细胞癌及10例正常膀胱黏膜组织石蜡切片中Livin和Caspase-3表达的情况,结合临床资料进行分析,并探讨两者相关性。【结果】Livin在膀胱移形细胞癌标本中的表达阳性率为76.4%(42/55),而正常对照组中无一例呈阳性表达;Caspase-3在膀胱移行细胞癌标本中的表达阳性率为32.7%(18/55),与对照组阳性率90%(9/10)相比差异有统计学意义(P<0.05)。Livin的表达与膀胱移行细胞癌的初发和复发显著相关(P<0.05),但与组织学分级、临床病理分期、转移与否、肿瘤数目无关;Caspase-3的表达与膀胱移行细胞癌的初发复发、组织学分级、临床病理分期、转移与否、肿瘤数目均无关。相关性分析表明,膀胱移行细胞癌中的Livin表达与Caspase-3表达呈负相关。【结论】Livin蛋白与膀胱癌的发生和复发有关,可作为BTCC早期诊断和评判术后高复发风险的一项重要指标,且Livin的高表达和Caspase-3蛋白的低表达在膀胱移行细胞癌的发生发展起着重要作用。

非霍奇金淋巴瘤组织Caspase-3和Ki-67的表达

目的 :研究Caspase 3蛋白在非霍奇金氏淋巴瘤 (non Hodgkin’slymphoma ,NHL)中的表达及与细胞增殖相关抗原Ki 67的关系。方法 :应用免疫组织化学Envi sionsystem法检测NHL患者组织标本Cas pase 3蛋白和Ki 67的表达。 结果 :Caspase 3蛋白在 5 4例NHL中的阳性率为 83 3 %( 4 5 /5 4)。Caspase 3表达与NHL恶性度相关 ,r =0 3 75 ,P <0 0 1;NHL低、中 -高度恶性表达率分别为 66 7% ( 14 /2 1)、93 9%( 3 1/3 3 ) ,2组之间差异有统计学意义 ,P <0 0 5。Ki 67表达与NHL恶性度具有相关性 ,r =0 3 3 4,P <0 0 5。结论 :Caspase 3介导的凋亡作用可能在NHL肿瘤发生和发展中有一定意义。Ki 67表达对NHL病理分级。

FasL和Caspase-3在胃癌中表达及相关免疫逃逸机制

目的 :研究Fas配体 (FasL)和Caspase 3表达在胃癌发生和演进中的作用。方法 :利用免疫组化方法检测FasL和Caspase 3在 113例胃癌旁上皮细胞、原发灶癌细胞和淋巴细胞以及转移灶癌细胞中的表达 ,比较原发灶癌细胞中两种蛋白表达与胃癌病理特征的关系 ,探讨原发灶癌细胞中FasL表达与原发灶癌细胞或浸润淋巴细胞中Caspase 3表达的关系。结果 :FasL在原发灶癌细胞中阳性表达率高于癌旁上皮细胞 ( 5 3 98%vs3 4 5 1% ) ,P <0 0 5 ,Caspase 3则有相反趋势 ( 3 2 74%vs 5 0 44 % ) ,P <0 0 5。70 80 %原发灶浸润淋巴细胞中Caspase 3呈阳性表达 ,显著高于原发灶癌细胞和癌旁上皮细胞中的阳性率 ,P <0 0 5。FasL在转移灶癌细胞中阳性表达率低于对应原发灶癌细胞 ( 5 1 16%vs 81 5 8% ) ,P<0 0 5 ,Caspase 3则有相反趋势 ( 5 8 14 %vs 3 4 2 1% ) ,P <0 0 5。原发灶癌细胞中FasL表达与胃癌肿块大小、浸润深度、转移、分化和lauren分型显著相关 ,P <0 0 5。原发灶癌细胞中FasL表达与其浸润淋巴细胞中Caspase 3表达呈正相关 ,P <0 0 5。结论 :FasL表达上调和Cas pase 3表达下调在胃癌发生中起到重要作用。FasL可能通过诱导浸润淋巴细胞凋亡而参与胃癌分化、浸润和转移 。

Bcl-2及Pan caspase-1蛋白在胃腺癌组织中的表达及临床意义

目的 :研究bcl 2及Pancaspase 1在胃腺癌组织中的表达 ,进一步探讨bcl 2及Pancaspase 1对胃腺癌细胞凋亡基因蛋白的影响 ,为临床正确判断肿瘤细胞的生物学行为及估计患者预后筛选可靠生物学指标。方法 :收集2 0 0 1年 1月～ 2 0 0 2年 2月酒泉钢铁公司医院胃腺癌手术标本蜡块 5 4例。其中低分化胃腺癌 3 2例 ,高分化 2 2例。采用SP免疫组化法 ,严格按照SP超敏试剂盒的说明操作 ,显微镜下观察Pancaspase 1和bcl 2在胞质 /胞核中的表达。并结合F ⅧRAg检测 ,测量MVD值。结果 :Pancaspase 1在低分化腺癌表达为2 1 9% ,高分化表达为 72 8% ,两者差异有统计学意义 ,P <0 0 1。Pancaspase 1表达阳性率在bcl 2阳性表达中低于bcl 2阴性中 ,P <0 0 5。肿瘤的MVD在bcl 2和Pancaspase 1的阳性表达中分别高于其阴性表达 (P =0 0 2 3 6和P =0 0 0 2 8)。而bcl 2的表达与胃腺癌分化程度无关。结论 :Pancaspase 1在癌细胞凋亡有作用 ,与癌组织分化程度有关。提示检测Pancaspase 1有助于确定癌细胞的分化程度 ,正确判断胃癌细胞的生物学行为及患者预后。

不同葡萄糖浓度对体外培养肝细胞内caspase-3表达的影响

[目的]探讨不同葡萄糖浓度下肝细胞的caspase-3表达及意义.[方法]将不同浓度的葡萄糖（5、15、25 mol/L）作用于正常成人肝细胞HL-7702 24 h和48 h后,采用流式细胞术检测肝细胞的凋亡情况,采用western blotting法检测肝细胞caspase-3及cleavage caspase-3的表达情况,采用Real-time PCR 检测Bax和Bcl-2蛋白的表达情况.[结果]肝细胞在葡萄糖处理后呈现剂量和时间依赖性的凋亡上调;肝细胞中caspase-3及cleavage caspase-3表达阳性指数也随着葡萄糖浓度和时间逐渐增加;Bax mRNA呈浓度和时间依赖性的增加,而Bcl-2 mRNA的表达水平呈葡萄糖浓度和时间依赖性的下降.[结论]高浓度葡萄糖可诱导干细胞出现凋亡,其作用机制可能通过下调Bcl-2/Bax比值以及caspase-3的剪切活化来实现.

Bcl-2 cleavages at two adjacent sites by different caspases promote cisplatin-induced apoptosis

bcl-2 proto-oncogene 编码的蛋白质在调停 themitochondria 的 apoptotic 小径起一个重要作用。尽管 Bcl-2 的一般角色是 anti-apoptotic，以前的工作证明 caspases 劈开的 Bcl-2 碎片能支持 apoptotic 过程。Wereport 此处，那 Bcl-2 蛋白质被劈开在表示 cisplatin 导致的 CHO 房间上在 humanhepatocarcinoma BEL-7404 房间或在 Bcl-2 生产约 23 kDa 的二碎片。Bcl-2.Mutagenesis 的导致的劈开分析的有堵住的一般 caspase 禁止者 z-VAD-fmk 的 Treatingcells 证明 Bcl-2 被 caspases 在环领域(YEWD (31 ) 减少 AGD (34 ) 减少 V ) 在二个邻近的识别地点劈开，它能被 caspase-8 和 -3inhibitors, 分别地禁止。23 kDa 碎片增加了的 carboxyl 终端的 Overexpression 到导致 cisplatin 的 apoptosis 的 CHO 房间的敏感。这些结果显示 Bcl-2 能被不同 caspases 在导致 cisplatin 的 apoptosis 期间劈开进二靠近的碎片，哪个贡献 apoptotic 的加速过程。

植物细胞程序性死亡研究进展

植物细胞死亡分为坏死和程序性死亡。细胞程序性死亡是具有信号或一系列分子参与,并且由细胞内在的死亡程序介导的有序过程。它在植物生长发育和抵御外界胁迫中具有重要作用。简要介绍了植物PCD的特征,对植物PCD中的信号分子和类caspase的作用等进行了综述,并对植物PCD存在的问题进行分析和展望,为深入研究植物PCD提供参考。

人脑挫裂伤后神经细胞凋亡及其与caspase-3基因表达的关系

目的观察人脑急性创伤性脑损伤后神经细胞凋亡及其与caspase-3基因表达的关系。方法术中采集12例重型颅脑损伤患者挫裂伤脑组织和脑叶切除组织标本15个,分别应用凋亡细胞原位末端标记法(TUNEL)、DNA琼脂糖凝胶电泳、透射电镜等检测神经细胞凋亡的变化,采用免疫组织化学技术检测caspase-3蛋白的表达,并借助caspase-3荧光分析试剂盒检测caspase-3蛋白酶活性的变化。结果12个挫裂伤脑组织标本中10个透射电镜发现有散在分布、数量不等的凋亡神经细胞；TUNEL染色11个出现阳性凋亡神经细胞；5个DNA出现凋亡特异性的“梯状”电泳带；9个出现caspase-3蛋白超表达；11个caspase-3蛋白酶活性明显增高；凋亡出现时间从伤后4h直到216h,高峰在23～72h。结论急性创伤性脑损伤患者存在神经细胞凋亡,并且具有时间和空问依赖性。Caspase-3的超表达与激活参与了人脑创伤性脑损伤后的细胞凋亡过程。

脑组织中神经酰胺、白细胞介素-1β、caspase-3在脑创伤后的改变和作用

目的 研究脑组织中白细胞介素 - 1β(IL - 1β)、神经酰胺、caspase - 3在创伤性脑损伤 (TBI)后的改变和相互作用。 方法 以大鼠自由落体脑损伤为模型 ,损伤前后各 30min加用不同处理因素后 2 4h ,用干湿法测量脑含水量 ,TUNEL染色检测神经细胞凋亡 ,ABC法检测caspase- 3活性片段P2 0的表达 ,DAG激酶 (diacylglycerolkinase ,DAGK)法检测神经酰胺的变化。 结果 TBI后双侧脑组织含水量、TUNEL染色阳性细胞、caspase- 3活性片段、IL - 1β及神经酰胺均较对照组显著增加。caspase - 3抑制剂使TBI后TUNEL染色阳性细胞明显下降 ,对脑组织水和神经酰胺含量没有影响。IL - 1β抗体使TBI后脑组织中神经酰胺含量显著下降 ,同时也使TBI后脑组织含水量、TUNEL染色阳性细胞、caspase - 3活性片段下降 ,但明显弱于神经酰胺的降解剂鞘氨醇激酶(SK)的作用。而SK对TBI后脑组织中IL - 1β的表达没有影响。 结论 TBI后脑组织中神经酰胺的大量合成在伤后的脑水肿和神经细胞凋亡中是一个主要信号途径。IL - 1β是神经酰胺合成的刺激因素之一 ;

大鼠坐骨神经损伤后脊髓组织中Caspase3、Bcl-xl表达变化的实验研究

目的 探讨大鼠坐骨神经损伤后脊髓组织中Caspase 3、Bcl-xl的表达变化以及与脊髓神经细胞凋亡的关系 ,为进一步研究坐骨神经损伤后的神经再生提供依据。 方法 成年Wis tar大鼠 96只 ,随机分为对照组 (12只 )和实验组 (84只 ) ,实验组大鼠切除右侧长约 6mm的坐骨神经 ,分为伤后 3d和 1,2 ,3,4,5 ,6周组。采用Caspase 3、Bcl-xl免疫组化检测大鼠脊髓组织Caspase 3、Bcl-xl表达变化 ,测定Caspase 3的活性 ;采用流式细胞仪AnnexinⅤ /PI双标检测和原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记法 (TUNEL)检测脊髓细胞凋亡情况。结果 Caspase 3、Bcl-xl免疫组化阳性反应主要位于灰质神经元细胞 ,高表达区在前角。伤后 1周实验组伤侧脊髓组织中Caspase 3表达轻度升高 ,2～ 4周显著升高 ,5周后下降 ;伤后 1～ 3周脊髓Bcl-xl表达减弱 ,4周后明显升高 ,高水平持续到伤后 6周 ;伤后 2～ 4周大鼠伤侧脊髓有较多TUNEL阳性标记细胞 ;伤后 3d伤侧Caspase 3活性荧光值开始升高 ,1～ 3周明显升高 ,4周逐渐下降 ;流式细胞仪检测 ,伤后 1周伤侧脊髓凋亡细胞开始增加 ,2 ,3周为高峰 ,4周伤侧凋亡细胞逐渐减少。实验组未伤侧与对照组比较 ,各项检查差异无显著性意义。 结论 Caspase 3的活化是细?

内质网应激反应性凋亡途径研究进展

内质网应激(ERS)反应性凋亡途径是一种最近提出的新的凋亡途径,不同于经典的凋亡途径:死亡受体途径(外源性途径)和线粒体途径(内源性途径)。该途径作为一种新的凋亡途径,可为肿瘤凋亡诱导治疗和逆转肿瘤耐药提供新的方向。

CPP32在阿霉素诱导的胃癌耐药细胞的凋亡

目的探讨耐药细胞和药敏细胞中 caspase-3 mRNA、蛋白的表达以及他们相互之间的关系,试图阐明 caspase-3在诱导耐药细胞凋亡中的作用及意义.方法利用已有的胃癌耐药细胞系 SGC7901/08,通过 RT-PCR 研究 caspase-3的 mRNA 在细胞毒药物处理耐药细胞0h,24h 及药敏细胞0h,6h 时的表达,用 Western-blot 的方法讨论其蛋白在耐药细胞中0h,6h,24h,30h 的表达和药敏细胞中0h,6h,24h 的表达,DNA ladder 检测其特征性凋亡变化.MTT法检测细胞的存活率.结果耐药细胞在0h,24h 和药敏细胞在0h,6h 表达的caspase-3mRNA 无显著性差异,蛋白表达在耐药细胞中在6h 出现微量的表达,在30h 时出现更小片断;药敏细胞在6h 时出现小片断,在24h 出现完全裂解.细胞 DNA 分析表明耐药细胞在30h 出现典型的凋亡谱带;应用了 caspase-3抑制剂后细胞的凋亡延迟.药敏细胞在6h 出现典型的凋亡谱带,应用了抑制剂后也出现凋亡的延迟.结论提高耐药细胞的用药量仍然可以使耐药细胞出现凋亡,而且其凋亡的过程与耐药细胞相同,均有 caspase-3的激活,而抑制了 caspase-3的活性,凋亡的发生可被抑制或是延迟,其差别就在于耐药细胞需要较高的药物诱导浓度.耐药细胞与药敏细胞的凋亡机制从本质上并无显著的不同,其根本的差别可能在于凋亡发生前的诸多因素产生的差异.