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粉尘螨1组主要变应原(Der.f 1)含量测定体系比较
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作者 张影 鲁旭 +1 位作者 王斌 曾明 《中华临床免疫和变态反应杂志》 2019年第5期355-360,共6页
目的探索建立Der. f 1含量测定抗原、抗体国家标准品的可行性。方法首先对粉尘螨1组主要变应原(Der. f 1)含量测定用的3种不同企业抗原标准品(ST-H011、MS-14、EL-UAS)进行比较分析,筛选适用性好的抗原标准品;进一步对3种抗体系统(5-17/... 目的探索建立Der. f 1含量测定抗原、抗体国家标准品的可行性。方法首先对粉尘螨1组主要变应原(Der. f 1)含量测定用的3种不同企业抗原标准品(ST-H011、MS-14、EL-UAS)进行比较分析,筛选适用性好的抗原标准品;进一步对3种抗体系统(5-17/Der1-BD、14-1/12G2、6A8/4C1)进行比较,筛选最佳检测抗体系统;最后再进一步利用两种抗原标准品和3种抗体系统对不同企业粉尘螨变应原制品中的Der. f 1进行含量测定。结果 ST-H011和MS-14用于测定Der. f 1含量具有较好的通用性,EL-UAS用于Der. f 1含量测定结果与前两者差异较大;3种Der. f 1特异性抗体检测系统具有较好的通用性;利用上述两种Der. f 1抗原标准品和3种抗体系统测定各企业粉尘螨变应原制品中的Der. f 1含量时,结果均符合质量标准规定。结论两种Der. f 1抗原标准品及三种抗体系统测定粉尘螨变应原中Der. f 1含量,均具有较好的通用性和适用性,其中14-1/12G2抗体测定结果的一致性最好,可作为Der. f 1含量测定用抗体国家标准品的候选。 展开更多
关键词 粉尘 粉尘螨1组主要变应原 ELISA夹心法 抗原标准品 抗体标准品
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抗粉尘螨主要变应原Der fⅡ单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:4
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作者 刘晓宇 吉坤美 +2 位作者 李荔 邹菊 刘志刚 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1021-1023,1034,共4页
目的制备并鉴定鼠源抗粉尘螨主要变应原Der fⅡ单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb)。方法重组Der fⅡ蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,取小鼠免疫脾细胞与NS-1细胞融合。间接ELISA法筛选特异性分泌的杂交瘤细胞。用筛选获得的单克隆细胞株... 目的制备并鉴定鼠源抗粉尘螨主要变应原Der fⅡ单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb)。方法重组Der fⅡ蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,取小鼠免疫脾细胞与NS-1细胞融合。间接ELISA法筛选特异性分泌的杂交瘤细胞。用筛选获得的单克隆细胞株诱生小鼠腹水,蛋白G亲和层析法纯化腹水抗体。利用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western Blotting方法鉴定该单克隆抗体的特性和交叉性。结果获得5株IgG2a型鼠抗粉尘螨主要变应原Der fⅡ的单克隆抗体,效价良好。ELISA和Western Blotting分析表明该5株单抗均可识别重组Der fⅡ蛋白和天然粉尘螨提取物。结论成功制备了5株鼠抗粉尘螨主要变应原Der fⅡ的单克隆抗体,为建立粉尘螨主要变应原Der fⅡ的检测及纯化方法奠定了基础。 展开更多
关键词 DerfⅡ 粉尘 主要应原 单克隆抗体 特性鉴定
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粉尘螨变应原Derf1基因的原核表达及多克隆抗体的制备 被引量:11
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作者 石连 姜玉新 +1 位作者 王海宁 李朝品 《皖南医学院学报》 CAS 2012年第1期3-6,共4页
目的:原核表达、纯化粉尘螨主要变应原Der f1重组蛋白,并制备其多克隆抗体。方法:大量诱导表达含pET-28a(+)-Der f1质粒的BL21菌株,SDS-PAGE电泳并割胶纯化目的蛋白,以此为抗原免疫新西兰大白兔,收集血清进行效价检测并用Western blot... 目的:原核表达、纯化粉尘螨主要变应原Der f1重组蛋白,并制备其多克隆抗体。方法:大量诱导表达含pET-28a(+)-Der f1质粒的BL21菌株,SDS-PAGE电泳并割胶纯化目的蛋白,以此为抗原免疫新西兰大白兔,收集血清进行效价检测并用Western blot检测其特异性。结果:割胶回收可有效纯化Der f1重组蛋白,抗Der f1抗体效价为1∶32 000。结论:成功制备Der f1多克隆抗体,以期为尘螨过敏性疾病的诊断和免疫治疗提供参考。 展开更多
关键词 粉尘 应原 Derf1 多克隆抗体
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两种尘螨1类变应原嵌合基因的原核表达及生物活性鉴定 被引量:6
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作者 郭伟 姜玉新 李朝品 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期274-278,共5页
目的原核表达尘螨1类变应原(粉尘螨1类变应原仇叩和户尘螨1类变应原Derpl基因)的嵌合基因R8,并检测其生物活性。方法以含嵌合基因R8的pUCm-T重组质粒为模板,用Derel的特异性引物进行PCR扩增,产物经酶切后与载体pET28a(+)连接,... 目的原核表达尘螨1类变应原(粉尘螨1类变应原仇叩和户尘螨1类变应原Derpl基因)的嵌合基因R8,并检测其生物活性。方法以含嵌合基因R8的pUCm-T重组质粒为模板,用Derel的特异性引物进行PCR扩增,产物经酶切后与载体pET28a(+)连接,连接产物转入大肠埃希菌(E.coli)BL21感受态细胞,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后纯化,十二烷基磺酸钠.聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS.PAGE)检测;纯化后的蛋白用ELISA检测其与粉尘螨过敏患者血清(IgE)的结合能力,同时以重组rDerfl和rDerP1蛋白作为对照。为检验嵌合蛋白R8的免疫原性,将75只BALB/c小鼠随机均分为5组,分别为PBS组(阴性对照组)、rDerf1组、rDerP1组、R8组和哮喘组(阳性对照组)。除PBS组外,其余各组分别于第0、7和14天每鼠腹腔注射(0.1μg/μl)粉尘螨注射液100μ1,第21~27天每鼠每天雾化吸入0.5μg/ml粉尘螨注射液悬浊液,30min/d。rDerf1组、rDerP1组和R8组于第25~27天雾化前30min.分别腹腔注射100μg/ml的rDerf1、rDerP1和R8蛋白各200μl进行特异性免疫治疗,PBS组用等量PBS进行腹腔注射和雾化吸人。所有小鼠于第27天雾化吸入后24h气管切开,用1mlPBS进行肺泡灌洗,收集肺泡灌洗液(BALF),检测γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的水平。结果SDS-PAGE结果显示,R8表达产物的蛋白相对分子质量(Mr)约为35000。EUSA检测结果显示,嵌合蛋白R8与粉尘螨过敏患者血清IgE的结合力为(37.03±12.46)μg/ml,显著低于rDerf1[(80.44±15.50)μg/ml]和rDerP1[(90.79±10.38)μg/ml](P〈0.01)。动物实验结果显示,R8组IFN-γ水平[(343.43±38.79)pg/ml]与rDerfl组[(322.98±30.36)pg/m1]和rDerP1组[(314.97±33.89)pg/ml]的相比,差异均无统计学意义(P〉0.05);与PBS组[(393.93±50.68)pg/ml]和哮喘组[(208.44±46.11)pg/m1]相比,差异均有统计学意义(P〈0.01)。R8组IL4水平显著低于其他各组水平(P〈0.05或0.01)。结论表达了具有低变应原性和高免疫原性的尘螨1类变应原嵌合基因R8。 展开更多
关键词 粉尘 户尘 1应原 嵌合基因 原核表达 应原 免疫原性
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抗粉尘螨主要变应原Der f1单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:1
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作者 顾耀亮 李佳娜 +2 位作者 陈家杰 吉坤美 刘志刚 《热带医学杂志》 CAS 2009年第12期1370-1373,共4页
目的制备和鉴定鼠抗粉尘螨主要变应原Der f1的单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb)。方法利用重组Der f1蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。通过间接ELISA法筛选特异性分泌的杂交瘤细胞。用杂... 目的制备和鉴定鼠抗粉尘螨主要变应原Der f1的单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb)。方法利用重组Der f1蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。通过间接ELISA法筛选特异性分泌的杂交瘤细胞。用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用蛋白A亲和层析法进行抗体纯化。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western Blotting鉴定该单克隆抗体的特性和交叉性。结果获得6株可稳定分泌鼠抗粉尘螨主要变应原Der f1的单克隆抗体,其Ig亚型均为IgG1,且6株单抗均具有良好的效价。ELISA和Western-blotting分析表明,该6株单抗均能识别重组Der f1蛋白和天然的粉尘螨提取物。其中,除了484不识别屋尘螨提取物,其他均能识别。结论成功制备了6株鼠抗粉尘螨主要变应原Der f1的单克隆抗体,为建立粉尘螨主要变应原Der f1检测及纯化方法奠定了基础。 展开更多
关键词 Der F1 粉尘 主要应原 单克隆抗体 特性鉴定
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儿童支气管哮喘变应原检测与防治 被引量:2
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作者 刘萍 周雅燕 郑跃杰 《咸宁学院学报(医学版)》 2005年第2期102-104,共3页
目的检测深圳地区儿童支气管哮喘的变应原种类,为本地区儿童支气管哮喘的防治方案提供科学依据。方法应用阿罗格点刺液,对301例支气管哮喘患儿进行14种吸入性变应原及4种食物变应原测试。结果301例支气管哮喘患儿变应原测试总阳性率75. ... 目的检测深圳地区儿童支气管哮喘的变应原种类,为本地区儿童支气管哮喘的防治方案提供科学依据。方法应用阿罗格点刺液,对301例支气管哮喘患儿进行14种吸入性变应原及4种食物变应原测试。结果301例支气管哮喘患儿变应原测试总阳性率75. 08% (226例),以屋尘螨最高67. 11% (202例),其后依次为粉尘螨61. 13% (184例)、霉菌19. 27% (58例)、动物毛18. 60% ( 56例)、干草尘埃13. 29% ( 40例)、反枝苋11.96% (36例)、虾11. 63% (35例)、树Ⅰ9. 63% (29例)等。食物过敏56例,阳性率18. 60%。67. 44% (203例)患儿对2种及2种以上变应原过敏。屋尘螨的阳性率不同年龄组之间差异有显著性(P<0. 01)。结论深圳地区支气管哮喘患儿最常见变应原为屋尘螨、粉尘螨,食物过敏所占比例小。在治疗过程中可针对性地采取有效的避、忌、替、移等措施,测试结果对脱敏治疗亦具有重要的指导意义。 展开更多
关键词 儿童支气管哮喘 应原检测 应原测试 阿罗格点刺液 吸入性应原 哮喘患儿 深圳地区 食物过敏 不同年龄 阳性率 屋尘 科学依据 防治方案 治疗过程 指导意义 脱敏治疗 粉尘 显著性 针对性
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粉尘螨1类变应原T和B细胞表位t合基因的构建与表达 被引量:4
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作者 徐海丰 徐朋飞 +1 位作者 王克霞 李朝品 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2014年第4期420-424,共5页
目的:构建粉尘螨1类变应原(Derf1)的T和B细胞表位嵌合基因原核表达载体。方法将Derf1包含的5个T细胞表位(T1~T5)和6个B细胞表位(B1~B6),以B1-T1-B2-T2-B3-T3-B4-T4-B5-T5-B6和B1-B2-B3-B4-B5-B6-T1-T2-T3-T4-T5连接方式直接... 目的:构建粉尘螨1类变应原(Derf1)的T和B细胞表位嵌合基因原核表达载体。方法将Derf1包含的5个T细胞表位(T1~T5)和6个B细胞表位(B1~B6),以B1-T1-B2-T2-B3-T3-B4-T4-B5-T5-B6和B1-B2-B3-B4-B5-B6-T1-T2-T3-T4-T5连接方式直接合成表位嵌合基因,并分别命名为Derf1A和Derf1B。构建原核表达重组质粒pET-28a(+)-Derf1A和pET-28a(+)-Derf1B,双酶切及测序验证的阳性克隆转化到E.coliBL21(DE3)后诱导表达。SDS-PAGE分析表达产物后进行纯化,并进行Westernblotting鉴定。ELISA法检测嵌合蛋白对粉尘螨过敏患者血清IgE抗体的结合力。结果双酶切及测序结果表明,成功构建了原核表达重组质粒pET-28a(+)-Derf1A和pET-28a(+)-Derf1B;SDS-PAGE分析表明,Derf1A和Derf1B诱导并纯化成功,Westernblotting结果进一步证实纯化了Derf1A和Derf1B嵌合蛋白。与Derf1相比,Derf1A和Derf1B嵌合蛋白与粉尘螨过敏患者血清IgE抗体的结合能力显著降低(P均<0.05),但Derf1A和Derf1B间差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功表达了Derf1的T和B细胞表位嵌合蛋白,为粉尘螨过敏的特异性免疫治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 粉尘 粉尘1类应原 T细胞表位 B细胞表位 免疫印迹试验
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尘螨变应原基因ProDer f1突变体的制备与表达 被引量:1
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作者 湛孝东 郭伟 李朝品 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第9期810-814,共5页
目的制备粉尘螨1类变应原基因ProDer f 1的突变体并原核表达。方法 PCR扩增ProDer f 1基因,DNaseⅠ酶切后回收≤100bp的基因片段。回收的基因片段进行3轮无引物PCR,并以此为模板用ProDer f1基因的特异性引物进行PCR,切胶回收与ProDer f... 目的制备粉尘螨1类变应原基因ProDer f 1的突变体并原核表达。方法 PCR扩增ProDer f 1基因,DNaseⅠ酶切后回收≤100bp的基因片段。回收的基因片段进行3轮无引物PCR,并以此为模板用ProDer f1基因的特异性引物进行PCR,切胶回收与ProDer f1基因大小相当的片段,连接pUCm-T载体后测序。DNAMAN软件分析突变基因,筛选理想的突变体,连接pET-28a(+)载体后转入E.coli BL21感受态细胞进行原核表达,切胶回收表达产物并进行Western blot验证。结果得到ProDer f1基因的突变体C1并成功表达嵌合蛋白,SDS-PAGE电泳分析该蛋白分子质量单位为35ku,与预期值相符;Western blot显示该嵌合蛋白能与粉尘螨变应原致敏兔血清中特异性抗体结合。结论成功制备ProDer f1基因的突变体且能在原核表达系统中表达嵌合蛋白。 展开更多
关键词 粉尘1类应原基因 基因改 原核表达 哮喘
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Der f 1血清特异性IgE ELISA检测方法的建立
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作者 王运刚 周鹰 +2 位作者 马桂芳 杨李 崔玉宝 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2012年第6期436-439,共4页
目的利用粉尘螨变应原第1组分重组蛋白rDer f 1建立特异性IgE ELISA检测方法,并对哮喘患者血清进行检测。方法以rDer f 1为包被抗原,分别建立间接ELISA法和亲和素-生物素复合ELISA(ABC-ELISA)法,检测Der f 1特异性IgE阳性标准血清和39... 目的利用粉尘螨变应原第1组分重组蛋白rDer f 1建立特异性IgE ELISA检测方法,并对哮喘患者血清进行检测。方法以rDer f 1为包被抗原,分别建立间接ELISA法和亲和素-生物素复合ELISA(ABC-ELISA)法,检测Der f 1特异性IgE阳性标准血清和39例哮喘患者血清中的Der f 1特异性IgE,并分析检测结果。结果间接ELISA法和ABC-ELISA法检测Der f 1特异性IgE的最适抗原包被浓度和血清稀释倍数均为15μg/ml和1︰2,间接ELISA法辣根过氧化物酶(HRP)标记抗人IgE抗体适宜稀释倍数为1︰1 000,ABC-ELISA法生物素标记抗人IgE抗体和HRP标记亲和素的稀释倍数分别为1︰1 000和1︰2 000。用间接ELISA和ABC-ELISA检测IgE的灵敏度分别为0.68U/ml和0.73U/ml,检测患者血清中Der f 1特异性IgE的阳性率分别为92.3%和97.4%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论基于重组变应原rDer f 1的ELISA法检测粉尘螨特异性IgE具有较高的敏感度,可用于螨过敏性疾病的实验诊断。 展开更多
关键词 酶联免疫吸附试验 应原 粉尘应原第1 态反应性疾病
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