目的探索建立Der. f 1含量测定抗原、抗体国家标准品的可行性。方法首先对粉尘螨1组主要变应原(Der. f 1)含量测定用的3种不同企业抗原标准品(ST-H011、MS-14、EL-UAS)进行比较分析,筛选适用性好的抗原标准品;进一步对3种抗体系统(5-17/...目的探索建立Der. f 1含量测定抗原、抗体国家标准品的可行性。方法首先对粉尘螨1组主要变应原(Der. f 1)含量测定用的3种不同企业抗原标准品(ST-H011、MS-14、EL-UAS)进行比较分析,筛选适用性好的抗原标准品;进一步对3种抗体系统(5-17/Der1-BD、14-1/12G2、6A8/4C1)进行比较,筛选最佳检测抗体系统;最后再进一步利用两种抗原标准品和3种抗体系统对不同企业粉尘螨变应原制品中的Der. f 1进行含量测定。结果 ST-H011和MS-14用于测定Der. f 1含量具有较好的通用性,EL-UAS用于Der. f 1含量测定结果与前两者差异较大;3种Der. f 1特异性抗体检测系统具有较好的通用性;利用上述两种Der. f 1抗原标准品和3种抗体系统测定各企业粉尘螨变应原制品中的Der. f 1含量时,结果均符合质量标准规定。结论两种Der. f 1抗原标准品及三种抗体系统测定粉尘螨变应原中Der. f 1含量,均具有较好的通用性和适用性,其中14-1/12G2抗体测定结果的一致性最好,可作为Der. f 1含量测定用抗体国家标准品的候选。展开更多
目的制备粉尘螨1类变应原基因ProDer f 1的突变体并原核表达。方法 PCR扩增ProDer f 1基因,DNaseⅠ酶切后回收≤100bp的基因片段。回收的基因片段进行3轮无引物PCR,并以此为模板用ProDer f1基因的特异性引物进行PCR,切胶回收与ProDer f...目的制备粉尘螨1类变应原基因ProDer f 1的突变体并原核表达。方法 PCR扩增ProDer f 1基因,DNaseⅠ酶切后回收≤100bp的基因片段。回收的基因片段进行3轮无引物PCR,并以此为模板用ProDer f1基因的特异性引物进行PCR,切胶回收与ProDer f1基因大小相当的片段,连接pUCm-T载体后测序。DNAMAN软件分析突变基因,筛选理想的突变体,连接pET-28a(+)载体后转入E.coli BL21感受态细胞进行原核表达,切胶回收表达产物并进行Western blot验证。结果得到ProDer f1基因的突变体C1并成功表达嵌合蛋白,SDS-PAGE电泳分析该蛋白分子质量单位为35ku,与预期值相符;Western blot显示该嵌合蛋白能与粉尘螨变应原致敏兔血清中特异性抗体结合。结论成功制备ProDer f1基因的突变体且能在原核表达系统中表达嵌合蛋白。展开更多
目的利用粉尘螨变应原第1组分重组蛋白rDer f 1建立特异性IgE ELISA检测方法,并对哮喘患者血清进行检测。方法以rDer f 1为包被抗原,分别建立间接ELISA法和亲和素-生物素复合ELISA(ABC-ELISA)法,检测Der f 1特异性IgE阳性标准血清和39...目的利用粉尘螨变应原第1组分重组蛋白rDer f 1建立特异性IgE ELISA检测方法,并对哮喘患者血清进行检测。方法以rDer f 1为包被抗原,分别建立间接ELISA法和亲和素-生物素复合ELISA(ABC-ELISA)法,检测Der f 1特异性IgE阳性标准血清和39例哮喘患者血清中的Der f 1特异性IgE,并分析检测结果。结果间接ELISA法和ABC-ELISA法检测Der f 1特异性IgE的最适抗原包被浓度和血清稀释倍数均为15μg/ml和1︰2,间接ELISA法辣根过氧化物酶(HRP)标记抗人IgE抗体适宜稀释倍数为1︰1 000,ABC-ELISA法生物素标记抗人IgE抗体和HRP标记亲和素的稀释倍数分别为1︰1 000和1︰2 000。用间接ELISA和ABC-ELISA检测IgE的灵敏度分别为0.68U/ml和0.73U/ml,检测患者血清中Der f 1特异性IgE的阳性率分别为92.3%和97.4%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论基于重组变应原rDer f 1的ELISA法检测粉尘螨特异性IgE具有较高的敏感度,可用于螨过敏性疾病的实验诊断。展开更多
文摘目的探索建立Der. f 1含量测定抗原、抗体国家标准品的可行性。方法首先对粉尘螨1组主要变应原(Der. f 1)含量测定用的3种不同企业抗原标准品(ST-H011、MS-14、EL-UAS)进行比较分析,筛选适用性好的抗原标准品;进一步对3种抗体系统(5-17/Der1-BD、14-1/12G2、6A8/4C1)进行比较,筛选最佳检测抗体系统;最后再进一步利用两种抗原标准品和3种抗体系统对不同企业粉尘螨变应原制品中的Der. f 1进行含量测定。结果 ST-H011和MS-14用于测定Der. f 1含量具有较好的通用性,EL-UAS用于Der. f 1含量测定结果与前两者差异较大;3种Der. f 1特异性抗体检测系统具有较好的通用性;利用上述两种Der. f 1抗原标准品和3种抗体系统测定各企业粉尘螨变应原制品中的Der. f 1含量时,结果均符合质量标准规定。结论两种Der. f 1抗原标准品及三种抗体系统测定粉尘螨变应原中Der. f 1含量,均具有较好的通用性和适用性,其中14-1/12G2抗体测定结果的一致性最好,可作为Der. f 1含量测定用抗体国家标准品的候选。
文摘目的利用粉尘螨变应原第1组分重组蛋白rDer f 1建立特异性IgE ELISA检测方法,并对哮喘患者血清进行检测。方法以rDer f 1为包被抗原,分别建立间接ELISA法和亲和素-生物素复合ELISA(ABC-ELISA)法,检测Der f 1特异性IgE阳性标准血清和39例哮喘患者血清中的Der f 1特异性IgE,并分析检测结果。结果间接ELISA法和ABC-ELISA法检测Der f 1特异性IgE的最适抗原包被浓度和血清稀释倍数均为15μg/ml和1︰2,间接ELISA法辣根过氧化物酶(HRP)标记抗人IgE抗体适宜稀释倍数为1︰1 000,ABC-ELISA法生物素标记抗人IgE抗体和HRP标记亲和素的稀释倍数分别为1︰1 000和1︰2 000。用间接ELISA和ABC-ELISA检测IgE的灵敏度分别为0.68U/ml和0.73U/ml,检测患者血清中Der f 1特异性IgE的阳性率分别为92.3%和97.4%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论基于重组变应原rDer f 1的ELISA法检测粉尘螨特异性IgE具有较高的敏感度,可用于螨过敏性疾病的实验诊断。