深低温冷冻对脐带血干祖细胞影响的研究

目的探讨深低温冷冻对脐带血中干祖细胞产生的影响。方法取30份脐带血标本,经过羟乙基淀粉离心沉淀,去除成熟红细胞及血浆,收集有核细胞悬液,然后采用标准的程控降温冷冻方法:以(1~2)℃/min的降温速率进行程控降温,降到-80℃后放入-196℃液氮内保存,对有核细胞悬液进行冷冻保存。对冷冻前后的细胞悬液进行有核细胞总数(TNC)、CD34^+细胞、CD41^+细胞回收率检测,分析细胞活率及各系祖细胞集落形成单位表达情况。结果经过对脐带血标本一系列处理及深低温冷冻、融化后,脐带血中TNC回收率为92.57%,CD34^+细胞回收率为86.53%。冷冻前后各系祖细胞集落形成单位比较,巨核系祖细胞集落形成单位(CFU-Meg)的回收率(46.50%)要明显低于粒单系祖细胞集落形成单位(CFU-GM)的回收率(76.58%)(t=18.87,P <0.001)。对脐带血免疫表型检测,冷冻前脐带血有核细胞中CD34^+、CD41^+分别为(0.31±0.11)%、(0.05±0.01)%,冷冻后有所下降[(0.28±0.10)%、(0.03±0.01)%];CD34^+、CD41^+冷冻后的回收率分别为86.88%、62.12%;差异有统计学意义(t=7.01,P <0.05)。结论在目前的分离冷冻条件下,深低温冷冻对脐带血中各系祖细胞影响不同,巨核系祖细胞与粒单核系祖细胞相比,表现出对深低温冷冻更加敏感。