临床注射用α-干扰素和粒巨-集落刺激因子诱导慢性髓性白血病细胞向树突状细胞分化

目的：研究临床注射用α-干扰素（interferon-alpha，IFN-α）和粒巨-集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony-stimularing factor，GM-CSF）在诱导慢性髓性白血病（chronic myeloid leukemia，CML）细胞向树突状细胞（dendritic cells，DCs）分化过程中的影响，以建立临床应用稳定的培养体系。方法：取6例CML慢性期患者的骨髓单个核细胞（bone marrow mononuclear cells，BMMNCs），用含10％人AB血清的RPMI 1640同时加入不同细胞因子组合（A组：GM-CSF＋IL-4；B组：临床注射用IFN—α＋临床注射用GM—CSF）作为培养体系，培养7～9d后，在倒置显微镜下观察细胞形态，全自动血液分析仪分析CML-DCs数量，通过流式细胞仪检测其表面标志，采用异基因混合淋巴细胞反应（allogeneic mixed lymphocyte reaction，allo—MLR）分析检测DCs的免疫刺激功能。结果：经不同细胞因子组合分别培养诱导5d和7～9d后的细胞，其特征性表面标志（CD80、CD86、HLA-DR、CD83、CD1a）表达率均高于培养前的细胞（P〈0．05）；在培养的第5天，B组细胞表面标记CD83的表达率高于A组（PG0．05）；但培养7～9d后两组表面标记的表达率无明显差异，CML-DCs计数值也无统计学意义。allo-MLR在DC细胞与反应细胞之比为1：10时B组刺激指数高于A组（P〈0．05）。结论：CML患者的BMMNCs在体外经临床注射试剂组合培养后可以分化为具有典型形态、免疫表型和一定功能的DCs，这一结果为培养更适合回输人体的“临床型”DCs提供了新的培养体系。

双黄升白冲剂与粒-巨噬细胞集落刺激因子治疗肺癌化疗骨髓抑制44例临床研究

目的:观察中药双黄升白冲剂对非小细胞肺癌患者化疗所致骨髓抑制、白细胞减少的疗效.方法:选择化疗复治为主的中医辨证为气阴两虚的非小细胞肺癌患者44例,按自身交叉对照随机分为AB、BA两组,每例连续化疗两个周期.A为治疗周期,化疗后白细胞(WBC)≤2.5×109/L起口服双黄升白冲剂;B为对照周期,化疗后WBC≤2.5×109/L起用粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)皮下注射.动态检测WBC、嗜中性粒细胞计数(ANC),并观察临床症状变化.结果:升高WBC有效率A、B两周期分别为77.27%、79.55%,两周期差异无显著性(P＞0.05);WBC与ANC减少持续时间A周期长于B周期;临床症状改善率A周期优于B周期.结论:中药双黄升白冲剂对肺癌化疗所致骨髓抑制具有明显的升高白细胞、改善临床症状的作用.

烟曲霉菌提取物对人支气管上皮细胞粒-巨噬细胞集落刺激因子表达的影响

目的:探讨烟曲霉菌对呼吸道上皮细胞的粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)表达的影响及其可能机制。方法:分别应用不同浓度(0、8、16、20 mg/L)的烟曲霉菌提取物(Aspergillus fumigatus extract,AFE)作用体外培养人支气管上皮细胞16HBE-14o不同的时间(12、24、48、72 h)。同时还应用热处理的AFE(heat-treated AFE,HT-AFE)、丝氨酸蛋白酶抑制剂(抑肽酶)、蛋白激酶激活受体-2(PAR-2)激动剂(SLIGLV-NH2)和PAR-2阻断剂(FSLLRY-NH2)作用16HBE-14o细胞。应用ELISA法检测细胞上清液GM-CSF含量,同时应用RT-PCR法检测GM-CSF mRNA的表达。结果:正常培养条件下的对照组细胞仅表达分泌少量GM-CSF,而给予不同浓度的AFE作用后,细胞合成和分泌GM-CSF的量较对照组明显增加(P<0.05),并呈明显的时间和浓度依赖性。PAR-2激动剂同样可以促进细胞合成分泌GM-CSF。丝氨酸蛋白酶抑制剂和PAR-2阻断剂几乎完全抑制AFE的上述作用。HT-AFE的蛋白酶活性完全灭活,不能促进细胞GM-CSF表达增加。结论:AFE依赖其蛋白酶活性激活PAR-2受体,促进呼吸道上皮细胞GM-CSF合成和分泌,从而促进哮喘的发生和发展。

撤除粒-巨噬细胞集落刺激因子对TF-1细胞生长的影响

采用MTT实验测定撤除细胞因子后TF 1细胞的增殖活性 ,经流式细胞仪、透射电镜观察撤除细胞因子对TF 1细胞凋亡的作用及其形态学变化。采用荧光微孔板读数仪测定凋亡过程中Caspase 3活性的改变。结果发现 ,撤除细胞因子后 4 8h ,细胞存活率为正常培养时的 4 8 8% ;电镜显示TF 1细胞出现了凋亡典型的变化。细胞凋亡率在撤除因子后 2 4h、4 8h时分别为 2 1 2 3%和 71 36 % ,TF 1细胞被阻滞在G0 G1 期。细胞内Caspase 3活性在撤除因子后 12h、36h时明显升高 ,荧光度分别为 6 32 1和 1782 3。结果表明 ,撤除因子后可导致TF 1细胞凋亡 ,Caspase 3活化参与了此凋亡过程。另外通过MTT实验观察到一种新型造血刺激因子粒 -巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF) 白细胞介素 3(IL 3)融合蛋白可维持TF

重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子治疗放射性食管炎的疗效

目的探讨重组人粒一巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）对放射性食管炎的疗效。方法对31例出现3级放射性食管炎的患者口服5ml注射用水＋300μgrhGM-CSF＋75％甘油20ml的混合液分4次，每间隔1小时用药1次，连用5d。结果31例中，放射性食管炎自3级退回至0～1级者13例（41．94％），退至2级者15例（48．39％），继续维持在3级者3例（9．68％），总有效率为90．32％。结论rhGM-CSF对放射性食管炎具有明显的治疗作用。

粒-巨噬细胞集落刺激因子在流产患者血清中的浓度及在子宫蜕膜组织中的表达研究

目的测定粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)在流产患者血清中的浓度及在子宫蜕膜组织中的表达量,探讨其意义并分析可能的影响因素。方法前瞻性留取2012年5月至2014年10月间就诊的先兆流产、难免流产患者与同期正常妊娠妇女外周血及子宫蜕膜组织,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别测定先兆流产(58例)、难免流产(40例)、正常妊娠妇女(50例)血清GM-CSF浓度,并采用实时PCR技术分别检测难免流产(16例)、正常妊娠者(23例)子宫蜕膜组织中GM-CSF mRNA的表达量。运用统计学方法比较各组间GM-CSF水平差异,分析血清GMCSF浓度与蜕膜GM-CSF mRNA的表达量的相关性,并探讨GM-CSF水平与患者年龄、孕龄、血清β人绒毛膜促性腺激素(β-h CG)水平及孕酮水平的关系。结果先兆流产组与正常妊娠组血清GM-CSF浓度分别为(497.8±25.4)pg/ml、(543.1±29.3)pg/ml,均显著高于难免流产组血清GM-CSF水平(186.7±16.8)pg/ml(P<0.05)。难免流产组子宫蜕膜组织中GM-CSF mRNA的表达相对值(1.952±0.166)显著低于正常妊娠组(3.203±0.257)(P<0.05)。难免流产组和正常妊娠组的血清与蜕膜组织中GM-CSF水平均呈高度正相关(r=0.921、0.854,P<0.05)。三组患者的血清GM-CSF水平均与其年龄因素无关,而与孕龄呈中度正相关(r=0.723、0.573、0.509,P<0.05),与血清β-h CG水平(r=0.417、0.381、0.453,P<0.05)及孕酮水平(r=0.359、0.302、0.467,P<0.05)低度正相关。结论(1)难免流产患者血清GM-CSF水平显著低于正常妊娠妇女,提示GM-CSF在妊娠维持中可能起保护作用,GM-CSF水平降低至一定水平将导致流产发生。(2)GM-CSF在先兆流产和难免流产患者体内水平有显著性差异,提示测定流产患者体内GM-CSF水平对于判断预后具有一定意义。(3)妊娠时的血清和蜕膜组织中的GM-CSF水平具有高度相关性,反映了血清GM-CSF主要来源于蜕膜组织。(4)GM-CSF在妊娠维持中的作用可能与h CG和孕酮作用有关。

粒-巨噬细胞集落刺激因子对小鼠体内树突状细胞增殖和活化的影响

目的:研究粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)在体内对树突状细胞(DC)增殖和活化的影响。方法:将Balb/c小鼠随机分为GM-CSF处理组和对照组,致死量γ射线照射后移植入绿色荧光蛋白(GFP)标记的骨髓来源的造血干细胞(HSC),GM-CSF处理组隔天皮下注射0.1μg直至处死,对照组隔天皮下注射PBS。应用流式细胞仪分析和比较两组移植后1,2,3及4周小鼠脾脏内DC的数目、活化状态和随时间变化的DC动力学。结果:移植后各时间点GM-CSF处理组小鼠脾脏内DC数目明显高于对照组(均P<0.05),其中最大高出倍数为5倍;GM-CSF处理组DC的CD40,CD80和CD86均高于处理组;骨髓移植后第1周,小鼠脾脏内即出现HSC来源的DC,第2周数目开始上升,至第3周达到高峰,第4周开始下降。结论:GM-CSF对体内HSC分化为DC具有促进作用,并且可促进体内DC的成熟与活化。

粒细胞集落刺激因子/粒-巨噬细胞集落刺激因子联合动员异基因造血干细胞移植

背景:目前FDA已批准应用于临床外周血造血干细胞移植的动员剂只有粒细胞集落刺激因子和粒-巨噬细胞集落刺激因子,其中粒细胞集落刺激因子单药应用是目前最主要的动员方案,但可引起供者骨骼肌肉酸痛、发热等不良反应。目的:回顾性分析以粒细胞集落刺激因子/粒-巨噬细胞集落刺激因子联合应用为动员方案的异基因造血干细胞移植临床效果。方法:选择2004-01/2009-10河南省人民医院血液科以粒细胞集落刺激因子与粒-巨噬细胞集落刺激因子联合应用为动员方案进行血缘全相合异基因造血干细胞移植51例,分析移植物成分、造血重建及移植物抗宿主病的发生率。结果与结论:动员96h后CD34+细胞占单个核细胞的比例为(0.97±0.13)%,CD34+CD38-细胞占CD34+细胞的比例为(37.49±4.03)%;移植后的快速造血重建与CD34+细胞、CD34+CD38-细胞输入量呈负相关。Ⅰ度、Ⅱ～Ⅳ度急性移植物抗宿主病的发生率分别为25.5%,15.7%;局限性、广泛性慢性移植物抗宿主病的发生率分别为39.2%,21.2%。提示在血缘全相合异基因造血干细胞移植中,粒细胞集落刺激因子/粒-巨噬细胞集落刺激因子联合可有效实现干细胞动员,所获CD34+细胞完全可以满足快速造血重建的需要;输入较多的CD34+细胞、CD34+CD38-细胞可能利于快速造血重建。

重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子治疗放射性口腔黏膜炎疗效分析

目的观察重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)局部应用对放射性口腔黏膜炎的疗效。方法56例头颈肿瘤患者随机分为两组,治疗组32例,使用rhGM-CSF漱口液含漱(rhGM-CSF100μg冻干粉末用1ml蒸馏水溶解后加入200ml生理盐水中),5次/d;对照组24例,常规处理。根据RTOG急性放射性黏膜炎的分级标准进行临床评价。结果治疗组Ⅲ、Ⅳ度急性放射性口腔黏膜损伤发生率18.8%(6/32),明显低于对照组(75.0%,18/24;P=0.0001)。rhGM-CSF治疗放射性口腔黏膜损伤的有效率较对照组显著提高(87.5%对45.8%,P=0.0019),口腔黏膜溃疡平均愈合时间5d。结论rhGM-CSF局部应用,对放射性口腔黏膜损伤有很好的治疗作用,可刺激表皮生长因子活性,促进溃疡早日愈合。

DISA显像对急性心肌梗死患者粒-巨噬细胞集落刺激因子治疗后的疗效评价

目的使用DISA心肌存活显像的方法,对粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)动员外周血干细胞辅助治疗急性心肌梗死患者的安全性及近期临床疗效进行评价。方法选取我院心内科收住的急性心肌梗死患者20例(均为男性),随机分为用药组(10例)和对照组(10例)。显像前,于静息状态下静脉注射99mTc-MIBI 925 MBq,调整血糖水平至7.8～8.8 mmol/L,1 h后静脉注射18F-FDG296 MBq,45～60 min后进行显像。采用Millinium VG+Hawkeye双探头hPET/CT仪,分别使用两个能窗[(140±20)kev;(511±30)kev]对99mTc-MIBI和18F-FDG同时采集(步进式采集,1帧/3,共采集60帧)。常规断层重建,同时获得99mTc-MIBI和18F-FDG图像。采用心肌20分区评分法判断心肌存活情况;对比灌注、代谢缺损面积。结果20例患者共检出心肌存活8例,检出率为40%,其中对照组2例、用药组6例(P<0.05)。用药组99mTc-MIBI靶心图缺损面积为40.00±13.36,18F-FDG图像缺损面积为33.33±9.30,后者较前者明显减小,提示存活心肌增加;对照组99mTc-MIBI靶心图缺损面积为38.40±13.54,18F-FDG图像缺损面积为37.45±14.84,后者与前者比较无明显变化,提示存活心肌未见增加。结论一日法DISA心肌灌注/代谢显像,能全面评价冠心病患者的心肌灌注及存活状况,可作为评价急性心肌梗死患者GM-CSF治疗后疗效的重要手段之一。

粒-巨噬细胞集落刺激因子在乙型肝炎肝损害中的作用

为探讨粒 -巨噬细胞集落刺激因子 (GM- CSF)在乙型肝炎肝损害过程中的意义及其与肿瘤坏死因子 (TNF-α)和内毒素之间可能存在的关系 ,应用酶联免疫吸附试验 (EL ISA)同期检测了 73例乙型肝炎患者及 12例健康献血员 GM- CSF和 TNF水平 ,并用改良的鲎变形裂解产物 -鲎试剂与合成基质的偶氮显色法 (L AL)测定其血清内毒素水平。实验结果显示 :在不同类型的乙型肝炎患者中 ,与对照组相比 ,肝硬化、重症肝炎与慢性肝炎中重度组的血清 GM-CSF水平升高 (P<0 .0 5 ) ,而慢性肝炎轻度组 ,血清 GM- CSF水平与对照组相比无显著差异 (P>0 .0 5 )。在重症肝炎组中 ,血清 GM- CSF水平与 TNF- α水平和内毒素水平均呈显著正相关 (r=0 .4 36 9,0 .5 70 5 ) ,而与血清白蛋白水平呈负相关 (r=- 0 .4 0 72 ,P<0 .0 5 ) ;在慢性肝炎中重度组中 ,血清 GM- CSF与丙氨酸转氨酶水平呈正相关 (r=0 .6 0 6 0 ,P<0 .0 5 ) ;在肝硬化组中 ,GM- CSF与血清白蛋白水平呈负相关 (r=- 0 .5 137,P<0 .0 5 )。提示 :1GM- CSF在慢性乙型肝炎肝损害中可能起到免疫激活作用 ,通过激活免疫反应特别是细胞免疫反应 ,间接造成肝细胞的损害 ;2 GM-CSF与重症乙型肝炎发病关系密切 ,其机制可能与内毒素血症有关 ;3GM- CSF可能在乙型肝炎肝硬化的发生?

粒-巨噬细胞集落刺激因子对大鼠降钙素水平的影响

目的探讨粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对大鼠降钙素水平的影响。方法给动物腹腔注射不同剂量的GM-CSF,然后用RIA试剂盒检测血中降钙素水平,同时测血中钙、磷及碱性磷酸酶。结果血清钙水平各实验组均比对照组降低,但仅大剂量组与对照组间差异有统计学意义(P<0.05);雌性大鼠血清降钙素水平各实验组均比对照组明显降低(P<0.05);实验组的血清磷均比对照组升高,但无统计学意义(P>0.05);血清碱性磷酸酶未见有显著的组间差异。结论50μg/kg的GM-CSF可以引起SD大鼠血清钙下降;10μg/kg和50μg/kg的GM-CSF均可以引起雌性大鼠的血清降钙素降低,但对血磷、血清碱性磷酸酶无显著影响。

基因重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子/白细胞介素-3融合蛋白在猕猴中的药代动力学

目的 研究重组人粒 /巨噬细胞集落刺激因子 白细胞介素 3融合蛋白 (PIXY32 1)在猕猴中的药动学。方法 12 5I 标记结合反相高效液相和酸沉淀法。结果 12 5I PIXY32 1纯度为 94 5 % ,标记前后PIXY32 1对TF 1细胞增殖的ED50 分别为 0 12 5和 0 119μg·L-1。12 5I PIXY32 1在体内迅速降解。iv和sc后末端T1/ 2 相近 ,为 6 6～ 8 2h。AUC随sc剂量增大 ,全身清除率ClS 相近 ,sc生物利用度6 3 %± 2 1%。泌尿系统浓度最高 ,胆汁其次 ,骨髓和脾脏高于其它组织略低于血清 ,脑内最低。主要经尿排泄 ,少部分在尿中以原型排出。结论 猕猴sc12 5I PIXY32 12 0～ 80 μg·kg-1后为线性药代动力学。肾脏在12 5I PIXY32

粒-巨噬细胞集落刺激因子联合白细胞介素-2活化的脐血造血细胞抗肿瘤作用的研究

为探讨粒 巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)联合白细胞介素 2 (IL 2 )活化的脐血造血细胞体外杀伤白血病细胞株HL 6 0细胞的作用 ,以及对脐血粒 -巨噬造血祖细胞 (CFU GM)生成活性的影响 ,采用MTT比色法测定经GM CSF和 (或 )IL 2激活的脐血造血细胞的抗肿瘤活性及半固体培养法检测活化脐血CFU GM生成活性。结果显示 ,IL 2或GM CSF +IL 2组均可活化脐血产生对体外培养的白血病细胞株HL 6 0细胞的杀伤作用 ,杀伤率分别为 ( 6 7 2± 1 5 1 % )和 ( 6 3 4± 2 3 9% ) ;GM CSF单独应用不能活化脐血产生对白血病细胞株HL 6 0细胞的杀伤作用 :GM CSF或GM CSF +IL 2均可扩增脐血CFU GM ,其产率分别为 ( 1 36 1± 4 2 9) / 1 0 5MNC和 ( 90 1±30 3) / 1 0 5MNC ;IL 2单独应用对CFU GM产率有减少的趋势。结果表明 ,IL 2或GM CSF +IL 2均能活化脐血产生明显的抗肿瘤活性 ;GM CSF或GM CSF +IL 2组使脐血CFU GM得到了明显的扩增 :脐血造血祖细胞治疗和免疫治疗相结合将是肿瘤高剂量化疗中一种有希望的治疗方法。

逆转录病毒介导转导的人粒-巨噬系集落刺激因子基因在哺乳动物细胞中的表达(英文)

利用多聚酶链反应(PCR)方法,从活化的人外周血单个核细胞中克隆了人粒-巨噬系集落刺激因子(GM-CSF)的cDNA。DNA序列测定证实此片段为完整的GM-CSF cDNA。应用DNA重组技术,将此cDNA重组于逆转录病毒载体pDORneo上,以Lipofectin介导转染病毒包装细胞PA317,用NIH3T3细胞测定病毒滴度。选取高滴度病毒上清感染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,经G418筛选获抗性克隆,PCR方法鉴定重组载体整合于CHO细胞的基因组DNA中。用CFU-GM集落形成实验检测GM-CSF活性,证实转染后的CHO细胞有GM-CSF的稳定、高效表达。

人类粒-巨噬集落刺激因子治疗对肿瘤患者化疗致中性粒细胞减少症的疗效

目的探讨对肿瘤化疗致中性粒细胞减少症患者实施人类粒-巨噬集落刺激因子药物治疗的临床效果.方法选取大庆龙南医院2016年2月至2019年1月收治的108例肿瘤化疗致中性粒细胞减少症患者,随机分为两组,每组54例.参照组行西医常规药物治疗,研究组实施人类粒-巨噬集落刺激因子药物治疗,比较两组治疗有效率、不良反应发生率以及治疗前后外周血白细胞数.结果研究组的治疗有效率高于参照组,不良反应发生率低于参照组(P<0.05).治疗前,两组外周血白细胞数比较,差异无统计学意义(P>0.05).治疗后2、4周时,研究组的外周血白细胞数均高于参照组(P<0.05).结论为肿瘤化疗致中性粒细胞减少症患者实施人类粒-巨噬集落刺激因子治疗,能显著提升患者的治疗有效性,降低患者并发症发生率,增加患者的外周血白细胞数.

粒-巨噬系集落刺激因子基因在大肠杆菌中的高效表达

粗-巨噬系集落刺激因子(GM-CSF)是一种重要的造血生长因子,主要是刺激粒细胞和巨噬细胞大量增殖。其临床疗效显著而且副作用小。本文先从正常人外周血细胞中提取总RNA,经逆转录——PCR扩增克隆了GM-CSF之cDNA。以DNA序列分析证实与文献一致。再设计合成一对引物定向改造编码成熟GM-CSF基因的5′端:换成大肠杆菌偏性密码,并避免起始点周围形成强二级结构,把终止密码子换成TAA。将改造后的基因克隆到载体pBV220中,转化受体菌HB101,经42℃诱导高效表达出GM-CSF。表达产物约占全菌蛋白的20％,初步纯化和复性后比活性】1×10~7U/mg。

巴西蘑菇多糖对小鼠脑组织表达粒-巨噬细胞集落刺激因子的影响

目的 :研究巴西蘑菇多糖 (ABPS)对小鼠脑组织表达粒 巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)的影响。方法 :应用组织培养技术、克隆形成法、逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)等方法检测小鼠脑组织在ABPS作用下表达GM CSF的变化。结果 :不同浓度的ABPS对小鼠脑组织表达GM CSF有明显的促进作用 ,浓度范围为 2～ 6mg·ml-1之间 ,最佳浓度为4mg·ml-1。经LightFramesoftware分析 ,小鼠GM CSF在 96 0bp处出现一高峰。结论 :ABPS有促进小鼠脑组织表达GM CSF的作用 。