多粒度粒球粗糙集模型

基于粒球计算的粗糙集理论作为知识发现和数据挖掘的重要工具之一,已成功地应用于标记预测、属性约简等。而现有的粒球粗糙集模型仅仅是从单粒度出发,无法从多粒度角度对数据进行分析和处理,实际生活中仍有很多应用场景需从多粒度角度进行思考。将粒球计算思想结合到多粒度粗糙集模型,提出了多粒度粒球粗糙集模型,并讨论了该模型的相关性质。该模型通过纯度的设定对数据进行粒球划分,能够有效地刻画数据之间的内在联系,以此设计多粒度粒球粗糙集的正域生成算法。实验分析表明该模型的可行性和有效性。

一种面向粒球粗糙集的快速约简求解方法

在粗糙集领域中,粒球的产生可以被视作是一个无监督的进程,其终止条件是无监督产生的粒球需达到根据标签信息所计算出来的纯度.当数据中存在大量不一致情形时,样本自身的标签信息有可能会为生成高纯度的粒球带来较大阻碍,基于粒球粗糙集的约简求解因受粒球生成这一因素的影响,也会耗时巨大.鉴于此,首先,将伪标签策略引入粒球的计算过程中,因为伪标签的生成也可以采用无监督的方式,所以可以较好地贴合粒球中样本的聚集,减少不一致情形,提高粒球的产生效率.其次,设计了前向贪心搜索算法,用于求解基于伪标签粒球粗糙集的约简.最后,在12组基准数据集上的实验结果验证了所提方法不仅能够有效地提升约简的求解效率,而且也能够保证约简中的属性具备相当的分类能力.

快速求解粒球粗糙集约简的属性划分方法

传统邻域粗糙集需指定半径或通过搜索方式找出适用于问题求解的半径,这在数据预处理过程中会带来极大的时间消耗。而粒球粗糙集方法则能够依据数据分布,自适应地生成合适的粒结构。以粒球的纯度为度量准则,粒球粗糙集方法亦为属性约简问题的研究引入新的思路。利用前向贪心搜索求解约简时,需尝试计算每一个候选属性被加入约简池后所引起的粒球纯度的变化,这为算法的执行效率带来了严峻挑战。为解决这一问题,在前向贪心搜索进程中提出了属性划分策略,其本质是将所有属性划分成不同的组,从而能够压缩候选属性的搜索空间,以达到快速求解约简的目的。使用了10组UCI数据集,最终的实验结果说明,相较于传统邻域粗糙集约简以及基于纯度的粒球粗糙集约简,引入属性划分策略后,能够极大地提升粒球粗糙集约简求解的时间效率。

东太平洋远洋粘土中玄武质玻璃粒球的成分和成因

东太平洋 DSDP 站位32的早中新世玄武质玻璃球粒成分各异,现已对早期地质工作者所研究的玄武质玻璃球粒作了新分析和解释。这些球粒是钛铁质玄武岩。高度演化的深海玄武岩和一些洋岛上的喷发岩在成分上与其相似。球粒多半是在多次独立喷发期中熔岩强烈喷涌时形成的。这些喷发事件导致了许多截然不同成分而有关联的岩浆。例如它们具有较高的 SiO_2和 FeO 含量。其年龄与哥伦比亚河某些高原玄武岩喷发年龄相重迭。但是,球粒在成分上与大多数后者的玄武岩不同。虽然球粒约为15百万年,但其蚀变极小。与深海铁质玄武岩相比氯和硫的低含量是跟地表喷发停息前的脱气有关,从而否定了球粒是由海底熔老喷涌产生的观点。因为仅熔岩喷涌难以说明甚至距最近的、可能的海山源区也有约100千米的距离。大型岩浆蒸气喷发柱包括初始火山爆发后旋即产生的熔岩喷涌必颁达到至少15千米。换言之,令人难以置信的是球粒由来之于先期海山的浊流沉积。

基于异类粒球分离度的自适应属性约简

属性约简是处理大规模数据集的关键步骤,与传统的邻域粗糙集(NRS)相比,粒球邻域粗糙集(GBNRS)可以显著提高属性约简的性能.然而,目前GBNRS属性约简算法生成了太多不必要的粒球;从而极大降低了算法运行效率.文章首先定义了一种新的粒球质量指标来控制生成自适应数量的粒球;然后通过粒球对样本集进行划分,将不同类别的样本点放入不同类别的粒球;最后根据不同属性集合下粒球中正域样本的数量来进行前向属性约简.为了验证算法的有效性,在12个真实数据集上将提出的算法与其他NRS属性约简算法进行了对比实验.实验结果表明,所提出的算法有更高的精度和更快的运行效率.

去氢骆驼蓬碱对细粒棘球蚴中EgTP53蛋白生物信息学表达的影响

目的基于生物信息学表达分析去氢骆驼蓬碱对细粒棘球蚴中EgTP53蛋白(Echinococcus granulosus of Tumor protein p53,EgTP53)的影响。方法将EgTP53蛋白与去氢骆驼蓬碱进行分子对接,从美国国家生物技术信息中心数据库(National Center for Biotechnology Information,NCBI)下载EgTP53的氨基酸序列,使用ProtParam蛋白分析工具进行EgTP53蛋白理化性质的预测,通过生信工具ProtScale进行疏水性的预测。使用SignalP5.0在线软件对信号肽进行预测,使用生物学在线软件工具TMHMM分析跨膜区域。借助NetPhos3.1在线软件预测磷酸化位点,利用SOMPA在线软件进行二级结构的预测。使用SWISS-MODEL在线软件对EgTP53的三级结构进行预测,采用IEDB在线软件进行B细胞抗原表位预测。使用MEGA6.0软件构建系统进化树并进行分析;采用实时荧光定量PCR技术检测去氢骆驼蓬碱作用后EgTP53蛋白的mRNA表达水平。结果分子对接结果显示,EgTP53与去氢骆驼蓬碱的对接能量为-4.44 kcal/mol,有良好的对接位点。生物信息学分析EgTP53氨基酸数量1108个,分子量121799.11,等电点9.29,属于亲水性蛋白,有一个信号肽,无跨膜区,有多个磷酸化位点,28个B细胞抗原表位。其中存在TUDOR蛋白结构域,存在2个BRCT保守蛋白结构域。EgTP53与亚洲带绦虫病、带状泡尾绦虫同属一个分支,与长膜带绦虫、矮小齿壳绦虫、微口膜壳绦虫同属绦虫纲,进化关系较近,与智人、家鼠、果蝇进化关系较远。实时荧光定量PCR结果显示去氢骆驼蓬碱干预组的EgTP53蛋白的mRNA表达较空白对照组明显上调。结论生物信息学分析表明EgTP53蛋白具有保守的功能结构域,对接点位稳定性良好,抗原表位多。

细粒棘球绦虫膜联蛋白B5、B15和B25的原核表达和分泌特性分析

旨在探讨细粒棘球绦虫膜联蛋白B5、B15和B25的反应原性及其在中间宿主组织中的分泌特性,为进一步研究细粒棘球绦虫膜联蛋白与中间宿主的相互作用奠定基础。作者提取细粒棘球蚴原头蚴的总RNA并反转录为cDNA,以cDNA为模板PCR扩增获得EgANXB5、EgANXB15和EgANXB25基因全长编码序列,使用同源重组法构建pET32a-EgANXB5、pET32a-EgANXB15和pET32a-EgANXB25质粒并进行重组蛋白的原核表达,应用蛋白免疫印迹对上述重组蛋白进行鉴定,并采用免疫荧光染色试验分析EgANXB5、EgANXB15和EgANXB25在中间宿主组织中的分泌特性。结果显示:本研究成功克隆并表达出重组EgANXB5、EgANXB15和EgANXB25,并更正了EgANXB25的CDS序列(GenBank:OR245515.1)。蛋白免疫印迹结果显示,这3种蛋白均能够被感染细粒棘球绦虫的犬阳性血清和感染细粒棘球蚴的小鼠阳性血清所识别。同时,免疫荧光染色结果显示,在细粒棘球蚴包囊附近的肝实质组织中可以检测到EgANXB5、EgANXB15和EgANXB25的阳性信号。EgANXB5、EgANXB15和EgANXB25具有良好的反应原性,同时它们具有分泌进入包囊周围肝实质组织中的潜能,可能进一步参与细粒棘球蚴与宿主的相互作用。

细粒棘球蚴感染早期对小鼠肝脏NKT细胞及其相关因子的影响

目的探讨细粒棘球蚴感染早期对小鼠肝脏自然杀伤T(Natural killer T,NKT)细胞及其相关因子的影响。方法将24只雌性C57BL/6小鼠随机分为对照组与感染组,每组12只。感染组经肝门静脉接种细粒棘球蚴原头蚴,对照组注射等量生理盐水,4周后,每组各取6只小鼠的肝脏组织进行Masson染色,另外6只小鼠的肝脏组织用于分离淋巴细胞以进行流式细胞术检测小鼠肝脏不同NKT细胞亚群比例和相关细胞因子干扰素-γ(Interforn-γ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(Tumour necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)、白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)和白细胞介素-17A(Interleukin-17A,IL-17A)的表达。结果与对照组纤维占比比较,感染组肝脏侵袭部位及其邻近肝脏组织呈现结缔组织病变,纤维化明显,纤维占比显著增加,且分布较广,包绕肉芽肿四周形成条索状纤维间隔。与对照组比较,感染组小鼠肝脏NKT细胞比例和CD4^(+)NKT细胞比例显著降低,差异均有统计学意义(P均<0.01);与对照组比较,感染组小鼠肝脏NKT细胞分泌TNF-α的比例、CD4^(+)NKT细胞分泌TNF-α的比例显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论细粒棘球蚴感染早期小鼠肝脏纤维化程度增加,肝脏NKT细胞及其亚群CD4^(+)NKT细胞产生TNF-α的水平增加,提示肝脏NKT细胞可能参与细粒棘球蚴感染早期肝脏免疫应答反应。

西藏中部地区散养牦牛和绵羊细粒棘球绦虫cox1和nad1的多态性

目的分析西藏中部地区散养牦牛和绵羊细粒棘球绦虫cox1、nad1的基因多态性。方法采集西藏中部地区45份散养牦牛和绵羊细粒棘球蚴包囊,提取包囊生发层DNA,根据细粒棘球蚴线粒体cox1、nad1基因序列设计扩增的引物序列,用PCR技术扩增线粒体cox1、nad1基因片段,将扩增产物做琼脂糖凝胶电泳并测序;利用MEGA11.0软件做cox1、nad1序列特征与同源性比对,并构建系统进化树;运用DnaSP 5.0软件计算序列单倍型数量(H),分析核苷酸多样性(Pi)、单倍体型多样性(Hd)特性;利用Network软件为cox1、nad1基因的所有单倍体构建单倍体网络图,判断西藏中部地区散养牦牛和绵羊的主要单倍型。结果(1)cox1、nad1序列长度分别为925、839bp。(2)在cox1序列中,A、T、G、C碱基的平均含量分别为32.6%、33.1%、17.4%、16.9%;而nad1序列中,A、T、G、C碱基的平均含量为19.5%、47.6%、25.5%、7.4%;同源性分析结果显示,cox1序列之间的同源性为99.6%~100.0%,nad1序列之间的同源性为98.1%~100.0%;西藏中部地区散养牦牛和绵羊细粒棘球绦虫基因型为G1、G3、G6。(3)cox1、nad1单倍型个数分别为19个、7个,Hd、Pi分别为0.89600、0.56000和0.36500、0.00060。(4)单倍型网络图显示,Hc-2、Hc-12、Hn-1为西藏中部地区散养牦牛和绵羊的主要单倍型。结论西藏中部地区散养牦牛和绵羊细粒棘球绦虫基因型为G1、G3、G6,G1是主要基因型。上述结论为探明西藏中部地区细粒棘球蚴的分型和病原体遗传演化的情况提供了参考依据。

细粒棘球绦虫DNA损伤修复聚合酶ζ生物信息学分析及初步验证

目的对细粒棘球绦虫DNA损伤修复聚合酶ζ(DNA damage repair polymeraseζof Echinococcus granulosus sensu lato,EgPolζ)进行生物信息学分析,并分析去氢骆驼蓬碱(Harmine,HM)及其衍生物H-2-168、H-2-104干预后对EgPolζ的影响。方法提取细粒棘球绦虫总RNA并逆转录合成cDNA,利用RT-PCR技术克隆EgPolζ,通过测序获得EgPolζ全长序列。采用生物信息学在线网站、在线数据库与分析软件等工具预测和分析EgPolζ相关生物学信息,构建系统进化树进行同源性比较,HM及其衍生物H-2-168和H-2-104与EgPolζ蛋白进行分子对接。Western Blot检测HM及其衍生物H-2-168和H-2-104干预细粒棘球绦虫后EgPolζ含量变化。结果经生物信息学预测分析EgPolζ为亲水性蛋白,缺乏信号肽位点,但具有一个跨膜区域;该蛋白具有多个酸磷酸化位点;其结构域包含DNA聚合酶δ催化亚单位、3'-5'核酸外切酶结构域超家族与DNA聚合酶B型家族催化域;EgPolζ二级结构中与抗原表位相关的β-折叠约占4.59%;分析EgPolζB细胞抗原表位且对其进行评估后得到8条预测表位;EgPolζ与多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis,Em)的Polζ序列相似性为93.56%,二者同属于绦虫纲,进化关系较近,与智人和家鼠等哺乳动物的进化关系较远。HM、H-2-168和H-2-104与EgPolζ蛋白结合能分别为-5.91、-5.71与-5.05 kcal/mol;Western Blot结果分析:与DMSO组相比,HM组与H-2-104组EgREV3蛋白含量均降低(P<0.05,P<0.01);H-2-168组中EgREV3蛋白含量无显著变化(P>0.05)。结论成功克隆了EgPolζ全长序列,分析预测EgPolζ对细粒棘球绦虫的DNA修复具有调控作用,且HM与H-2-104抑制EgPolζ蛋白表达,从而影响细粒棘球绦虫DNA损伤修复功能。

去氢骆驼蓬碱治疗细粒棘球蚴病的作用机制研究

目的 应用网络药理学方法预测去氢骆驼蓬碱(HM)治疗细粒棘球蚴病的作用机制。方法 从中药系统药理学数据库(TCMSP)、瑞士靶点预测数据库(SwissTargetPrediction)、药物银行数据库(Drugbank)获取HM相关基因,在基因卡数据库(GeneCards)、DISGENET数据库、DrugBank数据库获取细粒棘球蚴病的作用靶点,将HM的预测靶点和细粒棘球蚴病相关基因相互映射,得到HM作用细粒棘球蚴病的靶点基因,导入String数据库进行网络拓扑属性分析,筛选重要靶点蛋白,构建蛋白质-蛋白质互作(PPI)和成分-疾病-靶点网络。采用DAVID数据库进行基因本体论(GO)功能分析和Kyoto京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,筛选与DNA损伤相关的基因靶点。采用Autodock Vina软件及Pymol软件对相关靶点进行分子对接验证和展示。将活力不低于98%的细粒棘球蚴随机分为空白对照组、1%DMSO组、25μmol/L HM组、50μmol/L HM组、100μmol/L HM组,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRTPCR)法、免疫印迹(Western blot)法体外验证HM干预细粒棘球蚴肿瘤蛋白P53(TP53)、拓扑异构酶Ⅰ(TopoⅠ)、染色体组蛋白H2A的变异体(H2AX)、共济失调毛细血管扩张突变基因(ATM)mRNA和蛋白表达水平。结果 共获得HM靶点105个,细粒棘球蚴病相关基因88个,二者共有靶点为2个。HM干预细粒棘球蚴病的作用靶点主要有促分裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)、MAPK1、TP53、热休克蛋白90α家族A类成员1(HSPAA1)、MAPK14、Jun,机制可能涉及MAPK信号通路、受体酪氨酸激酶(ERBB)信号通路、DNA损伤与DNA修复通路、细胞凋亡等过程。体外验证结果显示,与空白对照组相比,25μmol/L HM组、50μmol/L HM组、100μmol/L HM组的TP53,TopoⅠmRNA和蛋白表达均呈下调趋势(P <0.05),H2AX,ATM mRNA和蛋白表达均呈上调趋势(P <0.05)。结论 HM可通过多种生物学过程和相关信号途径治疗细粒棘球蚴病,HM参与细粒棘球蚴病DNA损伤与DNA修复信号通路的调控作用,TP53,TopoⅠ,H2AX,ATM均可能是其作用靶点。该研究为进一步阐明HM治疗细粒棘球蚴病的分子机制奠定了基础。

上肢皮下及肌肉间细粒棘球蚴病一例

病人,女,66岁,汉族,农民,有饮用生水史及牛、羊、狗接触史。发现右上臂肿块4年余伴疼痛3个月于2022年3月31日入院。肿块最初仅黄豆大小,无压痛,局部皮肤无红肿破溃的可移动性包块,入院时增长至鸡蛋大小,有阵发性隐痛。体格检查:右侧肱骨近端皮下可扪及一5.4 cm×1.7 cm×2.1 cm的肿块,边界清,皮肤颜色及皮温正常,质软,有压痛,触诊有弹性,叩诊有震颤感的可移动包块。

TGF-β1和Collagen-Ⅲ在牦牛感染细粒棘球蚴肝纤维化中的表达

研究转化生长因子β1(TGF-β1)、Ⅲ型胶原(Collagen-Ⅲ)在牦牛感染细粒棘球蚴导致肝纤维化中的表达及其意义。收集西藏地区40例细粒棘球蚴感染的牦牛肝组织和血清样本,同时收集未感染的肝组织和血清进行对照。采用苏木素-伊红(HE)染色法和天狼猩红染色法观察牦牛肝脏病理变化和肝纤维化程度;酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫组化法(IHA)分别检测肝组织和血清中TGF-β1、Collagen-Ⅲ的表达水平及分布;RT-PCR检测肝细胞内TGF-β1和Collagen-Ⅲ基因mRNA的相对表达水平。HE染色和天狼猩红染色结果显示,与未感染细粒棘球蚴病牦牛肝组织相比,感染棘球蚴周围的肝组织肝界板细胞破坏,呈虫蚀状,感染肝组织外围纤维化,细粒棘球蚴寄生的牦牛肝脏组织引起组织增生,纤维化;ELISA结果显示感染细粒棘球蚴牦牛血清样中细胞因子TGF-β1、Collagen-Ⅲ的含量明显超过未感染组(P<0.05),且免疫组化的结果显示它们的表达主要存在于细胞基质中;RT-PCR显示细粒棘球蚴感染肝组织中TGF-β1、Collagen-Ⅲ的mRNA相对表达量超出未感染组(P<0.05)。结果表明,细粒棘球蚴感染期间TGF-β1、Collagen-Ⅲ在细粒棘球蚴感染引起的肝纤维化中起重要作用。

细粒棘球绦虫胞外囊复合物2蛋白的生物信息学分析

目的:利用生物信息学方法预测细粒棘球绦虫胞外囊复合物2(EXOC2)蛋白的生化特性、抗原表位及分子功能。方法:利用蛋白质在线分析网站以及在线数据库预测EXOC2蛋白的理化性质、三级结构、亲疏水性、B细胞优势抗原表位、T细胞优势表位、蛋白的互作网络关系、差异基因GO功能、KEGG通路富集分析、磷酸化位点和蛋白修饰位点。结果:优势B细胞表位位于100-115、539-540、851-866、896-911、988-992、704-749区段,HLA-DRB1*0401限制性Th表位位于821-823、920-930区段,HLA-DRB1*0701限制性Th表位位于270-275、920-922区段。结论:利用在线数据库及生物信息学方法预测EXOC2蛋白的生物功能、B细胞优势抗原表位及T细胞优势,可为棘球蚴病分子肽疫苗的研制提供一定的理论基础。

细粒棘球绦虫EgM123基因的原核表达与免疫原性检测

为了验证EgM123表达蛋白的免疫原性功能,建立犬细粒棘球绦虫EgM123基因的原核表达和蛋白纯化体系,为EgM123蛋白单克隆抗体制备与基因重组疫苗的研制提供研究基础。本试验通过构建EgM123基因原核蛋白表达载体及其蛋白表达条件优化、利用亲和层析方法对表达蛋白进行纯化、SDS-PAGE(聚丙烯酰氨凝胶电泳)和Western blotting(蛋白质印迹)试验对表达蛋白的分子量和免疫原性进行检测,并通过间接酶联免疫吸附(ELISA)方法对所表达的EgM123蛋白的抗原功能进行验证。本试验通过菌液聚合酶链式反应(PCR)扩增和双酶切验证成功构建EgM123基因原核蛋白表达载体;优化出最佳诱导条件为37℃、表达时间为7h下表达量最高;Western blotting显示其在28KDa处均有特异性条带;ELISA显示纯化后的蛋白能很好的与EgM123多克隆抗体结合。上述结果表明EgM123表达蛋白极具免疫原性,可用于免疫BALB/c小鼠制备EgM123单克隆抗体。

肝细粒棘球蚴病患者胆囊疾病发生的相关因素分析

明确青海地区肝细粒棘球蚴病患者胆囊相关疾病的特点及相关因素,为患者临床诊疗和愈后提供理论依据。方法 收集我院2019年1月~2021年6月肝细粒棘球蚴病住院患者的临床基本资料,明确患者细粒棘球蚴病和胆囊相关并发症的特征,行单因素分析和二元多因素Logistic回归分析影响因素。结果 共收集194例肝细粒球蚴病患者,194例肝肝细粒棘球蚴病患者术前有胆道系统临床症状的占35.05%(68/194),有胆囊相关并发症的占48.97% (95/194),其中慢性胆囊炎占18.04%(35/194)、胆囊结石占11.86%(23/194)。行手术者占76.29%(148/194),其中根治性手术治疗合并切除胆囊者占64.19%(95/148)。患者术后有并发症者占51.35%(76/148),其中营养性并发症18.92%(28/148)、肝功能不全17.57%(26/148)、残腔感染占12.16%(18/148)、胆汁瘘占7.50%(2/148)、术后胆管狭窄0.68%(1/148)、残腔钙化0.68%(1/148)。行二元多因素Logistic回归结果表明,肝脏左右叶位置、病灶分布、大小、数量等是肝囊性包虫病合并胆囊相关疾病并发症发生的影响因素。结论 本研究证实青海地区肝囊性包虫病患者中胆囊疾病相关并发症的发生率较高,对术前患者的评估、手术方法、术后的发生并发症及生命质量产生较大影响。

基于细粒棘球蚴病不同时期诊断抗原的研究进展

细粒棘球坳病是一种常见的寄生虫并,对人类及牲畜的健康构成了极大的威胁,对农业及畜牧业造成了严重的经济负担。在最近几年,AgB、Ag5、EpCI、EgTPx等重组抗原的制备已经被应用到医学检测中,且表现出了相当的灵敏度与特异度,经研究发现,细粒棘球坳病的早期诊断有极其关键的作用。而本文针对近些年来细粒棘球蚴病在不同时期诊断时应用抗原的研究进行综述,希望能为相关人员提供参考。

2023年青海省犬细粒棘球绦虫感染情况调查与分析

本研究旨在调查青海省犬细粒棘球绦虫感染情况。于2023年在全省不同地区采集21999份犬粪便样本,采用夹心ELISA法检测犬细粒棘球绦虫感染情况。结果发现,共824份粪便样品检测为细粒棘球绦虫抗原阳性,平均阳性率为3.75%;其中野犬细粒棘球绦虫感染率较家犬高,分别为7.86%(371/4719)和2.62%(453/17280)。在被调查家犬中,不同年龄阶段犬细粒棘球绦虫感染率差异较大,其中6岁以上犬感染率最高,为3.88%(156/4018),1~3岁和3~5岁犬感染率分别为2.08%(96/4608)和2.89%(173/5977),1岁以下犬感染率为1.05%(28/2677);但雌性犬和雄性犬细粒棘球绦虫感染率差异较小,分别为2.37%(149/6277)和2.76%(304/11003)。结果提示,青海省仍然存在犬细粒棘球绦虫病流行,其中野犬感染率高于家犬感染率,需要加强犬细粒棘球绦虫病的防控,保障公共健康。

犬细粒棘球绦虫抗原ELISA检测方法的建立

旨在建立敏感特异的犬细粒棘球绦虫(Eg)抗原ELISA检测方法。用细粒棘球绦虫表膜抗原(EgSfAg)免疫兔获得抗血清,同时利用抗EgSfAg杂交瘤细胞株4E8制备单抗,通过亲和层析获得纯化的多抗和单抗4E8,制备Eg、多房棘球绦虫、泡状带绦虫、多头绦虫和犬弓首蛔虫等5种蠕虫抗原作为特异性质控样品,利用单抗4E8进行Western blot检测,通过人工感染犬结合氢溴酸槟榔碱下泄法制备阳性对照样品,同时设置敏感性质控样品和阴性对照样品,构建样品盘,以多抗为捕捉抗体,HRP标记的单抗4E8为检测抗体,建立犬Eg抗原ELISA检测方法,并验证该方法的敏感性和特异性。结果:Western blot检测证明单抗4E8仅与EgSfAg有特异性反应;建立的ELISA检测方法最低检出量为1∶512;对130份阳性样品的平均检出率为95.38%;交叉试验结果显示仅EgSfAg结果为阳性;检测150份阴性样品的平均符合率为95.56%。综上,建立的ELISA方法具有较好敏感性和特异性,为终末宿主棘球蚴病的诊断和流行病学调查提供了一种安全、简便、高效的免疫学检测方法。

重组pET30a-EgM9蛋白高免兔血清对体外培养细粒棘球绦虫发育的影响

探究egM9基因在细粒棘球绦虫性成熟发育过程中的调控机制。利用重组pET30a-EgM9蛋白高免血清对细粒棘球绦虫进行体外干预试验,观察干预后虫体的发育情况。在体外培养模型中,用pET30a-EgM9蛋白高免兔血清作用于体外培养30 d的虫体,通过Western blot检测虫体蛋白的免疫反应性,RT-qPCR分析虫体中EgM9基因的表达水平。显微观察表明经高免血清干预后虫体明显向成囊方向发育。Western blot直接法表明高免兔血清可以与虫体蛋白形成复合物,间接法证明EgM9多克隆鼠血清未与上述复合物发生抗原抗体特异性结合。RT-qPCR验证EgM9高免兔血清可刺激虫体中的EgM9基因的表达。说明通过高免血清体外干预,可促进EgM9在基因和转录水平上的表达,为筛选细粒棘球绦虫终末宿主疫苗候选基因提供理论依据。