四物汤及各单味药的含药血清对粒系-巨系造血祖细胞集落(CFU-GM)的影响

目的 :研究四物汤及各单味药对粒系 -巨系造血祖细胞集落 (CFU - GM)的影响 ,更近于真实地反映药物在体内作用的实际情况 ,以进一步探讨四物汤补血作用的配伍机制。方法 :采用血清药理学体外实验法。结果 :四物汤能明显促进造血祖细胞的增殖 ,单味药当归的作用最强 ,单味药熟地黄、川芎的作用也较正常对照组有增强趋势 ,而单味药白芍对 CFU - GM的增殖似无作用。几种受试药的作用强弱顺序可排列如下 :当归 >四物汤 >川芎 >熟地黄 >白芍。结论 :上述结果提示在促进 CFU - GM的增殖方面 ,四物汤的生血补血作用源于当归 ,川芎与熟地黄似有一定的协同作用 ,而白芍不表现协同作用。

当归补血汤及不同提取部分含药血清对粒系-巨系造血祖细胞集落克隆的影响

目的 :以CFU -GM细胞集落形成数目为指标 ,探讨当归补血汤全方发挥功效的有效部分或有效部位。方法 :用极性由小到大的 4种有机溶剂依次萃取全方水煎液 ,所得各供试部分灌胃及供试各部分组合灌胃 ,取血清 ,培养骨髓细胞 (CFU -GM)。结果 :未发现某一供试部位对CFU -GM细胞集落形成作用强度等同全方 ,其中氯仿、乙酸乙酯供试部分较强 ;各部分相互组合后作用增强 ,其中氯仿与正丁醇部分组合的血清、氯仿与乙酸乙酯组合的血清较强 ,但仍弱于全方。结论 :能完全代表全方功效和物质基础的有效部分及组合部分可能不存在 。

放烧复合伤小鼠骨髓基质细胞对粒-巨噬系祖细胞生长的影响

为了进一步阐明放射损伤复合烧伤(放烧复合伤)时骨髓造血基质细胞支持粒-巨噬系祖细胞造血能力的变化,采用小鼠骨髓基质细胞体外融合培养和粒-巨噬系祖细胞集落(CFU-GM)培养的方法,观察了5Gy照射复合15％Ⅲ度烧伤时基质细胞对支持CFU-GM生长的影响。结果表明:①单纯5Gy照射,单纯烧伤及放烧复合伤后,其骨髓基质细胞支持正常粒-巨噬系祖细胞造血的能力明显下降,以伤后3-5天最为显著,伤后10天仍未恢复至正常;②当骨髓基质细胞和粒-巨噬系祖细胞均受到致伤因素作用时,单纯照射及放烧复合伤组的CFU-GM形成能力下降更为明显,至正常对照组的10％以下,单纯烧伤组也有明显下降,但恢复较快;③在本研究所涉及的各种情况下,损伤的效应均有伤后3-5天达最低值的规律,之后可不同程度地恢复。实验结果提示,在上述损伤因素的作用下骨髓基质细胞的功能确已受到了不同程度的损伤,因此在治疗由此所引起的造血功能障碍时,同时加强促进基质细胞修复的措施,可能会取得更满意的疗效。

人参皂甙Rg1和Rb1对骨髓粒-巨噬系祖细胞增殖的作用

用体外造血祖细胞集落形成技术 ,观察人参皂甙Rg1和Rb1对正常人粒 巨噬系祖细胞(CFU GM )的刺激增殖作用。实验结果表明 :Rg1浓度为 2 .5 ,5 ,10和 5 0 μg ml时CFU GM集落产率均显著高于对照组 (P <0 .0 1) ,提高率分别为 (39.8± 3.6 ) % ,(70 .6± 6 .8) % ,(6 3.0± 6 .4 ) %和 (6 0 .8± 5 .9) %。Rb1浓度为 0 .5 ,2 .5 ,5 ,10和 5 0 μg ml时CFU GM集落产率均明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,提高率分别为 (2 4 .5± 2 .3) % ,(45 .6± 4 .7) % ,(5 4.6± 6 .1) % ,(6 5 .1± 6 .3) %和(5 8.3± 5 .7) %。高浓度 (5 0 μg ml)不显示抑制作用。上述结果说明 ,Rg1和Rb1对CFU GM具有明显的刺激增殖作用 。

丹参注射液对家兔粒-巨噬系祖细胞动员作用的研究

以体外半固体琼脂培养方法观察了家兔循环血CFU-GM的一般特性及丹参注射液对家兔CFU-GM的动员作用。研究结果显示,家兔循环血CFU-GM正常值为9.10±7.45(范围0～27.33)CFU-GM/1×10~6MNC,其数量无明显性别差异,亦无明显日间周期性变化;丹参注射液可升高循环血CFU-GM数量;当给药剂量1g/kg,连续给药8d后,循环血CFU-GM数量达高峰,为对照组的6.18倍。作者分析,丹参注射液对家兔CFU-GM动员作用的机理可能包括改善骨髓造血微循环、促进造血细胞增殖分化并向外周血迁移等,确切机理尚待进一步研究。丹参具有毒性小、安全范围大、来源方便等优点,以其作为造血祖细胞动员剂,有进一步研究的价值。

放射损伤对骨髓基质细胞支持小鼠粒-巨噬系祖细胞生长的影响

为阐明放射损伤时骨髓造血基质细胞支持粒 -巨噬系祖细胞造血能力的变化。采用小鼠骨髓基质细胞体外融合培养和粒 -巨噬系祖细胞集落 (CFU -GM )培养法 ,观察 5Gy照射对基质细胞支持小鼠CFU -GM生长的影响。结果表明 ,经 5Gy照射后 ,骨髓基质细胞支持正常粒 -巨噬系祖细胞造血的能力明显下降 ,以伤后 3- 5d最为显著 ,伤后 10d仍未恢复至正常 ;当骨髓基质细胞和粒 -巨噬系祖细胞均受到致伤因素作用时 ,照射组的CFU -GM形成能力下降更为明显 ,至正常对照组的 10 %以下。说明放射损伤后骨髓基质细胞的功能受到了不同程度的损伤 ,因此 ,在治疗由此所引起造血功能障碍的同时 ,应加强促进基质细胞修复的措施 ,可能会取得更满意的疗效。

逆转录病毒介导转导的人粒-巨噬系集落刺激因子基因在哺乳动物细胞中的表达(英文)

利用多聚酶链反应(PCR)方法,从活化的人外周血单个核细胞中克隆了人粒-巨噬系集落刺激因子(GM-CSF)的cDNA。DNA序列测定证实此片段为完整的GM-CSF cDNA。应用DNA重组技术,将此cDNA重组于逆转录病毒载体pDORneo上,以Lipofectin介导转染病毒包装细胞PA317,用NIH3T3细胞测定病毒滴度。选取高滴度病毒上清感染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,经G418筛选获抗性克隆,PCR方法鉴定重组载体整合于CHO细胞的基因组DNA中。用CFU-GM集落形成实验检测GM-CSF活性,证实转染后的CHO细胞有GM-CSF的稳定、高效表达。

人参茎叶皂苷对体外条件下小鼠骨髓间充质干细胞和粒-巨噬系祖细胞增殖的影响

目的:探讨人参茎叶皂苷(GSL)在体外培养条件下对小鼠骨髓间充质干细胞(MSC)和粒-巨噬系祖细胞(CFU-GM)生长的影响。方法:在小鼠骨髓细胞液体培养体系和半固体培养体系中加入不同浓度的GSL,应用体外集落形成法检测GSL对小鼠MSC和CFU-GM增殖的影响。结果:在培养体系中GSL浓度为25μg/ml时,MSC和CFU-GM集落产率与对照组无明显差异(P>0.05);50～200μg/ml的范围内,MSC和CFU-GM集落产率显著高于对照组(P<0.05),其中浓度为100μg/ml时效应最明显;但在400μg/ml时,MSC和CFU-GM集落产率却低于对照组(P<0.05)。结论:GSL在一定浓度范围内对体外培养条件下的小鼠骨髓MSC具有生长促进作用,而在高浓度时表现出生长抑制作用。

血清粒/巨噬系集落刺激因子(GM-CSF)与骨髓粒系造血

细胞因子在造血调节中有着极其重要的作用,深入研究其对造血干细胞增殖、分化与调控的机理,可以进一步阐明造血细胞生成的机制,并为与造血功能障碍有关的许多疾病提供新的诊断和治疗思路;同时,通过监测血液或体液中某种细胞因子的水平,可以更进一步了解其生物效应,或人为地控制体内某些细胞因子的产生和释放,可以为与造血功能障碍有关的许多疾病探索开发新的临床诊断和治疗手段。本文仅就血清GM—CSF水平测定及其与骨髓粒系造血关系的文献作一综述。

锂对小鼠高增殖潜能集落形成细胞和粒巨噬系祖细胞体外增殖的影响

本文观察了锂对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨髓高增殖潜能集落形成细胞（ＨＰＰ－ＣＦＣ）和粒巨噬系祖细胞ＣＦＵ－ＧＭ体外增殖的影响。ＨＰＰ－ＣＦＣ集落由ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＷＥＨＩ３条件培养液（ＷＥＨＩ３－ＣＭ，含有ＩＬ－３）及Ｌ９２９条件培养液（Ｌ９２９－ＣＭ，含有Ｍ－ＣＳＦ）所支持，而ＣＦＵ－ＧＭ由ＷＥＨＩ３－ＣＭ所支持。结果显示，ＬｉＣｌ浓度在０．４－２ｍｍｏｌ／Ｌ时呈现剂量依赖性抑制ＨＰＰ－ＣＦＣ增殖；而在０．４－１ｍｍｏｌ／Ｌ的浓度范围内，则对ＣＦＵ－ＧＭ的增殖起剂量依赖性促进作用。这些结果提示ＬｉＣｌ对ＨＰＰ－ＣＦＣ和ＣＦＵ－ＧＭ的作用不同。

藏药巴桑母酥油丸对放射线-化学复合损伤小鼠粒-巨噬系造血功能的影响及机理研究

目的探讨藏药巴桑母酥油丸对放射线-化学复合损伤小鼠粒-巨噬系造血功能的影响及可能机理。方法60Coγ射线照射和环磷酰胺腹腔注射方式制造放射线-化学复合损伤小鼠模型,采用外周血细胞计数、造血祖细胞集落分析、实时荧光定量PCR,检测灌胃不同浓度巴桑母酥油丸后不同时间放射线-化学复合损伤小鼠外周白细胞数、骨髓粒-巨噬系(CFU-GM)造血祖细胞集落产率、粒-巨噬系集落刺激因子(GM-CSF)和粒-巨噬系集落刺激因子受体(GM-CSF R)mRNA相对表达量。结果灌胃14 d后,中、高剂量组的白细胞数显著高于生理盐水组;中剂量巴桑母酥油丸灌胃14 d后,骨髓CFU-GM集落产率、GM-CSF mRNA和GM-CSFR mRNA也显著高于空白组、生理盐水组。结论适当浓度的巴桑母酥油丸可以通过上调骨髓GM-CSF、GM-CSFR mRNA表达、促进CFU-GM增殖分化,进而促进放射线-化学复合损伤后小鼠外周血白细胞数的提前恢复。

小鼠颌下腺组织培养上清液促进粒-单系和巨核系造血的实验研究

目的 证实颌下腺是否合成影响造血的细胞因子 ,并探讨其对粒 -单系和巨核系造血祖细胞增殖分化有何影响 ,为重新认识颌下腺的生理功能提供实验证据。方法 采用造血祖细胞体外培养和流式细胞术检测 CD13膜抗原及细胞周期 ,研究小鼠颌下腺组织培养上清液 (SGCM)对小鼠粒 -单系和巨核系造血发生的影响。结果 SGCM对粒 -单系祖细胞 (CFU- GM)集落生长有明显促进作用 ,能明显促进巨核系造血祖细胞 (CFU- Meg)集落生成 ,而且雄性 SGCM刺激活性高于雌性 SGCM,IL- 3与雌性 SGCM有叠加作用 ,贫血雄性 SGCM对 CFU-GM和 CFU- Meg的刺激活性高于正常小鼠 ,SGCM能促进小鼠骨髓细胞进入增殖活跃期 (S/G2 )。结论 颌下腺能合成与粒 -单系、巨核系造血相关的造血因子。

肾上腺素影响小鼠粒巨噬系祖细胞生长的实验研究

目的 :了解肾上腺素 (Adrenaline ,Adr)对小鼠粒巨噬系祖细胞的影响。方法 :在体外半固体培养的粒 巨噬系集落形成单位 (ColonyFormUnit GranulocyteandMacrophage ,CFU GM )中加入不同浓度的Adr后 ,计数集落数 ,并与阴性对照组比较。结果 :Adr浓度在 10 -6～ 10 -10 mol/ml范围内 ,CFU GM集落数与对照组相比 ,P >0 .0 5 ;Adr浓度为10 -5mol/ml时 ,P <0 .0 5 ;Adr浓度为 10 -4 mol/ml时 ,培养体系中没有CFU CM形成。结论 :高浓度Adr可抑制CFU GM在体外的生长 。

粒-巨噬系集落刺激因子基因在大肠杆菌中的高效表达

粗-巨噬系集落刺激因子(GM-CSF)是一种重要的造血生长因子,主要是刺激粒细胞和巨噬细胞大量增殖。其临床疗效显著而且副作用小。本文先从正常人外周血细胞中提取总RNA,经逆转录——PCR扩增克隆了GM-CSF之cDNA。以DNA序列分析证实与文献一致。再设计合成一对引物定向改造编码成熟GM-CSF基因的5′端:换成大肠杆菌偏性密码,并避免起始点周围形成强二级结构,把终止密码子换成TAA。将改造后的基因克隆到载体pBV220中,转化受体菌HB101,经42℃诱导高效表达出GM-CSF。表达产物约占全菌蛋白的20％,初步纯化和复性后比活性】1×10~7U/mg。

小鼠胎肝造血基质细胞系对CFU-GM生长的调控作用

利用本实验室建立的小鼠胎肝造血基质细胞系(MFLSC)研究了造血基质细胞对粒-巨噬系造血祖细胞(CFU-GM)生长的影响。实验结果表明,MFLSC对CFUGM集落的生成有双向调控作用,即既有刺激性作用,又有抑制性影响。这种调控有体液因子之中介,亦有细胞与细胞间近距离的效应。文中讨论了MFLSC双向调控CFUGM生长的意义及其机理。

SPGL对白血病细胞系HL-60细胞增殖的影响

采用CFU-GM和白血病CFU-L集落培养、白血病HL-60细胞液体培养的方法,观察了光叶海酮总皂甙(SPGL)对正常人骨髓粒-巨噬系造血祖细胞(CFU-GM)和人急性髓系白血病HL-60细胞增殖的影响。结果表明:5 ×10^(-6)-5×10^(-4)mg/ml浓度SPGL能显著抑制HL-60细胞增殖,且具有明显的量-效关系。而对正常人造血祖细胞无明显的细胞毒作用,提示SPGL有抗白血病作用。此结果为进一步研究SPGL提供了实验依据。

特发性血小板减少性紫癜骨髓造血干细胞的功能及与疗效的关系

目的:探讨特发性血小板减少性紫癜(idiopathicthrombocytopenicpurpura,ITP)患者骨髓造血干细胞的增殖分化功能,并从巨核细胞集落形成单位的数量和血小板上升的幅度探讨两者之间的疗效关系。方法:用甲基纤维素半固体培养ITP患者粒-巨噬细胞集落形成单位、红系集落形成单位、巨核细胞集落形成单位,观察巨核细胞集落形成单位与血小板上升平均值的关系。结果:ITP患者骨髓粒-巨噬细胞集落、红系集落形成单位、巨核细胞集落形成单位集落数低于正常对照组,粒-巨噬细胞集落数及丛落数高于正常对照组,巨核细胞数大于5/高倍视野的ITP患者其巨核细胞数与血小板上升无关,巨核细胞集落形成单位与血小板上升平均值有关。结论:ITP患者骨髓造血干细胞增殖分化功能异常,提示ITP可能是造血干细胞异常的疾病。ITP的巨核细胞集落形成单位与血小板上升幅度有关,巨核细胞集落形成单位可以预测ITP的治疗效果。

重型再生障碍性贫血患者免疫抑制治疗后骨髓造血祖细胞水平的变化及其意义

为更好地评价重型再生障碍性贫血(SAA)患者免疫抑制治疗(IST)后骨髓造血功能恢复程度,采用造血祖细胞体外培养技术,动态观察了48例接受IBT的SAA患者及20例正常对照者骨髓晚期红系爆式集落形成单位(mBFU-E)及粒-巨噬系集落形成单位(CFU-GM)的水平变化。结果表明,IST前所有SAA患者骨髓mBFU-E及CFU-GM水平均显著低于正常对照组(P<0.001);IST后1年,29例有效者骨髓mBFU-E及CFU-GM水平显著增高,增高程度与其临床疗效相关;12例mBFU-E及10例CFU-GM水平恢复正常,其中8例患者mBFU-E及CFU-GM水平同时恢复正常。这表明SAA确是一组异质性疾病,其造血功能衰竭与异常免疫关系密切,若去除这种异常,造血功能可获得部分甚至完全重建。

重组人铜锌超氧化物歧化酶对小鼠骨髓造血粒─巨系祖细胞的辐射防护作用

目的：探讨重组人铜锌超氧化物歧化酶（ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ）的辐射防护作用及其机理。方法：通过γ线辐射损伤小鼠的体内和体外实验，观察了ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ和聚乙二醇修饰的ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ（ＰＥＧ－ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ）对小鼠骨髓造血粒－巨系祖细胞克隆产生率（ＣＦＵ－ＧＭ）的影响。结果：体内实验，小鼠整体照射，静脉给药，以上两种酶（２５`０～３００ｍｇ／ｋｇ）均能非常显著地提高ＣＦＵ－ＧＭ的数量。其中以照射前后联合给药效果最好。而单纯照射前给药，ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ仅在照前１小时给药效果较好；ＰＥＧ－ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ则在照前３小时或照前１小时给药都有较好的效果。体外实验，小鼠离体细胞照射并给药，未见ｒｈＣｕＺｎ－ＳＯＤ对ＣＦＵ－ＧＭ的影响。结论：以上两种酶对小鼠骨髓ＣＦＵ－ＧＭ有良好的辐射防护作用，其机理可能是通过机体防御系统作用的间接途径实现的。ＰＥＧ－ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ的生物半衰期较长，可增加给药时机，因而具有更大的实用价值。

银屑病患者骨髓造血细胞体外增殖活性研究

目的进一步了解银屑病患者骨髓造血细胞是否有异常。方法采用密度梯度离心法分离银屑病患者及正常对照组骨髓单一核细胞,然后在含有甲基纤维素的半固体细胞因子培养体系中进行体外高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)、粒-巨噬细胞系集落形成单位(CFU-GM)及红系集落形成单位(CFU-E)集落形成实验,培养一定时期后计数集落。结果与正常对照比较,银屑病患者的HPP-CFC及CFU-GM的集落形成数显著减少,而CFU-E形成的集落数无统计学意义。结论银屑病患者骨髓造血细胞体外增殖能力明显降低,这种异常的造血细胞可能在银屑病的免疫发病机制中发挥一定作用。