人外周血粒细胞褪黑素受体亚型的基因与蛋白表达

目的:研究人外周血粒细胞褪黑素受体(melatonin receptor,MR)亚型的基因与蛋白表达的特点。方法:通过密度梯度离心法分离得到健康成年人外周血粒细胞,采用异硫氰酸胍-苯酚-氟仿一步法抽提总RNA,分别采用Northern印迹和RT-PCR方法检测MR亚型mt1和MT2的mRNA,并将RT～PCR的阳性产物通过自动测序仪测序;同时应用免疫组化染色方法检测mt1和MT2受体亚型蛋白在粒细胞内的分布特点。结果:Northern印迹方法检测出长约1.1 kb的mt1mRNA,但未检出长约1.1 kb的MT2mRNA;RT-PCR方法则得到了约370 bp的mt1cDNA片段,无320 bp的MT2cDNA片段,mt1阳性条带测序结果显示扩增产物与人mt1受体亚型的基因序列相吻合;免疫组化结果显示:人外周血粒细胞存在mt1受体蛋白,主要分布于细胞膜和细胞质,呈棕褐色阳性颗粒,而细胞核上几乎未见阳性颗粒,MT2受体蛋白则未检出。结论:证实正常人外周血粒细胞存在mt1亚型的基因与蛋白的表达,而无MT2亚型的基因与蛋白的表达,提示外周血粒细胞为褪黑素(melatonin,Mel)作用的外周靶器官。

MT2受体介导褪黑素对小鼠前胃癌细胞的抑制作用

目的探讨褪黑素(MLT)通过褪黑素膜受体MT2抑制小鼠前胃癌(MFC)细胞增殖及其与丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)-Akt信号通路的关系。方法应用siRNA技术沉默MT2表达,观察褪黑素对小鼠前胃癌细胞的抑制作用及ERK1/2、Akt的磷酸化的影响。结果 1.siRNA介导的MT2沉默能明显拮抗褪黑素对胃癌细胞增殖的抑制作用;2.沉默MT2可部分阻断褪黑素抑制ERK1/2、Akt磷酸化的作用。结论褪黑素可通过MT2受体抑制ERK1/2、Akt的磷酸化从而抑制胃癌细胞增殖。

褪黑素受体MT1和转录因子Sp1在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的:检测乳腺癌组织中褪黑素受体MT1与转录因子Sp1的表达,探讨两者表达的相关性及其临床意义。方法:采用免疫组织化学SP法和蛋白质印迹技术检测MT1和Sp1在90例乳腺癌组织和50例癌旁正常乳腺组织中的表达情况。结果:MT1在乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织中的阳性表达率分别为64.4%和22.0%,两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。Sp1在乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织中的阳性表达率分别为74.4%和28.0%,两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。蛋白质印迹半定量检测结果与免疫组织化学结果相一致。乳腺癌组织中MT1、Sp1的表达与TNM分期、肿瘤浸润及淋巴结转移呈正相关(P<0.05),与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级无明显相关性(P>0.05)。乳腺癌组织中MT1的表达与Sp1的表达呈正相关(r=0.523,P<0.01)。结论:MT1、Sp1可能共同参与了乳腺癌的侵袭和转移,检测两者的表达对判断乳腺癌临床进展、预后推测具有一定的参考价值。

人HUT78细胞褪黑素受体的基因与蛋白表达的研究

为了检测人HUT78细胞是否存在褪黑素受体(melatoninreceptor,MR)及其亚细胞分布特点 ,采用异硫氢酸胍 苯酚 氯仿一步法抽提总RNA ,进一步通过RT PCR方法检测MR亚型mt1和MT2 的mRNA ,并将RT PCR的阳性产物通过自动测序仪测序 ;同时应用免疫组化染色方法检测mt1和MT2 受体亚型蛋白在HUT78细胞内的分布特点。RT PCR方法则得到了 3 68bpmt1cDNA片段 ,无 3 2 1bpMT2 cDNA片段 ,同时将mt1阳性条带通过胶回收、测序 ,结果显示扩增产物与人mt1受体亚型的基因序列相吻合 ;免疫组化结果显示 ,人HUT78细胞存在mt1受体蛋白 ,主要分布于细胞膜和细胞浆 ,呈棕褐色阳性颗粒 ,而细胞核上未见阳性颗粒 ,MT2 受体蛋白则未检出。提示褪黑素 (melatonin,Mel)对T淋巴细胞具有直接调节作用 。

下丘脑褪黑素受体亚型基因及蛋白表达的研究(英文)

目的 :应用 PT- PCR技术和免疫组织化学染色显示人胚胎下丘脑褪黑素受体及其亚型的分布。方法 :取人胚胎下丘脑组织 ,抽提总 RNA并应用 RT- PCR方法检测其 m RNA,扩增所得阳性产物用自动测序仪测序 ;石蜡包埋下丘脑组织 ,应用鼠抗人 m t1 和 MT2 受体单克隆抗体分别检测褪黑素 mt1 和 MT2 受体亚型 m RNA及其蛋白的表达。结果和结论 :人胚胎下丘脑组织中存在 m t1 和 MT2 受体亚型 m RNA的表达及其蛋白的翻译 ,提示在该组织中有 m t1 和 MT2

绵羊附睾褪黑素受体1的表达与定位

为研究褪黑素受体1(MT1)在不同年龄绵羊附睾中的表达模式,选用幼龄绵羊(2~3月龄)、青年绵羊(6~8月龄)和成年绵羊(2~3岁)的附睾,采用实时荧光定量PCR和免疫组化技术检测不同年龄绵羊附睾各部位MT1基因mRNA的表达量和MT1的分布情况。结果表明:幼龄绵羊附睾尾MT1基因的转录水平极显著高于附睾头和附睾体(P<0.01);青年绵羊附睾体和附睾尾MT1基因的转录水平显著高于附睾头(P<0.05);成年绵羊附睾尾MT1基因的转录水平显著高于附睾头和附睾体(P<0.05),附睾各部位MT1基因的转录水平随年龄增长呈明显降低趋势;定位结果显示,MT1在各年龄组绵羊附睾的各个部位均有分布,且主要分布在附睾上皮细胞中。综合上述结果,不同年龄绵羊附睾的不同部位均有MT1表达和分布,并随年龄增长各部位的表达量降低,相同年龄绵羊附睾尾MT1的表达水平较高。

人胚胎胸腺褪黑素受体亚型的分布

目的 :应用免疫组织化学和核酸原位杂交技术显示人胚胎胸腺褪黑素受体及其亚型的分布。方法 :人胚胎胸腺组织用 4%多聚甲醛及 0 .1% DEPC固定 ,石蜡包埋组织 ,应用 m t1 和 MT2 受体亚型的特异性探针和鼠抗人 mt1 和 MT2 受体单克隆抗体分别检测 m t1 和 MT2 受体亚型 m RNA的表达及蛋白的翻译。结果 :人胚胎胸腺组织的皮髓质的上皮细胞及胸腺小体均存在 m t1 和 MT2 受体亚型 m RNA的表达及其蛋白的翻译。结论 :人胚胎胸腺组织中存在 m t1 和 MT2 受体亚型 m RNA及蛋白 ,提示在该组织中有 mt1 和 MT2 受体亚型的表达。

人外周血淋巴细胞和粒细胞褪黑素受体亚型mt_1的检测

目的 检测人外周血淋巴细胞和粒细胞的褪黑素受体 (MR)亚型mt1和其细胞内定位。方法 分离出健康成年人外周血淋巴细胞和粒细胞 ,应用RT PCR技术分别检测其亚型mt1的mRNA ,阳性产物用自动测序仪测序 ;同时将所分离的淋巴细胞和粒细胞制成细胞涂片 ,应用免疫组化染色检测mt1在淋巴细胞和粒细胞上的分布。结果 RT PCR产物电泳显示 :人外周血淋巴细胞和粒细胞均存在mt1阳性条带 ,片段长度约 3 70bp ,测序结果显示扩增产物与GenBank的人mt1受体亚型的基因序列相吻合 ;免疫组化结果显示 :人外周血淋巴细胞和粒细胞均存在mt1受体蛋白 ,分布于细胞膜、细胞浆和细胞核 ,以细胞膜和细胞浆为主。结论 人外周血淋巴细胞和粒细胞中均存在MR的亚型mt1,外周血淋巴细胞和粒细胞为褪黑素作用的外周靶器官 。

绵羊松果体及生殖轴系褪黑素受体MT1的克隆

采用RT-PCR技术从绵羊松果体、下丘脑、垂体及卵巢组织中克隆到褪黑素受体MT1基因,扩增序列全长650 bp。同源性分析表明与GenBank中已知序列的同源性均达到99%,证明这些组织存在MT1基因的mRNA表达。序列分析发现绵羊下丘脑、垂体和卵巢组织中的基因序列为Mel1aα基因,而松果体组织中的基因序列为Mel1aβ基因。绵羊卵巢组织中存在有MT1褪黑素受体,暗示褪黑素可能直接作用于绵羊卵巢,参与生殖功能的调节。

褪黑素对大鼠牙乳头细胞和牙齿发育的影响

目的研究褪黑素(MT)对大鼠牙乳头细胞及牙齿发育的影响。方法新生鼠牙乳头细胞的分离培养与鉴定,应用免疫组化检测培养第4代牙乳头细胞褪黑素MT1、MT2受体,四唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度褪黑素对牙乳头细胞增殖的变化,双荧光标记检测褪黑素对SD新生大鼠牙本质生长情况的影响。结果培养第4代牙乳头细胞存在MT1受体,主要分布于细胞膜、细胞浆和细胞核周围,呈棕黄色阳性颗粒,而MT2受体呈阴性;MTT法检测吸光度(A)值,高浓度MT组明显小于对照组(P<0.05);荧光标记检测10天牙本质生长距离褪黑素组明显小于对照组(P<0.05)。结论褪黑素能够明显抑制牙乳头细胞的增殖,对牙本质生长的早期发育起抑制作用。

2-Iodomelatonin上调NRF2表达对缺血性脑损伤神经保护作用

目的探讨褪黑激素受体1(MT1)激动剂2-Iodomelatonin通过上调核因子E2相关因子2(NRF2)对大脑中动脉栓塞小鼠的神经保护作用。方法采用大脑中动脉栓塞(MCAO)法制备小鼠缺血性脑损伤体内模型,给予2-Iodomelatonin及NRF2抑制剂(Nrf2-IN-1)干预。采用三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法检测小鼠大脑的梗死体积,Western Blot法检测缺血损伤后大脑皮质半暗带NRF2表达水平,改良神经功能缺损程度评分(mNSS)评估2-Iodomelatonin和Nrf2-IN-1干预对小鼠缺血性脑损伤亚急性期运动功能的影响。结果TTC染色结果显示,2-Iodomelatonin干预可以显著降低缺血性脑损伤小鼠的大脑梗死体积(F=7.79,q=5.06,P<0.05)。Western Blot结果显示,2-Iodomelatonin干预可上调小鼠皮质梗死半暗带NRF2的表达水平(F=10.56,q=3.99,P<0.05)。mNSS评分结果显示,2-Iodomelatonin干预可以显著改善缺血性脑损伤第14天的运动功能损伤(F=6.12,q=4.79,P<0.05),该效应可被Nrf2-IN-1逆转(q=3.60,P<0.05)。结论2-Iodomelatonin干预可以通过上调NRF2降低缺血性脑损伤小鼠的大脑梗死体积并改善14 d时的运动功能损伤。

光照条件改变对青春期前雄性金黄地鼠性腺轴的影响

目的:观察光照改变对雄性金黄地鼠下丘脑-垂体-性腺轴的影响。方法:2日龄雄性金黄地鼠40只,随机分为正常组(12h,50lux)、16h弱光组(16h,50lux)、16h强光组(16h,350lux)和20h强光组(20h,350lux),光照干预至28日龄;放免法检测血清睾酮(T)、黄体生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)水平;Real-time PCR法检测下丘脑促性腺激素释放激素(Gn RH)、促性腺激素抑制激素(Gn IH)、褪黑素受体1c亚型(Mel1c),垂体Gn RHR、GPR147 m RNA表达变化。结果:光照组金黄地鼠出现躁动不安,皮毛光泽度差,体质量偏轻等类似阴虚火旺证候表现。与正常组比较,各光照组T水平显著上升(P<0.05);下丘脑Mel1c m RNA表达水平显著下降(P<0.01,P<0.05);16h弱光组和20h强光组下丘脑Gn IH m RNA表达水平显著升高(P<0.05)。结论:延长光照时间、增加光照强度可使雄性地鼠出现一定的阴虚火旺表现。光照时间延长、强度增加可引起雄性地鼠睾丸发育提前,其机制可能与褪黑素受体、Gn IH有关。