BXSB狼疮鼠骨髓粒-巨噬细胞集落形成单位异常与发病的关系

目的 :研究 BXSB自发性狼疮鼠骨髓粒 -巨噬细胞系的增殖情况与狼疮发病的关系。方法 :雄性 BXSB小鼠按 4、 8、 12、 16及 2 0周龄分组 ,每组 6只 ,采用甲基纤维素半固体培养方法体外培养骨髓单个核细胞(BMMC) ,计数粒 -巨噬细胞集落形成单位 (CFU - GM)及小鼠外周血单核细胞 (PBMC) ,并检测尿蛋白。相同周龄的 C5 7BL小鼠作为正常对照组。结果 :12周龄雄性 BXSB小鼠尿蛋白 (+) ,2 0周龄时尿蛋白 ( ) ,4、 8周龄 BXSB小鼠及各周龄 C5 7BL小鼠尿蛋白 (- )。 8周龄雄性 BXSB小鼠骨髓 CFU - GM为 (96 .0 0± 18.11) / 2×10 5BMMC,PBMC计数为 (111.33± 10 .97)× 10 6· L- 1 ,均明显高于 4周龄 BXSB小鼠及正常 C5 7BL 小鼠(P<0 .0 5 ) ,随着周龄增加 ,CFU- GM和 PBMC进一步增多。结论 :BXSB小鼠粒 -巨噬细胞系造血异常及外周血单核细胞增多参与了自身免疫疾病的发病过程。

慢性粒单核细胞白血病患者骨髓成纤维集落形成单位功能及意义

背景:研究表明,异常的骨髓微环境可能参与慢性粒单核细胞白血病的发生,成纤维集落形成单位(colony formingunit-fibroblast,CFU-F)代表了一组具有多系分化潜能的间充质干细胞,其功能、数量状态具有评价骨髓基质微环境状态的意义。目的:评估慢性粒单核细胞白血病患者骨髓间充质干细胞形成CFU-F的能力与成骨分化潜能,探讨CFU-F指标与患者外周血细胞计数、疾病表现型等指标的相关性。方法:①收集广东省人民医院血液科收治、资料齐全的慢性粒单核细胞白血病患者15例与对照组志愿者10例,比较两组间骨髓形成CFU-F的功能与分化潜能;②分析慢性粒单核细胞白血病患者骨髓CFU-F数量与初诊时外周血细胞计数、临床表现型、骨髓原始细胞及患者基因突变的相关性。实验方案得到广东省人民医院(广东省医学科学院)伦理委员会批准,批件号:[2018]002号。结果与结论:①15例慢性粒单核细胞白血病患者CFU-F数量低于对照组(P=0.04),其中67%(10/15)的慢性粒单核细胞白血病患者骨髓CFU-F数量显著降低(P=0.00),33%(5/15)患者CFU-F水平接近对照组(P=0.14);②全组慢性粒单核细胞白血病患者骨髓间充质干细胞成骨转录因子Osterix及RUNX2的表达量显著降低(P <0.05),成骨分化潜能显著下降(P=0.00);③慢性粒单核细胞白血病患者CFU-F数量与初诊时外周血白细胞、中性粒细胞以及单核细胞计数呈负相关,与外周血小板计数呈正相关;④在CFU-F数量显著降低的10例患者中,90%(9/10)外周血白细胞计数均升高(≥13×10~9L^(-1),P=0.01),50%(5/10)患者携带有NRAS/KRAS基因位点突变。⑤结果表明:慢性粒单核细胞白血病患者骨髓间充质干细胞功能受损,形成的CFU-F数量降低,CFU-F数量与外周血细胞计数以及患者临床特征具有相关性,提示了CFU-F指标具有潜在的临床价值。

白细胞介素15和粒-单核集落刺激因子激活的自然杀伤T细胞对神经母细胞瘤细胞的杀伤作用

目的 研究白细胞介素 15 (IL 15 )和粒 单核集落刺激因子 (GM CSF)对健康儿童自然杀伤T细胞(NKT)增殖和对NKT细胞介导的神经母细胞瘤 (NB)细胞的细胞毒作用的影响。方法 采集分离健康儿童外周血T细胞 ,分别加入IL 15 ,GM CSF培养 ,MTT法检测T细胞增殖程度的变化 ,流式细胞仪检测NKT/T比例并分选出NKT细胞 ,MTT法检测NKT细胞对NB细胞毒作用。结果 IL 15刺激组、GM CSF刺激组和IL 15 +GM CSF刺激组T细胞增殖程度分别是对照组的 1.2 5倍、1.2倍和 1.4倍 (均P <0 .0 1) ;NKT/T比例分别是对照组的 2 .5 6倍、3.2 7倍和 4 .39倍 (P <0 .0 1或 0 .0 5 ) ;GM CSF组和IL 15 +GM CSF组NKT细胞毒作用高于对照组 (均P <0 .0 1) ,IL 15组NKT细胞毒作用与对照组比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。与GM CSF组比较 ,IL 15 +GM CSF组T细胞增殖程度增高但NKT/T比例和NKT细胞毒作用差异无显著性。与IL 15组比较 ,IL 15+GM CSF组NKT/T比例和NKT细胞毒作用增高但T细胞增殖程度差异无显著性。IL 15组与GM CSF组T细胞增殖程度、NKT/T比例和细胞毒作用差异无显著性。结论 NKT细胞对NB具有细胞毒作用 ,IL 15和GM CSF联合应用可以促进健康儿童外周血NKT细胞增殖 ,增强NKT细胞对NB细胞毒作用。

粒-巨细胞集落刺激因子对单核细胞表达CCR2的影响

目的:探讨粒-巨细胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)对体外培养的人单核细胞株THP-1表达半胱氨酸-半胱氨酸趋化因子受体2(Cysteine-cysteine chemokine receptor2,CCR2)mRNA和蛋白的影响。方法:以不同浓度的GM-CSF处理THP-1细胞,应用半定量RT-PCR方法检测CCR2mRNA表达,并应用Western蛋白印迹法进一步检测CCR2蛋白的表达。结果:对照组THP-1细胞表达较低水平的CCR2mRNA和蛋白,经GM-CSF刺激后各实验组CCR2mRNA和蛋白表达随GM-CSF浓度和时间的增加而增强。结论:GM-CSF可以刺激THP-1细胞CCR2mRNA和蛋白的表达,且其增加程度与GM-CSF刺激浓度及刺激时间呈正性相关。

重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对人THP-1单核细胞抗阿萨希毛孢子菌活性增强作用的研究

目的研究重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,rh GM-CSF)对单核细胞吞噬、杀伤阿萨希毛孢子菌(Trichosporon asahii,T.asahii)功能的影响。方法不同浓度的rh GM-CSF(100 U/ml、200 U/ml及400U/ml)与人THP-1单核细胞预孵育48 h后,加入T.asahii临床株共培养1 h,应用瑞氏-姬姆萨染色,倒置显微镜下观察人THP-1单核细胞对T.asahii的吞噬情况;菌落计数法评估人THP-1单核细胞对T.asahii的杀伤情况。结果 rh GM-CSF预孵育可使人THP-1单核细胞对T.asahii的吞噬率从20%提高到84%左右。人THP-1单核细胞对T.asahii的吞噬率随rh GM-CSF浓度增高而升高,具有浓度依赖性。200 U/ml及400 U/ml的rh GM-CSF预孵育组,每毫升T.asahii菌落形成单位较对照组明显减少(P<0.05)。结论 rh GM-CSF可明显增强人THP-1单核细胞对T.asahii的吞噬、杀伤活性。

PDGF-BB促粒细胞/巨核细胞生长及其作用机制的研究

目的:探讨血小板衍生生长因子(PDGF-BB)对体外粒-单核细胞集落形成单位(CFU-GM)、巨核细胞集落形成单位(CFU-MK)的生成作用及其对人巨核细胞株CHRF抗凋亡作用的具体机制。方法:采用血浆凝固培养法培养小鼠和人骨髓细胞CFU-GM和CFU-MK,探讨PDGF-BB对两者CFU-GM、CFU-MK形成能力的影响。通过AnnexinV/PI双染、活性Caspase-3表达及JC-1线粒体膜势能流式细胞术检测研究PDGF-BB对人巨核细胞株CHRF的抗凋亡作用机制。结果:PDGF-BB 0-100 ng/ml能够促进小鼠/人CFU-GM和CFU-MK的增殖并呈剂量依赖性,其中50 ng/ml作用最为明显(P<0.01)。流式细胞术检测结果表明,PDGF-BB通过线粒体及Caspase-3通路对人巨核细胞株CHRF发挥抗凋亡作用(P<0.05)。结论:PDGF-BB能够促进体外小鼠和人粒-单核系及巨核系造血生成,且能通过线粒体途径和Caspase-3通路对巨核细胞发挥抗凋亡作用。

骨水泥颗粒促进肿瘤坏死因子α诱导的破骨细胞形成及其骨吸收作用

目的:验证骨水泥颗粒对肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导的破骨细胞形成及其生物学活性的影响。方法:体外培养外周血单核细胞,对照组加入TNFα和白细胞介素-1α(IL-1α)及巨噬细胞克隆集落刺激因子(M-CSF),实验组并分别加入含有或不含有硫酸钙的骨水泥(PMMA±BaSO4)颗粒。对培养终末细胞作组织化学染色检测破骨细胞标志物抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的表达,并以象牙磨片上虫蚀样骨吸收陷窝的形成为指标检测破骨细胞的生物学活性;并比较各实验组中TRAP阳性多核细胞(multinucleatedcells,MNCs)及虫蚀样骨吸收陷窝形成时间的早晚。结果:各组TRAP阳性MNCs的数量无明显差异;PMMA±BaSO4组象牙磨片上骨吸收陷窝的面积均较对照组大,差异具有显著性(P<0.01);并且PMMA±BaSO4组TRAP阳性的MNCs及虫蚀样骨吸收陷窝的形成均较对照组早。结论:PMMA±BaSO4颗粒能够促进TNFα诱导的破骨细胞分化提早发生并促进其骨吸收活性。

Rhodamine123介导的光动力学疗法对小鼠淋巴细胞增殖及骨髓干祖细胞集落形成的影响

目的 探讨Rhodamine12 3(Rh12 3)介导的光动力学疗法对小鼠淋巴细胞增殖及骨髓干祖细胞集落形成的影响。方法 以C5 7B/ 6小鼠为供鼠 ,BALB/c小鼠为受鼠 ,脾脏淋巴细胞混合培养 ,比较单纯Rh12 3、单纯激光照射、光动力学疗法对小鼠混合淋巴细胞增殖 (MTT法 )及骨髓粒单核巨噬细胞集落形成 (CFU -GM)的影响 (甲基纤维素培养基法 ) ;流式细胞仪检测混合淋巴细胞中CD3+ CD6 9+ 阳性率。结果 Rh12 3组及单纯激光组对细胞增殖无显著影响 ,光动力学组 2 0mW/cm2 以下剂量激光对细胞增殖无明显影响 ,30mW/cm2 以上明显抑制细胞增殖 ;30mW/cm2 以下剂量对CFU -GM集落无明显影响。光动力学疗法后细胞培养 2 4h ,CD3+ CD6 9+ 表达明显下降。结论 光动力学疗法在 30mW/cm2 激光照射时可抑制淋巴细胞增殖 ,降低早期活化T细胞表达 ,但不影响骨髓CFU

Rituximab减少SLE患者B淋巴细胞对骨髓粒巨噬细胞集落的抑制作用

目的 :了解不同浓度Rituximab对SLE患者B淋巴细胞、对正常人及SLE患者骨髓粒 巨噬细胞集落形成单位(GM CFU)抑制作用的影响及其机制。方法 :体外用终浓度为 0 1、0 5、1、3、6、9μg ml的Rituximab与SLE患者B淋巴细胞共同加入SLE患者及正常人骨髓GM CFU的培养体系中 ,观察它们对SLE患者及正常人骨髓GM CFU形成的影响 ,用流式细胞仪检测经不同浓度Rituximab处理前后SLE患者B淋巴细胞上的CD2 0表达水平 ,逆转录PCR法检测与终浓度为 9μg mlRitux imab共同孵育前后SLE患者B淋巴细胞的IL 10mRNA与β actin的比值。 结果 :加入终浓度为 0 1、0 5、1、3、6、9μg ml的Ritux imab和SLE患者B淋巴细胞后 ,正常人骨髓GM CFU产率分别为 180± 37、2 0 0± 5 4、2 2 6± 4 5、2 4 8± 71、2 5 1± 5 6、2 5 8± 6 6个 10 5细胞 ,与不加Rituximab和SLE患者B淋巴细胞的正常人骨髓GM CFU产率 (2 5 6± 80个 10 5细胞 )比较 ,前二组P <0 0 5 ,后四组P >0 0 5 ,与仅加入SLE患者B淋巴细胞的正常人骨髓GM CFU产率 (199± 92个 10 5细胞 )对比 ,前二组P >0 0 5 ,后四组P <0 0 5。加入以上 6种相同浓度的Rituximab和SLE患者B淋巴细胞后 ,SLE患者骨髓GM CFU产率分别为 119± 71、116±78、177± 6 8、2 0 2± 4 9、

当归多糖促进5-氟尿嘧啶作用后小鼠应激性红细胞发生

目的探讨当归多糖(Angelica sinensis polysaccharide,ASP)拮抗5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)对小鼠脾脏应激性红细胞发生的影响及其相关机制。方法选取6~8周龄的C57BL/6J小鼠,雌雄各半,分为对照组、ASP组、5-FU组、ASP+5-FU组。记录建模时期小鼠体质量,血细胞计数仪分析外周血常规;观察脾脏组织切片病理学改变;计算脾指数;台盼蓝染色法计数小鼠股骨骨髓单个核细胞及脾细胞数;分离培养及计数脾脏单个核细胞爆氏红系集落形成单位;流式细胞术检测F4/80+脾巨噬细胞数量;qRT-PCR检测脾脏黏附分子基因Emp,铁转运基因Hmox-1、Trf、Fpn、TrfR以及核内吞基因Tim4、MerTK表达水平。结果ASP部分逆转5-FU致伤小鼠体质量、红细胞数量、血红蛋白含量和红细胞压积、骨髓单个核细胞数量下降;ASP增大脾脏体积、提升脾指数、红髓面积、脾细胞数量,促进脾脏BFU-E形成;ASP拮抗5-FU,维持F4/80+脾巨噬细胞数量,促进Emp、Hmox-1、Trf、Fpn、TrfR、Tim4及MerTK基因表达。结论ASP通过保护脾脏幼红细胞岛中央巨噬细胞数量及功能,促进小鼠脾脏应激性红细胞发生。

Graves病粒细胞减少患者骨髓CFU-GM生长的研究

目的 :体外研究Graves病 (GD)患者骨髓CFU -GM的生长情况。方法 :11名正常对照 ,16名GD患者(11名为白细胞减少 ,5名为粒细胞缺乏 ) ,进行外周血检测 ,骨髓检查和CFU -GM的体外培养。结果 :GD粒细胞缺乏患者CFU -GM体外生成率显著低于正常对照组 ,而白细胞减少组患者CFU -GM的生成率与对照组比较无显著差异。结论 :GD患者出现白细胞减少时 ,虽然外周血中白细胞数目和粒细胞比例已明显降低 ,但处于这一时期的患者骨髓尚有一定的代偿能力。在粒细胞缺乏阶段 ,骨髓功能受到严重影响 ,CFU -GM明显减少。

GM-CSF对重症急性胰腺炎患者单核细胞功能状态的影响

用流式细胞仪测定30例重症急性胰腺炎(SAP)患者和20例健康成年人的外周血单核细胞人类白细胞抗原DR(HLA-DR)表达率,双抗夹心酶联免疫吸附法检测其体外培养的单核细胞分泌的肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,部分患者在常规给药同时加用粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。结果显示,SAP患者单核细胞HLA-DR表达、TNF-α水平均明显低于正常对照组(P<0.05),且两者呈正相关。应用GM-CSF可上调SAP患者HLA-DR表达及TNF-α水平,降低死亡率及感染率。

灵芝复方对人正常骨髓粒单系造血祖细胞及HL-60细胞增殖的影响

以往研究发现灵芝复方(GLC)在一定浓度范围内能促进小鼠正常骨髓粒单系集落形成单位(CFU-GM)增殖,并对小鼠白血病细胞系 WEHI-3细胞集落生长呈剂量依赖性抑制。为进一步了解灵芝复方的骨髓保护及抗白血病作用,为其临床应用奠定基础,本研究以人正常骨髓细胞、人急性髓系白血病细胞系HL-60细胞为研究对象,进行了较系统的研究。材料与方法1 材料1.1 标本肋骨来自湖南医科大学湘雅医院、湖南医科大学附属第二医院非血液病胸外手术患者。1.2 细胞系 HL-60细胞系由北京军事医学科学院提供,

Graves病合并白细胞减少患者血清对骨髓细胞粒-单核细胞系集落形成单位生长的影响

目的 探讨Graves病 (GD)患者血清成分对骨髓细胞粒 单核细胞系集落形成单位 (GM CFU)生长的影响。方法 对 11名正常人和 11例GD合并白细胞减少患者的骨髓细胞进行体外培养 ,观察他巴唑、甲状腺素、甲状腺刺激免疫球蛋白 (TSI)和GD患者血清对GM CFU生长的影响。结果 TSI和GD合并白细胞减少患者的血清对正常人和GD合并白细胞减少患者的骨髓GM CFU集落生长有抑制作用 (P <0 .0 1) ,他巴唑、甲状腺素和GD白细胞正常患者的血清对正常人和GD白细胞减少患者的骨髓GM CFU集落生长无明显影响 (P >0 .0 5 )。结论 TSI和GD合并白细胞减少患者的血清能明显抑制GM CFU的生长 。

胎盘血移植特性的研究——Ⅰ.人胎盘血粒单系祖细胞体外长期培养观察

本文采用体外甲基纤维素长期培养观察脐血(又称胎盘血)粒单系集落形成单位(CFU—GM)生长情况。结果:脐血(n=20)7、14、21、28天CFU—GM产率分别为28.78±37.82、143.30±168.64、286.40±497.00、107.93±131.98/2×10~5,35天(n=13)为93.27±111.20,42天(n=6)为68.67±103.30/2×10~5;14、21、28天脐血与7天骨髓的产率(180.91±134.07)无明显差异(P>0.05)。正常骨髓CFU-GM产率:14天(n=11)、21天(n=9)、28天(n=6)分别为115.14±87.85、59.81±68.05、25.00±20.45/2×10~5,14天集落产率开始下降,21天后明显减少;14天后集落脐血明显大于骨髓,细胞>1000个细胞,有些特大集落,>5000个细胞;脐血集落细胞于35天开始部分溶解(骨髓为14天,21天时多已完全溶解)。可见脐血造血细胞体外培养维持时间明显长于骨髓造血细胞(4～6^+周/3周~±),表明脐血造血细胞的生物学特性不同于骨髓造血细胞——富含扩增潜能更强、可维持长期造血重建的早期造血干细胞群。

α-半乳糖神经鞘氨醇对自然杀伤T细胞的激活作用

目的 研究α 半乳糖神经鞘氨醇KRN70 0 0与白细胞介素 15 (IL 15 )、粒 单核细胞集落刺激因子(GM CSF)对自然杀伤T细胞的激活作用。方法 采集健康儿童外周血T细胞 ,与同一个体外周血树突细胞共同培养。在培养体系中分别加入KRN70 0 0和 (或 )细胞因子 (IL 15 +GM CSF)。并检测各组T细胞增殖程度变化 ,NKT/T比例 ;并分选出非杀伤T细胞 ,分别测定各组NKT细胞对肿瘤细胞系的杀伤作用。结果 KRN70 0 0刺激组、细胞因子刺激组和共刺激组T细胞增殖程度 ,NKT/T比例高于其他各组 ;各组NKT细胞对多个肿瘤细胞系均有杀伤作用 (效∶靶为 2 0∶ 1和 10∶ 1) ,共剌激NKT细胞细胞毒作用高于其他组。结论 KRN70 0 0可有效促进NKT细胞增殖 ,激活NKT细胞发挥抗肿瘤作用。IL 15、GM CSF与KRN70 0

人GM-CSF受体β亚单位胞质域对配体内在化的影响

为了探索人GM-CSF受体(GM-CSF R)β亚单位胞质域对配体诱导的内在化的影响,通过PCR扩增技术,构建了β亚单位胞质域缺失突变子1441,1582,1726,2354和Sma,然后将野生型或突变型β亚单位和GM-CSF Rβ亚单位cDNA共转染入COS-7细胞,并对转染细胞的配体结合与受体内在化进行了检测。结果表明,表达GM-CSF Rα的COS细胞仅能以低亲和力方式与配体结合,其内在化水平仅为结合配体的7％,而GM-CSF Rα/β共表达的COS细胞则能以高亲和力方式与配体结合,内在化水平达37％,为前者的5倍,提示高水平的内在化需要高亲和结合力的功能受体存在;β亚单位胞质域对内在化有正或负调节作用,缺失β亚单位C末端122个氨基酸可使内在化受抑,而缺失该122个氨基酸上游的300个氨基酸区域,则可使内在化水平显著提高,提示这些区域含有调节内在化过程的序列。有效的配体内在化可被丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂H-7和星形孢菌素抑制,但不被酪氨酸激酶抑制剂木黄酮和制表菌素所抑制,提示酪氨酸激酶磷酸化并不涉及GM-CSF受体诱导的内在化。

1，25-(OH)2D3在促进大鼠外周血间充质干细胞扩增中的作用

目的:探讨大鼠外周血中是否存在非黏附间充质干细胞(MSCs)以及1,25-(OH)2D3能否刺激它们形成成纤维细胞集落形成单位(CFU-f)。方法:从大鼠外周血中分离单核粒细胞(PBMGC)组份,在缺乏和添加10-8mol/L1,25-(OH)2D3条件下进行贴壁培养。培养至4天和8天时,将未贴壁细胞转移到新的培养皿中继续培养,即:"pour-off"培养,培养16天形成的细胞进行亚甲基蓝染色,计数CFU-f数目,并对4天"pour-off"培养形成的细胞进行免疫细胞化学染色。结果:PBMGC培养及4天和8天非黏附PBMGC培养都能形成CFU-fs,而1,25-(OH)2D3能够明显地促进它们形成CFU-f。非黏附细胞形成的克隆表达波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅲ型胶原,而不表达Ⅰ型胶原。结论:大鼠外周血中存在非黏附MSCs,在体外培养能够形成CFU-fs,而1,25-(OH)2D3具有促进外周血MSC扩增的作用。

不同培养体系对脐血造血干细胞粒细胞-巨噬细胞集落形成单位的影响

目的比较H4534与GF-H4434两种甲基纤维素培养基对脐血生成粒细胞-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)的影响。方法从新鲜脐血标本中分离出造血干细胞,接种于H4534和GF-H4434培养基,于37℃、5%二氧化碳饱和湿度条件下培养14～16d。结果在样本中CD34+细胞百分率和有核细胞总数检测结果相似的情况下,H4534与GF-H4434培养条件下CFU-GM集落数分别为(55.71±28.24)/105与(66.28±31.99)/105,两者比较差异有统计学意义(u=4.16,P<0.05)。GF-H4434培养条件下还产生了红细胞爆裂型集落形成单位(64.89±34.95)/105和粒细胞-红细胞-巨噬细胞-单核细胞集落形成单位(2.53±2.08)/105。结论 GF-H4434甲基纤维素培养基中脐血样本CFU-GM集落形成能力更强,更适合脐血质量鉴定。