BXSB狼疮鼠骨髓粒-巨噬细胞集落形成单位异常与发病的关系

目的 :研究 BXSB自发性狼疮鼠骨髓粒 -巨噬细胞系的增殖情况与狼疮发病的关系。方法 :雄性 BXSB小鼠按 4、 8、 12、 16及 2 0周龄分组 ,每组 6只 ,采用甲基纤维素半固体培养方法体外培养骨髓单个核细胞(BMMC) ,计数粒 -巨噬细胞集落形成单位 (CFU - GM)及小鼠外周血单核细胞 (PBMC) ,并检测尿蛋白。相同周龄的 C5 7BL小鼠作为正常对照组。结果 :12周龄雄性 BXSB小鼠尿蛋白 (+) ,2 0周龄时尿蛋白 ( ) ,4、 8周龄 BXSB小鼠及各周龄 C5 7BL小鼠尿蛋白 (- )。 8周龄雄性 BXSB小鼠骨髓 CFU - GM为 (96 .0 0± 18.11) / 2×10 5BMMC,PBMC计数为 (111.33± 10 .97)× 10 6· L- 1 ,均明显高于 4周龄 BXSB小鼠及正常 C5 7BL 小鼠(P<0 .0 5 ) ,随着周龄增加 ,CFU- GM和 PBMC进一步增多。结论 :BXSB小鼠粒 -巨噬细胞系造血异常及外周血单核细胞增多参与了自身免疫疾病的发病过程。

GW003对骨髓细胞体外形成粒-巨噬细胞集落能力的影响

本研究旨在观察重组人血清白蛋白-粒细胞集落刺激因子融合蛋白(GW003)对骨髓造血细胞体外形成粒系集落能力的影响。分别抽取正常恒河猴、缓解期和化疗中ALL患者骨髓并分离有核细胞,分别加入系列浓度的GW003、吉粒芬、G-CSF突变体,在培养12 d后计数粒-巨噬细胞系集落(CFU-GM)。结果表明,GW003具有提高正常恒河猴骨髓有核细胞体外形成CFU-GM的能力,效果明显优于相同摩尔浓度的吉粒芬及G-CSF突变体;在一定的浓度范围内,GW003浓度与恒河猴骨髓细胞形成CFU-GM的数量呈明显的剂量效应关系(r=R2=0.965,P=0.003);GW003能提高ALL患者骨髓细胞粒系集落体外形成能力,对化疗中患者的效果更为显著,可有效缓解化疗引起的骨髓抑制。结论:GW003可显著提高骨髓细胞体外形成粒细胞集落的能力,可有效缓解骨髓抑制。

阵发性睡眠性血红蛋白尿症病人骨髓粒-巨噬细胞系祖细胞的特点

阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)是后天的细胞膜缺陷性疾病。这种缺陷累及红细胞、粒细胞和血小板,还累及骨髓造血祖细胞。本实验采用造血祖细胞体外培养技术研究PNH病人骨髓粒-巨噬细胞系祖细胞(CFU—GM)的增殖能力;骨髓细胞经新鲜酸化AB型血清处理后培养的CFU—GM的增殖能力;以及CFU—GM对粒-巨噬细胞系集落刺激因子(GM—CSF)的反应能力。

Rituximab减少SLE患者B淋巴细胞对骨髓粒巨噬细胞集落的抑制作用

目的 :了解不同浓度Rituximab对SLE患者B淋巴细胞、对正常人及SLE患者骨髓粒 巨噬细胞集落形成单位(GM CFU)抑制作用的影响及其机制。方法 :体外用终浓度为 0 1、0 5、1、3、6、9μg ml的Rituximab与SLE患者B淋巴细胞共同加入SLE患者及正常人骨髓GM CFU的培养体系中 ,观察它们对SLE患者及正常人骨髓GM CFU形成的影响 ,用流式细胞仪检测经不同浓度Rituximab处理前后SLE患者B淋巴细胞上的CD2 0表达水平 ,逆转录PCR法检测与终浓度为 9μg mlRitux imab共同孵育前后SLE患者B淋巴细胞的IL 10mRNA与β actin的比值。 结果 :加入终浓度为 0 1、0 5、1、3、6、9μg ml的Ritux imab和SLE患者B淋巴细胞后 ,正常人骨髓GM CFU产率分别为 180± 37、2 0 0± 5 4、2 2 6± 4 5、2 4 8± 71、2 5 1± 5 6、2 5 8± 6 6个 10 5细胞 ,与不加Rituximab和SLE患者B淋巴细胞的正常人骨髓GM CFU产率 (2 5 6± 80个 10 5细胞 )比较 ,前二组P <0 0 5 ,后四组P >0 0 5 ,与仅加入SLE患者B淋巴细胞的正常人骨髓GM CFU产率 (199± 92个 10 5细胞 )对比 ,前二组P >0 0 5 ,后四组P <0 0 5。加入以上 6种相同浓度的Rituximab和SLE患者B淋巴细胞后 ,SLE患者骨髓GM CFU产率分别为 119± 71、116±78、177± 6 8、2 0 2± 4 9、

肾上腺素影响小鼠粒巨噬系祖细胞生长的实验研究

目的 :了解肾上腺素 (Adrenaline ,Adr)对小鼠粒巨噬系祖细胞的影响。方法 :在体外半固体培养的粒 巨噬系集落形成单位 (ColonyFormUnit GranulocyteandMacrophage ,CFU GM )中加入不同浓度的Adr后 ,计数集落数 ,并与阴性对照组比较。结果 :Adr浓度在 10 -6～ 10 -10 mol/ml范围内 ,CFU GM集落数与对照组相比 ,P >0 .0 5 ;Adr浓度为10 -5mol/ml时 ,P <0 .0 5 ;Adr浓度为 10 -4 mol/ml时 ,培养体系中没有CFU CM形成。结论 :高浓度Adr可抑制CFU GM在体外的生长 。

当归多糖促进5-氟尿嘧啶作用后小鼠应激性红细胞发生

目的探讨当归多糖(Angelica sinensis polysaccharide,ASP)拮抗5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)对小鼠脾脏应激性红细胞发生的影响及其相关机制。方法选取6~8周龄的C57BL/6J小鼠,雌雄各半,分为对照组、ASP组、5-FU组、ASP+5-FU组。记录建模时期小鼠体质量,血细胞计数仪分析外周血常规;观察脾脏组织切片病理学改变;计算脾指数;台盼蓝染色法计数小鼠股骨骨髓单个核细胞及脾细胞数;分离培养及计数脾脏单个核细胞爆氏红系集落形成单位;流式细胞术检测F4/80+脾巨噬细胞数量;qRT-PCR检测脾脏黏附分子基因Emp,铁转运基因Hmox-1、Trf、Fpn、TrfR以及核内吞基因Tim4、MerTK表达水平。结果ASP部分逆转5-FU致伤小鼠体质量、红细胞数量、血红蛋白含量和红细胞压积、骨髓单个核细胞数量下降;ASP增大脾脏体积、提升脾指数、红髓面积、脾细胞数量,促进脾脏BFU-E形成;ASP拮抗5-FU,维持F4/80+脾巨噬细胞数量,促进Emp、Hmox-1、Trf、Fpn、TrfR、Tim4及MerTK基因表达。结论ASP通过保护脾脏幼红细胞岛中央巨噬细胞数量及功能,促进小鼠脾脏应激性红细胞发生。

不同培养体系对脐血造血干细胞粒细胞-巨噬细胞集落形成单位的影响

目的比较H4534与GF-H4434两种甲基纤维素培养基对脐血生成粒细胞-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)的影响。方法从新鲜脐血标本中分离出造血干细胞,接种于H4534和GF-H4434培养基,于37℃、5%二氧化碳饱和湿度条件下培养14～16d。结果在样本中CD34+细胞百分率和有核细胞总数检测结果相似的情况下,H4534与GF-H4434培养条件下CFU-GM集落数分别为(55.71±28.24)/105与(66.28±31.99)/105,两者比较差异有统计学意义(u=4.16,P<0.05)。GF-H4434培养条件下还产生了红细胞爆裂型集落形成单位(64.89±34.95)/105和粒细胞-红细胞-巨噬细胞-单核细胞集落形成单位(2.53±2.08)/105。结论 GF-H4434甲基纤维素培养基中脐血样本CFU-GM集落形成能力更强,更适合脐血质量鉴定。

重组血小板生成素对再生障碍性贫血患者巨核祖细胞的作用

应用重组血小板生成素(rTpo)对17例再生障碍性贫血(AA)患者进行CFU-MK和CFU-GM培养。研究结果表明:①Tpo 10ng/ml为CFU-MK培养的最佳浓度;②AA患者CFU-GM和CFU-MK增殖均明显低于正常人,P<0.001;③AA患者CFU-MK增殖较CFU-GM更低(CFU-MKx 3.2,CFU-GMx 17.5);④Tpo对骨髓小剂量照射后CFU-MK的增殖有促进恢复,对血小板的减少起到积极预防作用。

人GM-CSF受体β亚单位胞质域对配体内在化的影响

为了探索人GM-CSF受体(GM-CSF R)β亚单位胞质域对配体诱导的内在化的影响,通过PCR扩增技术,构建了β亚单位胞质域缺失突变子1441,1582,1726,2354和Sma,然后将野生型或突变型β亚单位和GM-CSF Rβ亚单位cDNA共转染入COS-7细胞,并对转染细胞的配体结合与受体内在化进行了检测。结果表明,表达GM-CSF Rα的COS细胞仅能以低亲和力方式与配体结合,其内在化水平仅为结合配体的7％,而GM-CSF Rα/β共表达的COS细胞则能以高亲和力方式与配体结合,内在化水平达37％,为前者的5倍,提示高水平的内在化需要高亲和结合力的功能受体存在;β亚单位胞质域对内在化有正或负调节作用,缺失β亚单位C末端122个氨基酸可使内在化受抑,而缺失该122个氨基酸上游的300个氨基酸区域,则可使内在化水平显著提高,提示这些区域含有调节内在化过程的序列。有效的配体内在化可被丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂H-7和星形孢菌素抑制,但不被酪氨酸激酶抑制剂木黄酮和制表菌素所抑制,提示酪氨酸激酶磷酸化并不涉及GM-CSF受体诱导的内在化。

造血基质细胞的调节与细胞系的分离

本成果第一部份内容系应用有限稀释法和加人生长刺激因子在国际上首次从原代骨髓细胞中培养出纯纤维母细胞集落、纯内皮细胞集落和纯巨噬细胞集落,直接证明了骨髓纤维母细胞集落形成单位(CFU-F)中的三种细胞混杂存在是来自细胞系的污染。

粒-巨噬细胞集落刺激因子及其受体拮抗剂mavrilimumab在类风湿关节炎中研究进展

RA是一种系统性慢性自身免疫性疾病,以持续侵蚀性的炎症性多关节炎为主要临床表现,除关节外,也可累及肺、心脏、皮肤等其他脏器,如果没有得到合理的治疗,将导致关节毁损和瘫痪,生活质量下降和寿命缩短.粒-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF）是一种具有多效性的造血细胞生长因子,在粒细胞系与巨噬细胞系的发育与成熟的各阶段起到调控作用.近年研究表明GM-CSF在炎症反应与自身免疫疾病中有重要作用,GM-CSF参与RA发病,而其受体拮抗剂mavrilimumab能够拮抗GM-CSF信号传导,显著改善关节炎小鼠的症状.为此,本文将综述GM-CSF及其受体拮抗剂mavrilimumab在RA治疗中的研究进展.

银屑病患者骨髓造血细胞体外增殖活性研究

目的进一步了解银屑病患者骨髓造血细胞是否有异常。方法采用密度梯度离心法分离银屑病患者及正常对照组骨髓单一核细胞,然后在含有甲基纤维素的半固体细胞因子培养体系中进行体外高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)、粒-巨噬细胞系集落形成单位(CFU-GM)及红系集落形成单位(CFU-E)集落形成实验,培养一定时期后计数集落。结果与正常对照比较,银屑病患者的HPP-CFC及CFU-GM的集落形成数显著减少,而CFU-E形成的集落数无统计学意义。结论银屑病患者骨髓造血细胞体外增殖能力明显降低,这种异常的造血细胞可能在银屑病的免疫发病机制中发挥一定作用。

重型再生障碍性贫血患者免疫抑制治疗后骨髓造血祖细胞水平的变化及其意义

为更好地评价重型再生障碍性贫血(SAA)患者免疫抑制治疗(IST)后骨髓造血功能恢复程度,采用造血祖细胞体外培养技术,动态观察了48例接受IBT的SAA患者及20例正常对照者骨髓晚期红系爆式集落形成单位(mBFU-E)及粒-巨噬系集落形成单位(CFU-GM)的水平变化。结果表明,IST前所有SAA患者骨髓mBFU-E及CFU-GM水平均显著低于正常对照组(P<0.001);IST后1年,29例有效者骨髓mBFU-E及CFU-GM水平显著增高,增高程度与其临床疗效相关;12例mBFU-E及10例CFU-GM水平恢复正常,其中8例患者mBFU-E及CFU-GM水平同时恢复正常。这表明SAA确是一组异质性疾病,其造血功能衰竭与异常免疫关系密切,若去除这种异常,造血功能可获得部分甚至完全重建。

多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞冻存前后的生物学特性

背景:多发性骨髓瘤患者的骨髓间充质干细胞具有多向分化、免疫调节和支持造血作用,但是这些功能是否受冻存的影响目前尚不清楚。目的:探讨冻存对多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞生物学特性的影响。方法:采用细胞贴壁法获取多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞,将传代后的细胞用IMDM细胞冻存液(含10%的二甲基亚砜和体积分数40%的胎牛血清)保存在-196℃液氮中。检测短期(1个月)和长期(12个月)冻存复苏后间充质干细胞的活性和增殖能力;将冻存后多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞作为滋养层,应用甲基纤维素半固体培养,检测其支持造血的能力;混合淋巴细胞反应检测冻存后多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞调控免疫能力。结果与结论:经过短、长期冻存后多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞的细胞活性分别为(92.9±7.5)%和(86.7±9.2)%;短、长期冻存后细胞的增殖能力与冻存前间充质干细胞相似;冻存后多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞仍具有支持造血祖细胞生长的作用和抑制T淋巴细胞增殖的能力,与冻存前相比,没有明显差别。说明冻存可以降低多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞的细胞活性,但是并不影响间充质干细胞的增殖、支持造血和免疫调节的能力。

低浓度STI571提高β1整合素介导的Ph(+)慢性髓性白血病髓系祖细胞增殖抑制

为探讨ABL酪氨酸激酶特异性抑制剂STI5 71(CGP5 7148B)对Ph(+ )慢性髓性白血病(CML)的疗效机制 ,观察了STI5 71预处理 (0 .1μmol/L× 30 - 60min)前后 β1整合素活化剂及纤连蛋白 (FN)单独或联合作用以及STI5 71预处理本身对正常及CML粒巨噬系集落形成单位(CFU GM )的影响 ,并结合阻断实验观察了VLA 4及VLA 5整合素在其中的作用。结果显示 :①STI5 71预处理、β1整合素活化剂单独或联合作用或FN单独作用对CML及正常CFU GM均无明显抑制作用 ,STI5 71预处理对活化剂或FN的作用也无直接影响 ;② β1整合素活化剂 +FN对CMLCFU GM抑制作用明显低于对正常CFU GM的作用 ;③经STI5 71预处理后 ,活化剂 +FN对CMLCFU GM抑制作用明显提高达正常水平 ;④阻断VLA4 +VLA5整合素或总 β1整合素可阻断STI5 71的上述作用。研究结果提示STI5 71提高Ph(+ )CML祖细胞

海藻糖深低温保存外周血造血干细胞的可行性

背景:二甲基亚砜是目前造血干细胞深低温保存的经典保护剂,但其对细胞和患者均有一定的毒副作用。海藻糖是一种稳定的无毒副作用的非还原性双糖,已被广泛应用于红细胞、血小板和胚胎等的冷冻保存中。目的:探讨海藻糖作为低温保存造血干细胞保护剂的可行性。方法:外周血造血干细胞经重组人集落刺激因子动员后,用血细胞分离机采集连续单个核细胞,分为0.5mol/L海藻糖组、1.0mol/L海藻糖组、对照组。采用程序降温法液氮保存,冻存7d后取出,立即置于40℃水浴箱内复苏。锥虫蓝拒染法检测细胞存活率;采用甲基纤维素半固体培养体系进行集落培养,计数粒-巨噬细胞集落形成单位的回收率;采用CD34-PE/CD45-FITC双标法,流式细胞仪检测CD34+细胞回收率。结果与结论:与对照组比较,0.5,1.0mol/L海藻糖组细胞存活率、粒-巨噬细胞集落形成单位回收率、CD34+细胞回收率均明显升高(P<0.001),且0.5mol/L海藻糖组升高幅度尤为显著(P<0.001或P<0.01)。证实海藻糖对于短期内低温冻存的外周血造血干细胞有一定保护作用,浓度为0.5mol/L的海藻糖保护冻存的造血干细胞效果较佳。

用CFU-GM Do值推断人体辐射敏感性

本文研究了动物与人体CFU-GM辐射敏感性与整体辐射敏感性的关系。结果表明,给小鼠全身1次照射不同剂量后取骨髓培养CFU-GM,与体外直接照射骨髓细胞的结果相比较,它们的D_O值分别为1.33Gy和1.23Gy,二者十分相近。通过对小鼠与人体各个个体CFU-GM辐射敏感性的测定,它们的D_O值差异很大,最大值与最低值相差2倍多。在慢性粒细胞白血病病人经全身^(60)Coγ—射线照射治疗的经过中,以及在骨髓移植的病例中,都观察到CFU-GM D_0值的大小能反映出全身照射后的辐射效应。

特发性血小板减少性紫癜骨髓造血干细胞的功能及与疗效的关系

目的:探讨特发性血小板减少性紫癜(idiopathicthrombocytopenicpurpura,ITP)患者骨髓造血干细胞的增殖分化功能,并从巨核细胞集落形成单位的数量和血小板上升的幅度探讨两者之间的疗效关系。方法:用甲基纤维素半固体培养ITP患者粒-巨噬细胞集落形成单位、红系集落形成单位、巨核细胞集落形成单位,观察巨核细胞集落形成单位与血小板上升平均值的关系。结果:ITP患者骨髓粒-巨噬细胞集落、红系集落形成单位、巨核细胞集落形成单位集落数低于正常对照组,粒-巨噬细胞集落数及丛落数高于正常对照组,巨核细胞数大于5/高倍视野的ITP患者其巨核细胞数与血小板上升无关,巨核细胞集落形成单位与血小板上升平均值有关。结论:ITP患者骨髓造血干细胞增殖分化功能异常,提示ITP可能是造血干细胞异常的疾病。ITP的巨核细胞集落形成单位与血小板上升幅度有关,巨核细胞集落形成单位可以预测ITP的治疗效果。

人白细胞介素3基因克隆、表达及产物的功能研究

人白细胞介素3(IL-3)作用于早期造血并具有广谱效应。为了制备足量高纯度的IL-3,本研究利用分子遗传学技术构建了三株重组IL-3表达菌株,其中一株表达水平为16％。菌体裂解物对人粒-巨噬系祖细胞有刺激增生的作用;对小鼠早期与晚期红系祖细胞亦有刺激作用,对晚期的作用强;但是对小鼠粒-巨噬系祖细胞无刺激作用,提示人IL-3的造血刺激作用可能具有种属特异性。