壁虎粗多肽诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的机制研究

目的:体外实验研究壁虎粗多肽(Gecko Crude Peptides,GCPS)诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的机制。方法:采用MTT法检测GCPS对肝癌细胞HepG2增殖的影响;采用Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡的形态学改变,western-blot检测BAX和BCL-2蛋白的表达,观察壁虎粗多肽对人肝癌细胞凋亡的影响。结果:GCPS可以抑制肝癌细胞HepG2增殖,作用呈浓度和时间依赖性,其IC50为1.2 mg/mL;在GCPS的作用下,HepG2呈凋亡形态学改变,且GCPS(1.6 mg/mL、0.8 mg/mL)可以降低bcl-2的表达,升高蛋白bax的表达。结论:GCPS对HepG2细胞有增殖抑制作用,诱导其凋亡是其作用机理之一。

文蛤粗多肽对免疫抑制小鼠TNF-α,IL-2及IFN-γ的影响

目的:研究文蛤粗多肽的免疫药理活性,为后期产品开发提供研究基础。方法:取雄性KM小鼠50只,随机分为5组:空白组、模型组、左旋咪唑组(1.0 mg/kg)、文蛤粗多肽高剂量组(200 mg/kg)、文蛤粗多肽低剂量组(100 mg/kg),每组10只。灌胃给药,每日1次,连续给药30 d,灌胃体积为0.2 ml/10 g BW。同时,除空白组外,其余各组小鼠每隔2日灌服地塞米松(DXM,1.5 mg/kg)1次进行免疫抑制造模,共15次。末次灌胃6 h后,称重,摘眼球取血,脱颈椎处死小鼠,并取脏器,测定免疫器官指数与血清中TNF-α,IL-2与IFN-γ的变化。结果:文蛤粗多肽对免疫抑制小鼠胸腺指数、脾脏指数与体重具有明显增加作用(P<0.05);并可明显升高免疫抑制小鼠血清中TNF-α、IL-2与IFN-γ的水平(P<0.05)。结论:文蛤粗多肽对地塞米松造成的免疫抑制小鼠具有免疫增强作用。

壁虎粗多肽对3种消化道肿瘤细胞的体外抑制作用

目的探讨壁虎粗多肽(GCPS)对消化道肿瘤细胞体外增殖的抑制作用。方法用不同浓度(0.375、0.75、1.0、1.5、3.0 mg/mL)的GCPS处理食管癌细胞EC109、肝癌细胞HepG2和胃癌细胞MGC803,于24、48、72 h后倒置显微镜下观察细胞形态变化,并使用MTT法观察GCPS对3种人消化道肿瘤细胞增殖的影响。结果与空白对照组比较,在倒置显微镜下可观察到GCPS作用24、48、72 h后的细胞形态有不同程度的改变。MTT法结果显示GCPS具有抑制人消化道肿瘤细胞增殖作用,且作用呈浓度和时间依赖性;48 h后GCPS作用于上述3种细胞的IC50为1.1、1.2和1.6 mg/mL。结论壁虎粗多肽可抑制HepG2、EC109和MGC803这3种消化道肿瘤细胞增殖。

壁虎粗多肽诱导食管癌KYSE450细胞凋亡机制研究

目的研究壁虎粗多肽(GCP)体外对食管癌KYSE450细胞的增殖抑制作用。方法取对数生长期细胞,种板,用不同浓度的(0.10,0.15,0.20,0.25,0.30,0.35,0.4,0.45,0.50,0.55,0.6 mg·mL^(-1))GCP处理KYSE450细胞24,48,72 h,通过噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞增殖,根据MTT结果,将实验分组为空白组(0)和低、中、高3个浓度(GCP:0.1,0.15,0.22 mg·mL^(-1))实验组与对照组(10μg·mL^(-1)阿霉素)。以免疫印迹法检测GCP对KYSE450细胞内B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)蛋白表达的影响。结果 GCP处理KYSE450细胞24,48,72 h后,半数抑制浓度(IC_(50))值分别为0.32,0.28,0.24 mg·mL^(-1)。空白组和低、中、高3个浓度实验组与对照组的Bax与Bcl-2灰度比值平均分别为(23.83±0.07)%,(51.08±0.78)%,(148.26±6.19)%,(329.33±4.44)%,(115.84±0.26)%;这5组的Caspase-9与甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)灰度比值平均分别为(14.81±1.05)%,(20.91±1.24)%,(39.61±1.89)%,(43.68±1.13)%,(39.82±0.69)%;这5组的Caspase-3与GAPDH灰度比值平均分别为(6.37±0.51)%,(10.97±0.50)%,(13.44±0.49)%,(17.03±0.49)%,(8.63±0.42)%。以上各项指标,与空白组比较差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 GCP可抑制KYSE450细胞增殖并诱导其凋亡,其机制与Caspase依赖性途径有关。

壁虎粗多肽对SH-SY5Y细胞增殖和凋亡的影响

目的研究壁虎粗多肽(GCPs)对人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞增殖、凋亡能力的影响。方法用不同浓度GCPs(0,0.08,0.12,0.16,0.20,0.24,0.32 mg·mL^(-1))分别处理SH-SY5Y细胞24,48,72 h,用噻唑蓝(MTT)比色法检测SH-SY5Y细胞增殖能力的变化,根据MTT结果分组。将SH-SY5Y细胞分为空白组和低、中、高剂量实验组(GCPs:0,0.12,0.16,0.20 mg·mL^(-1))。用流式细胞仪检测SH-SY5Y细胞的凋亡率,用Hoechst 33258荧光染色检测细胞核变化,用蛋白质印迹法检测胱天蛋白酶-3(Caspase-3)和Caspase-9蛋白的表达水平。结果GCPs作用SH-SY5Y细胞24,48,72 h的半数抑制浓度(IC_(50))值分别为(0.23±0.01),(0.20±0.01)和(0.17±0.01)mg·mL^(-1)。空白组和低、中、高剂量实验组的细胞凋亡率分别为(10.21±0.73)%,(20.93±2.07)%,(32.90±1.07)%和(57.71±8.51)%,低、中、高剂量实验组的凋亡率与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在荧光显微镜下观察,低、中、高剂量实验组蓝色荧光分布不均,细胞核缩小,有较强荧光团出现。空白组和低、中、高剂量实验组的Caspase-3与GAPDH灰度值比值分别为0.25±0.05,0.43±0.06,0.52±0.07和0.59±0.06,低、中、高剂量实验组与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01);Caspase-9与GAPDH灰度值比值分别为0.17±0.01,0.19±0.02,0.23±0.02和0.26±0.02,高剂量实验组与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论GCPs可抑制SH-SY5Y细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与激活Caspase凋亡途径相关。

壁虎粗多肽对肝癌HepG2细胞增殖及自噬相关蛋白表达的影响

目的观察壁虎粗多肽对肝癌HepG2细胞增殖及自噬相关蛋白表达的影响。方法低、中、高剂量实验组肝癌HepG2细胞分别予以0.15,0.30,0.45mg·mL-1壁虎粗多肽处理,对照组细胞则予以等量0.9%氯化钠。噻唑蓝(MTT)法检测HepG2细胞增殖抑制情况,用蛋白免疫印迹法检测自噬相关蛋白表达情况。结果给药72h后,低、中、高剂量实验组的增殖抑制率分别为(23.16±2.17)%,(51.24±2.28)%,(89.59±2.94)%,组间比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组及低、中、高剂量实验组的微管轻链Ⅰ蛋白3-Ⅱ型(LC3Ⅱ)相对表达量分别为0.43±0.12,0.45±0.11,0.76±0.15,0.87±0.16;Beclin-1蛋白表达量分别为0.41±0.09,0.46±0.12,0.48±0.14,0.91±0.15,中、高剂量实验组的LC3Ⅱ和Beclin-1蛋白分别与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论壁虎粗多肽可有效抑制肝癌HepG2细胞增殖,其作用机制可能与上调自噬相关蛋白表达相关。

猪胰多肽粗品对断奶仔猪生长及血清蛋白质浓度的影响

28日龄的断奶仔猪 39头随机分为 3组 ,每组 13头 ,Ⅰ组为对照组 ,每周每头颈部皮下注射 1 0mLPBS .Ⅱ组、Ⅲ组分别注射 1 0mL不同浓度的猪胰多肽粗品 ,剂量分别为 2、4mg/kg ,观察猪胰多肽粗品对断奶仔猪生长、血清中总蛋白、白蛋白和球蛋白浓度的影响 .结果表明 :(1)试验结束时 ,各组间仔猪体增重无明显差异 ,但用猪胰多肽粗品处理的Ⅱ Ⅲ组仔猪的料重比均低于对照组 .(2 )各组血清总蛋白含量随日龄增长而逐渐升高 ,血清蛋白系数试验组小于对照组 .提示注射一定剂量的猪胰多肽粗品可提高仔猪饲料利用率 ,提高血清球蛋白水平 ,增强仔猪免疫性 。

油菜籽多肽的制备工艺

以油菜籽饼粕为原料,建立碱性蛋白酶酶解菜籽饼粕蛋白的优化工艺,研究透析袋制备油菜籽饼粕粗多肽的工艺。在单因素试验的基础上采用正交试验研究酶解菜籽饼粕蛋白的最优条件,将水解产物透析不同的时间,探究透析时间对油菜籽饼粕粗多肽制备工艺的影响。确定碱性蛋白酶酶解菜籽饼粕蛋白的最适条件为:酶解pH8.0、酶解温度50℃、加酶量1200U/g、酶解时间40min;利用透析袋制备油菜籽饼粕粗多肽条件为:将菜籽饼粕蛋白酶解液浓缩后,按体积比1:6与双蒸水混合,在5℃环境中透析48h,在该条件下,油菜籽饼粕粗多肽的肽氮含量为96.78%,油菜籽饼粕粗多肽占菜籽饼粕蛋白的5.89%。

宣威火腿中抗菌肽的分离、纯化及鉴定

为探究干腌火腿中生物活性多肽的抗菌活性及其组成,选取产自中国云南省曲靖地区的宣威火腿为材料,通过缓冲液浸提的方法提取火腿中的多肽成分。以粗提多肽对单增李斯特菌和O157型大肠杆菌的生长抑制情况为指标进行抗菌性评价,同时结合离子交换色谱、尺寸排阻色谱等技术对宣威火腿粗多肽进行分离与纯化,并选取其中抑菌活性较强的组分进行氨基酸序列测定。抑菌实验发现宣威火腿粗多肽具有显著抑制单增李斯特菌和O157型大肠杆菌生长的效果;经过逐级分离纯化得到的各组分具有不同的抑菌活性。其中组分7活性最强,对大肠杆菌和李斯特菌的抑菌率分别为98%和56%。通过Nano-LC-ESI-MS/MS肽序列鉴定,最终得到抑菌活性较强的多肽序列,分别为QYYNGEEHVRFDSDVGEYR、LRNLPNLEVLDLGTNFI、FASFEAQGALANIAVDK。将鉴定得到的3条多肽化学合成后进行抑菌实验发现,合成多肽均具有较好的抑菌效果,对O157型大肠杆菌的生长抑制效果均显著高于单增李斯特菌。研究结果表明宣威火腿中含有抑菌效果的肽类成分,从而为阐释宣威火腿多肽的功能特征提供理论依据。