粗糠柴毒素在癌症治疗中的抑瘤作用

癌症是全世界人类的一个主要死因,也是国际最为关注的一个公共卫生问题。常见的癌症包括乳腺癌、肺癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌、肝癌等。因此,发现更好的抗癌药物来治疗癌症是非常必要的。粗糠柴毒素(Rottlerin)是一种天然多酚化合物,来源于大戟科植物粗糠柴的成熟果实。已有研究表明,Rottlerin在多种人类癌症中表现出抗肿瘤的特性,表明其可能是治疗癌症的潜在药物,因此本文讨论了有关Rottlerin在癌症中的生物学功能和抑瘤作用。通过进一步开发Rottlerin的药用价值,在未来可应用于人类癌症的潜在治疗。

粗糠柴毒素的非经典抗癌活性研究进展

癌症作为当今世界一个主要的公共卫生问题,其难以被治愈的情况一直未得到有效的解决。粗糠柴毒素(Rottlerin)是一种从大戟科植物中提取出来的天然化合产物,具有多种抗癌生物活性。近些年来的研究已充分证明Rottlerin作为多种激酶、转录因子和信号分子的抑制剂,可控制癌症细胞的存活或死亡。虽然Rottlerin的抗癌活性一直被认为是调控细胞凋亡或自噬,然而最近的研究揭示了其毒性机制的存在。本综述主要介绍Rottlerin能够直接结合和抑制某些关键分子,例如细胞外调节蛋白激酶(ERK)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR),从而独立于上游信号,并通过mTORC1(哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体1)/4EBP-1(真核翻译起始因子4E结合蛋白1)/eIF4E(真核翻译起始因子4E)轴负调控蛋白质的翻译起始阶段,并抑制内质网应激负调控的真核翻译起始因子2(eIF2)的表达。这些全新的机制,已被证实可诱导乳腺癌和皮肤癌细胞系的死亡,极大增加Rottlerin作为开发新型治疗药物的天然先导化合物的潜力。

粗糠柴毒素对SD大鼠抗心肌缺血-再灌注损伤的作用

目的研究粗糠柴毒素对抗心肌缺血-再灌注损伤的作用。方法结扎雄性SD大鼠心脏冠状动脉左前降支40 min造成心肌缺血,剪断结扎线进行120 min再灌注,以此构建心肌缺血-再灌注模型。实验组大鼠缺血处理前给予1μmol/L粗糠柴毒素处理,对照组予生理盐水处理。抽取血液检测血清乳酸脱氢酶(LDH)及肌酸激酶(CK-MB)活性。随后取出心脏并取样,将细胞裂解并离心,对提取物进行Western印迹测定,其中乙醛脱氢酶(ALDH)2磷酸化比例。结果实验组LDH活性(4 079.6±88.3)U/L,对照组(5 703.7±451.9)U/L。实验组CK-MB活性(3 228.5±257.4)U/L,对照组(4 433.4±319.9)U/L。实验组磷酸化ALDH2占总ALDH2比例(0.340±0.032),对照组(0.101±0.037)。两组各指标均存在显著差异(均P<0.05)。结论粗糠柴毒素可显著提升缺血-再灌注心肌的ALDH2磷酸化水平并降低血清LDH和CK-MB水平,诱导心脏保护。ALDH2激活可能参与了粗糠柴毒素的心脏保护作用。

粗糠柴毒素上调微小RNA-204-5p对脂多糖所致心肌损伤的保护机制研究

目的探讨粗糠柴毒素对脂多糖(LPS)所致心肌损伤的影响及其保护机制。方法该研究自2018年9月至2019年4月,用终浓度为10 mg/L的LPS刺激HCM、AC16心肌细胞6 h,分别加入终浓度为0.5μmol/L、1.0μmol/L、1.5μmol/L、2.0μmol/L粗糠柴毒素(Rottlerin)再处理12 h后分别记为LPS+0.5μmol/LRottlerin组、LPS+1.0μmol/LRottlerin组、LPS+1.5μmol/LRottler⁃in组、LPS+2.0μmol/LRottlerin组,以单纯10 mg/LLPS处理的为LPS组,以未经粗糠柴毒素和LPS处理的为对照组。将模拟物阴性对照(miR-NC)、微小RNA-204-5p模拟物(miR-204-5p)、抑制剂阴性对照(anti-miR-NC)、miR-204-5p抑制剂(anti-miR-204-5p)分别转染至未经任何处理的HCM细胞中,记为miR-NC组、miR-204-5p组、anti-miR-NC组、anti-miR-204-5p组。将miR-NC,miR-204-5p转染至单纯10 mg/LLPS处理的HCM细胞中,记为LPS+miR-NC组,LPS+miR-204-5p组。将anti-miR-NC、anti-miR-204-5p、过表达空载体(pcDNA3.1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)过表达载体(pcDNA3.1-HMGB1)转染至2.0μmol/L粗糠柴毒素和10 mg/LLPS处理HCM细胞中,记为LPS+Rottlerin+anti-miR-NC组、LPS+Rottlerin+anti-miR-204-5p组、LPS+Rottlerin+pcD⁃NA3.1组、LPS+Rottlerin+pcDNA3.1-HMGB1组。MTT法检测各组细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-204-5p和HMGB1 mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果与对照组相比,LPS组心肌细胞HCM、AC16抑制率显著升高,HCM细胞中miR-204-5p(0.30±0.03比1.99±0.08)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达显著下降,Bax、HMGB1(1.04±0.10比0.26±0.02)表达和凋亡率[(27.79±2.23)%比(5.61±0.05)%]显著升高;相较于LPS组,LPS+0.5、1.0、1.5、2.0μmol/LRottlerin组HCM、AC16细胞抑制率显著降低,HCM细胞中miR-204-5p(0.46±0.04、0.54±0.05、0.76±0.04、0.88±0.07比0.30±0.03)和Bcl-2表达显著升高,Bax、HMGB1(0.93±0.09、0.80±0.08、0.62±0.06、0.53±0.05比1.04±0.10)表达和凋亡率[(22.61±2.14)%、(20.06±1.94)%、(11.71±1.01)%、(9.16±1.00)%比(27.79±2.23)%]显著降低,呈浓度依赖型。与LPS+miR-NC组相比,LPS+miR-204-5p组HCM细胞中miR-204-5p(0.86±0.07比0.42±0.03)和Bcl-2表达升高,Bax表达及细胞抑制率和凋亡率[(15.76±1.32)%比(27.26±2.25)%]降低。miR-204-5p可靶向调控HMGB1;抑制miR-204-5p表达、过表达HMGB1均能逆转Rottlerin对LPS作用的心肌细胞HCM的保护作用。结论粗糠柴毒素对LPS所致的心肌细胞损伤有保护作用,其机制主要是通过上调miR-204-5p表达,进而抑制HMGB1的表达发挥作用。

粗糠柴毒素对前列腺癌细胞经典Wnt信号通路影响

目的:探讨粗糠柴毒素(Rottlerin)对前列腺癌细胞PC-3经典Wnt信号通路作用。方法:以不同浓度Rottlerin处理PC-3细胞24 h,谷胱甘肽转移酶-E-钙粘蛋白(GST-E-cadherin)结合法提取胞浆游离β-连环蛋白(β-catenin),Western blot法测定总β-连环蛋白、胞浆游离β-连环蛋白、低密度脂蛋白相关受体-6(LRP6)及磷酸化LRP6(p-LRP6)蛋白水平。结果:Rottlerin可明显降低PC-3胞浆游离β-连环蛋白水平、LRP6及p-LRP6蛋白水平,并成剂量依赖性,和对照组比较,Rottlerin0.25、0.5、1.0和2.0μmol·L-1组胞浆游离β-连环蛋白水平分别下降54.0%,78.6%,79.7%和79.6%,LRP6表达分别下降17.9%,38.8%,63.2%和85.0%,p-LRP6水平分别下降29.4%,67.1%,96.3%和97.4%。结论:Rottlerin可通过LRP6受体抑制PC-3细胞经典Wnt信号通路。

PKCθ在活化诱导T细胞死亡中的作用

为初步探讨PKCθ在αβT细胞活化诱导细胞死亡(AICD)中的作用,采用PKCθ选择性阻断剂Rottlerin(粗糠柴毒素)预处理,抗CD3单抗再刺激αβT细胞,分别选用流式细胞术AnnexinV/PI法检测细胞早期凋亡,琼脂糖凝胶电泳检测细胞晚期凋亡。结果表明,抗CD3单抗刺激6 h后,αβT细胞早期凋亡率为28.27%±2.96%;Rottlerin(10μmol/L)预处理组,αβT细胞早期凋亡率为17.30%±2.30%。用抗CD3单抗刺激αβT细胞12 h后,出现较明显的DNA梯形条带,18 h后DNA梯形条带明显增强;用Rottlerin预处理后,DNA梯形条带明显减弱。提示PKCθ信号通路参与αβT细胞AICD的发生。