Oligo-FISH涂染揭示柚粗线期1号染色体的结构及配对

【目的】深化柑橘减数分裂粗线期染色体结构组成和配对分析。【方法】首次利用柑橘染色体全长特异寡核苷酸荧光原位杂交(oligo-fluorescence in situ hybridization,oligo-FISH)涂染探针,精准示踪鉴定沙田柚粗线期1号染色体的结构特征,比较其与有丝分裂间期细胞核、有丝分裂前中期和中期染色体的结构差异,并揭示粗线期全长染色体的同源配对。【结果】观测到同源配对的全长粗线期与有丝分裂中期较大染色质结构差异。经测定,柚粗线期1号染色体平均全长、长臂长、短臂长和臂比分别为中期的13.93倍、16.54倍、10.44倍和1.54倍,表现出更高FISH信号分辨率。检测到柚粗线期1号染色体着丝粒附近约3.01 Mb的探针信号缺失区。【结论】首次实现柑橘特定全长粗线期染色体的跟踪研究,为深入开展其结构和配对遗传利用的精准研究提供了新方法。

籼、粳稻及其杂种粗线期的核型分析

研究了典型籼、粳稻及其杂种粗线期的核型，结果表明：（１）籼稻品种南特号具有两对随体染色体，分别为第十和第十二染色体，粳稻品种巴利拉具１对随体染色体，为第十染色体，杂种南特号／巴利拉的随体染色体与南特号相同；（２）在粗线期，两品种均可见单核仁和双核仁的细胞存在，说明细胞内的核仁数目与随体数目并不对应；（３）两品种的对应染色体之间，在染色体相对长度、臂比及染色位分布上均无明显差异。

利用粗线期染色体和DNA纤维的FISH分析水稻端粒序列(英文)

利用粗线期染色体和DNA纤维的荧光原位杂交(FISH)技术分析了水稻广陆矮四号(Oryzasativassp.indicacv.GuangluaiNo.4)的端粒序列。粗线期染色体荧光原位杂交结果表明,大多数染色体的末端都有端粒串联重复,但信号的强度在不同染色体上是不同的。伸展DNA纤维荧光原位杂交结果显示,端粒最长的线状信号长度为6.55μm,最短的为1.82μm,依据2.51kb/μm的标准,它们分别相当于16.44kb和4.56kb。端粒的平均信号长度为3.62±1.32μm,相当于9.09±3.31kb。由此可以估计,最长的、最短的和平均长度的端粒拷贝数约为2349、651和1298±473。

我国三个野生稻种粗线期核型的研究

为了探求栽培稻同野生稻种的亲缘关系,采用去壁、低渗和Giemsa染色制片法,比较分析了我国的普通野稻(Oryza rufipogon Gri ff.=O. Perennis Moench)、药用野稻(O.officinalis Wall.)、疣粒野稻(O.meyeriana Baill)和栽培稻(O.sativa L_)的粗线期核型。试验结果表明,最长染色体长度与最短染色体长度的比值,以普通野稻同栽培稻最为接近。根据Levan等的臂比率标准,普通野稻的核型为7M+5SM;药用野稻为6M+5SM+1ST;疣粒野稻为7M+5SM;栽培稻为6M+6SM。普通野稻同栽培稻具有相同类型和编号的染色体数目最多,核型最相似,表明二者的亲缘关系最为密切。本文还就种内核型变异的主要表现及引起变异的可能原因进行了讨论。

大鳞副泥鳅粗线期二价染色体分带研究

报道了一种鱼类二价体显带的新方法。采用 pH值在 7 2～ 7 4之间的低渗液对大鳞副泥鳅精巢进行整体长低渗、卡诺固定液处理方法得到了粗线期二价染色体的高分辨G带 ,其带纹特征和数目相对稳定且清晰可辨。与胰酶显带法和EDTA显带法相比具有操作简单、耗时短以及二价体分散相对较好等特点。这一方法在所有显带方法中最为简便。

鱼类粗线期二价体上染色粒的研究

在红鲫减数分裂不同时相粗线期二价体上都可看到清晰度各不相同的染色粒带．在早粗线期，二价体上的染色粒过于细小，染色粒分布式样的特征难以分辨．随着二价体的收缩，染色粒因融合而变粗，数目减少，分布式样的特征性也逐渐明显．到晚粗线期，除少数已经局部分离的二价体外，大多数二价体都显示了特征明显，光反差良好的染色粒带．收缩程度基本一致的相应二价体上，染色粒带型和带数也一致．当染色粒减少到某一定数目后，染色粒不再相互融合．因此，染色粒带可作为区分鱼类染色体和染色体片段，分析染色体结构变异的可靠标识．

玉米粗线期染色体的高分辨率染色粒图

经温和固定和展片的玉米小孢子母细胞减数分裂的粗线期染色体,在电镜下,着丝粒和大量的电子致密的染色粒清晰可辨。其数量和位置自减数分裂早偶线期至早双线期是稳定和可重复的。为此,我们对粗线期的10条双价体中各条分别进行详细的染色粒分析,构建了一个完整的染色体组的染色粒图。总共识别和定位了达430±12(根据7套染色体组计数平均)染色粒。染色粒图可用于确定原位杂交法定位基因的详细分布区域,染色体重排中断点的定位,识别外源单价体和由于不联会或脱联会而产生的单价体等。

小鼠粗线期精母细胞T型Ca^(2+)通道电流特性及氰戊菊酯对它的影响

[目的 ]建立小鼠粗线期精母细胞T型Ca2 + 通道电流膜片箝记录方法 ,并观察拟除虫菊酯类杀虫剂氰戊菊酯的作用。[方法 ]应用膜片箝技术 ,全细胞方式下记录小鼠粗线期精母细胞T型Ca2 + 通道电流 ,并用各种特异的通道阻断剂和激动剂确定电流特性 ,与体细胞T型Ca2 + 通道电流比较 ;通过胞外给药 ,观察氰戊菊酯对T型Ca2 + 通道电流影响。 [结果 ]当以Cs+ 、TEA+ 阻断K+ 电流 ,记录到一 -6 0mV激活 ,-2 0～ -30mV达到最大值的内向电流 ,该电流呈快速激活快速失活。加入Na+通道阻断剂TTX ,对记录的内向电流无影响 ,表明该内向电流不含有Na+ 电流成分 ,是由Ca2 + 通道开放产生。另该电流对L型Ca2 + 通道激动剂BayK 86 44不敏感 ,但对Cd2 + 、Nifedipine两种Ca2 + 通道阻断剂较敏感 ,提示其为T型Ca2 + 通道电流。与体细胞典型T型Ca2 + 通道比较 ,粗线期精母细胞T型Ca2 + 通道有自身特点。研究氰戊菊酯对记录的T型Ca2 + 通道电流的作用显示 :5 0 μM·L-1氰戊菊酯在加入后 3～ 5min开始抑制T型Ca2 + 通道电流 ,于 9～ 10min达到最大抑制作用 ,并有明显的剂量 反应关系。 [结论 ]小鼠粗线期精母细胞主要存在T型Ca2 + 通道 ,而不含有L型Ca2 + 通道 ,但与典型T型Ca2 + 通道电流比较 ,精母细胞的T型Ca2 + 通道电流又?

家鸡卵母细胞减数分裂粗线期二价染色体研究

家鸡卵母细胞减数分裂粗线期二价染色体研究余梅喻传洲陈世林李奎（华中农业大学畜牧兽医学院，武汉４３００７０）实验材料为孵化出１～２天的母鸡，全部取自华中农业大学畜牧兽医学院鸡场。染色体标本的制备是针对家鸡染色体的特征，并在参考余其兴等在制备鱼类减数分裂...

丽纹攀蜥粗线期染色体核型及微小染色体的分析

本文以精巢、四肢骨和脊椎骨为材料,利用直接制片法制备了丽纹攀蜥(Japalura splendida)染色体标本,首次对其精巢减数分裂粗线期染色体,特别是微小染色体的长度进行了测量,描述了染色体特征,并进行了核型分析。同时与二倍体细胞染色体的核型进行了比较,发现11对微小染色体类型中包括8对中着丝粒染色体、2对端着丝粒染色体和1对点状染色体。

水稻间期核、粗线期和有丝分裂中期染色体FISH分辨率的比较

利用水稻第 4染色体上的两个BAC(bacterialartificialchromosome)克隆作为探针 ,对水稻间期核、减数分裂染色体和有丝分裂中期染色体进行了荧光原位杂交 (fluorescenceinsituhybridization ,FISH) 结果表明 ,它们的杂交信号在水稻第 4染色体短臂上 ,有丝分裂中期染色体上两信号完全重叠 ,而在早粗线期染色体上可以分开 已知它们间的遗传距离为 2cM ,在粗线期染色体上两信号点彼此邻近但未重叠 ,两信号点中心的物理距离为 0 .36μm ,在间期核上两个信号点完全分开 ,相距 (2 .0 6± 1.15 ) μm 说明在水稻第 4染色体上 ,减数分裂粗线期FISH可以分辨相距约 2cM的两个标记

小鼠粗线期精母细胞钙离子通道膜片箝方法的建立

应用机械分离获得小鼠单个精母细胞 ,采用全细胞膜片箝技术记录 Ca2 +离子通道电流。结果表明 :1阻断 K+电流后 ,当钳制电位 - 90 m V、指令电压 - 6 0～ + 10 m V、步阶电压 10 m V时 ,可记录到内向电流 ;2内向电流在 - 30～ - 40 m V达到最大值 ;3在细胞外液中加入 4 μmol/ L TTX,对记录电流无影响 ,表明此电流不含有 Na+电流成分 ,为 Ca2 +电流。

小鼠精母细胞粗线期染色体SC长度和组型研究

用整装微铺开和银染技术，在电镜下分析测量了３２个小鼠精母细胞粗线期染色体的联会复合体（ＳＣ）长度。１９个常染色体ＳＣ的总长度平均为１４７．８μｍ，ｘ、ｙ染色体轴平均长度分别为１２．５和５．４μｍ。处于粗线期不同阶段的ＳＣ长度变化较大，中粗线期与早晚粗线期ＳＣ长度的差异最大可达２倍以上，但它们的相对长度则比较稳定。粗线期ＳＣ长度约是有丝分裂中期染色体的３倍，两者具有很好的相关性（ｒ＝０．９９６）。ｘ、ｙ染色体行为落后于常染色体，配对始于早粗线期，完成于中粗线期。配对部分仅占ｘ染色体的１／１７和ｙ染色体的１／７。我们发现了一个ｘ＊ｙｙ三体，在这个三体中，其中一条ｙ染色体与ｘ染色体有较大的配对区，约占这条ｙ染色体总长的１／２，这有别于其他正常的ｘ·ｙ配对．

在植物粗线期染色体和DNA纤维上的荧光原位杂交技术

介绍了两种荧光原位杂交技术的详细实验步骤。第一种技术是在减数分裂粗线期染色体上的荧光原位杂交，包括从花粉母细胞中制备粗线期染色体和在这种染色体上定位ＤＮＡ序列，其分辨率水平能够达到１００ｋｂ。第二种技术是从植物细胞核中制备ＤＮＡ纤维，并在上面进行原位杂交，能够直接分析ＤＮＡ序列的分子排列关系，其分辨率水平能达到几个ｋｂ。为了说明这两种原位杂交技术在研究基因组和染色体结构、构建高分辨率的ＤＮＡ物理图谱上的能力，将展示用该技术直接分析番茄染色体端粒重复序列和端粒联接重复序列的染色体定位和ＤＮＡ分子排列。

小鼠富集着丝粒DNA在小鼠减数分裂粗线期染色体上的原位杂交

本工作用Hoechst 33258及着丝粒特异抗体间接免疫荧光法显示的小鼠粗线期染色体主缢痕区,与以小鼠富集着丝粒(SFA)DNA为探针在粗线期染色体上的原位杂交主缢痕区作了比较。发现SFA DNA探针不仅杂交于全部常染色体联会复合体上的着丝粒区,并且杂交于着丝粒周围的异染色质区;而且,也杂交于X,Y染色体的着丝粒区。由此结论:此富集SFA DNA中含有全套常染色体及X,Y染色体的SFA DNA。

提高黄鳝减数分裂粗线期染色体分散程度

以黄鳝精巢为材料，采用药物处理提高黄鳝染色体分散程度。结果表明：在低渗时，分别用８羟基喹啉，α溴萘和对二氯苯三种化学药物进行预处理５小时，同时结合用加氯仿的固定剂进行固定、高滴片等方法，可以使黄鳝减数分裂期染色体适当缩短，获得较好的染色体分散效果。

斑马鱼粗线期二价体高分辨多重带模式图构建

采用碱性低渗结合高氯仿固定法,由斑马鱼（Danio rerio）初级精母细胞获得了分散良好的减数分裂粗线期二价染色体分裂相,且二价体上具有高分辨多重带,其带纹特征和数目相对稳定,重复性好.参照人类细胞遗传学的国际命名法体制,构建了斑马鱼粗线期二价染色体599条带纹的高分辨带模式图,并对每条二价体进行了区带划分,描述了其识别要点.

高质量杨树粗线期染色体制片及荧光原位杂交

以美洲黑杨无性系‘哈佛杨’处于减数分裂粗线期的花药为研究材料,比较了蒸汽滴片法、涂片法、压片法及改良压片法4种不同制片方法,在制备美洲黑杨粗线期染色体中的差异,以期获得高质量的美洲黑杨粗线期染色体制片。结果表明:改良压片法是获得高质量美洲黑杨粗线期染色体的有效方法,获得的染色体制片背景干净,染色体形态良好,适于进一步荧光原位杂交研究。以拟南芥端粒序列为探针,采用缺刻平移法用地高辛标记探针DNA,杂交后信号用Rodamine anit-DIG-sheep抗体检测,建立了高效的荧光原位杂交技术体系。为进一步开展杨树的分子细胞遗传学研究奠定基础。

一种新的鉴定水稻初级三体的方法(英文)

水稻初级三体在水稻遗传育种中起着重要的作用。其归属鉴定通常用 Shastry(1960 )的粗线期核型分析方法 ,但这种方法在实际操作中有一定的难度 ,不易得到分散好的粗线期染色体分裂相。本研究首次尝试利用三体株和正常株同源染色体间 DNA含量的差异 ,用分子标记的手段将量的差异转为自显影带的差异原理去鉴定三体 ,发现此鉴定结果与粗线期核型分析结果一致 ,而此方法在实验技术上可靠性高 ,快捷 。