粉红粘帚菌对番茄促生作用及施用方式研究

粉红粘帚菌（Clonos tachys ros e a）是一种具有生防作用真菌,但其对作物促生作用研究少有报道。文章旨在明确粉红粘帚菌WY-1菌株对番茄幼苗促生作用、最佳施用浓度和施用方式。采用平板种子萌发和温室盆栽方法,测定不同施用浓度和施用方式下WY-1菌株对番茄幼苗生长影响。结果表明,WY-1菌株对番茄种子萌发和幼苗生长均有促进作用,最佳浓度为4×106cfu·m L-1。不同处理方式对番茄幼苗生长均有促进作用,4~5叶期幼苗,拌土处理最佳;8~9叶期幼苗,浸种处理最佳。由此可知,WY-1菌株是一株有益于番茄生长的生防真菌,具有应用于蔬菜无公害生产的前景。

粉红粘帚菌代谢物对南方根结线虫卵孵化及二龄幼虫的影响(英文)

粉红粘帚菌(Gliocladium spp.)是一类对植物病原菌具有潜在生物控制作用的真菌,为了探讨粘帚菌对南方根结线虫(Meloidogyne incognita)的抑制作用,实验室条件下研究了粉红粘帚菌挥发性代谢产物和非挥发性代谢产物不同稀释度对南方根结线虫卵孵化及二龄幼虫活性的影响。结果显示非挥发性代谢产物在原液、5倍、10倍、20倍、50倍稀释浓度下,12 d后对南方根结线虫卵孵化的相对抑制率分别为80.4%、12.0%、10.5%、6.7%和5.2%,对二龄幼虫的矫正死亡率分别为32.0%、9.3%、2.0%、0.6%和0.1%,与对照组相比差异显著;挥发性代谢产物对南方根结线虫卵孵化的相对抑制率为22.5%,对二龄幼虫的相对死亡率为17.4%。因此,粉红粘帚菌的非挥发性和挥发性代谢产物对南方根结线虫卵孵化及二龄幼虫活性均有一定的抑制作用。

粉红粘帚菌几丁质酶基因cDNA克隆及表达

为研究粉红粘帚菌(Clonostachys rosea)生防机制并获得生物防治相关基因,文章利用RT-PCR方法克隆粉红粘帚菌1个几丁质酶基因T-ech42,对该基因进行生物信息学分析,并在大肠杆菌原核表达系统中进行外源表达。该基因长度为1 263 bp,编码420个氨基酸。推导T-ech42氨基酸序列以及蛋白质结构的生物信息学分析表明,该蛋白等电点为5.85,理论分子质量为45.13 ku,N端含信号肽,长度为20个氨基酸;T-ech42属于糖基水解酶18家族内切几丁质酶,包含SIGGW底物结合位点和FDGIDXDWE活性位点。将该基因构建到原核表达载体p ET-22b(+)上,转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,经终浓度1 mmol·L-1的IPTG诱导4 h后,可见酶蛋白活性表达。

10%粉红粘帚菌可湿性粉剂的研制

[目的]为获得符合国家化学农药标准的粉红粘帚菌分生孢子可湿性粉剂。[方法]选择常用助剂和粉红粘帚菌分生孢子进行生物相容性检测,初步筛选出影响较小或者没有影响的助剂,筛选出的助剂,进行粉红粘帚菌可湿性粉剂的研制。[结果]最终确定10%可湿性粉剂的配方为:粉红粘帚菌的分生孢子粉10%,润湿分散剂EFW 1%、K12 2%、D425 7%、NNO 7%,紫外保护剂黄原胶0.3%,载体凹凸棒土补足100%。[结论]检测结果表明粉红粘帚菌分生孢子可湿性粉剂的润湿时间为18s,质量悬浮率75.87%,孢子悬浮率72.05%,pH 5.9,含水量1.92%,98.34%可通过200目筛,符合国家化学农药可湿性粉剂的标准,为粉红粘帚菌可湿性粉剂的开发提供理论基础。

海洋真菌链孢粘帚菌(Gliocladium catenulatum T31)抗肿瘤活性代谢产物

目的阐明海洋真菌链孢粘帚菌（Gliocladium catenulatum T31）的抗肿瘤活性次级代谢产物。方法摇床发酵培养生产菌T31,活性跟踪分离纯化T31发酵液中的活性单体化合物,并根据理化性质和光谱分析（ESI MS、UV、IR、NMR等）鉴定单体化合物结构;采用细胞形态镜检、MTT方法评价单体化合物对人类慢性髓性白血病K562细胞的抗肿瘤活性。结果从链孢粘帚菌（Gliocladium catenulatum T31）发酵液中分离并鉴定了7个单体化合物,分别为3个甾醇类化合物ergosta-5,7,22-triene-3β-ol（1）、ergosta-6,22-diene-3β-ol（2）、ergosterol peroxide（3）和四个蒽醌类化合物emodin（4）、citreorosein（5）、isorhodopti-lometrin（6）和lunatin（7）,化合物1-7对K562细胞显示不同程度的细胞增殖抑制活性,其中,化合物4-7对K562细胞的IC50分别为1.09、1.24、13.6和8.92μmol.L-1。结论海洋真菌链孢粘帚菌（Gliocladium catenulatumT31）的主要抗肿瘤活性次级代谢物是甾醇类和蒽醌类化合物。

农杆菌介导的粘帚菌遗传转化

【目的】建立分离自西藏林芝的能够产生一系列具有抗肿瘤活性的二酮哌嗪类化合物(epipolythiodioxopiperazine,ETP)的一株冬虫夏草定殖真菌——粘帚菌(Gliocladium sp.)6.102的遗传转化体系。【方法】利用农杆菌介导的方式建立了粘帚菌的遗传转化体系;用正交试验研究了影响转化效率的因素,包括共培养所用农杆菌与真菌孢子的比例、共培养的时间、pH值和乙酰丁香酮的浓度。【结果】成功建立了农杆菌介导的粘帚菌的遗传转化体系,得到了转化的最佳条件,其转化效率为50-100个转化子/106真菌孢子。通过农杆菌介导的方式分别将潮霉素B磷酸转移酶基因(hph)和绿色荧光蛋白基因(egfp)转入粘帚菌中,实现了表达并且可以稳定存在。【结论】首次建立了农杆菌介导的粘帚菌遗传转化体系,为研究ETP化合物的生物合成及其调控机制奠定了基础。

粉红粘帚菌的ATMT体系构建及定殖甘草条件优化

目的:建立并优化根癌农杆菌介导的甘草内生真菌粉红粘帚菌的遗传转化体系,优选粉红粘帚菌定殖甘草的条件,为生物菌肥的开发及优质甘草的育种奠定基础。方法:分别从乙酰丁香酮浓度、共培养时间和受体真菌分生孢子浓度3个方面对根癌农杆菌介导的遗传转化(ATMT)条件进行优化并优选转化子。采用正交试验,以共培养温度、共培养时间和孢子浓度为考察因素,定殖率为指标,优化粉红粘帚菌定殖甘草的条件。结果:粉红粘帚菌最适转化条件为共培养时间60 h、孢子浓度1×10^(7) cfu·mL^(-1)、乙酰丁香酮浓度150μmol·L^(-1),此条件下的转化效率为每1×10^(7)个受体真菌孢子可获得135个转化子。通过标记基因绿色荧光蛋白(GFP)的克隆和β-葡萄糖苷酸酶(GUS)染色结果检测转化的准确性与稳定性。粉红粘帚菌通过浸种法定殖甘草的最佳条件为共培养温度25℃、共培养时间36 h、孢子浓度1×10^(6) cfu·mL^(-1),此条件下定殖率71.11%。结论:本研究成功建立了稳定高效的粉红粘帚菌ATMT体系及其定殖甘草的技术体系,可为甘草生物菌肥的开发奠定基础。

重寄生菌粉红粘帚霉SS-1-1菌株的发酵条件优化

采用正交试验和单因素试验对粉红粘帚霉(Gliocladium roseum)SS-1-1菌株发酵条件的优化进行了研究。SS-1-1菌株最佳发酵培养基配方为:麸皮40g/L,玉米粉50g/L,豆饼粉20g/L,KH2PO4 0.5g/L;最佳发酵条件为:培养基初始pH值为4.5,发酵温度为28℃,摇床转速为200r/min,最佳培养时间为5d。

Gliocladium virens(GVP)菌粉对Rhizoctonia solani引起的杉苗立枯病的影响

在17种载体中玉米粉玉米芯粉载体最适宜于GVP的生长和产孢。在灭菌土盆栽试验和田间小区试验中，用这种载体制成的菌粉单独或与低量PCNB（每千克±10mg）联合防治出苗前和出苗后的杉苗立枯病（Rhizoctonia solani) 都是有效的，但后者优于前者。GVP菌粉加到灭菌土壤中2周，它的群体数量增到10^8数量级，以后逐渐下降在10^5-10^6数量级之间波动；而R.solani的群体数量却急剧下降并保持在一个很低的水平。