粘毛黄芩质量标准提高研究

目的 提高粘毛黄芩的质量标准。方法 采用显微、薄层色谱法对6批粘毛黄芩样品进行定性鉴别。参照《中华人民共和国药典》2020年版通则方法测定6批样品的水分、总灰分、酸不溶性灰分和浸出物含量。采用高效液相色谱法对6批样品中黄芩苷、汉黄芩苷进行定量分析。结果 鉴别方法具有专属性,样品的水分、总灰分、酸不溶性灰分和浸出物的平均值分别为9.8%、8.0%、3.2%、48.5%。黄芩苷进样量在84.119 2~841.192 8 ng范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9),加样回收率为101.51%,RSD为1.60%;汉黄芩苷进样量在38.7696~387.696 ng范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=1.000 0),加样回收率为102.83%,RSD为2.00%。6批样品中,黄芩苷、汉黄芩苷的含量分别为6.99%~10.19%、2.30%~2.72%。结论 本研究通过定性和定量方法完善和提高了粘毛黄芩的质量控制方法。

粘毛黄芩毛状根培养体系的建立及其黄芩苷的动态合成

目的:建立粘毛黄芩毛状根培养体系,并对其生长特性和次生代谢产物的合成进行初步探索。方法:采用卸甲型根癌农杆菌Agrobacterium tumofaciens C58C1感染粘毛黄芩无菌苗的茎段,获得毛状根,并得到了优质株系;测定了毛状根的生长曲线;利用PCR对毛状根进行T-DNA转化的检测及利用HPLC进行黄芩苷含量检测。结果:PCR检测结果表明,发根农杆菌Ri质粒的rolC基因已整合入粘毛黄芩毛状根基因组中。C58C1感染粘毛黄芩无菌苗茎段8 d后,毛状根陆续在其伤口处产生,28 d时幼茎产生毛状根的外植体达81%。1/2 MS液体培养32 d后毛状根干重增加了17.42倍,总黄酮和黄芩苷含量分别增加了21.60,25.56倍。结论:粘毛黄芩毛状根离体培养的建立为进一步进行药用活性成分的工业化生产奠定了基础。

粘毛黄芩CHS基因的克隆分析及其正反义植物表达载体的构建

目的:获得粘毛黄芩查尔酮合成酶(CHS)基因正反义植物表达载体,通过转化粘毛黄芩进一步探讨CHS在黄酮化合物生物合成途径上的作用机理。方法:通过RT-PCR从粘毛黄芩总RNA扩增出CHS基因目的片段,克隆至PMD18-T载体,测序并进行生物信息学分析。结果:测序证明序列正确,同时推测出CHS氨基酸序列及三维结构。克隆片段和pCAMBIA1304+载体用BlgII和BstE II双酶切,然后连接CHS基因目的片段及pCAM-BIA1304+载体大骨架片段,得到CHS正反义植物表达载体。结论:成功构建粘毛黄芩CHS基因正反义植物表达载体,并通过冻融法转化C58C1和LBA4404,为农杆菌介导的粘毛黄芩CHS基因对植物的遗传转化奠定基础。

粘毛黄芩根的化学成分研究

目的研究粘毛黄芩 (ScutellariaviscidulaBge )化学成分。 方法利用各种色谱技术进行分离纯化 ,根据理化性质和光谱数据进行结构鉴定。结果分离得到 8个化合物 ,分别鉴定为 :千层纸素A(oroxylinA ,Ⅰ )、汉黄芩素 (wogonin ,Ⅱ )、白杨素 (chrysin ,Ⅲ )、5 ,7,4′ 三羟基 8 甲氧基黄酮(5 ,7,4′ trihydroxy 8 methoxyflavone,Ⅳ )、黄芩素 (baicalein,Ⅴ )、粘毛黄芩素Ⅲ (viscidulinⅢ ,Ⅵ )、粘毛黄芩素Ⅰ (viscidulinⅠ ,Ⅶ )、汉黄芩素苷 (wogonoside,Ⅷ )。结论化合物Ⅲ。

粘毛黄芩毛状根外源基因表达系统的建立

用携带植物高效表达载体pCAMBIA1304+和发根型质粒pRiA4,"解除武装"的重组C58C1工程菌感染粘毛黄芩(Scutellaria viscidula Bunge.)无菌苗的幼茎、子叶、叶片,诱导毛状根的表达,以建立基于粘毛黄芩毛状根的高效外源基因表达系统。幼茎毛状根诱导率最高,达88.9%。PCR扩增检测粘毛黄芩毛状根单克隆基因组中的rolC和hygr基因片段,结果表明,pRiA4和pCAMBIA1304+均能整合到粘毛黄芩毛状根的基因组内,共转化率达28.1%。

基于HPLC法的黄芩和粘毛黄芩药用活性成分相似性、多样性评价

目的评价黄芩及粘毛黄芩中活性成分的相似性及多样性,研究不同干燥方法对两者的影响。方法在资源调查、收集的基础上,经不同干燥方法处理后,以HPLC法测定活性成分含量,并进行对比分析。结果 60℃烘干提高了黄芩中的黄芩素含量,对其他成分没有显著影响;但对粘毛黄芩中黄芩苷和汉黄芩苷的含量有一定程度的降低。另外,粘毛黄芩中未检出野黄芩苷;粘毛黄芩中黄芩苷和汉黄芩苷的含量(分别为9.89%和2.27%)与黄芩(分别为10.23%和2.33%)相比无显著差异(P>0.05),但黄芩素和汉黄芩素的含量(分别为0.21%和0.08%)均显著低于黄芩(分别为0.40%和0.16%)(P<0.05)。结论不同干燥方法对活性成分有一定影响,粘毛黄芩与黄芩活性成分有差异。

高效液相色谱法测定蒙药粘毛黄芩中黄芩苷的含量

目的采用高效液相色谱法测定粘毛黄芩中黄芩苷含量。方法色谱条件为:采用C18柱,以甲醇-1%冰醋酸的水溶液(54∶46)为流动相,检测波长280 nm。结果平均回收率98.7%,RSD为0.96%。结论此法简便、灵敏、快速、可靠、重复性好,可用于粘毛黄芩药材的质量控制。

外界因子对粘毛黄芩毛状根生长和黄酮类化合物合成的影响

目的:研究不同外界因子对粘毛黄芩毛状根生长和黄酮类化合物合成的影响.方法:研究不同基本培养基、pH值、碳源及激素对粘毛黄芩毛状根生长和黄酮类化合物合成的影响.结果:30g.L-1蔗糖、pH 5.8的1/2MS培养基最适合毛状根生长,但黄酮类化合物合成最高时pH值为6.4.外源激素NAA、GA对毛状根的生长有促进作用,GA效果最为明显.结论:初步优化了粘毛黄芩毛状根的培养条件,为实现粘毛黄芩黄酮类化合物大规模生产奠定了基础.

黄芩、粘毛黄芩及沙滩黄芩种子的蛋白质电泳鉴别

目的建立黄芩、粘毛黄芩和沙滩黄芩种子的蛋白质电泳图谱,将图谱作为黄芩种子及混淆品鉴定的指征。方法采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对3种黄芩种子的蛋白质电泳图谱进行分析。结果不同产地的黄芩种子的电泳图谱基本一致,同属3种黄芩种子的蛋白质电泳图谱具有明显差异。结论聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱可作为鉴别3种黄芩种子的指征。

黄芩及粘毛黄芩种子形态的电镜扫描比较

目的为准确鉴别黄芩和粘毛黄芩种子提供形态学依据。方法采用扫描电镜法对两黄芩种子种表面超微特征进行比较观察,对其进行鉴别。结果黄芩与粘毛黄芩种子之间在种皮表面超微结构特征上具有明显差别,可用于鉴别。结论利用扫描电镜可以有效鉴别两种黄芩种子。

粘毛黄芩SvFNSⅡ-2基因克隆及生物信息学分析

目的:克隆获得粘毛黄芩中黄芩苷合成关键酶黄酮合成酶Ⅱ-2基因(FNSⅡ-2)全长,并进行生物信息学分析。方法:以粘毛黄芩总RNA为模板,采用RACE技术和序列克隆相结合的方法,获得粘毛黄芩FNSⅡ-2基因的cDNA完全编码序列并进行生物信息学分析;采用实时定量(qPCR)和高效液相色谱技术(HPLC)测定粘毛黄芩采收期不同部位FNSⅡ-2的表达量及黄芩苷的含量,并对二者进行回归及相关性分析。结果:获得SvFNSⅡ-2基因ORF区长度为1 518 bp(GenBank ID:MG737856),编码氨基酸505个,包含3个高度保守区域,分析预测编码稳定的亲水性蛋白为游离核糖体合成的胞内膜结合蛋白,二、三级结构均以α-螺旋为主体,且包含有多个磷酸化位点;qPCR和HPLC结果显示,SvFNSⅡ-2基因的表达和黄芩苷含量在根、茎、叶中均存在极显著差异(P<0.01),而且不同部位间SvFNSⅡ-2基因表达量和黄芩苷含量呈极显著正相关关系(r=0.999,P<0.01)。结论:首次克隆获得SvFNSⅡ-2基因cDNA全长,初步证明SvFNSⅡ-2是粘毛黄芩黄芩苷合成途径中重要的调控关键基因,为揭示黄芩苷分子合成机制及调控研究奠定了基础。

粘毛黄芩丛生芽的诱导及快速繁殖

[目的]为粘毛黄芩种质保存和工厂化繁育提供理论依据。[方法]以粘毛黄芩无菌苗的幼茎为外植体,MS为基本培养基,分别对其进行启动、丛生芽及生根培养,建立粘毛黄芩离体培养再生体系。[结果]粘毛黄芩最佳丛生芽诱导培养基MS+6-BA 2.0 mg/L+IAA 0.2 mg/L,丛生芽分化率可达94.8%,平均丛生芽倍增数为11.6;试管苗生根培养基以1/2 MS+IAA 0.5 mg/L最好,生根率高达97.8%。[结论]该研究建立了粘毛黄芩的快速、高效无性繁殖体系。

红外光谱与人工神经网络相结合识别栽培、野生黄芩和粘毛黄芩

为了识别栽培黄芩、野生黄芩和粘毛黄芩 ,采用非线性 线性、线性 线性、非线性 非线性三种模式的人工神经网络 (ANN)分别分析各种黄芩的红外谱。我们采用 4 2个样本作训练集 ,34个样本作检验集 ,用各种模式的ANN进行了监督性训练。当训练目标误差平方和定为 0 0 1时 ,各类ANN对训练集中三类黄芩样本识别的正确率均为 10 0 % ,但对检验集样本识别的结果各不相同 ,其识别的正确率与隐含层节点数S1有关。我们发现当S1较大时 ,识别正确率反而下降 ,可能此时网络的非线性程度过高 ,使其不适合于该类样本集的训练。线性—线性型ANN识别的结果随S1的变化不很大 ,但识别的正确率不高 ,基本在 85 %左右。非线性—线性型ANN识别的结果最佳。当S1为 3时 ,其识别正确率超过了 97%。因此该法可用以简便、快速、准确地识别这三种黄芩药材。

黄芩及其非正品的鉴别

通过来源性状、显微特征、薄层色谱这几方面对正品黄芩与其非正品进行鉴别区分。

药用黄芩中黄酮类成分的研究

早年从粘毛黄芩和甘肃黄芩中分出同一黄酮甙元,经四大光谱,初步鉴定为3,5,7,3’-四羟基-2’,4’-二甲氧基黄酮,近年通过X衍射进一步分析,修正其化学结构为5,7,2’,5’-四羟基-8,6’-二甲氧基黄酮。另从韧黄芩中分得一黄酮甙元,鉴定为5,7,2’-三羟基-6-甲氧基黄酮,两化合物与近年日本学者从正品黄芩中所分离到的新黄酮甙元是一致的。

山西省3种野生黄芩属植物表型及分子水平分析

为开发、利用山西省黄芩属野生资源,对3种黄芩植株的株高、茎、花、叶和根的形态特征进行了调查,发现最明显的区分点为花色、根的形态和颜色特征;随后利用手持数码电子显微镜观察到粘毛黄芩种皮呈现白色,而并头黄芩种子表面分布有大量的瘤状突起;同时分析了黄芩和并头黄芩叶绿体基因组序列的SSR位点,发现二者基因组序列中主要为单核苷酸重复基元A/T和C/G,黄芩叶绿体基因组序列中二核苷酸重复基元为AT/TA,并头黄芩叶绿体基因组中二核苷酸重复基元为AT/AT。在此基础上开发出黄芩和并头黄芩cpSSR引物并对3种黄芩属材料进行筛选,其中有5对引物能扩增出与材料对应的特异性条带。本研究从植株表型、种子形态和分子水平对黄芩、粘毛黄芩和并头黄芩进行了快速、准确的鉴定,可为黄芩属材料的鉴定、开发和利用奠定基础。

蛤蟆油与其伪品及两种黄芩的红外光谱鉴别

本文应用长春中医学院张洁等人建立的“中药材红外光谱鉴定技术”，对传统方法难以鉴别、亲缘关系较近，外形相似的两对药材，蛤蟆油与蟾蜍输卵管，粘毛黄芩和甘肃黄苓进行鉴别，其结果是令人满意的。

粘毛黄芩全草的化学成分研究

目的 研究粘毛黄芩Scutellaria viscidula全草的化学成分。方法 通过硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱及高效制备薄层色谱等方法对粘毛黄芩中的化学成分进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据对其化学结构进行阐明。结果 从粘毛黄芩全草95%乙醇提取物中分离得到了22个化合物,分别鉴定为5-羟基-7,8-二甲氧基黄酮(1)、白杨素(2)、5,7-二甲氧基黄酮(3)、5,7,4′-三羟基-6-甲氧基黄酮(4)、5,7,4′-三羟基黄酮(5)、5,7,2′-三羟基-8-甲氧基黄酮(6)、5,7-二羟基-8,2′-二甲氧基黄酮(7)、5,7,2′-三羟基-6-甲氧基二氢黄酮(8)、5-羟基-6,7,8-三甲氧基黄酮(9)、5,6,7-三甲氧基黄酮(10)、3,5-二甲氧基-6,7-亚甲二氧基黄酮(11)、5,2′-二羟基-7,8,6′-三甲氧基黄酮(12)、5,2′-二羟基-7,8,6′-三甲氧基二氢黄酮(13)、5,7-二甲氧基二氢黄酮(14)、7-甲氧基白杨素(15)、2′-羟基-5,7,8-三甲氧基黄酮(16)、阿魏酸(17)、3-甲氧基-4-羟基苯甲酸(18)、对羟基苯甲醛(19)、3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸(20)、6-甲氧基-7-羟基香豆素(21)、6,7-二羟基香豆素(22)。结论 化合物1、3~16、18和20为首次从该植物中分离得到。