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PCR方法筛选淡紫灰链霉菌海南变种基因组粘粒文库 被引量:3
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作者 田云龙 朱昌雄 +2 位作者 蒋细良 郭萍 刘雪 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期117-120,共4页
以中生菌素产生菌淡紫灰链霉菌海南变种(Streptomyces lavendulae var.hainanensis)B-7菌株为材料,利用pOJ446作为载体构建了B-7菌株的基因组粘粒文库,文库效价达到4.21×10^6CFU/ml。随机挑取12个克隆提取质粒,经BamHI酶切电泳分... 以中生菌素产生菌淡紫灰链霉菌海南变种(Streptomyces lavendulae var.hainanensis)B-7菌株为材料,利用pOJ446作为载体构建了B-7菌株的基因组粘粒文库,文库效价达到4.21×10^6CFU/ml。随机挑取12个克隆提取质粒,经BamHI酶切电泳分析,插入片段大小约为30-40kb,符合建库要求的理论值。利用建立的基于96深孔板PCR技术的文库筛选改良方法,成功快速地筛选到含有目标基因片段的阳性菌株。 展开更多
关键词 中生菌素 生物合成基因 基因组 粘粒文库 筛选
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从粘粒文库分离目的基因的简便方法
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作者 王立言 郭仁 +3 位作者 李鸿钧 胡方 戴长柏 陈淑范 《昆明医学院学报》 1997年第2期20-22,共3页
改良了粘粒(cosmid)文库分离目的基因的第二次筛选方法用一张硝酸纤维素(NC)膜,接种近百个初筛阳性菌落,进行第二次筛选获得的三个阳性信号,复筛全部为阳性克隆节约了昂贵的NC膜。
关键词 分子克隆 粘粒文库 原位杂交 基因工程
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中国人基因组粘粒文库的构建 被引量:1
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作者 秦学斌 张军 +3 位作者 钟自力 孔建 沈岩 吴冠芸 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第5期333-337,共5页
用SuperCos1粘粒载体构建中国人基因组文库,共得到5.97×10^5个有效克隆,插入外源DNA片段长度为32 ̄45kb平均40kb,约8.12倍于人类基因组3×10^9碱基DNA长度。用分布于不同染色体... 用SuperCos1粘粒载体构建中国人基因组文库,共得到5.97×10^5个有效克隆,插入外源DNA片段长度为32 ̄45kb平均40kb,约8.12倍于人类基因组3×10^9碱基DNA长度。用分布于不同染色体上6个已知标志做PCR鉴定,结果皆有特异扩增,表明这些位点均包含在库中。 展开更多
关键词 粘粒文库 人基因组 构建 DNA 载体 克隆
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河豚鱼基因组格式化粘粒文库的构建
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作者 杨立 刘山鸣 +7 位作者 张小晓 周巍 贾开亮 戴理 吴东颖 高春生 刘国仰 杨焕明 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期99-104,共6页
目的构建河豚鱼基因组文库,为人类基因组的研究提供资料。方法以红鳍东方豚的精子DNA为材料,采用含有“外显子捕获”元件的粘粒(sCOGH2)作为载体,构建河豚鱼的基因组粘粒文库。结果该文库共有57600个克隆,分别被保... 目的构建河豚鱼基因组文库,为人类基因组的研究提供资料。方法以红鳍东方豚的精子DNA为材料,采用含有“外显子捕获”元件的粘粒(sCOGH2)作为载体,构建河豚鱼的基因组粘粒文库。结果该文库共有57600个克隆,分别被保存在600块96孔细胞培养板中,插入片段的大小平均为35kb,相当于5.0个库容量,即从本文库中筛选到河豚鱼基因组任一单拷贝序列的机率为99.2%。该文库能承受10次以上的反复冻融,重组粘粒克隆在传代中仍保持高稳定性。以河豚鱼基因组DNA为探针进行Southern印迹分析,结果显示出强阳性的杂交信号。结论该文库符合粘粒文库的质量要求。 展开更多
关键词 河豚鱼 比较基因组学 粘粒文库
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嗜线虫致病杆菌北京变种基因组文库的构建及抗生素活性克隆的筛选
5
作者 龚永兴 杨怀文 +2 位作者 杨秀芬 刘峥 袁京京 《中国生物防治》 CSCD 北大核心 2007年第4期394-396,共3页
关键词 嗜线虫致病杆菌北京变种 初生型 粘粒文库 抗生素活性
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Xenorhabdus nematophilus BP品系杀虫毒素基因的克隆与鉴别 被引量:16
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作者 崔龙 邱礼鸿 +2 位作者 房媛媛 庞义 李国勋 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期47-50,63,共5页
构建了昆虫病原线虫共生菌XenorhabdusnematophilusBP品系的粘粒文库并用生物测定的方法从中筛选到 2个对棉铃虫初孵幼虫有口服抑杀作用的克隆cos83和cos76。为初步确定这两个克隆的毒素基因与已报道基因的差异程度 ,根据已发表的共生... 构建了昆虫病原线虫共生菌XenorhabdusnematophilusBP品系的粘粒文库并用生物测定的方法从中筛选到 2个对棉铃虫初孵幼虫有口服抑杀作用的克隆cos83和cos76。为初步确定这两个克隆的毒素基因与已报道基因的差异程度 ,根据已发表的共生菌毒素基因序列资料设计了 7对引物对这两个克隆进行PCR扩增并对扩增产物进行测序和分析。从毒力较强的cos83中 ,7对引物均扩增出与目标片段大小一致的产物 ,而从cos76中只有 5对扩增到目标片段。测序结果显示 ,cos76的 5个PCR扩增产物与cos83的对应扩增产物DAN序列同源性为 10 0 %。以cos83的 7个PCR扩增产物所编码氨基酸序列进行BLAST分析 ,它们与X .nematophilusPMF12 96和PhotorhabdusluminencencW14毒素相应区间的平均同源性分别为 94%和 5 8% ,说明cos83毒素是共生菌口服毒素家族的一员但与同类的其它毒素有一定的差异 ,值得对其杀虫谱 ,作用机理等进行进一步的研究。 展开更多
关键词 XENORHABDUS nematophilus BP 粘粒文库 杀虫阳性克隆 筛选
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洋葱伯克霍尔德氏菌HMW DNA的制备及酶切研究 被引量:1
7
作者 王筱青 喻晓蔚 +1 位作者 徐岩 顾玲 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期137-142,共6页
高质量粘粒基因组文库构建的关键是HMW DNA的长度至少为粘粒载体容量的10倍,通常粘粒载体的容量为30-50kb,因此提取的HMW DNA应不小于500kb。HMW DNA在制备时不能受到任何物理的剪切力,以免DNA断裂和损伤。利用琼脂糖凝胶包埋制备的... 高质量粘粒基因组文库构建的关键是HMW DNA的长度至少为粘粒载体容量的10倍,通常粘粒载体的容量为30-50kb,因此提取的HMW DNA应不小于500kb。HMW DNA在制备时不能受到任何物理的剪切力,以免DNA断裂和损伤。利用琼脂糖凝胶包埋制备的DNA胶块经裂解和纯化后发现其DNA长度远大于500kb,明显优于商品化试剂盒提取和酚抽提法。用BamH Ⅰ、Sau3A Ⅰ、Xba Ⅰ和HindⅢ对DNA胶块进行不完全酶切研究表明,构建文库常用的Sau3A Ⅰ并不适合胶块内酶切反应,而BamHⅠ酶切B.cepacia HMW—DNA效果较好,产生的DNA片段集中在20-50kb之间,完全适合粘粒基因组文库的构建,为B.cepacia大插入片段基因组文库的构建以及功能基因组的研究奠定了良好的理论基础。 展开更多
关键词 高分子量DNA 粘粒文库 胶块 脉冲场电泳
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链丝菌素生物合成基因簇的克隆及其异源表达
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作者 陈萌 徐敏 +4 位作者 王业民 白亭丽 毕德玺 邓子新 陶美凤 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期41-47,共7页
通过基因组粘粒文库的高通量接合转移、异源表达和生物活性测定,结合DNA序列测定,从刺孢吸水链霉菌AA97026中筛选具有广谱抗菌活性的小分子化合物及其生物合成基因簇,获得1个对革兰氏阳性细菌和红酵母均有抑制活性的阳性克隆1H5,其部分... 通过基因组粘粒文库的高通量接合转移、异源表达和生物活性测定,结合DNA序列测定,从刺孢吸水链霉菌AA97026中筛选具有广谱抗菌活性的小分子化合物及其生物合成基因簇,获得1个对革兰氏阳性细菌和红酵母均有抑制活性的阳性克隆1H5,其部分DNA序列与链丝菌素生物合成基因相似。含1H5的异源链霉菌宿主的发酵液均能检测到链丝菌素的不同组份,表明1H5含有完整的链丝菌素生物合成基因簇。 展开更多
关键词 链霉菌 链丝菌素 基因组粘粒文库 高通量接合转移 异源表达
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霍乱弧菌O139脂多糖基因的克隆表达
9
作者 曲殿波 刘传暄 马清钧 《生物技术通讯》 CAS 1997年第Z1期182-182,共1页
霍乱弧菌脂多糖作为一种保护性抗原,其抗血清可以抑制霍乱弧菌在小肠粘膜上的粘附并且可以破坏霍乱弧菌,因此在研制霍乱疫苗时可以作为一种有用的成分。同时,脂多糖作为基因代谢的二级产物,是由多基因协同作用经酶促合成的。这些基因以... 霍乱弧菌脂多糖作为一种保护性抗原,其抗血清可以抑制霍乱弧菌在小肠粘膜上的粘附并且可以破坏霍乱弧菌,因此在研制霍乱疫苗时可以作为一种有用的成分。同时,脂多糖作为基因代谢的二级产物,是由多基因协同作用经酶促合成的。这些基因以串联体的形式集中在一起,这为我们的克隆表达提供了便利条件。 本研究首先用粘粒pCOS5构建了O139霍乱弧菌基因组粘粒文库。 展开更多
关键词 脂多糖 霍乱弧菌O139 基因的克隆 基因组文库 保护性抗原 免疫印迹 免疫反应 酶促合成 粘粒文库 霍乱疫苗
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Construction and initial analysis of five Fosmid libraries of mitochondrial genomes of cotton(Gossypium) 被引量:6
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作者 LI ShuangShuang LIU GuoZheng +3 位作者 CHEN ZhiWen WANG YuMei LI PengBo HUA JinPing 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2013年第36期4608-4615,共8页
Cotton(Gossypium)is an important crop providing textile fiber and edible oil.To gain the insights into mechanism of the cytoplasmic male sterility(CMS)inheritance,we constructed five fosmid libraries of mitochondrial ... Cotton(Gossypium)is an important crop providing textile fiber and edible oil.To gain the insights into mechanism of the cytoplasmic male sterility(CMS)inheritance,we constructed five fosmid libraries of mitochondrial genomes from mitotype of G.harknessii Brandegee.(one CMS line and its restorer),mitotype of G.hirsutum L.(one CMS line and its maintainer),and G.barbadense L.The numbers of the clones in these libraries ranged from 1152 to 2016 with an average insert size of 36.2 to 38.4 kb,equivalent to 70–119.3 mitogenomes.The libraries were screened with 28 markers derived from the conservative sequences and yielded 22,19,26,21,and 23 positive clones,respectively.These positive clones were used to construct the physical map of G.harknessii Brandegee.CMS line and G.barbadense L.mitogenomes that shared six syntenis regions.A total of 30 genes in nine clusters showed conservative and had high similarity with those in the mitochondrial genomes of cotton,Carica papaya,Cucurbita pepo and Nicotiana tabacum.Further investigation indicated that gene rrn26 had two copies in all five cotton mitogenomes,while genes atp1,rrn5 and rrn18 had two copies only in G.barbadense L.The positive clones and physical map are considered being useful resources in cotton genomics research. 展开更多
关键词 线体基因组 粘粒文库 棉花 细胞质雄性不育系 阳性克隆 CMS系 保守序列 物理图谱
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