高效液相色谱法测定尿中苯的代谢物反,反-粘糠酸

建立了高效液相色谱测定职业苯接触者尿中苯的代谢物反，反-粘糠酸（tt—MA）的方法。该方法采用C18柱进行分离，以冰乙酸-四氢呋喃-甲醇-水（体积比为1：2：10：87）为流动相，以香草酸为内标，于264nm处进行紫外检测。尿样经2mol／L盐酸酸化后用乙酸乙酯进行萃取。结果表明，所建立的标准曲线在tt—MA的质量浓度为0．10～10．00mg／L时线性关系良好（r=0．9999），加标回收率为95．1％～100．5％，日内和日间测定的相对标准偏差分别为4．0％～9．0％和6．2％～8．8％。应用该法测定职业苯接触者56人和非职业苯接触者24人尿中的tt—MA，结果显示职业苯接触者的尿中tt—MA含量明显高于非职业苯接触者，并与接触的苯的浓度呈线性相关（P〈0．01）。该方法灵敏、快速、经济、简便，可用于职业苯接触者的生物监测和毒物动力学研究。

职业性苯暴露反-反式粘糠酸生物接触限值研究

目的研究职业性苯暴露反-反式粘糠酸(t,t-MA)生物接触限值。方法实验室建立生产环境空气中苯浓度的气相色谱检测方法及作业工人尿中t,t-MA含量的高效液相色谱检测方法,并通过检测苯暴露现场工人8 h苯暴露水平及班前、班后尿中t,t-MA含量,研究其相关性。结果苯暴露者班前、班后尿中t,t-MA含量与其苯暴露水平有明显的相关关系。班前Y(mg/gCr)=0.924+0.108X(mg/m3),r=0.62,P<0.01;班后Y(mg/gCr)=2.103+0.177X(mg/m3),r=0.791,P<0.01。结论根据我国作业场所空气中苯的国家卫生标准,按回归方程推导出职业接触苯生物接触限值,推荐职业暴露苯的生物接触限值为工作班班后尿t,t-MA含量为3.0 mg/gGr,下一班班前尿t,t-MA含量为1.5 mg/gGr。

职业苯接触生物标志物反-反式粘糠酸的分析与评价

反-反式粘糠酸(ttMA)作为职业苯接触的生物标志物,在低浓度苯接触条件下与苯接触水平呈线性相关,ttMA在机体内的代谢转化速率与苯接触水平、甲苯的联合暴露、防腐剂山梨酸的摄入、吸烟以及遗传因素存在一定联系。高效液相色谱固相萃取和毛细管气相色谱是目前测定尿中ttMA较为成熟的检测技术。本文对近年来尿中ttMA的生物监测方法。

UPLC-MS/MS法测定尿液中反-反式粘糠酸

目的建立尿液中反—反式粘糠酸的超高效液相色谱串联质谱测定方法。方法尿液加入同位素标记的反—反式粘糠酸内标,采用强阴离子固相萃取柱进行净化,经Shield RP18色谱柱分离,三重四级杆质谱检测,内标法定量。结果反—反式粘糠酸的线性范围为20.0~1000.0μg/L,相关系数为0.9997;方法的检出限和定量限分别为1.10μg/L和3.30μg/L;加标浓度为50.0、200.0、800.0μg/L时,方法的加标回收率为98.3%~101%;批内精密度(RSD)为0.88%~2.79%,批间精密度(RSD)为3.38%~5.63%。结论本方法适用于尿液中反—反式粘糠酸的测定。

人尿中酚、粘糠酸、苯巯基尿酸的生物监测

为了探索接触低浓度苯的生物监测指标，在建立了灵敏、特异的尿中反，反－粘糠酸（ｔ，ｔ－ＭＡ）的高效液相色谱（ＨＰＬＣ）、苯巯基尿酸（Ｓ－ＰＭＡ）的色谱／质谱／质谱（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）测定方法的基础上，对４９位接触低浓度苯的工人及２０位非职业接触者进行了生物监测。结果表明：在苯接触浓度低于３．２ｍｇ／ｍ３（１ｐｐｍ）的情况下，作业工人的尿ｔ，ｔ－ＭＡ和Ｓ－ＰＭＡ浓度与空气中苯的ＴＷＡ浓度显著相关；尿酚与空气中苯的ＴＷＡ浓度之间的相关性很差。吸烟能增加尿ｔ，ｔ－ＭＡ和Ｓ－ＰＭＡ的浓度。

高效液相色谱三重串联四级杆质谱法同时测定尿中8-羟基脱氧鸟苷、反-反式粘糠酸和苯巯基尿酸

为了建立同时测定苯效应生物标记物和接触生物标记物的方法,用甲醇(流动相A)和甲酸-甲酸铵溶液(流动相B)为流动相,梯度洗脱,采用合适的质谱条件,利用高效液相色谱三重串联四级杆质谱法同时测定尿中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)、反-反式粘糠酸(ttMA)、苯巯基尿酸(S-PMA)含量。结果显示,3种物质分离效果良好,其相关系数均>0.998 9,精密度为0.8%～5.2%,绝对回收率为85.1%～97.4%。提示,高效液相色谱三重串联四级杆质谱法灵敏度高,重复性好,可同时检测尿中8-OHdG、ttMA、S-PMA含量。

苯暴露者尿中反，反－粘康酸高效液相色谱检测法的建立及应用

本研究应用特异、敏感的高效液相色谱法，在紫外吸收波长２６５ｎｍ时，检测苯的代谢物，尿中的反，反－粘康酸（ｔｔＭＡ）。１ｍｌ尿液与２ｍｌ含香草酸作内标的Ｔｒｉｓ缓冲液混合，通过经预处理的阴离子交换柱。经磷酸、醋酸钠及去离子水洗涤，ｔｔＭＡ最后用１．５ｍｏｌ／Ｌ氯化钠－甲溶液洗脱。流动相为５ｍｏｌ／Ｌ醋酸钠含１％（Ｖ／Ｖ）醋酸和１２％甲醇（Ｖ／Ｖ）。流速为ｌｍｌ／ｍｉｎ，至第６ｍｉｎ时流速为１．５ｍｌ／ｍｉｎ。ｔｔＭＡ和内标ＶＡ分别在６．８和１２．８ｍｉｎ检出。本实验ｔｔＭＡ最低检出量为０．０５ｍｇ，回收率在９０％以上。现场应用结果提示，尿液ｔｔＭＡ可作为苯暴露者的生物监测指标。

同时测定尿中反-反式黏糠酸和苯巯基尿酸的在线固相萃取-液相色谱-质谱测定法

目的建立同时测定尿中反-反式黏糠酸和苯巯基尿酸的在线固相萃取-液相色谱-质谱测定方法。方法尿样离心后上机,经在线固相萃取HLB柱(20 mm×3.9 mm×15μm)净化、富集,经C18柱(150 mm×4.6 mm×5μm)分析,线性离子阱质谱检测。结果反-反式黏糠酸和苯巯基尿酸的线性范围为0.0~15.0 mg/L、0.0~500.0μg/L,相关系数为0.9998、0.9999,检出限为3.5、0.1μg/L,样品加标回收率为103.3%~108.8%,相对标准偏差为2.8%~8.4%。结论该方法样品前处理只需离心,操作简便快捷、结果准确、重现性好、灵敏高,适用于大批量的苯职业接触人群生物监测指标的检测。

低浓度苯系物作业人员尿中反-反式黏糠酸和苯巯基尿酸与8-羟基脱氧鸟苷的关系

目的以低浓度苯系物职业接触人群为研究对象，分析低浓度苯接触剂量与尿中反一反式黏糠酸（ttMA）、苯巯基尿酸（S-PMA）、8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）水平关系。方法以7家企业120名苯系物接触工人为研究对象（接触组），对照组为同企业共84名不接触苯系物的行政和后勤工作人员。热解析气相色谱法测定工作环境中苯、甲苯和二甲苯浓度，高效液相色谱三重串联四级杆质谱（HPLC—MS—MS）测定职业接触人群尿中ttMA、S—PMA和8-OHdG含量，并进行统计分析。结果在作业场所苯平均加权浓度（C_TWA）0．25～5．98mg／m3时，尿中ttMA、S—PMA与空气中苯浓度均呈相关性（r2=0．8759，r2=0．7497）。低浓度苯系物（C_TWA〈6mg／m3）、甚至低于3．25mg／m。的苯也对职业苯接触人员造成遗传损伤，且损伤程度有随苯浓度的增高而增强的趋势；尿中8-OHdG含量与苯接触浓度呈一定的剂量一反应关系（r2=0．181、P〈0．01）。结论尿中ttMA、S-PMA与空气中苯浓度均具有较高的相关性，可作为低浓度苯职业性接触生物监测的接触标记物；低浓度苯具有遗传损伤效应，尿中8-OHdG可作为苯致遗传损伤的效应标志物。未发现混杂接触限值以内的甲苯、二甲苯（C_TWA〈50mg／m3）对苯遗传损伤产生协同或拮抗作用。

新型弱阴离子交换色谱柱-高效液相色谱法同时测定苯代谢产物的方法

目的:建立了苯及其同系物体内代谢产物粘糠酸、苯乙醛酸、马尿酸的弱阴离子交换-HPLC测定方法,并进行了方法学研究。方法:采用Acclaim Mixed-Mode WAX-1(150 mm×2.1 mm,5μm)弱阴离子交换色谱柱,以甲醇-50 mmol/L磷酸氢二钾(18∶82)为基础流动相,以波长时间程序分别在254 nm下检测粘糠酸、苯乙醛酸,224nm下检测马尿酸,探讨了弱阴离子交换色谱柱分离粘糠酸、苯乙醛酸及马尿酸的影响因素。结果:流动相的pH值、离子强度、有机相比例对上述三种代谢物产生的分离产生明显影响。结论:在确定的色谱条件下,从分离度、对称性、重复性、线性4个方面来评价,弱阴离子交换色谱柱分析酸性可离子化化合物要优于常规C18色谱柱。

低浓度苯接触对作业工人外周血常规及尿中苯代谢产物的影响分析

目的通过分析低浓度苯环境下作业工人的外周血常规指标和尿中苯代谢产物反-反式粘糠酸(tt-MA)和8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)浓度,为临床筛选低浓度苯作业工人健康损害有效标志提供参考。方法选取某化工厂接触低浓度苯作业工人200例作为研究组,同期选取某高新企业不接触苯的工人200例作为研究组,利用调查问卷收集工人们的临床资料、职业信息等,采集外周血样本和尿液样本进行血常规和尿苯代谢产物分析。结果研究组工人血常规指标中RBC、WBC、PLT及Hb的正常率明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);研究组8-OHd G浓度为(30.25±14.67)ug/g Cr,对照组为(18.97±12.04)ug/g Cr,两组相比差异具有统计学意义(P<0.05);研究组tt-MA浓度为(3.14±1.71)ug/g Cr,对照组为(2.56±1.58)ug/g Cr,两组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论低浓度苯作业对工人外周血常规指标产生异常影响,引发tt-MA和8-Ohd G浓度升高,对低浓度苯接触工人职业健康产生不利影响,应加强低浓度苯接触工人的职业安全防护,提高工人职业健康保障。

苯生物监测指标测定方法的研究进展

苯是一种被广泛使用的化工原料和环境污染物,具有致癌性和血液毒性。急性苯中毒会引发神经中枢系统麻痹等症状甚至是DNA链的损伤。慢性苯中毒会造成白细胞减少、骨髓抑制、神经衰弱综合征,严重时能导致再生障碍性贫血及白血病。尿中苯的代谢物反,反-粘糠酸和苯巯基尿酸是苯的生物监测指标,其测定方法有多种。本文综述了近年来国内外尿中反,反-粘糠酸和苯巯基尿酸测定方法的研究进展,比较不同方法的优缺点,并对测定方法的发展前景进行展望。

低浓度苯作业工人外周血象及尿中苯代谢产物分析

目的分析低浓度苯作业工人外周血象及尿反反式粘糠酸(tt-MA)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)浓度改变及影响因素,探究低浓度苯接触是否引起作业工人健康损害并为筛选苯的暴露及效应标志提供依据。方法选取某大型石化企业低浓度苯接触工人256人与某高新技术企业不接苯工人155人,调查问卷收集研究对象一般情况、生活习惯及职业史等情况,采集生物样本,检测血常规指标及尿tt-MA、8-OHdG浓度,使用SPSS13.0统计软件对数据进行统计分析。结果两组血常规指标存在显著性差异,尿中tt-MA含量差异存在统计学意义(P<0.01);WBC计数与接苯工龄及尿中tt-MA、8-OHdG浓度存在相关关系。结论低浓度苯接触可引起工人外周血细胞计数降低,尿ttMA浓度增高。

苯暴露工人尿中8-OHdG、tt-MA和S-PMA含量的测定

目的测定苯暴露工人尿中苯巯基尿酸（S-PMA）、反-反式粘糠酸（tt-MA）和8-羟基脱氧鸟苷（8-OHd G）的含量,找出影响其变化的因素,探讨其作为苯暴露生物监测标志物的适用性。方法对苯暴露工人的作业环境进行监测,通过统一的问卷调查收集不同苯浓度暴露工人的姓名、年龄、饮酒、吸烟、职业史等一般信息,采集当日班前与班末尿样,用高效液相色谱-串联质谱法（HPCL-MS/MS）测定尿中8-OHd G、tt-MA和S-PMA含量,计算三者肌酐校正值,并对结果进行统计分析。结果苯接触工人尿中S-PMA检出率为39.2%,浓度范围在0.3-1 572.6μg/g Cr。尿中反tt-MA检出率为98.2%,检出的浓度范围为3-12 055.4μg/g Cr。;尿中8-OHd G检出率为97.2%,检出浓度范围为0.3-35.3μg/g Cr。不同性别、不同吸烟、饮酒量的工人尿中3种生物标志物的含量变化差异无统计学意义。不同苯暴露水平的工人,班前班末尿中8-OHd G、tt-MA和S-PMA的含量变化差异有统计学意义P〈0.01。结论 HPCL-MS/MS可同时检测尿中8-OHd G、tt-MA和S-PMA的含量,苯暴露工人尿中8-OHd G、tt-MA比S-PMA检出率高,尿中tt-MA的含量测定作为苯暴露生物监测指标,其效果优于8-OHd G和S-PMA。

阴离子交换固相萃取高效液相色谱测定尿中ttMA和SPMA

目的建立阴离子交换固相萃取高效液相色谱测定尿中tt MA和SPMA的方法。方法用混合型强阴离子交换柱对尿液中tt MA和SPMA进行净化富集,用适宜浓度的甲酸甲醇洗脱,高效液相色谱峰面积外标法定量检测。结果 tt MA和SPMA分别在0.025 mg/L^1.0 mg/L和0.05 mg/L^2.0 mg/L范围内线性关系良好,相关系数r均>0.999。以3倍信噪比计算检出限,tt MA为0.005 6 mg/L,SPMA为0.021mg/L。tt MA在0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.4 mg/L 3个空白加标水平下,加标回收率为91.3%~102%,相对标准偏差为2.4%~4.1%。SPMA在0.2 mg/L、0.4 mg/L、0.8 mg/L 3个空白加标水平下,加标回收率为87.5%~106%,相对标准偏差为3.1%~4.8%。结论该方法减少了人工操作,交叉污染少,准确可靠,重复性好,适合基层实验室测定尿中tt MA和SPMA进行苯的生物监测。

超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱联用同时检测人体尿液中苯、甲苯和二甲苯的6种代谢产物

目的建立同时检测人体尿液中苯、甲苯和二甲苯的6种代谢产物的超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱联用方法。方法尿液样品经固相萃取柱净化后,在最佳色谱条件下分离,采用Targeted-SIM/dd-MS2负离子模式扫描,一级精确母离子和二级碎片离子对样品快速定性筛查、一级精确母离子外标法定量分析。优化了色谱柱、流动相、柱温等色谱条件和样品前处理方法及质谱扫描模式等实验参数;测定了方法的检出限、准确度及加标回收等指标;用建立的方法检测了28家涉苯系物企业接触苯系物职工班后尿液中6种代谢产物。结果人体尿液中苯、甲苯、二甲苯的6种代谢产物尿中反-反式粘糠酸(tt-MA)、苯巯基尿酸(SPMA)、马尿酸(HA)、2-甲基马尿酸(2-MHA)、3-甲基马尿酸(3-MHA)和4-甲基马尿酸(4-MHA)在1.0~500μg/L(SPMA:0.1~50μg/L)范围内均有良好的线性关系,相关系数均大于0.999 8,检出限为0.001~0.050μg/L。实际样品的平均加标回收率在90.4%~104.4%范围内,相对标准偏差均低于4.2%。28家涉苯系物企业所采集的155份尿液样品中6种待测物均未超出职业接触限值。结论该方法前处理简单、灵敏度高、检出限低,可有效降低样品假阳性的可能性,适用于接触苯、甲苯和二甲苯生物样本监测指标的同时检测。

低苯暴露人群尿中t,t-MA及S-PMA的生物监测

目的分析职业低苯和环境低苯接触与人体尿液中t,t-MA和S-PMA浓度的相关性。方法选取广州市某制鞋厂钳帮和刷胶工人等苯职业接触人员作为职业低苯暴露人群(职业组),选取非职业苯接触且家庭1年内装修过并已入住半年以上的人员作为环境低苯接触人群(环境组)。采用超高效液相串联质谱联用(UPLC-MS/MS)内标法测定尿中t,t-反式粘糠酸(t,t-MA)及苯巯基尿酸(S-PMA)含量,采用气相色谱法检测空气中苯浓度。结果职业组个体空气暴露的苯浓度(均值±标准差)为(0.16±0.06)mg/m3,尿中t,t-MA及S-PMA含量分别为(42.7±39.2)和(0.28±0.19)μg/g Cr;环境组个体空气暴露的苯浓度中位数(四分位间距)为0.01(0.02)mg/m3,尿中t,t-MA及S-PMA含量的中位数(四分位间距)分别为20.5(16.2)和0.03(0.04)μg/g Cr;经非参数Mann-Whitney U-test检验分析发现:职业组的个体空气暴露苯浓度及尿中t,t-MA、S-PMA含量均高于环境组(均P<0.01)。相关性分析结果显示,当空气中苯浓度为0.16 mg/m3时,尿中t,t-MA和S-PMA与空气中苯浓度存在良好的相关性(r=0.499、0.715)。结论 t,t-MA及S-PMA可作为生物标记物用于职业低苯和环境低苯暴露的生物监测。

低苯暴露与职业暴露人群尿中t,t-MA及S-PMA的相关性

目的探讨低苯暴露与职业暴露人群尿中反-反式粘糠酸(t,t-MA)及苯巯基尿酸(S-PMA)的相关性。方法选择2015年1-2月某制鞋厂职业苯接触工人42例作为职业暴露组,该厂非职业接触办公人员28例作为低暴露组,分别检测工作环境中苯浓度和尿样中t,t-MA、S-PMA浓度,并分析二者间的相关性。结果低暴露组空气中苯浓度低于职业暴露组,差异有统计学意义(P<0.05);低暴露组班前班后t,t-MA、S-PMA浓度比较差异无统计学意义(均P>0.05)。职业暴露组班后t,t-MA、S-PMA浓度均高于班前,差异有统计学意义(均P<0.05);职业暴露组t,t-MA、S-PMA浓度在班前和班后均高于低暴露组,差异有统计学意义(均P<0.05)。低暴露组S-PMA班前、班后浓度与空气中苯浓度呈正相关(P<0.05),t,t-MA与空气中苯浓度没有明显相关性(P>0.05);职业暴露组班前、班后t,t-MA、S-PMA浓度与空气中苯浓度均呈正相关(P<0.05)。结论低苯暴露人群t,t-MA和S-PMA浓度低于职业苯接触人群,且S-PMA浓度与空气中苯浓度密切相关。