雪貂食管的形态学及其分子标记物的表达谱

目的分析雪貂食管形态学及分子表达,探讨其作为人食管疾病动物模型的可行性。方法取生长期为6~8月成年雪貂食管和出生1 d、3 d、5 d、1周和2周幼年雪貂食管各5只于宁夏医科大学总医院病理科制成冷冻切片、包埋石蜡组织。通过苏木精-伊红染色法(HE)染色、过碘酸雪夫染色(PAS)对成年雪貂食管粘膜下腺体(SMG)进行形态学分析;Mucin染色检测MUC5B和MUC5AC的表达情况;免疫组化、免疫荧光技术检测细胞角蛋白(CK):CK4、CK5、CK7、CK8、CK14、CK17、CK18、CK19、CK20等相关蛋白在成年雪貂食管上皮细胞中的表达情况;免疫荧光检测LEF1在雪貂食管上皮和食管粘膜下腺中表达情况。结果HE、PAS结果显示,成年雪貂食管粘膜下腺体为食管粘膜肌层下方结缔组织,具有分泌含有粘蛋白粘液的功能;细胞角蛋白在成年雪貂食管不同类型的细胞中呈差异性表达,粘液细胞主要表达CK4,导管细胞表达CK8,上皮细胞表达CK20,其中粘液细胞中细胞角蛋白类型表达最多;Mucin染色结果显示MUC5B、MUC5AC在成年雪貂食管腺体的粘液细胞胞质及腺体管腔内呈阳性表达;粘膜细胞中特异性结合双花扁豆凝集素(DBA)、鸡冠珊瑚树凝集素(ECL)、非偶联西非单叶豆凝集素Ⅰ(GSL Ⅰ)、非偶联西非单叶豆凝集素Ⅱ(GSL Ⅱ)、大豆凝集素(SBA)、他卡林生物化合物凝集素、荆豆凝集素(ULEX)、麦胚凝集素(WGA);导管细胞细胞膜上特异性结合凝集素GSL Ⅰ、GSL Ⅱ,上皮细胞细胞膜凝集素ECL、花生凝集素(PNA)和WGA呈阳性表达;凝集素伴刀豆凝集素(ConA)、红腰果E型凝集素(PHA-E)和红腰果L型凝集素(PHA-L)在浆液细胞胞膜呈阳性表达。免疫荧光结果提示,随着腺体的发育,在雪貂出生后3 d至1周可见到发育腺体中LEF1的表达,当腺体分化成熟时LEF1表达消失。将第1天至第7天龄雪貂食管腺体中LEF1表达强度与两周龄的雪貂食管腺体中荧光强度相比,差异有统计学意义(P<0.001)。结论雪貂食管与人类食管组织具有相似的结构和部分共同标记物,尤其是与人类相似的食管粘膜下腺体,未来可将雪貂作为人食管疾病动物模型的选择之一。