LT粘膜佐剂对鸡新城疫疫苗的免疫增强作用研究

研究大肠杆菌热敏性肠毒素突变体蛋白(heat-labile enterotoxin,LTRG)对鸡新城疫(Newcastle disease virus,NDV)疫苗经不同途径接种效果的影响。以NDV LaSota株作为共免疫原,与LTRG重组蛋白经滴鼻、口服及肌肉注射三种途径接种雏鸡,通过血清IgG抗体、HI抗体及粘膜分泌型IgA抗体水平变化,评价不同途径接种LTRG对NDV疫苗的免疫效果的影响。结果显示:①三种途径接种,LTRG均能显著增强NDV疫苗的免疫抗体水平,免疫雏鸡血清抗体和粘膜抗体水平均高于NDV疫苗单独免疫组;②LTRG对NDV疫苗免疫增强作用,以滴鼻接种最显著:二、三免后LTRG+NDV滴鼻组与NDV组血清IgG、粘膜IgA差异均显著(P<0.01、P<0.05);LTRG+NDV口服与NDV组血清IgG差异不显著(P>0.05)、粘膜IgA差异极显著(P<0.01);LTRG+NDV肌注与NDV组IgG差异不显著(P>0.05)、粘膜IgA差异显著(P<0.05);③三种免疫途径比较:血清IgG抗体水平差异均不明显(P>0.05);滴鼻、口服免疫可诱导雏鸡产生较高的粘膜IgA抗体、血清HI抗体。由此可见:LTRG粘膜佐剂对NDV疫苗免疫增强作用,以粘膜(滴鼻、口服)途径接种效果最为显著,能诱导高水平的粘膜IgA抗体及血清抗体。

粘膜佐剂霍乱毒素B亚单位的克隆与表达

目的 :构建表达粘膜佐剂霍乱毒素B亚单位 (CTB)基因的重组质粒 ,并在大肠杆菌中表达获得基因重组蛋白。方法 :用PCR方法从霍乱弧菌中扩增CTB片段 ,将其转入原核载体质粒pET-32a( +) ,在大肠杆菌Top10克隆 ,并在BL21中表达。结果 :重组质粒PET-CTB的全长序列经分析与基因文库公布的一致 ;表达蛋白经SDS-PAGE分析 ,相对分子量与文献相符 ;重组蛋白竟Westernblot检测有抗原性。结论 :基因重组菌表达的CTB蛋白可能作为有效。

粘膜佐剂的研究进展

哺乳动物的粘膜免疫系统是一个完整的淋巴细胞网络 ,正常情况下可对经粘膜侵入的外来有害抗原物质发生免疫应答。由粘膜途径进行接种疫苗可在感染部位直接诱导局部保护性免疫应答 ,防止感染和疾病。大多数免疫原性弱的抗原经粘膜供给时易引起免疫耐受 ,阻碍了粘膜疫苗的进一步研制和开发。为了克服粘膜疫苗使用中面临的问题 ,人们设计出多种粘膜佐剂以增强相应抗原经粘膜供给时促进机体发生免疫应答的能力。本文将重点介绍现在研究较多的一些粘膜佐剂类型 ,如微生物及其代谢产物、细胞因子、CpG基序及化学合成类佐剂等的研究情况。深入了解粘膜佐剂作用的分子机理 ,有益于促进安全、有效的粘膜疫苗的开发。

大肠埃希菌不耐热肠毒素作为新型粘膜佐剂的研究进展

大肠埃希菌(大肠杆菌)不耐热肠毒素(LT)不仅具有很强的免疫原性,可以用作保护性抗原,其粘膜佐剂作用显著。LT的佐剂作用与传统的佐剂概念有所不同。LT比CT更具优势成为粘膜性剂口服疫苗。LT的毒性限制了它的直接使用,用体外定点诱变技术获得具有佐剂效应的减毒株,可望成为理想的疫苗候选株。

肠毒素用作粘膜佐剂的效力与毒性

霍乱毒素 (CT)是粘膜疫苗的有效佐剂 ,能够诱导粘膜和全身免疫应答。然而 ,由于其固有毒性而不适于人类应用。近年来 ,疫苗开发的一个重点为鼻腔接种抗原和 CT以诱导粘膜 Ig A应答。本文讨论了 CT用作粘膜佐剂的效力及其对中枢神经系统 (CNS)

LTB的表达及其粘膜免疫佐剂活性分析

粘膜免疫是预防一些通过吸附粘膜组织侵入机体病原的很好措施,但粘膜免疫通常需要粘膜免疫佐剂,大肠杆菌(Escherichia coli)不耐热肠毒素的B亚基具有很好的粘膜免疫佐剂活性.本研究从大肠杆菌195菌株中扩增出LT(heat-labile enterotoxin)基因,测序后将其B亚基基因与pET32a连接构建了重组质粒pET32a-LTB,SDS-PAGE显示LTB(heat-labile enterotoxin B subunit)在原核细胞中得到表达,Western blotting和人神经节苷脂结合酶联免疫吸附试验(GM1-ELISA)结果表明,重组LTB具有抗原性和GM1结合活性.将其与禽流感M2e表位融合蛋白M2eHBc+混合通过滴鼻途径免疫小鼠,抗体检测结果表明,所表达的LTB能很好地提高共免疫抗原的粘膜和系统免疫应答.

粘膜免疫佐剂:肠产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)研究进展

粘膜免疫佐剂活性是肠产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素 (L T)的重要生物学特性之一。除野生型 L T外 ,L T突变体如 L TE112 K、L TG33D等及重组体 r L TB均具有很强的粘膜免疫佐剂活性 ;同时后者具有毒性较低的特点 ,显示了良好的临床应用研究前景。本文对 L

霍乱毒素的粘膜免疫佐剂效应机理

霍乱毒素(CT)具有较强的粘膜免疫原性和粘膜免疫性剂效应,与不相关的可溶性蛋白抗原同时口服免疫机体,能消除机体对这些共免疫蛋白的耐受性,能诱导机体产生针对CT和共免疫蛋白的长期免疫记忆.CT是目前研究得最深入的粘膜免疫性剂,但其粘膜免疫性剂效应机理尚未完全弄清.研究证实,CT的作用包括:促进抗原递呈细胞的抗原递呈作用;选择性地诱导抗原特异性TH2细胞应答;促进抗原对T细胞的初激作用;抑制CD8^+T细胞功能;促进肠上皮内淋巴细胞的有丝分裂;促进B细胞同种型分化等.

大肠杆菌LTKA63突变体的构建及重组LTKA63免疫佐剂活性机理的研究

目的 构建大肠杆菌不耐热肠毒素A亚单位（heat-labile enterotoxin subunitA，LTA）基因减毒突变体LTKA63及其原核表达系统，探讨重组LTKA63（rLTKA63）粘膜免疫佐剂活性的机制。方法采用高保真PCR从大肠杆菌44815株基因组DNA中扩增LTA基因，利用定位突变技术构建LTKA63突变体，T-A克隆后测序。采用无His-tag的原核表达载体pET-15b。构建LTKA63原核表达系统，通过SDS-PAGE鉴定表达产物。采用三色流式细胞术确定rLTKA63激活T细胞途径。结果从大肠杆菌44815株DNA模板中扩增获得预期大小的LTA基因条带。与报道的LTA序列比较，所克隆的LTA基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99．03％～99．61％和98．33％～99．22％。LTA基因定位突变后获得序列正确的LT-KA63突变体。rLTKA63表达量占细菌总蛋白的15％左右。rLTKA63作用后Th1和Th2细胞较阴性对照组分别增加21．9％和36．2％。结论本文成功地构建了LTKA63原核表达系统，所表达的rLTKA能同时激活Th1和Th2细胞。

霍乱样肠毒素的免疫调节作用:从佐剂到治疗剂

霍乱毒素和大肠杆菌不耐热肠毒素具有非常强的免疫原性和粘膜佐剂作用。最近发现其Ｂ亚单位能促进免疫耐受性，说明其在免疫系统中作用的复杂性。