安徽、江苏、广西部分地区水牛牛病毒性腹泻/粘膜病血清学监测

用微量细胞中和试验 ,对安徽、江苏和广西的 12个县部分水牛群血清样品 (n =343)牛病毒性腹泻 /粘膜病 (BVD/MD)中和抗体进行检测。结果从 10个县的血清中检出了BVD/MD抗体 ,其中安徽水牛血清 (n =15 0 )BVD/MD抗体平均阳性检出率为 2 4.2 % (范围 10 %～ 46 .7% ) ,江苏 (n =143)BVD/MD平均阳性检出率为 8.4% (0 %～ 11.1% ) ,广西 (n =5 0 )BVD/MD平均阳性检出率为 10 .0 % (0 %～ 15 .4% )。本调查说明我国水牛群中BVD/MD流行在扩大。

牦牛病毒性腹泻/粘膜病的防制研究

20世纪 80年代以来 ,我国牦牛群中陆续发现牛病毒性腹泻 /粘膜病 (BVD/MD) ,血清阳性率在 30 %～ 4 2 .4 %之间 ,病死率在 30 %左右 ,本研究先后从四川、西藏等地牦牛中分离出病毒 ,并对其进行各种生物学特征鉴定后 ,表明该病毒与标准毒属同一种 ,所不同的是四川牦牛病毒株属非致细胞病变型 ,即属NCP型。但回归本动物能复制出典型病例。目前尚无国产牛粘膜病疫苗用于生产。本研究依据猪瘟病毒与牛病毒性腹泻 /粘膜病病毒具有交叉免疫性的原理 ,用猪瘟弱毒苗对牦牛病毒性腹泻 /粘膜病进行预防 ,试验证明用猪瘟弱毒苗可以预防牛病毒性腹泻 /粘膜病 ,且安全可靠 ,具有实用价值。

猪瘟弱毒苗预防牛病毒性腹泻/粘膜病的短期安全性与微量中和试验

作者用猪瘟弱毒苗预防牛病毒性腹泻/粘膜病的短期安全性和中和抗体效价进行了测定.动物短期安全性试验结果表明:用大剂量(每头10～25个免疫剂量单位)猪瘟弱毒苗注射犊牛、成年奶牛、怀孕母牛和牦牛后,对体温、食欲、生产性能及妊娠牛的胎儿均无不良影响.微量中和试验结果表明:成年奶牛每头注射6个免疫剂量单位的猪瘟弱毒苗15d后,有50%产生保护性中和抗体;每头注射10个免疫剂量单位的猪瘟弱毒苗15d后,有83.3%产生保护性中和抗体;小牛每头注射3个免疫剂量单位的猪瘟弱毒苗15d后,有50%产生保护性中和抗体;抗体产生的滴度与免疫剂量成正比.上述结果表明用猪瘟弱毒苗预防牛病毒性腹泻/粘膜病是安全有效的,具有实用价值.

从幼鹿顽固性腹泻病料中检出牛病毒性腹泻——粘膜病病毒

应用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ对长春、前郭、伊通、双阳等地区送检的２８份幼鹿顽固性腹泻病料进行了牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）检测。应用电镜对部分ＥＬＩＳＡ阳性和阴性样品进行负染观察，结果６份阳性样品中均见有ＢＶＤＶ粒子，４份阳性样品未观察到ＢＶＤＶ粒子。结果表明，ＢＶＤＶ可能是引起幼鹿顽固性腹泻的重要病因。

西北和西南五省(区)部分地区黄牛 牦牛牛病毒性腹泻/粘膜病血清学监测

从陕西、甘肃、宁夏、青海和四川五省（区）部分地区的黄牛群、牦牛群采集血清，用细胞中和试验检测牛病毒性腹泻／粘膜病（ＢＶＤ／ＭＤ）抗体，结果黄牛群ＢＶＤ／ＭＤ阳性检出率为４６．１５％，其中宁夏黄牛群的感染率最高（５５．９５％），其次为甘肃（４１．４８％）和陕西（４０．６０％）；牦牛群ＢＶＤ／ＭＤ的阳性检出率为３０．０８％，其中四川牦牛群感染率最高（３８．４６％），其次为甘肃（２９．４１％）和青海（２８．００％）。

河北省奶牛牛病毒性腹泻/粘膜病病毒的分离鉴定

从河北省某规模化奶牛场牛病毒性腹泻/粘膜病(BVD/MD)疑似病例中采集病料,将处理好的病料接种MDBK细胞,盲传9代,得到了不产生细胞病变的病毒。琼脂扩散试验表明本病毒能与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)OregonC24标准阳性血清反应,出现沉淀线;细胞培养物用BVD/MD荧光抗体染色检测,可见到荧光着染的特异性细胞,荧光颗粒出现于胞浆中。双抗体夹心ELISA检测病毒抗原结果BVDVOregonC24VP/N为3.141,分离毒P/N为3.012,P/N>2,与BVDVOregonC24V结果一致;电镜观察到圆形、直径为40～60nm,有囊膜,囊膜表面有突起的病毒粒子,与BVDV颗粒基本一致。经RT-CR检测,扩增出了唯一的315bp的目的条带,进一步证实为牛病毒性腹泻/粘膜病病毒。

鹿感染牛病毒性腹泻－粘膜病病毒的调查

应用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ对吉林省某地区育成梅花鹿、育成马鹿及马鹿感染牛病毒性腹泻－粘膜病病毒（ＢＶＤ－ＭＤＶ）进行了调查．结果育成梅花鹿的带毒率为３４．１％（２８／８２）；育成马鹿的带毒率为１９，６％（１８／９２）；马鹿带毒率为４４．４％（８／１８）。应用电子显微镜对部分ＥＬＩＳＡ阳性及阴性样品进行负染观察、结果ＥＬＩＳＡ阳性样品中均见有ＢＶＤ－ＭＤＶ粒子．ＥＬＩＳＡ阴性样品中均未观察到ＳＶＤ－ＭＤＶ粒子．本试验结果表明，鹿也可感染ＢＶＤ－ＭＤＶ，其在流行病学中的意义有待于进一步研究。

内蒙古地区牛病毒性腹泻－粘膜病流行病学调查

采用微量细胞中和试验，对呼和浩特市、包头市、巴盟和伊盟地区部分牛场及旗县进行了牛病毒性腹泻－粘膜病血清抗体检测。共测２１６份血清，阳性１３５份，阳性率６２．５％，个别牛场阳性率高达１００％，证明内蒙古西部地区普遍存在本病。

我国规模化肉牛场牛病毒性腹泻-粘膜病流行状况监测

从山东、河南和河北省的６个规模化肉牛场随机采肉牛血清８９份，直肠粪拭子１６５份，分别用微量细胞中和试验和双抗体夹心ＥＬＩＳＡ试剂盒检测牛病毒性腹泻粘膜病（ＢＶＤＭＤ）的抗体和抗原。诊断结果：ＢＶＤＭＤ中和抗体阳性率为４６．２％～６５．０％；ＢＶＤＭＤ病毒抗原阳性检出率为５．１％～７７．２％。从而证实我国中原地区肉牛群中存在有ＢＶＤＭＤ。

检测牛病毒性腹泻－粘膜病病毒抗原试剂盒的研制及应用

本研究在双抗体夹心ＥＬＩＳＡ检测牛病毒性腹泻－粘膜病病毒（ＢＶＤ－ＭＤＶ）抗原的基础上，研制了检测ＢＶＤＭＤＶ抗原的试剂盒。经试验证明特异、敏感，４℃保存６个月检测结果稳定；与原方法比较，易于保存及运输，使用方便，为商品化推广应用提供了前提。

四川省部分牛病毒性腹泻／粘膜病血清中和抗体检测

应用细胞中和试验对四川黄牛、水牛、奶牛、牦牛共243份血清进行病毒性腹泻/粘膜病(BVD/MD)的中和抗体检测,结果显示,水牛阳性率较高,达50.0%(21/42),其次为牦牛,达37.5%(15/40),奶牛达26.6%(38/143),黄牛最低,为22.2%(4/18)。表明该病有蔓延和扩大的趋势,值得高度重视。

门诊口腔粘膜病临床用药调研

目的了解口腔粘膜病的主要病种及临床用药特点。方法从2002年6、7月我院所有门诊处方中挑选口腔粘膜病处方,统计处方诊断所涉及的病种及处方数量、金额,并分析处方数量排名前3位的口腔粘膜病用药情况。结果处方诊断所涉及的病种共计30多种,处方数量排名前3位的口腔粘膜病依次是口腔扁平苔藓、复发性阿弗他溃疡和口腔念珠菌病;口腔粘膜病的治疗体现出了同病异治、异病同治、局部疾病全身治疗和中西医结合治疗的特点。结论我院口腔粘膜病患者的病种涵盖了几乎所有种类的口腔粘膜病,合理用药在口腔粘膜病的治疗中发挥着重要作用。

粘膜病病毒感染幼鹿的病原流行病学调查

应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验 (ELISA)对 4个地区幼鹿感染粘膜病病毒 (MDV)进行了检测 ,感染率为 6 0 0 %～ 86 7% ,表明上述地区幼鹿存在着广泛的MDV感染。

奶牛和猪血清中牛病毒性腹泻-粘膜病抗体的检测

牛病毒性腹泻-粘膜病(BVD-MD)是一种病毒性传染病,习惯上简称为牛病毒性腹泻(BVD).以腹泻、消瘦和消化道(口腔、食道和胃肠道)粘膜的充出血、水肿和糜烂为主要特征.

牛病毒性腹泻/粘膜病病毒的分离鉴定 Ⅰ.病毒分离培养、理化特性测定、中和试验

用牛睾丸细胞,从呼和浩特市某奶牛场病牛脾脏中分离出1株病毒,并对其细胞培养特性、形态特征、核酸类型和对某些理化因素的敏感性进行了观察和检测,均与BVD—MDV一致,进一步用标准BVD—MDV Oregon C_(24)V阳性血清对分离病毒进行中和试验,结果为阳性。表明该病毒为BVD—MDV。

口腔粘膜病中虚证与微循环的关系

口腔粘膜病是常见的口腔疾病,其发病率虽不及龋齿和牙周病高,但病变种类繁多,涉及问题复杂,且与全身性疾病密切相关。祖国医学早就认识此类病虽局限于口腔粘膜,但与全身经络、脏腑功能失调,特别和脾胃、肝、肾、心等脏腑密切相关。发病因素又与外邪风、火、燥、湿等有关。为此,我们于1989年2～9月进行口腔粘膜病中医分型论治时,探讨其虚证与微循环的关系。

牛病毒性腹泻-粘膜病病毒地方株的分离及RT-PCR鉴定

自疑似牛病毒性腹泻-粘膜病的流产奶牛粪便及血液中分离得到一株不产生细胞病变的病毒,经双抗体夹心ELISA检测及RT-PCR扩增进一步证实该病毒为牛病毒性腹泻-粘膜病病毒。

Th1和Th2细胞检测在口腔粘膜病中的应用

目的 :观察Th亚群 (Th1及Th2 )在扁平苔藓、复发性口疮及白斑中的变化规律。方法 :采用细胞内免疫组化染色IFN -R(Th1细胞 )和IL - 4(Th2细胞 ) ,对 2 8例扁平苔藓、18例复发性口疮及 12例白斑患者进行了免疫治疗前后外周血单个核细胞(PBMC)Th亚群及Th1/Th2比值测定。结果 :扁平苔藓及复发性口疮患者Th2增高 ,而白斑患者Th1减少 ,Th1/Th2比值明显偏离正常。治疗后Th1/Th2比值趋于正常。扁平苔藓、复发性口疮及白斑患者Th1/Th2比值明显低于对照组 ,经免疫治疗后Th亚群失衡状况明显改善。结论

抗鹿源牛病毒性腹泻-粘膜病病毒特异性单克隆抗体的制备与鉴定

为建立鹿源牛病毒性腹泻-粘膜病病毒(BVDV)检测方法,本研究制备了抗鹿源BVDV特异性单克隆抗体(MAb)。用纯化的BVDV免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经3次有限稀释法克隆和间接ELISA法筛选,获得2株稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株2A3和4B12。通过间接ELISA检测,MAb效价为:上清液及腹水分别为1∶512、1∶640和1∶12800、1∶16000;MAb的亚类鉴定结果表明,2株杂交瘤细胞分泌的抗体亚类均为IgGl亚类;经ELISA测定,2A3和4B12与BVDVC24V株、HCV、BDV、PRV均不发生交叉反应,但与BVDVCCSYD株发生交叉反应;IFA试验结果显示,4B12和2A3与接种BVDVN71株病毒液的细胞反应产生较强的特异荧光;抗原识别位点分析结果表明,2A3和4B12两株MAb所识别的抗原位点相同。这两株MAb的获得为鹿BVDV的检测方法的建立奠定良好的基础。

牛粘膜病病毒E1基因的克隆及原核表达

参考BVDVVEDEVAC株的基因组序列及E2基因的测序结果设计一对引物,扩增出预期585 bp的目的片段。扩增产物克隆至pMD18-T载体,经酶切鉴定获得阳性重组质粒并对其进行测序。测序结果与参考序列VEDE-VAC株比较,二者的核苷酸同源性为100%,推导氨基酸同源性为100%。测序结果经同源性比较,克隆得到的基因与VEDEVAC株同源性最高。系统发生树分析推测E1基因与VEDEVAC株在进化上比较接近。将E1基因定向亚克隆到表达载体pGEX-6p-1中,对阳性重组质粒转化的大肠杆菌BL21进行诱导,E1基因获得了成功表达。