类贻贝粘蛋白水凝胶敷料应用于激光术后创面修复的疗效

目的:观察类贻贝粘蛋白水凝胶敷料应用于激光术后创面修复的临床疗效和安全性。方法:选择2021年4月—2022年12月广西壮族自治区皮肤病医院激光美容术后患者70例为观察对象,随机分为观察组和对照组,各35例。观察组使用类贻贝粘蛋白水凝胶敷料,对照组使用重组胶原蛋白修复敷料。比较两组临床疗效、皮肤屏障功能指标(角质层水分含量、经表皮水分丢失量、皮脂含量)、患者满意度。结果:治疗后,观察组角质层水分含量、皮脂含量均高于对照组,经表皮水分丢失量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P=0.023);观察组总满意度高于对照组,差异有统计学意义(P=0.040)。结论:类贻贝粘蛋白水凝胶敷料在激光美容术后创面修复中的临床疗效显著,可改善皮肤屏障功能,促进创面愈合,提高患者满意度。

水稻生防菌株多粘类芽孢杆菌WY110抗菌蛋白的纯化及其基因克隆

通过DEAE SephadexA 5 0离子交换层析和SephacrylS 2 0 0分子筛层析并采用抑菌活性和SDS PAGE跟踪检测 ,从多粘类芽孢杆菌 (Paenibacilluspolymyxa)WY110菌株中分离纯化到一种对稻瘟病菌具有拮抗活性的抗菌蛋白P2 (分子量约 2 6kD)。平板抑菌试验表明 ,在PDA培养基上 1 5 μg纯化的P2 蛋白即可有效地抑制稻瘟病菌菌丝生长 ,并对所测试的稻瘟病菌不同菌株均表现出抑菌活性。对P2 蛋白的N 端测序结果表明 ,N 末端 2 4个氨基酸序列为H2 N Ala Asn Val Phe Trp Glu Pro Leu Ser Tyr Tyr Asn Pro Ser Thr Trp Gln Lys Ala Asp Gly Tyr Ser Asn 。以此为靶序列在网上用BlastP程序对蛋白质序列数据库进行了类似性检索 ,发现其与来源于芽孢杆菌的β 1,3 1,4 葡聚糖酶前体具有很高的同源性。进一步用此酶的特异底物地衣多糖进行了定性检测 ,验证了P2 蛋白具有 β 1,3 1,4 葡聚糖酶的活性。在此基础上 ,根据P2 蛋白N 末端氨基酸序列及此酶C 端保守性序列设计合成了两端引物 ,以WY110基因组DNA为模板 ,通过PCR高保真扩增获得了P2 蛋白编码基因的全序列 ,并克隆到pMD18 T载体上。核苷酸序列分析表明 ,其 5′端 72个核苷酸序列与蛋白N 端已知的 2 4个氨基酸序列完全吻合 ,序列全长为 6 36bp (GenBank登录号 :AF2

多粘类芽孢杆菌BRF-1抗菌蛋白的分离纯化

通过硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-50柱层析并采用抑菌活性和SDS-PAGE跟踪检测,从多粘类芽孢杆菌BRF-1菌株代谢产物中分离纯化到一种对大豆立枯丝核菌具有拮抗活性的抗菌蛋白,分子量约35.4kD。

响应曲面法优化多粘类芽孢杆菌HT16产生抗菌蛋白的培养基

通过单因子试验对多粘类芽孢杆菌HT16菌株产抗菌蛋白的发酵培养基碳氮源进行优化,确定以硫酸铵、黄豆饼粉为氮源;以蔗糖为碳源。采用Plackett-Burman法筛选出发酵培养基中对产抗真菌蛋白有显著影响的3个组分,分别为土豆、硫酸铵、蔗糖三个因素,以抑菌圈直径大小作为产抗菌蛋白能力大小的判断依据,通过最陡爬坡试验和Box-Behnken试验进一步对3个主要因素进行优化,并对优化结果进行验证,验证结果表明,预测值和实际值有良好的拟合性,此优化模型可靠。最后确定优化发酵培养基组成:30%土豆,0.4%(NH4)2SO4,1.5%蔗糖,0.05%K2HPO4,0.05%MgSO4·7H2O,0.1%黄豆饼粉,pH6.5。该优化发酵培养基,其抗菌活性增加了1倍,且芽孢数提高了2.5倍。

人类唾液粘蛋白对口腔变形链球菌凝集的实验研究

目的 :观察人的腮腺唾液 (PARS)、除腮腺外唾液 (EPS)及纯化的高相对分子质量唾液粘蛋白 (MG1)对变形链球菌Ingbritt、LM 7、远缘链球菌OMZ 176的凝集作用。方法 :采用分光光度计 (酶标仪 )测其A570值 ,测定唾液及MG1对变链菌和远缘链球菌的凝集力。结果 :EPS介导的凝集力最高 ,MG1次之 ,PARS最低。结论 :MG1具有一定介导口腔变链菌凝集作用 ,但凝集力低于EPS 。

粘绿木霉Gv29-8的碳水化合物活性酶类蛋白预测及遗传关系分析

利用CAT(CAZymes analysis toolkit)在线分析程序对Trichoderma virens Gv29-8中碳水化合物活性酶类蛋白(carbohydrate-active enzymes,CAZymes)不同亚家族的分布情况进行分析,结果表明:粘绿木霉Gv29-8中含有185个CAZymes蛋白,分为主要类别和复合类别两种类型;其中,主要类别含有71个GH蛋白、54个CBM蛋白及12个AA蛋白、25个CE蛋白、3个PL蛋白、3个GT蛋白;复合类型含有17个蛋白。遗传关系分析表明,CAZymes分类应进一步细化到更小的类别。

人类高相对分子质量唾液粘蛋白的分离纯化及鉴定

目的 :提取人类高相对分子质量唾液粘蛋白 (MG1)并对其性质进行初步鉴定。方法 :用十六烷基三甲基溴化铵 (CETAB)沉淀 ,羧甲基葡聚糖 (CM Sephadex)离子交换和葡聚糖凝胶 (SephadexG 2 0 0 )过滤层析从人类除腮腺外唾液中提取MG1,并对其蛋白质含量、氨基酸组成 ,纯度及相对分子质量进行检测。结果 :提取的MG1蛋白质含量为 14 .17% ,氨基酸组成分析表明苏氨酸、丝氨酸、脯氨酸、丙氨酸为优势基酸 ,占 45 .6 % ,相对分子质量为 5 0 00 0 0～ 10 0 0 0 0 0。结论 :此技术提取MG1方法简单温和 。

气道粘液、粘蛋白及其分泌调节

Mucus secreted mainly by epithelial goblet cells and submucosal glands covering the respiratory tract plays an important role in the protection from external aggressions, such as solid particles, pathogens and chemical agents by mucociliary clearance. The viscoelastic properties of mucus are mainly determined by the presence of extensively-glycosylated high molecular weight mucins. A lot of factors influence the expression and secretion of mucins in airway, lead to mucus overproduction, which is a distinguishing feature of chronic obstructive pulmonary disease (COPD) and causes disruption of the mucociliary clearance function, resulting in airway block, chronic infection and death.

钙激活的氯通道gob-5和粘蛋白基因Muc5ac在小鼠哮喘模型肺部的表达

目的:研究“钙激活的氯通道”成员之一gob-5和粘蛋白基因Muc5ac在小鼠哮喘模型肺部的表达。方法:22只清洁级BALB/c小鼠随机分成哮喘组和对照组,用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)和免疫组化法分别测定肺组织gob-5mRNA和粘蛋白基因Muc5ac蛋白的表达。结果:小鼠哮喘组肺组织gob-5mRNA表达阳性(0·2297±0·0186,A),而对照组未出现gob-5mRNA的表达(P<0·01);哮喘组Muc5ac蛋白表达(0·6637±0·0127,A)明显高于对照组(0·2060±0·0179,A)(P<0·01);哮喘组肺组织gob-5mRNA表达与Muc5ac蛋白表达呈直线正相关(r=0·864,P<0·05)。结论:Gob-5mRNA表达的上调可能在哮喘小鼠气道粘液过度分泌中起着关键作用;抑制gob-5的表达将为哮喘的治疗提供新的策略。

多粘类芽孢杆菌及其产生的生物活性物质研究进展

多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)对人或动植物没有致病性,某些菌株可产生如抗生素、拮抗蛋白、植物激素、酶、絮凝剂等多种生物活性物质。这些活性物质在植物病害防治以及人和动物疾病治疗方面具有诱人的应用前景。本文对近年来多粘类芽孢杆菌及其产生的生物活性物质的研究进展进行了综述。

贻贝粘蛋白创面修复敷料体外细胞毒性的检测方法

背景:在贻贝粘蛋白创面修复敷料的体外细胞毒性检测中,由于蛋白分子表面带正电荷,1∶9的浸提比会使细胞聚团而导致测定产生误差,影响测定结果。目的:在已有标准的基础上,根据贻贝粘蛋白特殊的性质及使用状态,改进贻贝粘蛋白创面修复敷料的浸提比例或前处理方法。方法:①浸提液法:将贻贝粘蛋白创面修复敷料与细胞培养液分别以1∶9、1∶131浸提比例制备浸提液,分别以贻贝粘蛋白创面修复敷料浸提液、天然乳胶浸提液、高密度聚乙烯浸提液及细胞培养液培养L929小鼠成纤维细胞。②直接接触法:分别以蒸馏水、贻贝粘蛋白创面修复敷料溶液、二甲基亚砜及细胞培养液培养L929小鼠成纤维细胞。结果与结论:采用浸提比1∶9测定样品体外细胞毒性时,细胞产生聚团作用,不适用于样品毒性的检测;调整浸提比为1∶131后,絮凝作用和细胞聚团现象明显降低,提高了检测结果的可信度,显示样品无细胞毒性。直接接触法显示样品无细胞毒性。采用经调整过的浸提液法或直接接触法均可适用于贻贝粘蛋白创面修复敷料体外细胞毒性的检测。

抗粘蛋白1单链抗体的构建及其功能初步分析

目的分离鼠源抗粘蛋白1(mucin1,MUC1)单克隆抗体可变区基因,构建有结合功能的单链抗体,并初步检测结合活性。方法提取杂交瘤细胞总mRNA,合成cDNA后,PCR扩增鼠特异性抗体可变区编码基因,通过9个氨基酸的连接子构建表达单链抗体的原核重组表达载体,体外诱导表达纯化后,采用Westernblot和流式细胞术方法分析单链抗体与变性或天然状态下抗原的结合活性。结果在杂交瘤细胞中成功分离到抗体轻重链可变区基因,重组链接后形成单链抗体能够在大肠杆菌中分泌表达,Westernblot和流式细胞术分析表明该单链抗体能够与变性或天然状态下的T47D肿瘤细胞表面MUC1特异性结合。结论成功制备具有生物活性的抗肿瘤相关MUC1单链抗体,该单链抗体具有与MUC1特异性结合的生物学活性。

多粘类芽孢杆菌脂肽类抗生素合成与分泌机制研究进展

多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)是一种常见的植物根际促生细菌,对植物具有直接或间接生防作用,已在控制农业病害、促进作物生长等方面广泛应用。其可抑制植物病原菌,主要通过产生多粘菌素、杀镰刀菌素等脂肽类抗生素发挥作用。关于多粘类芽孢杆菌的脂肽类抗生素合成和分泌等促生相关分子机制的研究具有重要理论和应用价值。本研究综述了多粘类芽孢杆菌的分子遗传操作体系,多粘菌素和杀镰刀菌素合成基因簇的鉴定、表达调控基因的分析和分泌机制,并从脂肽类抗生素合成和分泌机制角度展望其今后的研究趋势。

胸腔积液中粘蛋白1表达的临床意义

目的:评价MUC1mRNA在非小细胞肺癌患者和非肿瘤患者胸腔积液中表达的临床意义。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,对30例肺癌患者、20例非肿瘤患者的胸腔积液中的MUC1mRNA表达进行检测。结果:非肿瘤患者的胸腔积液中未检测到MUC1mRNA的表达。肺癌患者胸腔积液中MUC1mRNA的敏感性为30%(9/30),特异性为100%。胸腔积液中MUC1mRNA的表达与肺癌组织类型密切相关,P<0.05;与患者年龄、性别、吸烟与否,肿瘤生长部位无明显相关,P>0.05。结论:应用RT-PCR法检测肺癌患者胸腔积液中MUC1mRNA的表达,具有一定的临床参考价值。

鼠-人嵌合抗粘蛋白1 IgG1全抗体的构建及其功能初步分析

目的获得鼠-人嵌合抗粘蛋白1(mucin1,MUC1)IgG全抗体,降低鼠源抗MUC1单克隆抗体(monoclonalantibody,mAb)的异种免疫原性,并在哺乳动物细胞中表达制备,初步分析其特性。方法 PCR扩增鼠mAb-6E3可变区编码基因,通过特异性限制性酶切位点克隆入含有人源IgG1抗体恒定区的哺乳动物细胞重组表达载体,获得IgG全抗体表达质粒,瞬时转染293T哺乳动物细胞,直接免疫荧光法确定细胞内人源IgG抗体表达,收获转染细胞培养上清,经亲和层析纯化后,经SDS-PAGE蛋白电泳、Western blot、流式细胞仪检测和表面等离子共振技术等分析所制备IgG抗体分子特点及其与MUC1抗原的结合活性及动力学参数。结果所构建鼠-人嵌合IgG表达质粒能够在哺乳动物细胞中有效表达并分泌到细胞上清,纯化后蛋白质电泳分析与预期IgG抗体分子大小一致,能够与变性或天然状态下的T47D肿瘤细胞表面MUC1特异性结合,经表面等离子共振技术分析表明抗体的亲和力约为KD=2.8×10-7M。结论获得鼠-人嵌合抗MUC1 IgG抗体,具有与MUC1特异性结合的生物学活性。

67KDa层粘连蛋白在小胶质细胞上的存在及EGCG对其影响的研究

目的:证明67KDa层粘连蛋白(67LR)在小胶质细胞中的存在,并探讨67LR是否介导了EGCG抑制小胶质细胞的效应。方法:混合培养神经细胞-小胶质细胞,细菌脂多糖(LPS)刺激后分离纯化小胶质细胞,应用免疫荧光细胞双标及Western blot的方法观察小胶质细胞的形态、数量变化,在EGCG干预后观察小胶质细胞形态、数量的变化以及67LR表达量的变化。结果:小胶质细胞上表达一定量的67LR,LPS刺激小胶质细胞后显示其形态变化、数量增多,67LR表达总量增加,给予EGCG干预后小胶质细胞数量减少、胞体变小、67LR的总量减低,接近于静息状态的小胶质细胞。结论:小胶质细胞存在67LR的表达,并可能介导了EGCG抑制小胶质细胞的效应。

肿瘤相关粘蛋白MUC1及其mRNA与卵巢上皮性肿瘤关系的研究

目的 :初步探讨肿瘤相关粘蛋白MUC1基因及其蛋白与卵巢上皮性肿瘤的关系。方法 :采用原位杂交法和免疫组化ABC法 ,检测 6 5例卵巢上皮性肿瘤组织和 8例正常卵巢组织MUC1mRNA及其蛋白的表达。结果 :MUC1mRNA和MUC1阳性表达皆位于胞浆和胞膜 ,多呈灶状分布。MUC1mRNA和MUC1在卵巢癌中的检出率分别为 75 .6 % ,80 .0 % ,显著高于良性上皮性肿瘤的 4 0 % ,4 5 %和正常卵巢组织的 2 5 .0 % ,37.5 % (P <0 .0 0 5 )。二者高表达与卵巢癌的期别晚、组织分化差及淋巴结转移有关。结论 :MUC1作为新型肿瘤标志物 ,与卵巢癌的发生。

慢性肝病血、尿透明质酸及层粘连蛋白检测分析

对５４例慢性肝病患者检测血、尿透明质酸（ＨＡ）及层粘连蛋白（ＬＮ），旨在探讨其对诊断慢性肝病肝纤维化程度的临床价值。结果：重度慢肝（ＨＣＨ）、慢重肝（ＣＳＨ）和肝硬化或合并肝癌（ＬＣ）组血ＨＡ、ＬＮ显著高于轻、中度慢肝（ＲＣＨ、ＭＣＨ）组（Ｐ＜０．０１）；ＭＣＨ血ＨＡ亦显著高于ＲＣＨ（Ｐ＜０．０１），而各组间尿ＬＮ比较差异无显著性（Ｐ＞０．０５）；３５例血ＨＡ、ＬＮ均异常的慢性肝病患者，ＨＣＨ、ＣＳＨ及ＬＣ组尿ＬＮ异常率仅为８％，而尿ＨＡ达１００％，显著高于ＲＣＨ及ＭＣＨ组（Ｐ＜０．０１），各组间尿ＬＮ异常率无统计学意义。提示：检测血ＨＡ、ＬＮ及尿ＨＡ对判断慢性肝病肝纤维化程度具有一定的诊断价值。

血管内皮细胞钙粘蛋白在2型糖尿病患者中的表达及临床意义

目的:探讨血管内皮细胞钙粘蛋白(VE-cadherin)在2型糖尿病患者中的表达及临床意义。方法:选择2型糖尿病患者80例及同期健康体检者80例,均测定空腹血糖(FBG)、餐后2h血糖(P2hBG)以及血清VE-cadherin浓度,并进行比较分析,探讨2型糖尿病患者治疗前、后的FBG、P2hBG、VE-cadherin浓度变化。结果:2型糖尿病患者的FBG、P2hBG、VE-cadherin水平均明显高于健康体检者,且存在统计学差异;2型糖尿病患者经过治疗,FBG、P2hBG、VE-cadherin水平均明显下降,趋于正常水平,与治疗前比较存在统计学差异。结论:血管内皮细胞钙粘蛋白的表达在2型糖尿病的发生发展过程中发挥着重要作用,可以作为有效的临床诊治指标。

多粘菌素外排转运蛋白的研究进展

多粘菌素是一种脂肽类抗生素,对大部分革兰氏阴性菌和小部分革兰氏阳性菌具有杀菌作用。多粘菌素主要由多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)在胞内产生,再通过外排转运蛋白转运到胞外,外排转运蛋白运输多粘菌素的能力在一定程度上影响了多粘菌素的产量。多粘菌素外排转运蛋白主要存在于多粘类芽孢杆菌中,在一些多重耐药细菌中也广泛存在。本文重点介绍已鉴定的多粘菌素外排转运蛋白的类型、结构和转运特征等研究进展,以期为多粘菌素跨膜分泌机制的深入研究提供理论基础。