基于白尾海雕粪便样品的SSR引物及性别鉴定引物的开发

白尾海雕(Haliaeetus albicilla),是鹰形目鹰科海雕属的一种大型猛禽、国家一级保护动物,位于食物链顶端,对于维持生态平衡和生物多样性具有重要作用.每年冬季,大批白尾海雕在我国吉林省珲春市敬信湿地越冬,形成了国内最大的越冬种群.为了实现基于粪便样品开展白尾海雕种群遗传学等方面的研究的可行性,填补白尾海雕亚洲种群的研究空白,需要开发新的微卫星DNA,即SSR(simple sequence repeat)引物和性别鉴定引物.本研究以NCBI上公布的白尾海雕全基因组数据为基础,进行了SSR引物和性别鉴定引物的开发.随后,使用白尾海雕粪便样品对引物进行了筛选,最终获得9对SSR引物和2对性别鉴定引物.本研究为白尾海雕种群遗传学深入研究提供了丰富有效的SSR分子标记,也为白尾海雕性别分子鉴定提供了新的引物选择.

圈养华北豹粪便样品中生殖激素的变化规律

为了提高华北豹的繁殖效率,了解华北豹生殖激素的变化规律,特别是由下丘脑-垂体-性腺轴调控下分泌的雌二醇(E_(2))、促黄体素(LH)和孕酮(P)在华北豹的发情、排卵和妊娠中的作用,本试验采集2~3月和8~9月华北豹的粪便样品,提取样品中的生殖激素E_(2)、LH和P,并利用放射免疫分析法(RIA)测定其含量。结果显示,在2~3月华北豹粪便样品中,E_(2)和P出现规律性的变化,并且E_(2)出现2次峰值;LH呈现脉冲式的变化,并且有2次脉冲式峰值。在8~9月华北豹的粪便样品中,E_(2)、LH和P有一定的规律,LH呈现出1次脉冲式峰值,P维持在高位水平。结果表明,对有发情症状的华北豹可以在2~3月和8~9月进行合笼配种。

马鹿粪便样品保存方法对DNA提取质量的影响

采用冷冻法采集、保存马鹿粪便DNA样品,并将冷冻保存、乙醇浸泡保存和干燥后保存的样品进行DNA提取测试、比较分析。结果表明,采用冷冻保存法保存的马鹿粪便样品DNA提取的质量明显优于酒精浸泡和干燥保存方法,此方法采集和保存简单,试验省时、经济,可应用于寒冷地区冬季各种动物的粪便取样。

圈养华北豹粪便样品中雌二醇提取方法的研究

本研究以圈养华北豹粪便样品中雌二醇的提取方法为研究对象。本实验中比较了甲醇加热法、乙醇加热法和乙醇蒸馏水,3种粪样中提取雌二醇的技术方法,利用放射免疫分析法测定雌二醇的含量。结果显示,甲醇加热法、乙醇加热法和乙醇蒸馏水法3种方法分别提取浓度为(2815.47±597.47)pg/mL、(7660.25±1546.11)pg/mL和(1937.83±531.71)pg/mL。其中乙醇加热法是这3种方法中提取含量可达(7660.25±1546.11)pg/mL,通过统计学分析发现,乙醇加热法与其他2种方法差异显著。实验证明:利用乙醇加热法提取圈养华北豹粪便雌二醇是一种比较理想的方法。

马鹿粪便样品微卫星基因型的可靠性评价

[目的]评价马鹿粪便DNA的微卫星基因型可靠性,为后续保护遗传学方面的研究提供参考。[方法]选择7个多态性较高的微卫星位点,扩增167份马鹿粪便DNA,通过3～4次的重复扩增统计等位基因丢失率和假等位基因出现率。[结果]7个位点的等位基因丢失率平均为0.034,假等位基因出现率平均为0.023。[结论]对于杂合体,3～4次的重复扩增可以满足基因型后续分析要求,而纯合体需要7次以上的重复扩增。

实验猴粪便样品中沙门氏菌LAMP检测方法的建立及应用

据GenBank数据库中沙门氏菌种特异性基因(fimY)的保守序列,试验设计1套特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,建立了实验猴粪便中沙门氏菌的LAMP检测方法。该方法对沙门氏菌纯培养的敏感性可达1.35×101 CFU/mL,对临床样品的敏感性可达1.35×103 CFU/mL,检测敏感性与常规PCR方法相当;LAMP方法全部反应可在1h内完成;可通过肉眼观察颜色直接判定结果;对其他常见病原体的检测结果均为阴性。结果表明建立的LAMP方法简便、快速、灵敏、特异,可用于粪便样品中沙门氏菌的快速检测。

LAMP方法快速检测实验猴粪便样品中志贺菌

为了缩短检测周期,加快通关速度,根据基因库中志贺菌属特异性基因(ipa H)的保守序列,试验设计1套特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,建立了实验猴粪便中志贺菌的LAMP检测方法。对志贺菌纯培养的敏感性可达7.5×100CFU/m L,对临床样品的敏感性可达到7.5×103CFU/m L;整个检测过程仅需12 h,且不需要昂贵的实验设备;该方法对12株其他菌株无扩增反应,且试验结果可通过肉眼观察颜色变化直接判定。试验表明,LAMP方法简便、灵敏、特异,适用于实验猴粪便样品中志贺菌的快速检测。与PCR相比,LAMP方法更加适合在基层推广使用。

乳酸菌分离培养基对粪便样品筛选能力的探究

目的探究在不同氧气条件下,不同的常用乳酸菌分离培养基分离婴儿粪便样品中微生物的能力,找出最合适的益生菌分离培养基及相关分离条件。方法以婴儿粪便为原料,在利用乳酸杆菌选择性琼脂培养基(Lactobacillus selective broth,LBS)、MRS以及MRS5.23种培养基对同一样品在有氧和厌氧条件下分别进行涂布培养。随后对样本内菌群进行16S rRNA扩增子测序,通过对测序数据的菌落组成、α多样性、β多样性及后续代谢的模拟分析,阐释了不同培养基对粪便样品的筛选特征,包括筛选后菌群的组内多样性、组间多样性、菌群功能预测以及培养基中乳酸菌所占比例等。结果对于婴儿粪便样品,所测5种分离条件均能对肠道中的乳酸杆菌进行有效分离。在厌氧条件下除LBS培养基外,各培养基中均有双歧杆菌出现,所占比率约在20%~30%之间,同时有氧环境下的MRS培养基中也存在少量双歧杆菌,所占比率约为5%。结论对于粪便样品中乳杆菌分离能力最适的条件是37℃下厌氧条件的LBS培养基,对双歧杆菌分离能力最适的条件是37℃下厌氧环境下的MRS培养基。

普氏原羚粪便样品中皮质醇激素保存时效研究

由于采集粪便样品无需对目标动物进行捕捉、限制或影响其行为,检测粪便样品中类固醇激素的方法近几十年来在野生动物保护、行为生态学、生理生态学等诸多领域得到广泛应用。普氏原羚(Procapra przewalskii)由于其种群和行为等方面的特殊性,较难进行直接的生理监测,因此采用间接手段监测其粪便类固醇激素就显得很有必要。为探讨不同保存方法对普氏原羚粪便中皮质醇的影响,我们将采集到的新鲜粪便样品充分混合后分为30份,各取10份分别保存于﹣20℃、4℃和20℃,在保存2、5、7、10、15、20、25、30 d和50 d时,使用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测样品中的皮质醇含量。单因素方差分析(One-way ANOVA)结果显示,保存于﹣20℃的粪便样品中皮质醇含量在保存50 d内没有显著变化,含量为(11.747±2.951)ng/g(平均值±标准差),(F=1.966,n=81,P>0.05),而保存于4℃和20℃的样品则出现明显波动(4℃:F=23.643,P<0.05;20℃:F=35.126,P<0.05),含量分别为(15.951±6.766)ng/g和(11.042±6.094)ng/g。保存于4℃和20℃的样品中皮质醇含量在24 h内均有上升,在随后的几天逐渐下降。结果表明,﹣20℃冷冻可以简便有效地保存普氏原羚粪便样品中的皮质醇激素。同时,在野外暴露超过24 h的粪便样品会造成测定结果产生误差,在采集样品时要考虑到潜在的影响。

广西地区犬和猫肠道病毒的病原学调查研究

为了解引起广西地区犬和猫腹泻等肠道病原的分布情况,并探究犬和猫新型肠道病毒感染的临床特征,为临床中及早诊治和防控肠道疾病提供参考依据,本试验采集宠物犬和猫粪便拭子样品394份(犬样品172份,猫样品222份),并通过聚合酶链式反应(PCR)或反转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)筛查犬细小病毒(CPV)、猫瘟病毒(FPV)和查帕马细小病毒(ChPV)等13种主要犬和猫肠道病毒,并分析肠道病毒阳性率与年龄、性别、免疫状况和临床症状之间的相关性。结果显示,犬粪便样品中总阳性样品数为49份,占比28.49%;其中CPV的阳性率最高,达到15.12%,临床症状为典型的肠道症状;其次,犬粪便样品中还检测到犬冠状病毒(CCoV,4.65%)、猫杯状病毒(FCV,4.07%)、嵴病毒(KoV,4.07%)、博卡病毒(BoV,3.49%)、犬瘟热病毒(CDV,2.91%)和布法病毒(BuV,0.58%);其中11份粪便样品混合感染了2种及以上种类的肠道病毒,CPV感染占10份。幼龄犬对CCoV和FCV比较易感;各肠道病毒阳性率与性别无相关性,部分肠道病毒阳性率与免疫状况和临床症状有相关性。猫粪便样品中总阳性样品数为32份,占比14.41%;FPV的阳性率最高,达到8.11%;其次,猫粪便样品中还检测到新型肠道病毒,包括FCV(4.05%)、ChPV(1.35%)、BoV(1.35%)、BuV(0.45%)和猫冠状病毒(FCoV,0.45%);其中混合感染样品仅4份,而FCV感染占3份。FPV和BoV阳性率与猫的年龄和免疫状况存在相关性,各肠道病毒阳性率与猫的性别和临床症状无明显相关性。值得关注的是,犬和猫粪便中均可检测到A型流感病毒(IAV),阳性率分别为2.91%和0.45%。综上表明,CPV和FPV仍是引起犬和猫肠道疾病的主要病原,同时也是混合感染的重要组成;多种新型肠道病毒的阳性率虽然不高,但仍是引起肠道或肠外疾病中不可忽视的病原;IAV的检出再次强调了犬和猫作为“中间宿主”的重要作用。本试验结果不仅为犬和猫肠道传染病的防控提供预警,也为切断宠物-人IAV传播提供重要参考。

吉林省畜禽养殖场粪便中抗生素污染特征

本文选择吉林省东中西猪、牛、鸡养殖场,采集新鲜粪便样品,分析测试粪便中土霉素、金霉素、磺胺嘧啶等抗生素含量特征,分析吉林省不同地区畜禽粪便中抗生素污染特征,为进一步了解吉林省不同地区畜禽养殖场粪便中抗生素污染特征提供数据基础。

树鼩粪便中沙门氏菌LAMP检测方法建立及应用

目的建立树鼩粪便沙门氏菌的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,并对此方法进行初步应用。方法根据沙门氏菌种属特异性基因inv A(侵袭蛋白基因A)的保守序列,设计合成特异性LAMP引物。分别设定十个反应温度即57℃~66℃和十个反应时间即24~42 min进行优化,并测定本方法的特异性和灵敏度;同时进行普通PCR实验,作为本方法的验证和比较。用建立的LAMP法对91份野生来源的树鼩稀便样品进行检测。结果优化反应条件选出反应温度为62℃,反应时间34 min;该方法对沙门氏菌的灵敏度可达3.36×101CFU/m L,比普通PCR方法高10~100倍;对10种树鼩来源的肠道细菌进行LAMP检测,只有沙门氏菌属的肠炎沙门氏菌和乙型副伤寒沙门氏菌检测为阳性,其余为阴性;对91份野生树鼩粪便样品进行LAMP检测,阳性检出率为20.88%;LAMP法的所有反应可在40 min内完成。结果可通过肉眼观察颜色变化直接判定。结论所建立的LAMP方法具有便捷、快速、灵敏、特异等特点,可用于树鼩粪便中沙门氏菌的大规模快速检测。

不同提取方法对食蟹猴粪便中结肠小袋虫PCR检测的影响

比较不同抽提方法对结肠小袋虫DNA提取效率的影响,从而获得一种高效、稳定的提取粪便样品总DNA的方法,继而为后续试验提供基础材料。采用3种商品化基因组DNA提取试剂盒和经典酚-氯仿法,分别对食蟹猴粪便样品进行DNA提取,作为模板,进行PCR检测,观察不同抽提方法对DNA扩增效果的影响。4种提取方法均能扩增出目的条带,粪便抽提试剂盒的PCR扩增效果最好,测定DNA含量达到42.05 ng/μL。同时利用粪便抽提试剂盒对广西地区采集的68份食蟹猴粪便样品进行DNA提取,经PCR检测其阳性率为17.65%(12/68)。4种提取方法中以粪便抽提试剂盒对粪便样品DNA提取后经PCR扩增效果最好,可为临床粪便样品DNA提取PCR检测提供参考。

从猪粪便中分离纯化毕氏肠微孢子虫的改良方法

为了从粪便样品中获得纯度更高的毕氏肠微孢子虫(Enterocytozoon bieneusi,E.bieneusi).我们从患腹泻病症的猪粪便中,通过改良网孔过滤、Percoll等密度离心以及蔗糖梯度离心等步骤,将粪便中的杂质去除,获得纯度更高的毕氏肠微孢子虫.同时在纯化的必要环节进行PCR法辅以韦伯氏染色法对获得的样品进行鉴定,从而进一步提高纯化的目的性和准确性.此方法大大提高了所获得毕氏肠微孢子虫的纯度,最高能达到占样品总微生物的15%.比现有报道的9%提高了近1倍.毕氏微孢子虫感染人类和牲畜,严重威胁公共卫生健康.但由于其在体外纯化和繁殖困难,关于它致病机理的研究非常有限.通过此改良方法获得更加纯化的毕氏肠微孢子虫,为开展更多更深入的研究提供了坚实的基础.

不同感染阶段奶牛粪便副结核分枝杆菌的排逸状况分析

为探索奶牛感染副结核分枝杆菌的粪便排菌情况,本试验提取血清抗体阳性奶牛的粪便DNA,通过Real-time PCR试剂盒进行核酸检测,综合分析不同感染阶段奶牛粪便中副结核分枝杆菌的排逸状况。结果显示,血清抗体阳性牛可通过粪便排放副结核分支杆菌,粪便检出率为5.82%(11/189),其中亚临床期牛的粪便检出率为2.98%(5/168),而临床期牛的粪便检出率为28.57%(6/21),且临床期粪便排放的副结核分支杆菌数量为亚临床期的32倍。鉴于感染副结核的奶牛会通过粪便排放致病菌到环境中,建议牛场标记感染牛,并在出现腹泻症状时淘汰。

粪便弹性蛋白酶反映活动性溃疡性结肠炎的活动性

作者曾证实,克隆病(CD)病人血浆弹性蛋白酶,蛋白酶抑制剂复合物(EPIC)升高,但在活动性溃疡性结肠炎(UC)中只是轻度升高,作者设想肠腔内容物EPIC水平较之血浆可能与疾病活动性有更好的相关性。对象和方法:取20例CD病人、16例UC病人和10例正常对照者没有尿液混杂的新鲜粪便样品,测重,同时测血白细胞计数和血浆EPIC和CRP水平(ELISA法),采用Mann-Whitney和Spearman相关实验处理各组数据。

短链脂肪酸气相色谱-质谱测定方法的建立

肠道微生物群及其主要代谢物短链脂肪酸(SCFAs)被认为是肠道内环境稳定和代谢疾病发生的重要因素。气相色谱-质谱(GC-MS)是生物样品中最常用的短链脂肪酸谱分析方法。三甲基硅基(TMS)衍生化试剂N,O-双(三甲基硅基)-三氟乙酰胺(BSTFA)是气相色谱/质谱分析中常用的提高灵敏度和准确性的试剂,采用BSTFA对粪便、盲肠和结肠内容物的SCFAs进行GC-MS分析,并采用选择离子监测模式对短链脂肪酸进行高灵敏度的定量分析。在37℃条件下,用BSTFA衍生的SCFAs具有良好的线性关系(R2>0.998),回收率86%~96%,精密度RSD<4%。结论:采用GC-MS和BSTFA衍生化结合的方法可应用于粪便中SCFAs的定量分析,是一种准确、通用的检测方法。

猪腹泻病发病原因及防治的研究

猪腹泻是一种猪流行性疾病,发病率高,给养殖业带来严重的经济损失。笔者综述了猪腹泻的发病原因和防治方法,以提高猪只抗病力,并建议养殖者应做好以下几个方面:加强饲养管理,控制饲料用量及料源供应;定期检测粪便样品质量、数量及pH值等指标;重视猪群的健康知识宣传教育工作以及对动物防控技术的应用研究。同时展望了未来的发展趋势,以提高养殖户抗疫能力,减少猪腹泻发生造成的经济损失,从而促进养殖业的可持续发展。

勐养保护区亚洲象微卫星位点筛选及种群遗传多样性分析

本文以亚洲象肌肉样品提出的DNA为模板,从非洲象31个微卫星位点和5个已知亚洲象微卫星位点中筛选勐养亚洲象的微卫星位点,进而对在西双版纳勐养保护区3年采集到的191份亚洲象粪便样品中提出的DNA进行特异性PCR扩增、基因分型、检测位点信息和遗传多样性分析。结果表明:36个位点中有14个位点能在亚洲象肌肉样品提出的DNA中成功扩增,且经测序证实为微卫星位点。其中9个多态位点能在185份粪便样品DNA中稳定扩增。勐养种群中,3个位点可能偏离Hardy-Weubberg平衡,至少8个位点间无明显连锁存在,平均等位基因数3.78±1.72,平均期望杂和度0.32±0.06,平均观察杂和度0.36±0.02,平均多态信息含量0.28,说明这9个位点适用于勐养亚洲象的遗传学研究。根据微卫星位点的杂合度和等位基因频率,相比于其他亚洲象种群,勐养亚洲象种群遗传多样性较低且等位基因频率具有特异性。

河南地区鸭隐孢子虫病流行病学调查

隐孢子虫病是重要的人兽共患原虫病,广泛分布于世界各地.隐孢子虫(Crptosporidium)宿主种类广泛,可以寄生于240多种动物,隐孢子虫有效种目前已达到16个,另有40多个基因型.其中已确定的禽类有效种有3个,即贝氏隐孢子虫(C.baileyi)、火鸡隐孢子虫(C.meleagridis)和鸡隐孢子虫(C.galli),还可能存在新的有效种和基因型,至少存在有2个未命名种(分别寄生于鹌鹑和鸵鸟[1])和3个新基因型(从黑鸭分离到的鸭基因型和加拿大鹅分离到的两个鹅基因型)[2].……