组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)在动脉粥样硬化斑块稳定性中的作用

组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)是一种含Kunitz型结构域的丝氨酸蛋白酶抑制剂,其生理功能和病理作用尚不清楚。由于TFPI-2在抑制恶性肿瘤侵袭转移中的重要作用及肿瘤侵袭转移与动脉粥样硬化斑块不稳定破裂的原因相似,研究者的目光开始转向TFPI-2对斑块稳定性的作用。本文就TFPI-2在动脉粥样硬化斑块稳定性中的作用作一综述。

组织因子途径抑制物-2的结构及其生物学作用研究进展

蛋白水解失调是机体许多病理过程的主要特征，例如癌症、动脉粥样硬化和炎症等。蛋白酶抑制剂在血液凝集、补体固定、纤维蛋白溶解、受精和胚胎形成等多种生物学过程中均发挥重要的调控作用。大部分的蛋白酶抑制剂都具有多肽支架的特征，包括Kunitz家族、Kazal家族、Serpin家族和Mucus家族等，其中Kunitz家族即丝氨酸蛋白酶抑制剂家族由20多个成员组成，主要包括牛胰蛋白酶抑制剂（bovine pancreatic trypsin inhibitor，BPTI）、组织因子途径抑制物（tissue factor pathway inhibitor，TFPI-1）及其同系物TFPI-2等，

粪便SDC2、TFPI2、SFRP2基因甲基化联合检测在结直肠癌早期筛查中的临床价值

目的探讨粪便SDC2、TFPI2、SFRP2基因甲基化联合检测在结直肠癌早期筛查中的临床价值。方法收集苏州大学附属第一医院2021年6月至2022年2月就诊患者105例,其中结直肠癌组患者30例,腺瘤组患者45例,健康对照者30名,采用荧光定量PCR法检测患者粪便SDC2、TFPI2、SFRP2的甲基化情况。分析粪便SDC2、TFPI2、SFRP2甲基化及其三者联合检测诊断结直肠癌的敏感度及特异度,以病理结果为金标准,通过ROC曲线分析该检测方法对疾病的诊断效能。结果结直肠癌组患者粪便SDC2、TFPI2、SFRP2甲基化及其联合结直肠癌检测阳性率高于腺瘤组和正常对照组,且腺瘤组高于正常对照组。SDC2、TFPI2、SFRP2甲基化及其联合检测结直肠癌的敏感度分别为46.7%、53.3%、66.7%、76.7%;特异度分别为96.7%、93.3%、96.7%、86.7%。ROC曲线分析显示粪便SDC2、SFRP2、TFPI2甲基化联合检测筛查结直肠癌的效能较高。结论粪便SDC2、TFPI2、SFRP2甲基化联合检测对结直肠癌早期筛查的诊断价值较高,具有重要意义。

5-Aza-CdR对非小细胞肺癌细胞株A549细胞TFPI-2基因甲基化水平及表达的影响

目的:探讨甲基化酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株A549中抑癌基因组织因子途径抑制物2(TFPI-2)基因甲基化水平及基因表达的影响。方法:用不同浓度的5-Aza-CdR[(1、5、10)×10-6mol/L]处理肺癌细胞株A549细胞,不加药物(0 mol/L)作为对照组。药物处理72 h后,甲基化特异性PCR(MSP)检测A549细胞TFPI-2基因的甲基化状态;Real-time PCR技术检测A549细胞TFPI-2基因mRNA的表达;Western blot检测A549细胞TFPI-2蛋白的表达。结果:MSP检测到对照组A549细胞TFPI-2基因呈高甲基化状态,5-Aza-CdR处理异常甲基化得到逆转。Real-time PCR检测显示(0、1、5、10)×10-6mol/L的5-Aza-CdR处理A549细胞72 h后,相对mRNA表达水平分别为1±0、1.49±0.14、1.86±0.09、5.80±0.15(P<0.05),TFPI-2基因mRNA表达呈明显的上升趋势,且随着药物浓度增加而增加。Western blot分析结果显示,对照组与(1、5、10)×10-6mol/L的5-Aza-CdR组的TFPI-2蛋白表达相对水平分别为0.12±0.01、0.23±0.02、0.31±0.02、0.62±0.03(P<0.05)。结论:5-Aza-CdR能成功逆转肺癌A549细胞中TFPI-2基因的高甲基化状态,并恢复TFPI-2基因mRNA及蛋白的表达。

血清TFPI-2基因甲基化在胃癌诊断中的临床价值

目的通过测定组织及血清组织因子途径抑制物2(TFPI-2)基因甲基化,探讨其作为一种肿瘤标志物对胃癌诊断的临床价值。方法收集32例胃癌、29例萎缩性胃炎作为研究对象,以30例不排除浅表性胃炎的正常对象作为对照。应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法,测定组织及血清TFPI-2基因甲基化状态。应用电化学发光免疫法测定癌胚抗原(CEA)、糖类抗原199(CA199)。结果组织TFPI-2基因甲基化检出率胃癌组为53.13%、萎缩性胃炎组为37.93%、对照组为3.33%。胃癌组明显高于对照组(P<0.05)。血清TFPI-2基因甲基化检出率胃癌组为28.13%,萎缩性胃炎组为6.90%,对照组未检出。胃癌组明显高于萎缩性胃炎组(P<0.05)和对照组(P<0.05)。血清TFPI-2基因甲基化检测灵敏度为28.13%,特异性为96.61%。血清检出阳性占组织检出阳性的比率为37.93%。胃癌组血清TFPI-2基因甲基化与性别、年龄、Borrmann's分期、CEA和CA199检测结果无关(P>0.05)。胃癌组血清TFPI-2基因甲基化与CEA、CA199阳性检出率分别为28.13%、21.88%、18.75%。联合3项阳性检出率为53.13%,显著高于3项各自单独检测(P<0.05)。结论血清TFPI-2基因甲基化来源于组织,其对胃癌诊断特异性较高,但灵敏度较差。联合检测血清CEA、CA199有利于提高其灵敏度。血清TFPI-2基因甲基化测定对胃癌的诊断有一定价值。

粪便SDC2和TFPI2基因甲基化联合检测对结直肠癌及癌前病变的诊断效能分析

目的 探究粪便硫酸类肝素蛋白多糖(Syndecan 2,SDC2)和组织因子途径抑制物2(Tissue factor pathway inhibitor 2, TFPI2)基因甲基化联合检测对结直肠癌及癌前病变的诊断效能。方法 纳入2020年5月~2021年4月于我院消化内科门诊及住院就诊的45例结直肠病变患者作为研究对象,另纳入同期于我院行体格检查的健康者21例作为对照组,经结直肠镜和术后病理学检查,45例结直肠病变患者中确诊结直肠癌25例,结直肠腺瘤20例。采用甲基化特异性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)法检测各组受试者中SDC2和TFPI2基因甲基化情况。应用受试者工作特征(Receiver operating characteristic,ROC)曲线判定SDC2和TFPI2基因甲基化单项检测和联合检测对结直肠癌及癌前病变的诊断效能。结果 结直肠癌组和结直肠腺瘤组SDC2和TFPI2基因甲基化阳性水平均显著高于对照组(P<0.05)。SDC2和TFPI2基因甲基化对结直肠癌诊断的ROC曲线下面积分别为0.744[95%CI(0.624~0.863)]和0.751[95%CI(0.631~0.879)],敏感度分别为71.61%和73.71%,特异性分别为73.21%和71.06%,两者联合检测对结直肠癌诊断的曲线下面积为0.913[95%CI(0.869~0.956)],敏感度为81.37%,特异性为78.66%;SDC2和TFPI2基因甲基化诊断结直肠腺瘤的ROC曲线下面积分别为0.713[95%CI(0.592~0.831)]和0.721[95%CI(0.598~0.847)],敏感度分别为66.31%和59.89%,特异性分别为67.75%和70.40%,两者联合检测诊断结直肠腺瘤的曲线下面积为0.878[95%CI(0.833~0.921)],敏感度为73.38%,特异性为81.34%。结论 粪便SDC2和TFPI2基因甲基化检测可作为临床诊断结直肠癌和结直肠腺瘤的重要生物学指标,且两者联合检测的诊断效能更高,可为临床早期筛查结直肠癌和癌前病变、及早干预、改善预后提供一定的帮助。

胰腺癌患者血浆TFPI-2基因启动子区甲基化状态检测及意义

目的观察胰腺癌患者血浆中组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)基因启动子区甲基化状态,并探讨其临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测62例胰腺癌患者(观察组)及30例胆胰非肿瘤疾病患者(对照组)血浆中的TFPI-2基因甲基化状态。结果观察组血浆TFPI-2基因甲基化阳性率为66.13%(41/62),明显高于正常对照组的3.33%(1/30),P<0.01。血浆TFPI-2基因甲基化与胰腺癌的临床分期、组织分化程度有关(P均<0.05)。结论胰腺癌患者血浆中TFPI-2基因出现异常甲基化;血浆TFPI-2基因甲基化检测可能有助于胰腺癌的早期诊断。

胰腺占位性病灶细针穿刺活检标本中ppENK和TFPI-2基因甲基化检测的可行性及其应用

目的检测胰腺组织ppENK和TFPI-2基因甲基化状态,探讨胰腺占位性病灶细针穿刺活检标本中ppENK和TFPI-2基因甲基化检测的可行性及其应用。方法采用重亚硫酸盐测序PCR(BSP)法检测86例胰腺占位性病变组织中ppENK和TFPI-2基因启动子区CPG岛的甲基化状态,采用单因素及多因素回归Logistic回归分析ppENK基因和TFPI基因甲基化检测的诊断价值,以及EUS-FNA联合基因甲基化检测在胰腺占位性病变中的诊断意义。结果本研究86例病例中,甲基化成功率为91.9%(79/86),TFPI-2和ppENK基因的甲基化检测率分别为95.9%(75/79)和91.1%(72/79)。肿瘤组与炎症组以及肿瘤组和对照组的甲基化率差异均有统计学意义(P<0.05),而炎症组与对照组甲基化率差异无统计学意义。受试者工作特征曲线结果显示:TFPI-2基因、ppENK基因甲基化水平诊断胰腺癌的敏感度分别为83.6%、74.6%,特异度分别为81.8%、86.4%,诊断率分别为89.7%、81.2%,以TFPI-2基因或ppENK基因甲基化水平诊断胰腺癌的敏感度为92.5%,特异度为79.8%,而以基因TFPI-2和ppENK甲基化水平进行诊断,其敏感度为74.6%,特异度为91.7%。结论TFPI-2和ppENK基因在胰腺肿瘤组织中具有高甲基化水平,且具有良好的敏感性和特异性,是胰腺癌的有利诊断指标,结合EUS-FNA,能够有效提高胰腺占位性病变的术前诊断。

姜黄素对肺癌细胞TFPI-2基因去甲基化作用研究

目的:探讨姜黄素对肺癌细胞组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)基因去甲基化的作用。方法:将人A549细胞分为姜黄素低剂量组(20μmol·L^(-1))、姜黄素中剂量组(40μmol·L^(-1))、姜黄素高剂量组(80μmol·L^(-1))及空白对照组,分别采用完全培养液及含相应浓度姜黄素的培养液培养后,MTT法检测A549细胞的增殖情况;RT-PCR检测TFPI-2 mRNA及DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)mRNA、DNMT3a mRNA、DNMT3b mRNA的表达情况;甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)法检测TFPI-2基因甲基化状态。结果:与空白对照组比较,处理细胞12 h、24 h及48 h后,各剂量姜黄素组细胞增殖降低,且40μmol·L^(-1)姜黄素处理细胞48 h时OD值最低,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞抑制率结果显示,各剂量姜黄素处理细胞12 h、24 h及48 h后均可抑制细胞增殖。与空白对照组比较,姜黄素各剂量组TFPI-2 mRNA表达水平升高,DNMT1 mRNA、DNMT3a mRNA、DNMT3b mRNA表达水平降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。TFPI-2甲基化检测显示:空白对照组未显示甲基化及去甲基化产物,各剂量姜黄素组同时显示甲基化产物和去甲基化产物,尤以姜黄素中剂量组去甲基化产物条带最为明显。结论:姜黄素可通过降低DNMT1 mRNA、DNMT3a mRNA、DNMT3b mRNA表达水平抑制TFPI-2甲基化,进而抑制A549细胞增殖,且以浓度40μmol·L^(-1)抑制效果最佳。

胰腺癌Panc-1细胞TFPI-2基因甲基化状态与其体内体外侵袭能力的关系

目的:探讨甲基化酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2-deoxycytidine,5-Aza-dC)对胰腺癌Panc-1细胞体内体外侵袭能力及裸鼠皮下移植肿瘤组织TFPI-2基因甲基化状态及表达的影响。方法:用不同浓度的5-Aza-dC处理胰腺癌Panc-1细胞。Transwell法测定各组Panc-1细胞的体外侵袭能力。将用药物处理过的各组Panc-1细胞分别接种于裸鼠皮下,观察各组成瘤率及肿瘤大小。用MSP及RT-PCR检测裸鼠移植瘤组织TFPI-2基因甲基化状态及TFPI-2基因mRNA表达情况。结果:与对照组相比,药物处理组Panc-1细胞体外侵袭能力明显下降,裸鼠成瘤率明显降低,第八周时,肿瘤体积明显低于对照组(P<0.05)。与对照组相比,TFPI-2基因异常甲基化状态在药物处理组裸鼠移植瘤组织中得到逆转,药物处理组移植瘤TFPI-2基因mRNA重新表达,并呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:甲基化酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷可能在一定程度上抑制人胰腺癌Panc-1细胞系的体内体外侵袭和生长能力,其机制可能与逆转TFPI-2基因高甲基化状态从而恢复其表达有关。

5-Aza-CdR对人食管癌细胞株生物学行为及TFPI-2 mRNA表达的影响

目的探讨5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-2-deoxycytidine,5-Aza-CdR)干预对食管鳞癌细胞株Eca9706生长增殖及其组织因子途径抑制物2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)基因表达的影响。方法选取食管鳞癌细胞株Eca9706,并用不同浓度的5-Aza-CdR处理该细胞株。MTT法检测干预前后细胞增长率的变化,FCM法检测干预前后细胞凋亡率的变化,RT-PCR技术检测干预前后Eca9706细胞TFPI-2基因mRNA的表达,免疫组化检测干预前后Eca9706细胞TFPI-2蛋白的表达。结果食管鳞癌细胞株Eca9706存在TFPI-2基因超甲基化状态,经5-Aza-CdR处理后,超甲基化状态解除,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡率明显提高(P<0.05);细胞中TFPI-2蛋白表达明显增强,同时mRNA的表达水平也较处理前明显提高(P<0.05)。结论食管癌细胞系TFPI-2基因超甲基化可抑制其mR-NA表达,当其超甲基化解除后,细胞增殖受到抑制,同时细胞凋亡率相应提高。

TFPI-2与消化道恶性肿瘤关系的研究进展

组织因子途径抑制物-2（ tissue factor pathway inhibitor-2，TFPI-2）也称胎盘蛋白-5，又称为基质相关性丝氨酸蛋白酶抑制剂，它是丝氨酸蛋白酶抑制物超家族成员之一，含有kunitz型结构域，是一种蛋白酶抑制剂。最初由 Jandial 和 Horne 在双胞胎妊娠者体内发现这种蛋白，对其进行研究并命名为胎盘蛋白-5。研究发现，胎盘蛋白-5氨基酸顺序与人组织因子途径抑制物高度同源，且两者性质相似，又将其命名为组织因子途径抑制物-2。人类的TFPI-2蛋白质序列最初由 Spercher 研究后公布，但TFPI-2的立体结构仍不清楚，还需进一步的研究。现就近年来关于TFPI-2与消化道恶性肿瘤关系的研究进展分述如下。

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对人肺腺癌裸鼠种植瘤的抑制作用及组织因子途径抑制物2基因甲基化状态和表达的影响

目的探讨去甲基化药物5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对人肺腺癌裸鼠种植瘤生长的抑制作用，以及对种植瘤组织中组织因子途径抑制物2（TFPI-2）基因甲基化状态和表达的影响。方法建立人肺腺癌A549细胞裸鼠种植瘤模型，按5-Aza—CdR不同剂量分为对照组（未注射5-Aza—CdR）和实验组，其中实验组分为0．5mg／kg组、1mg／kg组和2mg／kg组。比较各组裸鼠种植瘤生长的变化。采用甲基化特异性聚合酶链反应、实时定量荧光聚合酶链反应和Western blot检测5-Aza-CdR对裸鼠种植瘤组织TFPI-2基因甲基化状态、mRNA和蛋白表达的影响。结果用药28d后处死裸鼠时，0．5mg／kg组、1mg／kg组、2mg／kg组和对照组荷瘤裸鼠体重分别为（26．80±0．18）g、（26．67±0．28）g、（26．50±0．26）g和（27．12±0．38）g，差异无统计学意义（P〉0．05）。0．5mg／kg组、1mg／kg组、2mg／kg组和对照组皮下种植瘤体积分别为（400．67±2．68）mm^3、（285．71±2．91）mm^3、（230．44±3．15）mm^3和（709．22±2．87）mm^3，差异有统计学意义（P〈0．05）。对照组TFPI-2基因呈完全甲基化状态，0．5mg／kg组和1mg／kg组呈不完全甲基化状态，2mg／kg组呈非甲基化状态。0．5mg／kg组、1mg／kg组、2mg／kg组和对照组TFPI-2 mRNA的相对表达水平分别为1．67±0．07、3．40±0．24、5．55±0．61和1．00±0．00，差异有统计学意义（P〈0．05）。0．5mg／kg组、1mg／kg组、2mg／kg组和对照组TFPI-2蛋白表达的相对水平分别为0．36±0．01、0．64±0．02、0．81±0．20和0．18±0．02，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论5-Aza-CdR能抑制人肺腺癌裸鼠种植瘤的生长，诱导种植瘤细胞TFPI-2基因的表达，其机制可能为5-Aza-CdR通过去甲基化作用使甲基化的TFPI-2基因重新表达，从而抑制人肺腺癌A549细胞的生长和增殖。

非小细胞肺癌与组织因子途径抑制物-2基因胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤基序岛异常甲基化的关系

目的检测非小细胞肺癌（NSCLC）组织因子途径抑制物-2（TFPI-2）基因胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤基序（CpG）岛甲基化的状态，探讨甲基化状态与非小细胞肺癌发生发展及浸润转移的关系。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应（MS—PCR）检测60例非小细胞肺癌组织及相应癌旁组织和10例正常肺组织的TFPI-2基因甲基化状态。结果非小细胞肺癌组织中TFPI-2基因的甲基化阳性率为38．3％（23／60），明显高于癌旁组织的6．7％（4／60）（P〈0．01）。10例正常肺组织中均术发生甲基化。临床分期为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期的患者中TFPI-2基因甲基化阳性率分别为18．2％、53．8％、66．7％（P〈0．01），肿瘤直径〉5cm和≤5cm的患者中TFPI-2基因甲基化阳性率分别为80．0％、17．5％（P〈0．01），无淋巴结转移和有淋巴结转移的患者中TFPI-2基因甲基化阳性率分别为25．6％、61．9％（P〈0．01）。结论TFPI-2基因在非小细胞肺癌组织中出现异常甲基化，且与临床分期、肿瘤大小及淋巴结是否转移密切相关。

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对非小细胞肺癌体外生长及侵袭能力和TFPI-2基因mRNA表达的影响

目的探讨5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2-deoxycytidine,5-Aza-CdR)干预对非小细胞肺癌(nonsmall cell non cancer,NSCLC)细胞株A549生长增殖及其组织因子途径抑制物2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)基因表达的影响,同时探讨5-Aza-CdR能否通过恢复TFPI-2基因表达抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭能力。方法用不同浓度的5-Aza-CdR处理A549细胞株,MTT法检测药物处理24、48、72 h后的细胞增殖活性,流式细胞仪(fl ow cytometry,FCM)法检测药物处理72 h后细胞周期分布,Real-time PCR技术检测药物处理72h后A549细胞TFPI-2基因mRNA的表达,Transwell小室法测定药物处理24h后A549细胞体外侵袭能力的变化。结果 MTT检测显示不同浓度5-Aza-CdR处理A549细胞24、48、72h后,细胞的生长受到抑制,且抑制作用呈明显的剂量和时间依赖性。FCM检测分析显示0、1、5、10μM 5-Aza-CdR处理A549细胞72 h后,细胞增殖指数逐渐降低,分别为(30.43±0.99)%、(23.89±0.83)%、(16.19±0.34)%、(6.49±0.55)%(P<0.05)。Real-timePCR检测显示0、1、5、10μM的5-Aza-CdR处理A549细胞72 h后,相对mRNA表达水平分别为(1±0)、(1.49±0.14)、(1.86±0.09)、(5.80±0.15)(P<0.05),TFPI-2基因mRNA表达呈明显的上升趋势,且随着药物浓度增加而增加。Transwell小室法检测显示每一高倍镜下平均穿膜细胞数分别为(316.15±18.7)、(84.15±12.14)、(28.85±7.13)、(14.35±3.33),均明显低于对照细胞(P<0.05)。结论 5-Aza-CdR能通过降低TFPI-2基因的甲基化而恢复其在非小细胞肺癌细胞株A549细胞中的表达,并抑制A549细胞的增殖和侵袭。

组织因子途径抑制物-2在卵巢浆液性囊腺癌组织中的表达及甲基化修饰

目的探讨组织因子途径抑制物-2（tissue factor pathway inhibitor,TFPI-2）基因在卵巢浆液性囊腺癌与卵巢浆液性囊腺瘤组织中表达差异情况,以及与其启动子区DNA甲基化的关系。方法应用免疫组化技术分析46例卵巢浆液性囊腺癌组织和66例卵巢浆液性囊腺瘤组织中TFPI-2基因蛋白表达水平;用甲基化特异性PCR法（MS-PCR）检测TFPI-2基因启动子区DNA甲基化水平。结果卵巢浆液性囊腺瘤组织中TFPI-2蛋白表达阳性率为62.12%（41/66）,高于卵巢浆液性囊腺癌组织39.13%（18/46）,两组间差异有统计学意义（χ~2=5.748,P=0.017）;卵巢浆液性囊腺瘤组织与卵巢浆液性囊腺癌组织中TFPI-2基因甲基化阳性率分别为72.73%、78.26%,两组间差异无统计学意义（χ~2=0.443,P=0.506）,而低分化卵巢浆液性囊腺癌组织TFPI-2基因甲基化比率50.00%显著低于中、高分化组88.24%,两组差异有统计学意义（χ~2=5.540,P=0.019）。结论 TFPI-2蛋白表达与卵巢肿瘤的病理进展呈负相关,其启动子区DNA甲基化水平与卵巢癌细胞分化程度有关。

5－氮杂－2’－脱氧胞苷对胰腺癌细胞PANC1的组织因子途径抑制物－2表达及CpG岛甲基化的影响

目的探讨甲基化酶抑制剂5－氮杂-2’－脱氧胞苷（5-Aza—dC）对胰腺癌细胞系PANC1的抑癌基因组织因子途径抑制物2（tissuefactorpathwayinhibitor2，TFPI-2）甲基化水平及基因表达的影响。方法应用1×10^-7、5×10^-7、1×10μmol／L的5-Aza—dC处理胰腺癌细胞系PANC1。用甲基化特异性PCR（MSP）、RT—PCR及蛋白质印迹法检测细胞TFPI-2基因的甲基化状态、mRNA及蛋白的表达。结果未经5-Aza-dC处理的PANC1细胞的TFPI-2基因CpG岛为完全甲基化，无TFPI-2mRNA及蛋白的表达。1×10^-7、5×10^-7、1×10^-6mol／L的5-Aza-dC处理后，PANC1细胞的TFPI-2基因CpG岛甲基化逆转，从不完全甲基化到完全非甲基化；TFPI-2mRNA相对表达量分别为0．211±0．087、0．327±0．068、0．609±0．017；TFP1-2蛋白相对表达量为0．429±0．121、0．675±0．044、1．132±0．124，呈剂量依赖性增加（P〈0．05）。结论胰腺癌细胞系PANC1的TFPI-2启动子高甲基化可能是导致该基因表达下调甚至失活的主要原因。5-Aza—dC能够逆转其高甲基化状态，并诱导TFPI-2mRNA及蛋白重新表达。

组织因子途径抑制物-2对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长及血管生成的影响

目的:探讨组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)对人肝癌Hep3B细胞株裸鼠皮下移植瘤生长以及肿瘤血管生成的作用。方法:将TFPI-2稳定表达的Hep3B细胞(Hep3B-TFPI-2组)、转染空载体PCDNA3.1的Hep3B细胞(Hep3B-V组)及未进行转染的Hep3B细胞(Hep3B-P组)分别接种于裸鼠皮下,待皮下成瘤后,每隔3d测量1次肿瘤大小,并绘制出肿瘤体内生长曲线。3周后处死裸鼠,测定肿瘤体积,提取组织中总RNA和蛋白,实时荧光定量PCR(real-time uorescence quantitative PCR,RFQ-PCR)检测肿瘤组织中TFPI-2和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的mRNA水平;蛋白质印迹法检测肿瘤组织中TFPI-2和VEGF蛋白表达水平;免疫组织化学法检测肿瘤组织中TFPI-2蛋白表达水平和肿瘤微血管密度(micro vessel density,MVD)。结果:Hep3B-TFPI-2组最终肿瘤体积明显小于Hep3B-V组和Hep3B-P组(P<0.05)。Hep3B-TFPI-2组肿瘤组织的TFPI-2mRNA表达丰度和蛋白水平明显高于其余2组(P<0.05);而Hep3B-TFPI-2组VEGFmRNA表达丰度和蛋白水平明显低于其余2组,与2个对照组相比,VEGF蛋白表达抑制率分别为19.8%和23.5%(P<0.05)。Hep3B-TFPI-2组MVD计数明显低于其余2组(P<0.05)。结论:TFPI-2能抑制人肝癌细胞裸鼠皮下移植瘤生长和肿瘤血管生成。

粪便TFPI-2甲基化联合外周血内糖类抗原199在老年直肠癌筛查中的应用价值

目的:分析粪便组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)甲基化联合外周血内糖类抗原199(CA199)在老年直肠癌筛查中的应用价值。方法:选择我院2020-2021年诊治的老年直肠癌患者72例,将其纳入观察组;另在同期保证性别和年龄资料均衡情况下选择疑似直肠癌但证实为健康受试者72名,将其纳入对照组。检查粪便TFPI-2甲基化、外周血内CA199阳性情况,分析联合诊断价值。结果:观察组患者粪便TFPI-2甲基化、CA199阳性率分别高于对照组(P<0.05)。粪便TFPI-2甲基化联合CA199检测直肠癌诊断效能分别为灵敏度94.57%、特异度77.26%、约登指数0.721、AUC0.863,灵敏度、约登指数及AUC最大。结论:粪便TFPI-2甲基化、外周血内CA199联合检测可以做到优势互补,提高直肠癌诊断效能,建议推广应用。

粪便隐血与TFPI-2基因甲基化联合检测在结直肠癌中的应用价值

目的:研究粪便隐血与组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)基因甲基化联合检测在结直肠癌中的应用价值。方法:将我院收治的100例结直肠癌患者作为观察组,另选同期健康体检志愿者48名作为对照组,收集2组人员的粪便作为检测标本,检测2组人员粪便标本TFPI-2基因甲基化和粪便隐血结果,分析两者联合检测对结直肠癌的应用价值。结果:观察组患者粪便隐血阳性率为29.00%,对照组为0,差异有统计学意义(P <0.05);观察组患者TFPI-2基因甲基化阳性率64.00%,对照组为0,差异有统计学意义(P <0.05);观察组患者TFPI-2基因甲基化阳性率为64.00%,高于粪便隐血阳性率29.00%,差异有统计学意义(P <0.05)。粪便隐血和TFPI-2基因甲基化单独检测诊断AUC为(0.718)和(0.801),低于联合检测诊断AUC(0.903),根据ROC曲线获得,最佳界限粪便隐血为(86.7)、TFPI-2基因甲基化为(94.0),联合检测为(97.6),可获得ROC曲线下最大面积,联合检测敏感度高于单独检测。结论:粪便隐血和TFPI-2基因甲基化联合检测对结直肠癌早期筛查比单独检测具有更高的效率和更好的效果,能够为结直肠癌早期筛查起到循证作用。