卵子透明带保存精子在第二代试管婴儿中的应用研究

目的:探讨利用卵子透明带冷冻保存微量精子在第二代试管婴儿助孕中的应用效果。方法:回顾性分析2019年6月—2023年10月接受睾丸活组织检查取精助孕的40对夫妻,共计65个助孕周期的资料,根据患者助孕周期中精子来源分为A组(40个周期)和B组(25个周期)。A组采用女性取卵当日男方睾丸穿刺活检精子助孕,B组采用女性取卵当日利用卵子透明带冷冻保存的男性精子助孕(B组患者为上述经历了第一次新鲜睾丸精子助孕后,其中25对夫妻又开展了第2次助孕周期,第2次助孕周期时不再进行睾丸活组织检查取精,而是利用冷冻保存复苏后的精子助孕,共25个周期)。比较两组实验室各项指标[成熟卵母细胞百分率(MII卵率)、2原核胚胎受精百分率(2PN受精率)、2原核卵裂胚胎百分率(2PN卵裂率)、卵裂期优质胚胎百分率(D3优胚率)、囊胚形成率、临床妊娠率],25对接受两次助孕史的夫妻依据前后两次助孕的精子来源,分为新鲜睾丸精子和解冻精子两部分,比较其上述实验室各项指标的差异性。结果:两组MII卵率、2PN受精率、2PN卵裂率、D3优胚率、囊胚形成率、临床妊娠率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);另外25对夫妻前后接受两种不同来源精子助孕的指标比较,差异也均无统计学意义(P>0.05)。结论:利用卵子透明带冷冻保存微量精子在无精症患者中能够在保证无新鲜睾丸穿刺精子的情况下得到类似的临床结局,同时可减少男性反复睾丸活组织检查的痛苦及创伤,该方法确保极少量精子在冷冻-复苏过程中不会丢失,此方法容易获取高质量解冻精子。

人精子穿去透明带金黄地鼠卵实验和精子DNA完整性检测在体外受精-胚胎移植中的应用

目的:探讨人精子穿去透明带金黄地鼠卵实验(SPA)和精子DNA完整性检测在体外受精_胚胎移植术(IVF_ET)助孕中的应用价值。方法:选择兰州大学第一医院生殖医学研究中心,行IVF_ET助孕的不孕不育夫妇中的41名男性,根据不孕不育原因分为完全男方因素引起的不孕不育组(n=20)和完全女方因素引起的不孕不育组(n=21),比较分析两组男方年龄、穿透率、受精指数、IVF受精率、DNA碎片率、卵裂率、优质胚胎率、胚胎着床率及临床妊娠率的差别。结果:完全男方因素引起的不孕不育组和完全女方因素引起的不孕不育组之间,在男方年龄、IVF受精率、卵裂率、胚胎着床率、临床妊娠率等方面的差异均无统计学意义(P均>0.05),在穿透率、受精指数、DNA碎片率方面的差异均具有统计学意义(P<0.05);前者的SPA穿透率与IVF受精率、卵裂率和优质胚胎率之间均存在显著正相关(r=0.908,0.55,0.852,P均<0.05),DNA碎片率与IVF受精率和优质胚胎率均存在显著负相关(r=-0.636,-0.634,P均<0.05);后者SPA穿透率与IVF受精率、卵裂率和优质胚胎率之间均存在显著正相关(r=0.893,0.53,0.626,P均<0.05),DNA碎片率与IVF受精率和优质胚胎率之间均存在显著负相关(r=-0.636,-0.634,P均<0.05)。结论:SPA和精子DNA完整性检测在辅助生殖技术中可能具有一定的应用价值。

人精子穿透去透明带金黄地鼠卵试验与人精卵体外受精的比较

目的 研究在人工助孕技术中能否以人精子穿透去透明带金黄地鼠卵试验 ( SPA)结果作为确定采用人精卵体外受精 ( IVF)或经卵细胞胞浆内单精子注射 ( ICSI)的指标。方法 对 2 2例准备行 IVF的夫妇男方精子 SPA受精率与其 IVF受精率结果进行比较。结果 SPA和 IVF受精率分别为 38.6 %± 2 3.5 %与 5 3.5 %±2 8.4% ,SPA受精率较 IVF受精率低 ,但随着 SPA受精率的增加 ,IVF受精率也呈明显增加的趋势。在 SPA受精率大于 10 %的病例中 ,约 76 %的病例 IVF受精率大于 5 0 %。经统计学分析两者有显著相关性 ( rs=0 .70 46 ,| U | =3.2 2 84>u0 .0 1 /2 )。结论 SPA受精率可作为助孕技术中确定 IVF或

用去透明带仓鼠卵穿透试验检测牛冷冻精子的受精能力

研究了用去透明带仓鼠卵穿透试验检测牛冷冻精子的受精能力。对 36头西门塔尔、 2 3头夏洛来和 12头利木赞牛冷冻精子的实验结果表明 :三个品种的牛冻精均能穿入去透明带仓鼠卵 ,并形成发育良好的雄原核。穿透率在 70 %～ 80 %左右 ,有原核卵百分率在 30 %左右。

雷达微波辐射对精子穿透去透明带金黄地鼠卵能力与顶体酶活性的影响

雷达对人体的危害主要是雷达发射机中磁控管产生的高功率微波（HPM）辐射。睾丸和附睾是微波辐射生物效应的敏感器官之一^[1]，微波辐射对精子密度和精子活动能力及形态学有一定的影响^[2-4]。本研究以与雷达近距离接触的海员为研究对象，

精子-去透明带仓鼠卵穿透试验与精液分析主要参数的关系

目的 了解精液分析 (SA)与精子 -去透明带仓鼠卵穿透试验 (ZHOT)检测结果的关系 ,以评价此两种实验方法对评估男性生育力的临床实用价值。方法 对 2 2例男性不育症患者作了SA和ZHOT(改良的Yanagimachi方法 )的检测 ,并对SA主要参数指标的检测结果与ZHOT的检测结果 (穿卵率 )进行统计分析。结果 ZHOT之穿卵率与SA主要参数 :精子密度、正常形态精子百分率间有显著的正相关 (P <0 0 5 ) ,与a ,b级活动精子百分率间则有非常显著的正相关 (P<0 0 1)。另外 ,以ZHOT检测结果正常与否分成之两组间其SA主要参数的检测结果间差异均有显著性 (t检验 ) ,其中a ,b级活动精子百分率之差异最为显著 (P <0 0 0 1)。结论 改良的Yamagimchi精子 -去透明带仓鼠卵穿透试验确实能比较好的综合反映精液的质量 ,但因其方法较复杂 ,设备要求较高 ,精液分析仍应是一般临床单位评估男性生育力的首选实验室方法。特别是其中精子活动力的测定对男性生育力的评估更具临床实用价值。

少量人类精子以空卵透明带为冻贮载体的冷冻保存

目的:探讨空卵透明带作贮存载体冷冻保存少量人类精子。方法:将人或金黄地鼠卵内的细胞成份全部除去,制备成空卵透明带,分别显微注入人睾丸精子、附睾精子和射出精子后冷冻保存,并与正常供精者射出精子作对照。结果:解冻后卵透明带在溶液中容易识别寻找,卵透明带内的精子易于观察。附睾精子组(n=11)与供精者射出精子组(n=7)的冷冻精子活动率和存活率无显著性差异(P>0.05),但睾丸精子组(n=7)这两项参数值均显著低于附睾精子和射出精子组(P<0.01)。含6％、7.5％和9％不同甘油浓度的冷冻保护剂,对冷冻精子活动率无显著性影响(P>0.05);冻贮于人和金黄地鼠空卵透明带内的精子,两者的冷冻精子活动率也无显著性差异(P>0.05〕。结论:空卵透明带是冻贮少量人类精子的合适载体。

蛋白水解酶抑制剂对人精子穿透去透明带蛙卵的影响

目的研究蛋白水解酶抑制剂对人精子穿透去透明带蛙卵的影响。方法用人精子穿透经不同浓度的蛋白水解酶抑制剂处理过的去透明带蛙卵,观察对穿卵率的影响。结果(1)在人精子获能期,1.0×10-3mol.L-1天花粉抑制剂可使人精子的穿卵率明显下降(P<0.01),而同样浓度的慈姑抑制剂,作用不明显。(2)去透明带蛙卵用抑制剂预处理0.5 h,被获能精子的穿卵率和未用抑制剂处理的卵子相似。(3)在获能后的人精子和去透明带蛙卵孵育期,两种抑制剂的浓度为0.5×10-3mol.L-1或1.0×10-3mol.L-1时精子的穿卵率明显下降。(4)在人精子获能期及人精子/去透明带蛙卵孵育期,两种抑制剂的浓度为1.0×10-3mol.L-1时,均使精子的穿卵率下降(P<0.01),而抑制剂浓度为1.0×10-4mol.L-1时,作用不明显。结论蛋白水解酶抑制剂对人精子穿透去透明带蛙卵的穿透能力有显著影响,但不影响精子的活力,提示精子穿透卵子的酶体系受蛋白酶抑制剂的影响。

精子—去透明带仓带鼠卵穿透试验与精液分析主要参数的关系

目的：了解精液分析（SA）与精子－去透明带仓带鼠卵穿透试验（ZHOT）检测结果的关系，以评价此两种实验方法对评估男性生育力的临床实用价值。方法：对22例男性不育症患者作了SA和ZHOT（改良的Yangimachi方法）的检测，并对SA主要参数指标的检测结果与ZHOT的检测结果（穿卵率）进行统计分析。结果ZHOT之穿卵率与SA主要参数：精子密度、正常形态精子百分率间有显著的正相关（P<0.05)，与a,b级活动精子百分率间则有非常显著的正相关（P＜0．01）。另外，以ZHOT检测结果正常与否分成之两组间其SA主要参数的检测结果间均有显著的差异（t检验），其中a,b级活动精子百分率之差异最为显著（P＜0．001）。结论：改良的Yamagimchi精子－去透明带仓带鼠卵穿透试验确实能比较好的综合反映精液的质量，但因其方法较复杂，设备较高，精液分析仍应是一般临床单位评估男性生育力的首选实验室方法。特别是其中精子活动力的测定对男性生育力的评估更具临床实用价值。

重组人卵透明带蛋白及其多克隆抗体对精子-透明带结合的影响

为了探讨毕赤酵母表达的重组人卵透明带ZP3蛋白(recombinant human zona pellucida-3 protein,rhZP3)及其多克隆抗体对小鼠和人精卵结合的影响,采用不同浓度的rhZP3以及空白培养液分别处理小鼠精子,然后再与小鼠卵子进行结合实验,观察经过不同处理的精子对透明带黏附及体外受精率的影响;用rhZP3以及空白培养液分别处理人精子,然后再与人卵子进行结合实验,观察经过不同处理的精子对透明带黏附的影响;用抗rhZP3抗体与阴性血清分别处理小鼠和人卵子,再与精子进行结合实验,观察多克隆抗体对精子粘附以及小鼠体外受精率的影响。实验结果表明,rhZP3和抗rhZP3多克隆抗体既能抑制人的体外精卵结合,也能抑制小鼠体外精卵结合,提示rhZP3具有天然透明带的特性,有发展成避孕疫苗和作为检测透明带抗体检测试剂的可能。

豚鼠精子顶体反应期间卵透明带诱导激活磷酸脂酶A2活性

目的 为了探讨HA是否参与ZP诱发的AR，它的激活是否依赖于Ca^2+的存在以及HA在豚鼠精子AR过程中的信号转导通路。方法 将豚鼠精子悬浮在最小获能培养基(MCM-LCa^2+，23μM／LCa^2+)中预培养1h后，用[^11C]氯化胆碱或[^11C]花生四烯酸(AA)标记精子，并持续获能培养5h。经间断percoll密度梯度(30％～55％～85％)离心、洗涤。并将精子重新悬浮于MCM—LCa^2+培养其中。然后暴露于1mM/LCa^2+和／或ZP、百日咳毒素(PIX)、PLA2抑制剂、EGTA和甘油二脂激酶抑制剂(DAGKI),15分钟。精子膜脂类的提取、分离和鉴定采用Roldan和Varquer（1996)所报道方法。同时部分精子用相差显微镜检测AR百分率。结果获能精子Ca^2+／ZP合并应用后，可进一步加速AA释放和溶血磷脂酰胆碱(LysoPC)产生。同时伴有磷脂酰胆碱减少(这些变化是PLA2活性的指征)。Ca^2+／ZP的刺激亦导致精子AR率的增高；上述效应可被PLA2抑制剂马兜铃酸所阻断；采用PIX(G蛋白抑制剂)作用于已获能精子。结果发现由ZP引起AA和LysoPC含量升高以及AR率增加的效应均可被PIX抑制；23μMCa^2+存在下。精子虽不发生AR，但AA释放和LySoPC生成仍维持于较低的水平，而加入2mMEGTA(Ca^2+螫合剂)或250μMCa^2+(Ca^2+通道阻滞剂)可抑制HA的激活，导致AA和LySoPC的生成降低。DAG激酶抑制剂及K59022可加速AA及LySoPC产生,并促进口激发的AR。结论 上述结果表明，PLA2在四诱发豚鼠精子AR过程中起着关键作用,其激活仅需要低钙参与,同时PLA2活性受DAG和G蛋白介导信号转导通路的调控。

蜡样透明带卵母细胞患者ICSI助孕活产1例病例报道并文献复习

蜡样透明带的卵母细胞发育潜力低于正常形态卵母细胞,蜡样透明带影响精卵正常结合、从而影响受精率和胚胎发育。采用卵胞浆内单精子注射(ICSI)是最佳治疗策略,使得具有蜡样透明带的卵母细胞能够正常发育并最终分娩健康的后代,获得理想的临床妊娠结局。本文报道病例体外受精助孕共4个周期所获卵母细胞均见蜡样透明带,行ICSI后获可利用胚胎,冻融胚胎移植后获临床妊娠,并分娩活婴。另外,本文就蜡样透明带卵母细胞不孕患者的临床资料进行总结分析,并对相关文献进行系统性回顾。

人卵透明带蛋白及其与精子结合的研究进展

人卵透明带(hZP)在精卵识别与结合、诱发顶体胞吐(AE)以及阻止多重受精等方面起关键作用。目前已知hZP由4种糖蛋白构成,即hZP1、hZP2、hZP3和hZP4。本文就重组DNA技术获得的rhZP和从人卵中分离纯化的天然ZP在精子结合的特点、诱发AE的能力方面进行综述。

无透明带卵母细胞在辅助生殖领域中的研究进展

在辅助生殖技术的操作过程中,实验室在取卵后往往会观察到无透明带卵母细胞,本文就其产生原因、利用价值、辅助生殖过程中处理方式以及相关研究进展等方面进行综述。

精子透明带结合法优选精子行卵胞浆内单精子注射临床研究

目的探讨采用精子透明带结合法优选的精子进行卵胞浆内单精子注射(ICSI)的临床意义。方法选取2010年6月至2012年2月因男方因素在本中心行ICSI治疗的夫妇54个周期,随机将患者分为研究组和对照组,各27例,研究组患者采用与透明带结合的精子进行ICSI,对照组采用常规方法进行ICSI,比较两组患者的受精率、卵裂率、优胚率及着床率。结果研究组与对照组女方年龄、不育年限、促性腺激素(Gn)支数、MII卵母细胞数、移植胚胎数目无显著性差异(P>0.05);两组临床妊娠率(59.26%vs.48.15%),研究组高于对照组,但无显著性差异(P>0.05);两组的受精率(82.97%vs.81.63%)、卵裂率(96.32%vs.96.50%)无显著性差异(P>0.05);优胚率(66.12%vs.50.78%)和可利用胚胎率(75.95%vs.66.32%)均显著高于对照组(P<0.05)。结论通过采用患者自体卵母细胞透明带结合的方法选择精子进行ICSI可以提高胚胎质量,增加可利用胚胎的数量,有助于改善临床妊娠结局。

卵子透明带激光浅层、深层打孔卵胞质内单精子显微注射体外受精效果对比观察

目的观察透明带激光浅层、深层打孔卵胞质内单精子注射(ICSI)体外受精的效果,探讨ICSI前适宜的透明带激光打孔深度。方法选择89例男性不育症夫妻,取妻子成熟卵子,按照常规ICSI、透明带浅层激光打孔+ICSI、透明带深层激光打孔+ICSI的顺序依次纳入C-ICSI组、LA1-ICSI组、LA2-ICSI组。C-ICSI组按照常规方法行ICSI,LA1-ICSI组、LA2-ICSI组分别在透明带浅层、深层低能量单次打孔,然后行ICSI。计算并比较三组注射深度、胞质漏出率、卵子存活率、受精率、2原核(PN)率、优质胚胎率。结果 LA1-ICSI组、LA2-ICSI组注射深度少于C-ICSI组(P均<0.05)。LA2-ICSI组胞质漏出率高于C-ICSI组(P<0.05)。LA1-ICSI组、LA2-ICSI组卵子存活率高于C-ICSI组(P均<0.05)。C-ICSI组、LA1-ICSI组、LA2-ICSI组受精率分别为78.26%(378/483)、81.86%(194/237)、75.27%(137/182),2PN率分别为70.60%(341/483)、72.15%(171/237)、68.68%(125/182),三组受精率、2PN率相比,P均>0.05。LA1-ICSI组优质胚胎率显著高于C-ICSI组和LA2-ICSI组(P均<0.05)。结论与不打孔相比,透明带浅层、深层激光打孔后行ICSI注射深度较低,卵子存活率和优质胚胎率较高。与透明带浅层激光打孔相比,透明带深层激光打孔后行ICSI可以进一步降低注射深度,但优质胚胎率降低。ICSI前应该行透明带浅层激光打孔。

小鼠精子与卵透明带蛋白的识别机制

受精是一个非常灵巧、独特的和有时也很"棘手"的过程,包括一些必不可少的步骤,最后形成受精卵。在受精过程中卵透明带具有重要作用,卵透明带内含有许多种糖蛋白并能识别精子进行与卵子识别再融合。精子受体是指这些能识别精子的卵透明带内的糖蛋白,在受精和早期胚胎发育过程中发挥各种功能。文章主要针对卵透明带内的精子受体与受精过程进行综述。

不明原因不孕患者精子的精-卵相互作用实验及体外受精临床结局的研究

目的:研究不明原因不孕患者的精子功能,并进一步探讨不明原因不孕患者体外受精(in vitrofertilization,IVF)方式对临床结局的影响。方法:选择2009年7月至2010年1月在中南大学湘雅医院生殖医学中心行IVF治疗的55例患者,根据不孕的原因将患者分为不明原因不孕组(A组)和单纯女方输卵管因素组(B组)。将不明原因不孕组25例患者通过超排卵获取的成熟卵母细胞随机分为2组,分别行常规IVF(A1组)和卵胞质内单精子注射术(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)受精(A2组);单纯女方输卵管因素组(B组)采用常规IVF。将2组男方的精子利用废卵分别进行精-卵结合实验和透明带诱发精子顶体反应实验。观察A组与B组平均精卵结合数和透明带诱发精子顶体反应情况,分析透明带诱发精子顶体反应率与受精率的关系。比较不明原因不孕组通过2种方式受精后的受精率、优胚率及妊娠率。结果:A组平均精卵结合数(78.29±16.31)和透明带诱发精子顶体反应率[(55.87±27.69)%]明显低于B组的平均精卵结合数(94.63±6.72)及透明带诱发精子顶体反应率[(82.53±17.99)%],差异具有统计学意义(P<0.01);A1组的受精率(49.32%)明显低于B组(64.42%)和A2组(71.33%),差异具有统计学意义(P<0.01);而A1组的优胚率(44.44%),与A2组(56.86%)及B组的优胚率(53.81%)相比,差异无统计学意义(P>0.05);A2组的受精率及优胚率与B组比较,差异也无统计学意义(P>0.05);A组的妊娠率(36%)与B组(40%)相比,差异无统计学意义(P>0.05);A1组的受精率与透明带诱发精子顶体反应率具有明显的相关性,有统计学意义(r=0.932,P<0.01)。结论:对于不明原因不孕患者,精卵结合及透明带诱发精子顶体反应是有重要意义的精子功能检测实验。不明原因不孕患者的卵子采用half-ICSI,可有效地避免受精完全失败导致的无胚胎移植,从而获得较理想的妊娠结局。

胚胎透明带显微操作与单卵双胎妊娠

目的探讨体外受精-胚胎移植(IVF-ET)后单卵双胎妊娠与胚胎透明带显微操作的关系。方法回顾分析在我院行IVF-ET后获得临床妊娠的1,099个周期,比较行胚胎透明带显微操作(ZPM)和未经显微操作的两组患者单卵双胎(MZT)妊娠的发生率。结果IVF-ET后临床妊娠1,099周期中,MZT16周期,发生率为1.46%,占多胎的7.6%。显微操作组临床妊娠462周期,MZT6周期,发生率为1.30%;无显微操作组临床妊娠637周期,MZT10周期,发生率为1.60%,两组无显著差异(P>0.05)。结论单卵双胎妊娠与胚胎透明带显微操作之间无密切联系,积极控制IVF-ET的多胎妊娠可能是减少单卵双胎的有效途径。

小鼠去透明带裸卵的体外受精及其胚胎发育

为了建立提高小鼠弱精子体外受精率的新方法 ,将小鼠宰杀在 2 0℃下搁置 14 h,然后取出附睾尾精子进行冷冻保存。用解冻后活力明显下降的精子 ,与去透明带裸卵进行体外受精。结果显示 ,与带有颗粒细胞卵的体外受精率(0 % )和透明带切开卵的体外受精率 (4%～ 31% )相比 ,去透明带卵的体外受精率增至 39%～ 6 8% (P<0 .0 1) ;体外受精所获的 2细胞胚 ,经培养有 74 %～ 10 0 %的胚胎发育至扩张囊胚 ;来自 BDF1雄性小鼠精子的 2细胞期体外受精胚 ,经体外培养至囊胚期后再移植 ,获得了正常新生小鼠。以上结果表明 ,去透明带裸卵与小鼠弱精子体外受精 。