外周致密纤维1在人精子中的表达差异及其意义

目的:比较外周致密纤维1(ODF1)在健康男性和弱精子症患者精子中的表达差异。方法:根据WHO标准,收集正常男性和弱精子症患者的精液标本各20份,Percoll非连续梯度离心法分离精子,收集95%Percoll以下和57%与76%Percoll层之间的精子,以排除生精细胞和白细胞的污染;采用逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)和Western印迹方法,从mRNA和蛋白水平检测ODF1的表达。结果:RT-PCR结果表明,与正常男性组相比,ODF1在弱精子症患者精子中的mRNA表达水平显著降低(2.79±0.28vs1.35±0.25,P<0.05);免疫印迹与RT-PCR结果一致,与正常男性组相比,弱精子症患者精子中的ODF1蛋白的表达亦显著降低(3.64±0.34vs1.44±0.26,P<0.05)。结论:ODF1在弱精子症患者精子中的表达显著降低,提示其可能与精子活动力低下有关。

家兔精子尾部主段外周致密纤维的电镜观察

家兔精子尾部的９条外周致密纤维（Ｆ１～Ｆ９）从尾部中段进入尾部主段后就逐一终止，其终止顺序是：Ｆ８、Ｆ３、Ｆ７、Ｆ４、Ｆ２、Ｆ９、Ｆ１、Ｆ５、Ｆ６．根据外周致密纤维存在数量的多寡，主段可以分为１０个区域，从主段的近中段端至近末段端，这１０个区域依次是：９条纤维区域，８条纤维区域，…，１条纤维区域和０条纤维区域，１０个区域中，０条纤维区域最长，其次是３条纤维区域，其余的８个区域都很短。９条外周致密纤维的长短顺序为Ｆ６＞Ｆ５＞Ｆ１＞Ｆ９＞Ｆ２＞Ｆ４＞Ｆ７＞Ｆ３＞Ｆ８．Ｆ６、Ｆ５和Ｆ１这３条纤维明显地比其余各条长，其余的６条纤维相对较短，Ｆ８和Ｆ３两条最短。

弱精子症患者精子外周致密纤维2基因及蛋白的表达

目的:探讨弱精子症患者精子中外周致密纤维2(ODF2)mRNA及蛋白的表达水平,比较ODF2在健康男性与弱精子症患者中的表达差异。方法:根据WHO第5版,收集身体健康无疾病正常男性精液(n=15)和弱精子症患者精液(n=45)共60份,利用计算机辅助精液分析系统(CASA)进行精子统计,将弱精子症分为轻、中、重度3组,采用实时定量PCR和Western印迹对4组标本进行ODF2基因的表达量研究。结果:与正常组相比,轻度弱精子症组精子中ODF2基因表达无明显统计学差异(1.1120±0.5255 vs 0.6880±0.3720,P>0.05);中度弱精子症组ODF2基因表达降低,有显著的统计学差异(1.1120±0.5255 vs 0.4833±0.1863,P<0.05);重度弱精子症组ODF2基因表达明显降低,有极显著的统计学差异(1.1120±0.5255 vs 0.448 3±0.3408,P<0.01)。Western印迹中ODF2的OD值(ODF2/β-actin)在正常组和轻、中、重度弱精子症组分别为:0.4587±0.0521、0.3261±0.0714、0.1454±0.0536和0.1227±0.0457,与正常组相比,轻度弱精子症组无明显统计学差异(P>0.05),中度弱精子症组有显著的统计学差异(P<0.05),重度弱精子症组有极显著的统计学差异(P<0.01)。结论:ODF2基因及蛋白在弱精子症患者精子中的表达下调与精子活动力下降有密切联系,呈正相关性,提示ODF2基因可能参与精子活力的调控。

外周致密纤维2与精子功能关系的研究进展

弱精子症、畸形精子症是导致男性不育的主要原因,而精子尾部结构的异常和功能的缺失会导致精子活力低下。外周致密纤维2(ODF2)是哺乳动物精子尾部的组成部分,是维持细胞结构的骨架蛋白,因此,该纤维蛋白的异常与精子功能异常密切相关。研究显示,ODF2有许多同名蛋白和同源剪切体,出现在如精子中心体、卵裂胚的纺锤体等部位,也是动物纤毛发生所必需的;同时,ODF2也是微管相关蛋白,与精子获能有关,说明其并非单一的结构蛋白。本文对ODF2蛋白已知的多种功能进行了描述,为进一步系统研究ODF2与精子功能及受精的相关性奠定基础。

ODF1在胃肠道神经内分泌肿瘤中的表达及临床意义

目的探讨ODF1在胃肠道神经内分泌肿瘤(NEN)中的表达及与临床病理特征和预后的关系。方法收集2008-01—2021-12;胃肠道NEN标本254例,包括168例神经内分泌瘤(NETs)和86例神经内分泌癌(NEC)。采用免疫组化法检测ODF1在上述组织中的表达,分析其与临床病理特征和预后的关系。结果ODF1在168例NETs中全部弥漫阳性表达,在86例NEC中的阳性表达率为24.4%,而且均为局灶阳性染色。ODF1在胃肠道NETs和NEC中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。ODF1的表达随着NEN分级增高、T分期增加、淋巴结转移和TNM分期增加而降低(P<0.05)。ODF1的表达与患者性别和年龄无关(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析和单因素COX分析显示ODF1阳性NEC患者的预后较好,多因素COX分析显示ODF1表达不是NEC独立的预后因子。结论ODF1在胃肠道NETs中表达显著高于NEC。ODF1水平随着NEN分级增高、T分期增加、淋巴结转移和TNM分期增加而降低,对预后预测有一定价值。

外层致密纤维在Akap4基因缺陷致小鼠精子尾部多种形态异常中的作用

目的:探讨外层致密纤维(outer dense fobres,ODF)在Akap4基因缺陷引起小鼠精子尾部多种形态异常中的作用。方法:通过基因编辑技术构建Akap4基因缺陷小鼠模型。实验分为2组:成年Akap4基因缺陷雄鼠为实验组(n=7),成年野生型雄鼠为对照组(n=7),比较2组小鼠的体重和睾丸重量;采用计算机辅助精液分析(computer aided sperm analysis,CASA)检测精子活动力,改良巴氏染色(modified pap staining)检测精子形态学,扫描及透射电镜观察精子超微结构,免疫荧光检测精子尾部蛋白表达及定位,睾丸切片HE及PAS染色检测睾丸生精功能,透射电镜观察曲精细管超微结构。结果:Akap4基因缺陷小鼠精子总活动力为8.81%,明显低于野生型小鼠(P<0.01),且无正常形态精子,尾部缩短与尾部卷曲比例达91.18%,明显高于野生型小鼠(P<0.01),睾丸重量、睾丸生精功能、精子数量2组比较差异无统计学意义(P>0.01);Akap4基因缺陷精子的纤维鞘纵柱缺失,横肋柱结构部分残留,主段的3和8号ODF排列紊乱,与ODF2蛋白定位结果相符;睾丸中精子纤维鞘发育障碍,无正常纤维鞘结构形成,但未见异常膨大的精子尾部。结论:Akap4基因缺陷使纤维鞘横肋发育不良,纵肋的缺失引起3和8号ODF分离,"9+2"微管结构紊乱,使主段管腔异常膨大,导致小鼠精子尾部多种形态异常。

ODF1在肾上腺嗜铬细胞瘤/副神经节瘤和皮质腺瘤鉴别诊断中的应用价值

目的研究ODF1在肾上腺嗜铬细胞瘤/副神经节瘤和皮质腺瘤鉴别诊断中的应用价值。方法收集2017-01—2020-07确诊的10例嗜铬细胞瘤、5例副神经节瘤、15例肾上腺皮质腺瘤和10例正常肾上腺组织,进行ODF1、嗜铬素A(CgA)和类固醇生成因子-1(SF-1)免疫组织化学染色,观察它们的表达。结果所有嗜铬细胞瘤(10/10)、5/5例副神经节瘤及肿瘤周围正常髓质(10/10)均呈ODF1和CgA弥漫阳性表达,SF-1阴性表达。所有肾上腺皮质腺瘤(15/15)及肿瘤周围正常皮质(15/15)均呈SF-1阳性表达,ODF1阴性表达。CgA在肾上腺皮质腺瘤的阳性表达率为6.7%(1/15)。ODF1和SF-1表达组合对于诊断肾上腺嗜铬细胞瘤/副神经节瘤和皮质腺瘤的敏感性和特异性均为100%。10例嗜铬细胞瘤、5例副神经节瘤和15例肾上腺皮质腺瘤周围的肾上腺组织以及10例正常肾上腺组织中皮质均表达SF-1(100%),髓质均表达ODF1和CgA。结论ODF1可作为诊断嗜铬细胞瘤/副神经节瘤的新型免疫组织化学标记物,与SF-1联合可经济、有效地鉴别肾上腺嗜铬细胞瘤/副神经节瘤和皮质腺瘤。

外周致密纤维1在吸烟小鼠模型的表达

目的 探讨不同吸烟周龄小鼠的精子活率和睾丸组织外周致密纤维1（ODF1）mRNA的表达。方法 6~8周龄的C57BL/6J健康雄性小鼠分别给予吸烟2周、4周和6周处理,ELISA试剂盒检测血清可替宁含量,血球计数板计数精子活率,实时荧光定量PCR检测ODF1mRNA表达水平的改变。结果 经过2周、4周和6周的烟雾处理后,小鼠血清中可替宁含量明显高于不吸烟组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。吸烟6周后,小鼠血清中可替宁含量可达（10.76±2.19）ng/ml。此外,吸烟6周小鼠的睾丸组织ODF1mRNA表达量明显低于对照组（P〈0.05）。经过烟雾处理后,小鼠精子活率并没有发生显著改变。结论 本实验成功建立吸烟小鼠模型,可以为其他疾病的研究提供吸烟小鼠模型。其次,吸烟可能通过影响ODF1基因的表达而作用于精子的发生阶段,从而影响男性生殖系统。

ODF2基因敲减对小鼠精子活力和生育力的影响

目的:探讨外周致密纤维蛋白2(ODF2)基因敲减对小鼠精子活力和生育力的影响。方法:构建了3个携ODF2目的基因的基因敲减腺病毒载体及一个空载对照载体。感染ICR小鼠后,通过RT-PCR和Western印迹实验从3个目标载体中确定敲减效果最佳的载体。用此载体感染小鼠,分析基因敲减小鼠多项精子运动参数、睾丸组织病理以及小鼠产仔情况。结果:用敲减效果最佳的载体感染小鼠发现,基因敲减小鼠的精子多项运动参数显著低于正常对照组,睾丸组织生理结构出现异常,产仔数与对照组比较下降明显[(10.86±1.28)只vs(12.72±2.05)只,P=0.001]。结论:ODF2基因表达减少的确会造成小鼠精子多项运动参数异常、睾丸生理结构异常和生育力下降。