精子染色质扩散实验检测男性不育患者精子DNA碎片

目的:通过精子染色质扩散(SCD)实验检测精子DNA碎片,探讨男性不育患者精子DNA完整性。方法:改进的SCD实验分析精子DNA碎片,DNA完整的精子产生扩散的大光晕或中光晕,而DNA损伤的精子不产生或产生很小的光晕。少弱精子症患者56例,畸形精子症不育患者31例,对照组32例。结果:对照组、少弱精症组和畸形精子症组大、中光晕精子比率分别平均为(88.0±5.9)%、(73.4±9.6)%和(58.5±11.2)%,精子DNA碎片比率分别平均为(12.0±5.2)%、(26.6±9.7)%和(41.5±12.3)%,少弱精症组和畸形精子症组与对照组比较有统计学意义(DNA完整的精子比率显著低于对照组,P<0.001,精子DNA碎片比率显著高于对照组,P<0.001)。结论:SCD实验是检测精子DNA完整性有效的方法。少弱畸精子症不育患者精子DNA碎片比率增高。

精子染色质扩散实验中精子晕环类型与精液参数的相关性研究

目的探索精子染色质扩散实验(SCD)中精子晕环类型与精液参数的相关性。方法收集281例于南方医科大学南方医院生殖中心进行生育力评估的男性精液样本,进行精液常规分析及DNA损伤程度检测(SCD法)。依据SCD结果中各类型晕环精子百分比及总精子DNA碎片指数(DFI)的中位数,分别将研究对象分为A组(≤中位数者)和B组(>中位数者)。结果大晕环A组患者的前向运动精子百分比(PR%)显著低于大晕环B组[(34.00±19.07)%vs(41.35±18.78)%,P=0.001],大晕环A组不动精子百分比(IM%)显著高于B组[(54.72±20.75)%vs(46.46±20.83)%,P=0.001]。而中晕环、小晕环、无晕环、退化精子以及总DFI的A组与B组间精液常规参数均无统计学差异。结论大晕环精子百分比的降低与PR%的降低和IM%的增加有关,提示轻微的精子DNA损伤即可能反映着精子运动能力的减弱。

改良精子染色质扩散实验对精子DNA完整性检测的初步探讨

目的:通过对传统精子染色质扩散实验(SCD)方法进行改良,探索一种更简单、快速、准确的精子DNA完整性检测方法。同时对改良SCD法检测的正常参考值范围进行初步探讨。方法:对传统SCD法在实验过程、试剂配制及器具使用上进行了改良优化,同时对改良前后SCD法进行了比较。此外,利用改良SCD法对293例正常生育男性精液进行精子DNA完整性检测。结果:建立了改良SCD检测法,经统计分析改良前后测定结果无统计学差异,同时初步对改良SCD法检测的正常精子DNA百分比参考值范围进行了确定,其值为精子DNA异常发生率<32.58%。结论:改良SCD方法能更快速地对精子DNA的完整性进行检测,同时,由于降低了试剂成本,该法更容易在实际工作中得到普及。

精子染色质扩散实验及吖啶橙染色检测精子DNA完整性研究

目的:采用精子染色质扩散(sperm chromatin dispersion, SCD)实验检测精子DNA碎片,分析比较SCD实验及吖啶橙染色实验(AOT)检测精子DNA完整性的应用价值。方法:对32例正常成年已生育的男性和27例特发性少精子症(idiopathic oligozoospermia, IO)患者同时进行SCD实验和AOT,对检测结果进行分析。在SCD实验中,DNA完整性正常无损伤精子的DNA扩散产生大晕环或中晕环,而DNA损伤产生DNA碎片的精子不产生或产生很小的晕环。AOT染色实验中,正常精子DNA为双链,染成绿色,不成熟或损伤精子DNA为单链,染成红色、橙色或黄色。结果:SCD实验检测结果为:IO患者精子大晕环、中晕环、小晕环和无晕环精子百分率分别平均为(51.8 &#177;17.1)%、(9.4 &#177;8.6)%、(11.9 &#177;5.8)%和(26.7 &#177;10.6)%,健康对照组平均为(73.2 &#177;6.2)%、(14.8 &#177;5.7)%、(6.8 &#177;2.9)%及(5.3 &#177;2.2)%,二组比较,差异有统计学意义(t = 4.256, P 0.05)。结论:精子DNA完整性异常可导致男性不育。SCD实验是一种有效的精子DNA完整性检测方法。

精子染色质扩散实验中精子晕环类型与体外受精/卵胞浆内单精子注射治疗结局相关性研究

目的探讨精子染色质扩散(SCD)实验中精子晕环类型与体外受精(IVF)/卵胞浆内单精子注射(ICSI)治疗结局的相关性。方法收集2017年7月至2019年7月于南方医科大学南方医院生殖医学中心进行IVF/ICSI治疗且男方接受了精液常规分析及SCD实验的184对夫妇的IVF/ICSI治疗相关数据。依据SCD结果中各类型晕环精子百分比及精子DNA碎片指数(DFI)的第25百分位数(P_(25))及第75百分位数(P_(75))的具体数值,将各晕环精子百分比及DFI各自分为3组:A组(≤P_(25))、B组(P_(25)~P_(75))、C组(≥P_(75))。采用非参数检验比较各组间受精率、卵裂率、优胚率、临床妊娠率及流产率。结果退化精子百分比A组、B组、C组患者的优胚率分别为(33.1±22.9)%、(31.6±23.6)%、(21.3±20.9)%,3组间比较差异有统计学意义(P=0.046)。小晕环精子百分比A组、B组、C组患者的流产率分别为22.2%、33.3%、83.3%,3组间比较差异有统计学意义(P=0.024)。各晕环精子百分比及DFI的不同亚组间受精率、卵裂率、临床妊娠率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论退化精子百分比可能是预测胚胎质量更为敏感的指标,高小晕环精子百分比可能增加流产风险。

精子核成熟度与早期不明原因复发性流产的相关性研究

目的:探讨精子核成熟度与早期不明原因复发性流产的相关性。方法:收集配偶具有早期不明原因复发性流产史的患者50例为URM组,正常生育的男性30例为对照组,通过计算机辅助精液分析仪检测精子的浓度和活动力等,精子染色质扩散实验检测精子DNA完整性,苯胺蓝染色法检测精子核蛋白组型转换,分别比较两组精子DNA完整性、精子核蛋白组型转换率和精液参数的差异。结果:URM组与对照组之间精液量(3.23±1.13 vs 3.37±1.23)mL、精子浓度(29.33±3.76 vs 31.16±4.29)×10~6/mL的比较差异没有统计学意义(P>0.05);精子前向运动(35.19±7.26 vs 50.12±10.84)%、精子正常形态(2.07±2.94 vs 8.69±4.13)%、精子DNA碎片率(39.28±15.95 vs 23.16±15.17)%及精子核蛋白组型转换率(41.99±8.63 vs 18.81±7.53)%比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:早期不明原因复发性流产可能与精子核成熟度异常有关,建议RSA患者常规检测夫精精子核成熟度。

精子DNA碎片对IVF-ET结局的影响

目的:探讨精子DNA碎片化率(DFI)对体外受精结局的影响。方法:采用改良精子染色质扩散实验(SCD)对139例接受体外受精(IVF)的男方进行精子DFI检测,并根据精子DFI值将上述IVF患者分为:A组(DFI<17.6%)、B组(17.6%≤DFI≤30%)、C组(DFI>30%),根据单因素方差分析统计方法分析各组IVF受精率、卵裂率、优质胚胎率和妊娠结局的差异。结果:与A组比较,B组和C组正常形态精子率、精子前向活动力([a+b)%]、卵裂率、优质胚胎率均降低(P>0.05 vs B组,P<0.05 vs C组);与B组比较,C组正常形态精子率、精子前向活动力([a+b)%]、卵裂率、优质胚胎率均降低(P<0.05);与A组比较,B组和C组受精率均降低(P<0.05 vs B组,P<0.05 vs C组);与B组比较,C组受精率降低(P<0.05);A、B、C 3组间生化妊娠率、临床妊娠率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:精子DNA碎片率升高不仅会导致精子前向活动力下降,还可导致IVF受精率、卵裂率、优质胚胎率下降,但对临床妊娠结局无明显影响。

精子冻存技术及上游法精子处理技术对精子DNA完整性的影响

目的通过对冷冻前后及精子处理前后精子DNA完整性的比较,探讨冷冻技术、冷冻时间及上游法精子处理技术对精子DNA完整性的影响。方法(1)精液常规检测正常的患者30例,手淫法取精,精液液化混匀后分4份,分别用于精子染色质扩散(SCD)实验检测精子DNA完整性、上游法处理精液、以及两组冻存实验(不加保护剂直接冻存的为冻存1组;添加蛋黄葡萄糖保护剂冻存的为冻存2组);(2)上游法处理后的精液一部分用于检测精子动力和形态,一部分用于精子DNA完整性检测;(3)冻存1组分别于冻存第7天和第90天解冻,SCD实验检测精子DNA完整性;(4)冻存2组分别于第7天和第90天解冻,0.1 ml用于精子DNA完整性检测,剩余精液应用上游法处理,检测上游处理前后精子DNA的完整性。结果(1)冻存1组中,冻存90d后解冻的精子DNA损伤率[(25.6±7.3)%]显著高于冻存7d者[(22.4±7.4)%](P<0.05),且均显著高于新鲜精液的精子DNA损伤率[(20.6±7.3)%](P<0.05);冻存2组中,冻存90d后精子DNA损伤率显著高于冻存7d者[(25.9±7.2)%vs.(23.6±7.8)%](P<0.05),且均显著高于新鲜精液(P<0.05);而冻存7d和90d后,两个冻存组间比较,精子DNA损伤率均无显著差异(P>0.05)。(2)新鲜精液经上游法处理后,精子DNA损伤率由处理前的(20.6±7.3)%降为(6.4±2.5)%(P<0.05);冻存2组中精液冻存7d和90d后复苏上游法处理后,精子DNA损伤率较未经上游法处理者均显著降低[分别为(9.38±2.8)%vs.(23.6±7.8)%和(9.7±2.6)%vs.(25.9±7.2)%](P<0.05)。结论冻存对精子DNA有损伤,冻存时间对于精子DNA完整性有影响。不添加保护剂直接冻存和添加保护剂对精子DNA完整性的影响无显著差异。不论是新鲜精液还是冻存复苏精液,上游法处理并不会增加精子DNA的损伤,且有利于筛选出具有更好DNA完整性的精子。

不明原因复发性流产与精子DNA完整性的相关性研究探讨

目的:分析与探讨不明原因复发性流产与精子DNA完整性的相互关系。方法:精子DNA完整性的检验选用精子染色质扩散实验(sperm chromatin dispersion,SCD),以精子DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)表示。将符合条件的65例男性患者作为实验组,随机选取配偶有正常妊娠史且无流产史的65例男性患者作为对照组,并分别测定两组男性精液相关参数和精子DFI。结果:实验组与对照组比较,在年龄、禁欲时间、精液量、精子活率、精子密度差异无统计学意义(P>0.05)。实验组的DFI为(40.89±14.50),对照组的DFI为(22.89±6.94),差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:不明原因复发性流产与精子DNA损伤存在一定的关系。

男性不育患者精子染色体畸变及精子DNA完整性分析

目的探讨男性不育患者精子染色体和精子DNA完整性的改变。方法精子染色质扩散（sperm chromatin dispersion，SCD）实验分析精子DNA碎片，正常生育男性（对照组）32名，特发性严重少弱精子症患者（idiopathic severeolig oasthenozoospenTtia，ISOA）19例，妻子不明原因反复自然流产（unexplained recurrent miscarriage，URM）38例；多色荧光原位杂交（fluorescentinsituhybridization，FISH）技术检测URM妇女丈夫（n=12）、ISOA不育者（n=10）及对照组（n=5）精子13、21、18、X和Y染色体畸变。结果对照组、ISOA不育者及URM妇女丈夫精子13、18和21染色体数目总体异常的比率分别为1．29％、4．02％和3．91％，而x和Y染色体数目总体异常的比率分别为0．61％、2．03％和1．98％，与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。SCD实验分析精子DNA碎片，ISOA不育患者（n=19）及URM妇女丈夫（n=38）精子DNA碎片比例平均为40．7％±17．8％和22．1％±10．3％，均显著性高于对照组（12．1％±5．2％，P〈0．01）。nsH精子染色体（13、21、18、X和Y探针）数目畸变率与精子DNA碎片比率呈正相关（r=0．874，P〈0．01，n=27），精子DNA碎片比率与精子密度及前向运动精子率呈负相关（r=-0．571，P〈0．01，和r=-0．616，P〈0．01，n=89），与畸形精子比率呈正相关（r=0．637，P〈0．01，n=89）。结论精子染色体畸变率和精子DNA碎片比率增高，可能是ISOA和妻子URM不育男性的原因之一，精子DNA损伤筛查可能为特发性男性不育患者提供有用的信息。

精液处理前后精子DNA碎片的变化及对IVF-ET结局的影响

目的探讨经密度梯度离心结合上游法处理前后精子DNA碎片率的变化以及对体外授精-胚胎移植(In Vitro Fertilization-Embryo Transfer,IVF-ET)结局的影响。方法收集107例行IVF助孕患者的精液,按照WHO标准对处理前精液行精液常规分析,采用精子染色质扩散试验(Sperm Chromatin Dispersion,SCD)检测处理前和处理后精液的精子DNA碎片率,并收集IVF实验室及临床结局。根据处理前精子DNA碎片率将患者分为两组:精子DNA碎片率≤20%的患者为A组,精子DNA碎片率>20%的患者为B组。结果处理后精子DNA碎片率显著低于处理前精子DNA碎片率(3.49 3.38%vs18.69 10.89%,P<0.001);处理前和处理后精子DNA碎片率均与精子总活动率、前向运动率及受精率有显著负相关关系(Spearman相关系数:-0.508、-0.629、-0.283、-0.299、-0.399、-0.329,P<0.05)与男方年龄、精液量、精子密度、正常形态率及卵裂率无显著相关关系;B组处理后精子DNA碎片率高于A组,差别有统计学意义(P<0.05);B组的精子总活动率、前向运动率和受精率均低于A组,差别有统计学意义(P<0.05);两组男方年龄、女方年龄、不孕年限、获卵数、精液量、精子密度、正常形态率、卵裂率、种植率和妊娠率之间的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论密度梯度离心加上游法处理精液后可以显著降低精子DNA碎片率,精子DNA碎片率与精子活力最密切相关,碎片率升高会降低受精率,但对种植率、妊娠率等临床结局没有显著影响。

辅助生殖技术中人类精液优选对精子DNA及妊娠结局的影响

目的探讨经密度梯度离心结合上游法处理前后精子DNA碎片率的变化以及对体外授精-胚胎移植（in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET）结局的影响。方法收集107例行IVF助孕患者的精液,按照WHO标准对处理前精液行精液常规分析,采用精子染色质扩散试验（sperm chromatin dispersion,SCD）检测处理前和处理后精液的精子DNA碎片率,并收集IVF实验室及临床结局。根据处理前精子DNA碎片率将患者分为两组：精子DNA碎片率≤20%的患者为A组,精子DNA碎片率〉20%的患者为B组。结果处理后精子DNA碎片率显著低于处理前精子DNA碎片率（3.49±3.38%vs18.69±10.89%,P〈0.001）;处理前和处理后精子DNA碎片率均与精子总活动率、前向运动率及受精率有显著负相关关系（Spearman相关系数：-0.508、-0.629、-0.283、-0.299、-0.399、-0.329,P〈0.05）与男方年龄、精液量、精子密度、正常形态率及卵裂率无显著相关关系;B组处理后精子DNA碎片率高于A组,差别有统计学意义（P〈0.05）;B组的精子总活动率、前向运动率和受精率均低于A组,差别有统计学意义（P〈0.05）;两组男方年龄、女方年龄、不孕年限、获卵数、精液量、精子密度、正常形态率、卵裂率、种植率和妊娠率之间的差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论密度梯度离心加上游法处理精液后可以显著降低精子DNA碎片率,精子DNA碎片率与精子活力最密切相关,碎片率升高会降低受精率,但对种植率、妊娠率等临床结局没有显著影响。

VC患者精子DNA损伤及精索静脉高位结扎术对精子DNA损伤影响的研究

目的:探讨精索静脉曲张(Varicocele,VC)患者精子DNA损伤程度以及精索静脉高位结扎术对精子DNA损伤的影响,并探讨精子DNA损伤的检测对评估VC患者生育能力及手术效果的可行性。方法:以WHO精液分析标准为指导对58例VC患者进行精液分析,并用精子染色质扩散实验(SCD)检测精子DNA损伤程度。其中24例VC患者行精索静脉高位结扎术,在术前和术后3个月行精液分析和精子DNA损伤的检测。以30例正常生育男性作为对照组。结果:VC伴有精液分析异常的患者精子DNA损伤程度为(33.64±7.11)%,明显高于对照组(10.78±5.01)%(P<0.001);VC精液分析正常的患者精子DNA损伤程度为(23.94±6.04)%,也明显高于对照组(P<0.001)。行精索静脉高位结扎术后3个月,精子DNA损伤程度较术前明显减少(P<0.001)。结论:VC可引起不同程度的精子DNA损伤;精索静脉高位结扎术能有效降低VC患者的精子DNA损伤程度;精子DNA损伤的检测是评估VC患者生育能力及手术效果可行性较好的指标。

精液处理前后精子DNA碎片的变化及对IVF-ET结局的影响

目的探讨经密度梯度离心结合上游法处理前后精子DNA碎片率的变化以及对体外授精-胚胎移植(In Vitro Fertilization-Embryo Transfer,IVF-ET)结局的影响。方法收集107例行IVF助孕患者的精液,按照WHO标准对处理前精液行精液常规分析,采用精子染色质扩散试验(Sperm Chromatin Dispersion,SCD)检测处理前和处理后精液的精子DNA碎片率,并收集IVF实验室及临床结局。根据处理前精子DNA碎片率将患者分为两组:精子DNA碎片率≤20%的患者为A组,精子DNA碎片率<20%的患者为B组。结果处理后精子DNA碎片率显著低于处理前精子DNA碎片率[(3.49±3.38)%vs(18.69±10.89)%,P<0.001)];处理前和处理后精子DNA碎片率均与精子总活动率、前向运动率及受精率有显著负相关关系(Spearman相关系数:-0.508、-0.629、-0.283、-0.299、-0.399、-0.329,P<0.05)与男方年龄、精液量、精子密度、正常形态率及卵裂率无显著相关关系;B组处理后精子DNA碎片率高于A组,差别有统计学意义(P<0.05);B组的精子总活动率、前向运动率和受精率均低于A组,差别有统计学意义(P<0.05);两组男方年龄、女方年龄、不孕年限、获卵数、精液量、精子密度、正常形态率、卵裂率、种植率和妊娠率之间的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论密度梯度离心加上游法处理精液后可以显著降低精子DNA碎片率,精子DNA碎片率与精子活力最密切相关,碎片率升高会降低受精率,但对种植率、妊娠率等临床结局没有显著影响。