精子特异性透明质酸酶PH-20结构与功能

精子表面特异性透明质酸酶(PH-20)是糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定的单链膜蛋白,特异性分布于精子头部浆膜和顶体内膜,是一种多功能蛋白,在受精过程中具有重要作用。鉴于PH-20在精子表面的特异性分布及其在受精中的作用,PH-20作为免疫避孕候选疫苗对象一直受到关注。继续深入研究PH-20的结构与功能,将有助于全面揭示精卵结合的分子过程。

精子特异性透明质酸酶PH-20研究进展

精子表面PH-20是糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定的单链膜蛋白,特异性分布于精子表面浆膜和顶体内膜。它是一种多功能蛋白,在受精过程中具有重要作用。鉴于PH-20在精子表面的特异性分布及其在受精中的作用,PH-20作为免疫避孕候选疫苗对象一直受到关注。继续深入研究PH-20的结构与功能,将有助于全面揭示精卵结合的分子过程。

特异性透明质酸酶的研究进展

透明质酸酶在临床上被用作药物扩散剂,它通过降解肿瘤微环境和皮肤组织中的透明质酸,从而提高组织的通透性来促进药物的扩散和吸收,在肿瘤治疗和皮下给药中都有很好的应用前景。透明质酸酶对细胞外基质中透明质酸的降解作用不仅与其对透明质酸的解聚作用效力有关,还与酶的底物特异性有关。近年来,不断有专一性降解透明质酸的透明质酸酶被发现,本文主要对目前发现的特异性透明质酸酶的研究现状作一综述。

甲状腺结节超声TI-RADS分类与血清抗环胍氨酸肽、神经元特异性烯醇化酶水平关系研究

目的探究甲状腺结节患者甲状腺超声影像报告和数据系统(TI-RADS)分类与血清抗环胍氨酸肽(Anti-CCP)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平的关系及对甲状腺结节的诊断价值。方法回顾性分析2021年4月至2023年6月于医院接受甲状腺结节诊断及治疗的100例患者资料,按照甲状腺结节性质分组,良性组64例,恶性组36例。比较不同TI-RADS分类甲状腺结节患者的血清Anti-CCP、NSE水平。以多因素Logistic回归分析恶性甲状腺结节的独立影响因素,构建甲状腺结节诊断预测模型。结果Logistic回归分析显示,促甲状腺激素(TSH)、抗甲状腺球蛋白抗体(Tg-Ab)、Anti-CCP、TI-RADS分类、白细胞数、淋巴细胞数为恶性甲状腺结节的独立影响因素(P<0.05)。在此基础上建立诊断预测模型,模型公式为Logit(P)=-13.517+1.449×TSH+0.209×Tg-Ab+0.037×Anti-CCP+1.762×TI-RADS+0.420×白细胞数-1.365×淋巴细胞数。受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)为0.903,95%CI为0.839~0.966,最佳灵敏度为0.861,特异度为0.859,约登指数为0.720。结论甲状腺结节患者TI-RADS分类越高,血清Anti-CCP及NSE水平越高,NSE因其他数据干扰无法纳入预测模型,TI-RADS分类、血清Anti-CCP水平及其他独立影响因素联合诊断恶性甲状腺结节的效果较好。

精子中一氧化氮和透明质酸酶活性的关系

目的 :探讨一氧化氮 (NO)与人精子透明质酸酶(HYD)活性及精子质量的关系 .方法 :参照WHO标准方法 ,进行精液常规分析 .采用镀铜镉还原荧光法检测NO代谢产物硝酸盐 (NO3 -) .用改良Singer法测定精子HYD活性 .结果 :90例不育者NO含量与精子密度、活动率及HYD活性呈显著的负相关 (r =- 0 .4 8,- 0 .4 7,- 0 .6 3,P <0 .0 1 ) ,HYD与精子畸形率呈显著的负相关 (^y =- 0 .91 3+0 .0 0 9x) .结论 :精子HYD活性测定是评价精子受精能力的有效指标 ,NO对精子HYD活性有抑制灭活影响精子对卵丘的穿透作用 .

人精子透明质酸酶活性测定的临床意义

目的 :测定人精子透明质酸酶 (HYD)活性并分析其与精液常规参数之间的相关性。 方法 :用改良Singer法测定 14 6例男性精子HYD活性 ,常规检测精子密度、活动率和正常形态百分率。 结果 :精子HYD活性与密度、活动率及与正常形态百分率存在显著相关性 (r值分别为 0 .65、0 .63和 0 .72 ,P均 <0 .0 1)。不育男性精子密度在 4 0× 10 6 /ml以上组的HYD活性明显高于精子密度少于 2 0× 10 6 /ml以下组 (P <0 .0 1)。不育男性精子活动率 >60 %组的HYD活性明显高于 <3 0 %组 (P <0 .0 1)。 结论

精液中一氧化氮含量对精子顶体内透明质酸酶的影响

目的：探讨精液中一氧化氮（N0）含量对精子顶体内透明质酸酶的影响。方法：采用伟力彩色精子质量检测系统，对精液进行常规检查；硝酸还原酶法测定不育组和对照组精液中NO的含量；自制试剂盒检测不育组和对照组的透明质酸酶阳性率和活性强度情况。结果：不育组精液中NO比对照组精液中NO含量高；不育组透明质酸酶阳性率和活性强度均较对照组低；NO含量与透明质酸酶阳性率及透明质酸酶活性强度呈负相关（r=-0．94）。结论：随着NO含量增高，透明质酸酶阳性率及活性强度明显下降，表明精液中NO含量异常增高对精子顶体内透明质酸酶活性强度有抑制作用。

不育男性精子透明质酸酶活性与精液参数的关系

目的探讨不育男性精子顶体内透明质酸酶活性与精液有关参数的关系,为临床男性不孕不育的诊断、治疗及精子的功能检查提供理论及实验依据。方法收集81例精液标本,其中正常生育对照组20例,不育男性61例。以精子质量分析仪对每份标本进行临床精液常规检查及计算机辅助精液分析(CASA),并利用改良明胶底物膜法检测精子顶体内透明质酸酶活性。结果①精子透明质酸酶阳性反应率及酶活性强度与精子密度、精子活率、a+b级精子活力、正常形态百分率间存在显著相关性[r分别为0.42(0.31)、0.62(0.49)、0.79(0.75)和0.67(0.42)]。②结果显示随着精子密度及a+b级精子活力的减少,透明质酸酶活性明显减弱,对照组透明质酸酶活性明显高于不育各组(P<0.01)。③透明质酸酶活性与精子活率、正常形态百分率的关系,对照组与不育组间差异有显著性(P<0.01),对照组优于不育组。结论①精子透明质酸酶阳性反应率与活性强度与精子密度、精子活率、a+b级精子活力、正常形态百分率间存在显著相关性。②对照组与不育组在精子密度、精子活率、a+b级精子活力及正常形态百分率上差异有显著性,对照组精子质量明显优于不育组。

基于透明质酸及硫堇层层自组装的前列腺特异性抗原免疫传感器的研究

将带负电荷的透明质酸（HA）和带正电荷的电子媒介体硫堇（Thi）层层自组装到壳聚糖修饰的玻碳电极表面，利用硫堇上的氨基固定纳米金（nano-Au）并固载前列腺特异性抗体（anti-PSA），制得新型前列腺特异性抗原电流型免疫传感器。通过循环伏安法（CV）、微分脉冲伏安法（DPV）考察了该免疫传感器的电化学特性，并对影响该免疫传感器性能的各种因素进行详细研究。在优化实验条件下，此免疫传感器的线性范围为 0.5-4 μg/L 和 4-25 μg/L，检出限为 0.2 μg/L。该免疫传感器具有制备简单、灵敏度高、稳定性好等优点。

人精子膜蛋白P34H表达与透明质酸酶活性的关系

目的探讨人精子膜蛋白P34H表达和顶体内透明质酸酶活性的关系。方法收集88例精液标本,其中正常生育组20例,不育男性68例。参照世界卫生组织(WHO)标准对标本进行精液常规分析,根据精液参数的不同,将68例不育标本分为正常精液参数不育组和精液参数异常不育组。Western blotting检测P34H蛋白在人精子中的表达,免疫荧光观察P34H蛋白在精子表面的阳性表达率,采用改良透明质酸钠-明胶底物膜法检测精子顶体内透明质酸酶(HYD)活性(HYD阳性反应率、HYD活性强度)。结果正常精液参数不育组和精液参数异常不育组的精子P34H/β-actin平均吸光度、精子P34H标记阳性率均明显低于正常生育组,经统计学分析差异均有显著性(P<0.05);正常精液参数不育组和精液参数异常不育组的HYD活性(HYD阳性反应率、HYD活性强度)与正常生育组比较均有显著下降(P<0.05)。相关性分析提示,精子P34H蛋白表达量与HYD活性(HYD阳性反应率、HYD活性强度)存在正相关性,相关系数r=0.449、0.431,P<0.01;精子P34H阳性率与HYD活性(HYD阳性反应率、HYD活性强度)存在正相关性,相关系数r=0.727、0.691,P<0.01。结论男性不育患者精子P34H蛋白表达减少,精子P34H阳性率降低以及HYD活性(HYD阳性反应率、HYD活性强度)减弱。

冷冻保存对人精子膜蛋白PH-20和透明质酸酶活性的影响

目的：探讨冷冻保存对人精子膜蛋白PH-20和顶体内透明质酸酶活性的影响。方法：24例正常生育力精液标本行冷冻保存。免疫印迹检测PH-20蛋白在人精子中的表达，免疫荧光观察PH-20蛋白在人精子上的定位，采用改良透明质酸钠明胶底物膜法检测精子顶体内透明质酸酶（HYD）活性（HYD阳性反应率、HYD活性强度）。结果：免疫印迹显示正常标本冷冻前、后精子均有PH-20蛋白的表达，其PH-20/βactin平均光密度在正常组冷冻前为0.41±0.15；正常组解冻后为024±0.11，两者的平均光密度差异有统计学意义；间接免疫荧光染色后在荧光显微镜下观察冷冻前PH-20阳性率达72.88%±8.04%；解冻后PH-20阳性率降至46.97%±8.38%，差异有统计学意义；解冻后HYD活性与冷冻前比较均有显著性下降。结论：冷冻解冻过程可引起精子PH-20蛋白表达减少和精子PH-20阳性率降低，以及受精过程中的关键酶HYD活性减弱。

人精子特异性乳酸脱氢酶DNA疫苗的构建及免疫效果的初步研究

目的:构建人精子特异性乳酸脱氢酶DNA疫苗,并免疫雌雄两性BALB/c小鼠,以观察特异性抗体的产生。方法:采用分子克隆的方法构建pVAX1-hLDHC DNA疫苗。双酶切及正反向测序对该DNA疫苗进行鉴定。肌肉注射方法免疫雌雄两性BALB/c小鼠,ELISA和Western blot方法检测小鼠血清中的特异性抗体,常规病理学方法检测雄性实验小鼠的睾丸组织。结果:双酶切及正反向测序结果表明:插入片段的序列以及插入的位置和方向均正确。肌肉注射免疫BALB/c小鼠后可诱导明显的体液免疫反应,且在雄性实验小鼠中未观察到睾丸炎的发生。结论:成功构建了具有一定免疫效果的hLDHC DNA疫苗,为今后进行更深入的研究奠定了基础。

精子透明质酸酶活性与精液动态参数的相关性

目的探讨不育男性精子顶体内透明质酸酶活性与精液有关参数的关系,以期为临床男性不孕不育的病因分析、诊断、治疗及精子的功能检查提供理论及实验依据。方法收集81例精液标本,其中正常生育对照组为20例,不育男性61例,以精子质量分析仪对每份标本进行计算机辅助精液分析(CASA)。并利用改良明胶底物膜法检测精子顶体内透明质酸酶活性。结果①不育组与对照组相关动态参数的分析结果:VCL、VSL、VAP、LIN、WOB的数据不育组与对照组具有统计学意义,表明不育组精子综合质量与对照组间存在差异;②精子运动活力的参数即精子的VCL、VSL、VAP以及ALH等精子参数与精子顶体内透明质酸酶活性有显著相关性,与LIN、STR、WOB、BCF及STR无统计学意义。结论①不育组与对照组相关动态参数VCL、VSL、VAP、LIN、WOB数据具有统计学意义,精子综合质量与对照组间存在差异;②精子参数VCL、VSL、VAP及ALH与精子顶体内透明质酸酶活性有显著相关性。

绵羊冻融精子透明质酸酶活性变化的研究

为了检测冷冻对绵羊精子顶体透明质酸酶活性的影响,试验采用改良后的明胶膜片法对冷冻保存前后小尾寒羊精子顶体透明质酸酶活性变化进行研究。结果表明:冷冻保存后精子顶体透明质酸酶阳性反应率[(43.00±2.45)%]和平均成环直径[(32.86±0.32)μm]与冷冻前精子顶体透明质酸酶阳性反应率[(67.00±4.79)%]和平均成环直径[(55.05±0.47)μm]相比极显著降低和减少(P<0.01),且冷冻前后精子活率与透明质酸酶活性均呈极显著正相关(P<0.01),表明冷冻保存对绵羊精子顶体透明质酸酶活性造成显著损伤。说明透明质酸酶的活性可以在一定程度上预测精子活率和受精能力,可作为绵羊精液品质评价的新指标。

截短的人精子特异性乳酸脱氢酶L178X突变体丧失催化活性

精子特异性乳酸脱氢酶(乳酸脱氢酶C4,LDH-C4)是精子能量代谢的关键酶类之一.为了研究前期发现的1个LDH-C4基因突变(L178X)对LDH-C4功能的影响,在已构建的LDH-C4原核表达载体pET-28a(+)-hLDHC的基础上,利用PCR定点诱变技术,制备了L178X突变体的原核表达载体pET-28a(+)-hLDHC/L178X,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,诱导其表达.对该载体进行限制性酶切表明,插入的LDHC基因cDNA约1000bp;序列分析表明,该插入片段读框正确,带L178X突变.SDS-PAGE及免疫印迹显示,携带该载体的菌体可表达分子量约25kD的蛋白质,后者可被兔抗LDH-C4血清特异识别.乳酸脱氢酶(LDH)活性测定及活性染色表明,所表达的产物没有LDH活性.本研究成功进行了LDH-C4的1个突变体的原核表达,为研究LDHC基因突变对LDH-C4功能以及男性生育的影响奠定了基础.

不育患者精子质量与顶体内透明质酸酶活性研究

随着现代社会的进步和发展,男性不孕不育的发病率却越来越高,而不育患者精子质量的检测对临床诊断和治疗起到至关重要的作用,本文就不育患者精子质量分析与顶体内透明质酸酶活性的研究及其进展进行了综述,以期为男性不育患者的病因、病理以及诊断、治疗方面提供新的思路和方法。

不同条件下人精子透明质酸酶活性测定

目的：以人精子透明质酸酶作为检测精子生育力的指标，了解精子冻贮过程中生育力的变化。方法：收集正常人精液３０份，在精子冻贮的不同条件下用Ｓｉｎｇｅｒ法测定精子透明质酸酶活性。结果和结论：精子与保护剂混合后精子透明质酸酶活性改变不明显（Ｐ＞０．０５）。冻贮后精子透明质酸酶活性降低（Ｐ＜０．０５）。保护剂中甘油含量越多，精子透明质酸酶活性下降越明显。

正常人精子透明质酸酶活性测定

目的报道１２１例正常生育男性精子透明质酸酶活性的测定结果，以期为临床及实验研究提供参考。方法收集正常生育男性精液１２１份，用Ｓｉｎｇｅｒ法测定精子透明质酸酶活性。结果测出精子透明质酸酶活性的均值为０．１６３９±０．０１８４μｇ／千万精子，范围０．１１２３～０．２１４２μｇ／千万精子。结论精子透明质酸酶活性测定为今后男性学的研究及生育调节提供了有效参考数据。

人精子特异性乳酸脱氢酶结构和功能的计算生物学分析

精子特异性乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH),又称乳酸脱氢酶C4(lactate dehydrogenase C4,LDH-C4),特异性地存在于哺乳动物发育成熟的睾丸组织中,与精子的生成、代谢、获能等有密切关系.根据GenBank数据库中人LDH-C4氨基酸序列(P07864),利用PROSITE数据库预测人LDH-C4的功能基序;利用Clustalw2、TreeView1.6.6进行LDH-C4进化树的构建;利用I-TASSER软件预测人LDH-C4的二、三、四级结构以及功能位点.结果表明:在190!196位有1个LDH活性位点,该位点为脊椎动物各亚型乳酸脱氢酶共有的催化位点,为进化中的1个保守序列;从进化树来看,LDHC和LDHB的亲缘关系比较近;人LDH-C4与小鼠LDH-C4的二级、三级结构具有很高的相似性;LDH-C4属乳酸脱氢酶-苹果酸脱氢酶(LDH-MDH)超家族中的LDH-1(cd05293)家族的成员,属于NAD依赖性酶,拥有LDH-1家族具备的基本结构特点.以上结果为研究LDH-C4基因突变对其功能的影响打下基础.

精子特异性乳酸脱氢酶研究进展

精子特异性乳酸脱氢酶（sperm-specific lactate dehydrogenase，LDH-C4）特异地存在于鸟类和哺乳类动物的睾丸和精子中，与体细胞乳酸脱氢酶A4（LDH-A4）和B4（LDH-B4）同属于乳酸脱氢酶家族，它们都以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）为辅酶催化丙酮酸和乳酸的转化，在能量代谢中发挥重要作用，但LDH—C4与体细胞LDH相比又具有一些独特性质。