罗氏沼虾MSG蛋白对精子明胶水解活性影响的功能

雄性生殖系统中的蛋白酶被认为在生殖过程中起着十分关键的作用.不同于哺乳动物生殖系统的蛋白酶,甲壳类精子酶类的研究相对较少.在先前的研究中,我们鉴定了一种新型的罗氏沼虾精子明胶酶(MSG),发现它可以特意地被MRPINK抑制.然而,MSG参与到生殖过程的功能仍未阐明.本研究Western blotting的结果显示,MSG蛋白分布在雄性生殖系统的输精管和壶腹中,在精巢中没有分布;免疫组化和免疫荧光技术结果表明,MSG只分布在输精管和壶腹的内壁表皮细胞核精子的基部.为进一步研究MSG在罗氏沼虾体内的生理功能,采用RNA干涉的方法使MSG基因沉默,通过半定量PCR和Western blotting检测发现,干涉后个体内MSG核酸水平和蛋白水平与对照组相比均下降了80%以上.利用明胶SDS-PAGE和明胶薄层分析方法发现,干涉后精子的蛋白水解活力明显降低.以上结果表明,MSG在罗氏沼虾精子的水解蛋白活性方面起着重要作用.