精子特异性透明质酸酶PH-20结构与功能

精子表面特异性透明质酸酶(PH-20)是糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定的单链膜蛋白,特异性分布于精子头部浆膜和顶体内膜,是一种多功能蛋白,在受精过程中具有重要作用。鉴于PH-20在精子表面的特异性分布及其在受精中的作用,PH-20作为免疫避孕候选疫苗对象一直受到关注。继续深入研究PH-20的结构与功能,将有助于全面揭示精卵结合的分子过程。

特异性透明质酸酶的研究进展

透明质酸酶在临床上被用作药物扩散剂,它通过降解肿瘤微环境和皮肤组织中的透明质酸,从而提高组织的通透性来促进药物的扩散和吸收,在肿瘤治疗和皮下给药中都有很好的应用前景。透明质酸酶对细胞外基质中透明质酸的降解作用不仅与其对透明质酸的解聚作用效力有关,还与酶的底物特异性有关。近年来,不断有专一性降解透明质酸的透明质酸酶被发现,本文主要对目前发现的特异性透明质酸酶的研究现状作一综述。

表面等离子体共振技术分析卵黄抗体对酪氨酸酶与底物相互作用的影响

目的:采用表面等离子体共振技术(surface plasmon resonance,SPR)测定酪氨酸酶与特异性卵黄抗体(IgY)及其与底物L-多巴的亲和力,探讨特异性IgY对酪氨酸酶与底物亲和力的影响。方法:将裸金芯片进行自组装修饰,以3-巯基丙酸作为基底膜对酪氨酸酶进行固定,SPR实时监测特异性IgY及底物L-多巴与酪氨酸酶结合后芯片表面的响应信号变化。将数据导入CLAMP分析软件,进行拟合分析,确定动力学常数。结果:酪氨酸酶与特异性IgY的结合常数(4.50×10~6 L/mol)明显高于其与底物L-多巴的结合常数(4.95×10~3 L/mol),且酪氨酸酶与特异性IgY结合后,其与底物L-多巴结合常数明显下降。结论:相比底物L-多巴,酪氨酸酶更易与特异性IgY结合,而且从结合动力学角度说明特异性IgY可以明显抑制酪氨酸酶与底物结合从而抑制酶活性。

新型PH-20疫苗不同注射方式对雌性豚鼠免疫应答和避孕效果的影响

目的观察以等比方法配制的新型精子表面特异性透明质酸酶(PH-20)疫苗的不同注射方式对豚鼠免疫应答和避孕的影响。方法 60只雌性豚鼠随机分为两大组(直肠注射组和腹腔注射组),每组再分为3个小组(实验1组、实验2组和对照组,每小组各10只),用电镜观察该新型PH-20疫苗的形态,应用双夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测豚鼠阴道分泌物中分泌型免疫球蛋白A(sIgA)的水平、放射免疫分析法检测血液sIgA的水平、竞争ELISA技术检测血液PH-20特异性抗体的水平。结果直肠注射组和腹腔注射组豚鼠血液和阴道分泌物中sIgA、PH-20抗体含量均较对照组升高(P均<0.05);实验1组(添加弗氏完全佐剂)豚鼠在各测量时间点血液和阴道分泌物中sIgA、PH-20抗体含量均较实验2组(未添加弗氏完全佐剂)高(P均<0.05)。直肠注射组(50%)和腹腔注射组(76.7%)总阳性怀孕率相比有显著性差异(P<0.05)。结论该新型PH-20疫苗具有较高的免疫活性,能诱导机体产生明显的体液反应,且直肠注射诱导免疫优于腹腔注射。用弗氏完全佐剂均能增强两种注射方式的避孕效果。

屎肠球菌Hyl蛋白的免疫保护性研究

目的用基因工程方法获得屎肠球菌类透明质酸酶(Hyalronidase,Hyl)蛋白,经口服免疫小鼠后,探讨机体产生的免疫应答和抗感染保护作用。方法Hyl用Ni2+-NTA柱纯化后,作为抗原给小鼠灌胃进行免疫,ELISA检测小鼠血清IgG、IgA、小肠粘液sIgA和粪便sIgA。并用屎肠球菌TX0016腹腔攻击已免疫的小鼠,观察其免疫保护性。结果重组蛋白经Ni2+-NTA柱纯化后,灌胃免疫小鼠后。ELISA检测结果血清IgA、IgG,粪sIgA,肠粘液sIgA明显高于对照组(P<0.01)。通过细菌攻击后,小鼠的平均存活时间也明显长于对照组。结论重组蛋白Hyl经口服免疫可有效诱导粘膜免疫应答,产生高水平的sIgA,发挥局部粘膜免疫作用和抗菌保护作用。Hyl有望作为预防屎肠球菌口服疫苗的候选抗原。

黄唇蜾蠃蜂蜂毒中两个过敏原全长基因的克隆、序列分析和表达

为了进一步研究透明质酸酶的过敏活性,利用昆虫杆状病毒成功地表达了黄唇蜾蠃蜂Rhynchium brunneum蜂毒的透明质酸酶。根据已报道的胡蜂科透明质酸酶和抗原5基因的氨基酸保守序列,设计合成简并引物,利用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术扩增了黄唇蜾蠃蜂蜂毒透明质酸酶和抗原5的基因片段,利用RACE技术进一步获得了它们的全长基因(GenBank登录号分别为EU624135和EU624136)。按照过敏原的命名法则,分别命名为Rhy b 2和Rhy b 5。序列比对分析发现,这两个基因与胡蜂科的相应序列高度相似,说明对胡蜂蜂毒过敏的人群也可能对蜾蠃蜂蜂毒有交叉过敏反应。但进一步分析发现,黄唇蜾蠃蜂蜂毒透明质酸酶的B细胞决定表位显著不同,9个保守性氨基酸在蜾蠃蜂中仅保留了3个,而且缺乏两个关键的精氨酸;黄唇蜾蠃蜂蜂毒抗原5序列N端的二级结构和具有过敏活性的常见黄胡蜂Vespula vulgaris蜂毒的抗原5显著不同,有可能因此而缺失依赖其N端二级结构的B细胞决定表位。据此认为,蜾蠃蜂蜂毒透明质酸酶和抗原5很可能是天然弱化的过敏原,在过敏原特异性免疫治疗上具有潜在的应用价值。

尿BLCA-1、Haase水平在膀胱癌诊断及术后复发监测中的应用价值

目的探讨尿膀胱特异性核基质蛋白-1(BLCA-1)、透明质酸酶(HAase)水平在膀胱癌诊断及术后复发监测中的应用价值。方法选取80例膀胱癌患者作为膀胱癌组,80例前列腺增生患者作为前列腺增生组,80例健康志愿者作为对照组,检测三组研究对象尿液中的BLCA-1、HAase水平,并分析BLCA-1、HAase的诊断效能。结果三组受检者的尿BLCA-1、HAase水平比较:膀胱癌组>前列腺增生组>对照组,且两两组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。BLCA-1、HAase及二者联合诊断膀胱癌的AUC分别为0.921、0.866、0.934;灵敏度分别为80.0%、98.8%、90.0%;特异度分别为95.0%、70.0%、85.6%。术后1年,膀胱癌复发患者尿BLCA-1、HAase水平高于术前,且复发患者高于未复发患者(P<0.05)。结论膀胱癌及术后复发患者的BLCA-1、HAase水平较高,二者联合诊断膀胱癌的准确度高,可成为诊断膀胱癌、监测术后复发的重要指标。