半番鸭与番鸭精巢组织差异表达转录组测序分析

【目的】研究半番鸭与番鸭精巢组织转录组差异表达基因,为进一步阐明半番鸭不育的遗传机制奠定理论基础。【方法】利用转录组测序方法对半番鸭和番鸭的精巢组织进行研究,筛选其差异表达基因,并对其功能进行注释和荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,QRT-PCR)验证。【结果】测序共获得43.84Gb Clean Data,组装后共获得193 535条Unigene。DESeq分析发现3 597个基因在两个鸭品种间差异表达,其中上调基因1 194个和下调基因2 403个,包括与生殖功能相关的基因,如成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)、蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)、丝裂原活化蛋白激酶7(mitogen-activated protein kinase 7-like,partial,BMK)、生长因子受体结合蛋白2(growth factor receptor-bound protein 2,GRB2)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)和肿瘤坏死因子受体超家族成员6(tumor necrosis factor receptor superfamily member 6,FAS)等。GO(gene Ontology)分析发现382个差异基因获得功能注释,其中97个基因涉及发育繁殖生物学过程。KEGG(kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)通路分析表明差异表达基因共富集到50条信号通路中,其中17个通路显著富集,包括丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路(mitogen-activated protein kinase signaling pathway,MAPK)、甘油酯代谢(glycerolipid metabolism)以及钙信号途径(calcium signaling pathway)信号通路等,与生殖功能密切相关的有促性腺激素释放激素信号通路(gonadotropin releasing hormone(Gn RH)signaling pathway)和MAPK信号转导通路。经QRT-PCR验证,差异基因表达变化模式与转录组测序结果一致,测序结果可靠。【结论】在转录组水平上筛选出半番鸭和番鸭精巢组织差异表达基因,揭示了Gn RH和MAPK信号通路在鸭的生殖活动中发挥了重要作用,为进一步探索半番鸭生殖系统的分化机理提供可靠的参考依据。

壬基酚聚氧乙烯醚对斑马鱼精巢组织的影响

采用半静态水体暴露的方式研究了非离子表面活性剂对成熟雄性斑马鱼精巢组织的影响。用荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测试验鱼精巢雌激素受体α(ERα)、雄激素受体(AR)基因以及性激素合成相关细胞色素P450酶类基因(CYP17和CYP19a)的表达,通过组织学观察研究受试鱼精巢结构的变化。结果表明,壬基酚聚氧乙烯醚(NPEO)暴露可以引起雄性斑马鱼精巢组织结构的改变,并影响成年雄性斑马鱼ERα、AR基因和性激素合成相关细胞色素P450酶类基因的表达水平,且10.0mg·L^-1的NPEO暴露可以显著上调CYP19a、ERα和AR基因的表达量,可显著下调斑马鱼精巢中CYP17基因的表达量。在组织学上,0.1mg·L^-1组斑马鱼生精小管内不仅生精小囊数目减少,且管腔中精子数量减少,出现非细胞区域;1.0和10.0mg·L^-1组可见部分个体精子凝聚于生精小管管腔中央,管腔内空隙明显增大,表现出严重的精子浓缩效应。由此表明,NPEO暴露通过抑制CYP17基因的表达干扰睾酮的合成;同时,NPEO暴露通过诱导CYP19a和ER基因的表达增加内源雌激素的合成,导致斑马鱼精巢中性激素紊乱,最终损伤斑马鱼精巢组织。

鱿鱼精核蛋白提取物的保健功能研究

以鱿鱼精巢组织中提取的核蛋白为主要成分制成精核蛋白提取物 ,利用功能学评价实验方法对提取物进行抗疲劳、抗氧化以及免疫调节实验。结果表明 :( 1 )该提取物能明显延长小鼠爬杆和负重游泳时间 ,减少小鼠运动时肝糖元的消耗 ,降低运动后血乳酸的水平 ;( 2 )该提取物能降低血中过氧化脂质降解产物丙二醛 ( MDA)含量、增强血中超氧化物歧化酶( SOD)活力 ;提高小鼠 NK细胞活性、巨噬细胞吞噬百分比和吞噬指数及细胞免疫水平。因而 ,该提取物有抗疲劳。

中巨石斑鱼精巢鱼精蛋白提取工艺优化及其抗菌活性的初步研究

以中巨石斑鱼精巢组织为原料,优化提取工艺条件,提取鱼精蛋白,测定抗菌活性蛋白的分子量,并对其抗菌活性进行评价。主要结果如下:(1)通过正交优化试验,对鱼精蛋白的提取工艺进行了优化,最佳提取工艺条件是硫酸浓度为10%、硫酸用量为精巢质量的4倍、提取时间为1.5 h、冷乙醇用量为硫酸提取液的3.5倍,在此条件下,鱼精蛋白得率达1.24%,抗菌活性达到54.99%;(2)通过Tricine-SDS-PAGE电泳对抗菌活性蛋白的分子量进行测定,主体成分蛋白的分子量小于16 ku,在(13~14)ku之间;(3)鱼精蛋白对枯草芽孢杆菌和大肠杆菌均具有较好的抑菌活性,其对枯草芽孢杆菌的抑菌活性比大肠杆菌更显著。