一种非精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸肽对血小板聚集和ERK1/2磷酸化作用的研究

目的观察一种非精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)肽(P1c,专利公开号:101497656)对血小板聚集的影响和细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)磷酸化的作用。方法固相合成法制备P1c;将不同浓度(0～2.6 mmol/L)的P1c加入富血小板血浆中,以二磷酸腺苷(ADP)为诱导剂,检测血小板聚集率;用western blot检测小肽干预后对总ERK1/2和p-ERK1/2的表达。结果 P1c以浓度依赖方式抑制血小板的聚集;其对总ERK1/2的表达无影响,而显著降低血小板p-ERK1/2的表达(P<0.05)。结论 P1c可能通过抑制ERK1/2的磷酸化而减少血小板的聚集。

精氨酰甘氨酰天门冬氨酸三肽的合成

以L-精氨酸、L-甘氨酸、L-天门氨酸为原料,采用二环己基碳二亚胺(DCC)法合成了Arg-Gly-Asp(RGD)。Z-Arg(NO2)-OH经偶联剂活化与H-Gly-OMe.HCl缩合,水解后得到Z-Arg(NO2)-Gly-OH;产物与H-Asp(OBzl)-OBzl.TosOH偶联得到全保护多肽,经Pd-C/H2还原为Arg-Gly-Asp。

天冬氨酸酰基转移酶及其相关疾病的研究进展

N-乙酰-L-天冬氨酸(NAA)是由神经元产生的天冬氨酸衍生物,是大脑中含量第二高的氨基酸/氨基酸衍生物,仅次于含量第1位的谷氨酸。NAA代谢通过影响水的运输、髓鞘合成、神经细胞能量代谢等方面进而影响神经系统功能,NAA增多或减少均会引起神经系统疾病。天冬氨酸酰基转移酶(ASPA)是将NAA分解为天冬氨酸和乙酸盐的酶,在维持NAA代谢平衡过程中发挥重要作用。ASPA突变可导致罕见病卡纳万病(CD),CD预后极差。此外,近些年关于甲基化ASPA基因在衰老预测模型中的报道逐渐增多,提示了ASPA在神经系统之外的作用。该文将对ASPA的生物学功能、ASPA突变所致CD的临床症状及治疗,以及甲基化ASPA基因在衰老中的作用进行综述。

含精氨酰-甘氨酰-天冬氨酰序列短肽的合成及应用研究进展

精氨酰 -甘氨酰 -天冬氨酸 (RGD)是具有生物活性的短肽序列之一。它是大多数细胞表面粘附分子能识别的配体上的最小氨基酸序列 ,在内皮细胞的识别、抗血栓、抑制肿瘤 ,治疗烧伤和皮肤溃疡等方面具有重要的作用。本文综述了近年来国内外对含RGD序列短肽的合成及其应用研究进展。

精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸多肽层层自组装修饰钛片对小鼠成骨样细胞MC3T3-E1的影响

目的研究层层自组装精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸(RGD)多肽修饰钛片对小鼠成骨样细胞MC3T3-E1的影响。方法将纯钛试件随机分为3组:纯钛组(PT组)、NaOH处理钛片组(NT组)、RGD修饰钛片组(RT组)。根据分组对纯钛试件进行相应表面处理,扫描电子显微镜(SEM)观察试件表面形貌。将MC3T3-E1细胞在试件表面培养,采用SEM、3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测细胞的黏附和增殖能力,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测成骨细胞骨钙素、骨保护素mRNA的表达。结果 SEM观察到PT组试件表面存在均匀、较清晰的划痕结构,NT组试件表面出现微孔结构,RT组试件表面有类似小凸起结构,似网状。SEM观察到RT组细胞呈多边形且有大量丝状伪足,细胞伸展状态明显好于其余2组;MTT法显示RT组细胞的黏附率最高,无钛片对照组和PT组的细胞黏附率的差异无统计学意义,NT组细胞黏附率最低;RT组的细胞增殖率均高于其余3组(P<0.05),在1和3 d最为明显;RT-qPCR检测14 d时RT组骨钙素mRNA和骨保护素mRNA均高表达。结论 RGD多肽修饰钛片能促进小鼠成骨样细胞MC3T3-E1的黏附和增殖,并且能够上调骨钙素mRNA和骨保护素mRNA的表达。

半乳糖与精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸共修饰聚酰胺-胺树状大分子纳米粒的制备及其对肝癌的靶向性研究

目的构建半乳糖(Gal)与精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)共修饰聚酰胺-胺(PAMAM)纳米粒,研究其肝癌靶向性。方法采用乳化法制备Gal和RGD共修饰纳米粒(Gal/RGD-NPs),考察其形态、粒径、电位等理化性质。通过细胞摄取实验和肝癌肿瘤球穿透实验考察Gal/RGD-NPs与肝癌Hep G2细胞的亲和力和肿瘤组织穿透能力。结果制备的Gal/RGD-NPs粒径为(102.7±17.6)nm,电位为(3.92±1.37)m V。体外细胞摄取实验表明,Hep G2细胞对Gal/RGD-NPs的摄取效率分别是Gal-NPs和RGD-NPs的2.6倍和3.1倍,差异有统计学意义(P<0.01)。细胞摄取实验和肿瘤球摄取实验结果表明,Gal/RGD-NPs具有良好的肝癌细胞亲和力。结论 Gal与RGD共修饰纳米粒具有良好的肝癌靶向性,是一种潜在的肝癌靶向给药系统。

RGD肽类血小板聚集抑制剂的研究Ⅰ.N─乙酰─精氨酰─甘氨酰─天冬氨酸─苯乙酰胺的合成

活化的血小板暴露膜糖蛋白复合物（GPⅡb／Ⅲa），作为受体识别结合纤维蛋白原（Pg）等粘附蛋白共有的精氨酰─甘氨酰─天冬氨酸（Arg－Gly－Asp，即RGD）序列，导致血小板聚集和血栓形成。人工合成的含RGD多肽可阻断GPⅡb／Ⅲa与Fg等结合，从而抑制血小板聚集和血栓形成。为了开展肽类血小板聚集抑制剂的研究，我们用液相法合成了Ac－Arg－Gly一Asp－NHCH2CH2Ph。初步体外活性实验结果表明，该RGD肽衍生物对ADP诱导的血小板聚集具有较强的抑制作用，在血浆中3h作用强度基本不变。

粘附肽精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸促进小鼠成骨细胞在材料表面的附着和铺展

目的：研究粘附肽ＲＧＤ（精氨酸－甘氨酸－天冬氨酸）对小鼠成骨细胞在材料表面附着和铺展的影响，为使用粘附肽对种植材料进行表面修饰提供体外实验依据。方法：采用自组装单层结构法将含有ＲＧＤ的粘附肽片段ＲＧＤＣ以共价键固定在材料表面。小鼠成骨细胞体外培养４ｈ，细胞计数分析其对材料的附着。ＦＩＴＣ标记免疫荧光染色观察培养４ｈ后细胞内肌动蛋白的分布。结果：ＲＧＤ可以使细胞对材料表面的附着密度显著提高。体外培养４ｈ，细胞在ＲＧＤ材料表面具有良好的铺展形态。结论：表面固定 ＲＧＤ可以促进细胞对材料表面的附着和铺展。

草甘膦对GC-1小鼠精原细胞的毒性作用及N-乙酰半胱氨酸的干预效应

摘要：为探讨41％草甘膦水溶液（农达）对雄性生殖细胞的毒性及其作用机制以及N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine，NAC）的干预效应。以GC．1小鼠精原细胞为受试细胞，设正常对照组、草甘膦染毒组（60、90、120、150、180mg·L-1）、NAC干预组（10mmol·L NAC＋90mg·L-1农达）。MTT法检测细胞存活率，Giemsa染色法观察细胞的形态学改变，彗星试验检测细胞DNA损伤，比色法检测细胞培养液乳酸脱氢酶（LDH）以及细胞内超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）及丙二醛（MDA）水平的变化。结果显示，随着草甘膦染毒浓度增加，细胞存活率逐渐下降妒〈0．01），彗星阳性率逐渐升高（P〈0．01）；与对照组相比，草甘膦染毒组LDH活性增加（P〈0．05，60mg·L-1组除外），MDA生成量增多（P〈0．05），GSH含量降低（P〈0．05）和SOD活性降低（P〈0．05）。抗氧化剂NAC预处理具有相应的拮抗作用。研究表明，60～180mg·L。浓度草甘膦对GC-1细胞有明显的损伤作用，其机制可能是草甘膦诱导氧化应激，导致细胞通透性增加和DNA损伤。抗氧化剂NAC对草甘膦的细胞毒性具有一定保护作用。

精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽表面修饰多孔钽对软骨细胞黏附、增殖和分泌功能的促进作用

目的:研究精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)多肽表面修饰多孔钽(Ta)对软骨细胞黏附、增殖和分泌功能等生物学行为的影响,探讨RGD/软骨细胞/多孔钽复合物作为软骨组织工程支架材料修复软骨缺损、促进软骨再生的可行性。方法:通过物理吸附的方法将不同浓度RGD肽及Ⅱ型胶原(ColⅡ)吸附于多孔钽表面,分为Ta-RGD组、Ta-ColⅡ组、Ta-RGD/ColⅡ0.2g·L-1组、Ta-RGD/ColⅡ1.0g·L-1组、Ta-RGD/ColⅡ5.0g·L-1组、Ta-RGD/ColⅡ10.0g·L-1组及纯Ta组。分离培养新西兰幼兔关节软骨细胞,取第2代细胞种植于修饰前后多孔钽使其成为RGD/软骨细胞/多孔钽复合物;扫描电镜观察RGD/软骨细胞/多孔钽复合物形貌特征以及软骨细胞生长状态,沉淀法检测多孔钽修饰前后软骨细胞黏附率,MTT法检测多孔钽修饰前后软骨细胞的增殖水平,羟脯氨酸法测定软骨细胞分泌功能。结果:多孔钽经RGD修饰后各组软骨细胞黏附率均高于修饰前(P<0.05),其中黏附效果最好的是4h的Ta-RGD/ColⅡ5.0g·L-1组,同时各组间黏附率比较差异有统计学意义(P<0.05)。扫描电镜下各组软骨细胞在修饰后的多孔钽表面生长状态良好,细胞在多孔钽表面及孔隙内生长,分泌细胞外基质覆盖于多孔钽表面;MTT检测,多孔钽经RGD修饰后各组软骨细胞增殖水平均高于修饰前(P<0.05),其中增殖效果最好的是13d的Ta-RGD/ColⅡ1.0g·L-1组;羟脯氨酸检测,Ta-RGD/ColⅡ1.0g·L-1组羟脯氨酸水平高于其他各组(P<0.05)。结论:RGD多肽可有效加强软骨细胞在多孔钽表面及孔隙内的黏附及增殖,对软骨细胞的分泌有促进作用。

精-甘-天冬-丝氨酸4肽对肝星状细胞增殖及凋亡的影响

目的 :探讨精 -甘 -天冬 -丝氨酸 (RGDS) 4肽对纤维连接蛋白 (FN)刺激的肝星状细胞 (HSCs)增殖、凋亡及caspase - 3表达的影响。方法 :应用体外HSCs培养技术 ,采用 [3 H]-胸腺嘧啶核苷 ([3 H]-TdR)掺入法测定HSCs增殖 ;膜联蛋白 (Annexin -V) /碘化丙啶 (PI)双标记流式细胞术、TUNEL、扫描电镜及透射电镜等方法测定HSCs凋亡 ;采用甲苯胺兰染色方法测定细胞粘附率 ;应用流式细胞方法测定caspase - 3蛋白表达。结果 :① 2 5mg·L-1、5 0mg·L-1、10 0mg·L-1浓度RGDS 4肽剂量、时间依赖性抑制HSCs增殖 ,P <0 0 1。②RGDS 4肽对HSCs凋亡的诱导作用亦呈剂量和时间依赖关系 ,P <0 0 1。扫描电镜、透射电镜观察 ,RGDS 4肽组出现典型的凋亡征象。③RGDS 4肽作用于HSCs2h ,2 5mg·L-1、5 0mg·L-1、10 0mg·L-1组粘附抑制率分别是 8 82 %、2 9 4 1%、4 5 5 9% ,而RGES4肽组的粘附抑制率仅为 4 4 1% ,P <0 0 1。④RGDS 4肽处理组caspase - 3表达明显高于FN、RGES 4肽组。结论 :RGDS 4肽剂量和时间依赖性抑制HSCs增殖并诱导其凋亡。RGDS 4肽抑制增殖及诱导凋亡效应 ,依赖于caspase -3,也与其抗粘附作用有关。

精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸对氧化苦参碱脂质体减轻肝纤维化的增强作用研究

目的探讨精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arginine-Glycin-Aspartic acid,RGD)三肽序列对氧化苦参碱脂质体(oxymatrine liposomes,OXYL)治疗四氯化碳诱导的肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)作用的影响。方法建立四氯化碳诱导的大鼠HF模型,制备RGD-OXYL和OXYL。动物分组为:正常对照组;肝纤维化模型组;OXYL治疗组;RGD-OXYL治疗组;RGD脂质体组。检测各组大鼠血清ALP,利用HE染色和Masson染色评价肝脏病理损伤及细胞外基质沉积情况。分离各组大鼠的肝脏组织,利用半定量PCR检测纤维化相关基因(TIMP-1,MMP-2)表达。结果成功合成OX-YL及RGD-OXYL。与肝纤维化组比较,OXYL治疗组大鼠的ALP水平下降(344.47±27.52vs550.69±43.78,P<0.05)、肝损伤减轻、细胞外基质沉积面积显著减少(2.36%±0.09%vs7.70%±0.60%,P<0.05)、纤维化相关基因(TIMP-1,MMP-2)表达下调;与OXYL治疗组大鼠相比,RGD-OX-YL治疗组大鼠ALP水平(272.51±19.55vs344.47±27.52,P<0.05)和肝损伤及细胞外基质沉积面积(0.26%±0.09%vs2.36%±0.09%,P<0.05)及纤维化相关基因(TIMP-1,MMP-2)表达等指标均有均有进一步改善。结论氧化苦参碱脂质体可减轻四氯化碳诱导的肝纤维化,抑制纤维化相关基因表达。RGD偶联的OXYL治疗效果优于OXYL。

聚琥珀酰亚胺水解条件与聚天冬氨酸阻垢性能关系的研究

聚天冬氨酸具有无磷、可生物降解的特性,是一种“环境友好”型阻垢分散剂并具有一定的缓蚀性能,已经成为水处理药剂开发和研究的热点。目前,以L-天冬氨酸为原料进行缩合制得聚琥珀酰亚胺的工艺已经得到广泛的研究,但是对于聚琥珀酰亚胺水解为聚天冬氨酸的工艺条件研究的比较少。作者研究了聚琥珀酰亚胺的不同水解条件对其产物聚天冬氨酸阻垢性能的影响。结果表明,聚琥珀酰亚胺的最佳水解条件为:温度10～20℃,氢氧化钠质量浓度100g/L。

股骨头坏死组织中半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3与细胞凋亡的关系

目的探讨半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3在无菌性股骨头坏死(avascular/aseptic necrosis of femoral head,ANFH)进展过程中的表达及意义。方法21例(22髋)ANFH取股骨头病灶周围骨松质,其中早期ANFH组(6髋),中期ANFH组(8髋),晚期ANFH组(8髋);另取19例(19髋)新鲜股骨颈骨折的股骨头对应部位骨松质为对照组。采用原位末端标记(TUNEL)法、空骨陷窝计数法检测细胞凋亡水平,比色法检测股骨头组织Caspase-3活性。结果骨陷窝空虚百分率(F=45.43,P=0.000)、成骨细胞凋亡率(F=120.86,P=0.000)等凋亡指标均随ANFH临床分期进展而显著升高,ANFH早、中期组显著高于对照组(q=18.899,P<0.05;q=6.398,P<0.05),但并不随着ANFH病变进展而增强,而呈现进行性下降;ANFH晚期组Caspase-3活性与对照组Caspase-3活性无统计学差异(q=2.021,P>0.05)。Caspase-3活性与细胞凋亡率统计学相关性不显著(r=0.126,P=0.425)。结论在ANFH进展过程中,Caspase-3可能不是细胞凋亡的主要执行分子;Caspase-3在ANFH进展中可能发挥非凋亡作用。

N-乙酰天冬氨酸与缺血性卒中的研究进展

缺血性卒中占全部卒中的60％～80％.及早治疗而降低缺血性卒中的病死率和致残率,已成为近年医学研究的热点.代谢组学（metabonomics）是研究生物体受到外部刺激所产生的所有代谢产物变化的科学.

在多孔钛片表面固定精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸的一种新方法

目的应用层层静电自组装技术构建一种新的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)固定方法,并与物理吸附和化学偶联法进行比较。方法55片10mm×10mm×1mmTi-6Al-4V片经喷砂、双重酸和过氧化氢热处理后,30片应用层层静电自组装技术固定RGD,并与物理吸附、应用CDI的化学偶联技术固定RGD相比较。场发射扫描电镜(FSEM)观察RGD固定过程中钛片表面形貌情况,荧光显微镜大体观察固定到钛片上的RGD数量。结果FSEM显示物理吸附和新的固定方法不会破坏钛片的表面形貌,而应用CDI的化学偶联则破坏钛片原有的表面形貌,大小不等的多极孔洞被完全破坏。荧光显微镜图片显示物理吸附固定到钛片表面的RGD较少,而应用CDI的化学偶联和新的固定方法固定到钛片表面的RGD较多。结论采用层层静电自组装技术有利于将RGD固定到钛表面且不破坏种植体表面形貌,同时可保证数量和结合强度。

精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸修饰钛材料表面的研究进展

钛及其合金因良好的生物学性能被广泛应用于口腔医学领域,但钛金属是惰性材料,植入后不能直接和骨形成较好的结合,因此对钛及其合金表面进行生物改性一直是生物材料领域的研究热点。精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)作为钛材料表面修饰的候选蛋白质,广泛存在于纤连蛋白、玻连蛋白和骨涎腺蛋白等多种细胞外基质蛋白中,可调节细胞与血清及细胞外基质的附着,因此,本文就目前国内外对RGD修饰钛及其合金表面的主要研究进展作一综述。

精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽类似物与新生血管内皮靶向治疗

背景:血管内皮是缺血、血栓、炎症、水肿、氧化应激等病理损伤中的重要部位,选择特异性的内皮细胞靶点成为药物介入治疗的关键。目的:分析和总结近年来精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽及精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽类似物作为特异性的内皮细胞靶点的研究。方法:分别以"RGD、整合素、靶向治疗","RGD、integrin、targetedtherapy"为检索词,应用计算机检索Pubmed数据库1998年1月至2011年12月有关文章。纳入有关血管新生的文献。排除与研究目的无关和内容重复者。保留42篇文献做进一步分析。结果与结论:整合素αvβ3是内皮细胞病理损伤及血管新生时的特异靶点,参与内皮细胞的迁移、增殖、分化过程。精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽及精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽类似物作为整合素和其配体相互作用的识别位点,能结合肿瘤或者病理损伤时新生血管表达增高的整合素αvβ3,介导细胞与细胞外基质及细胞之间的相互作用,可在新生血管显影、靶向药物递送、载体材料修饰中发挥重要作用。

丙泊酚通过组蛋白脱乙酰酶2/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白/N-甲基-D-天冬氨酸-2B受体信号通路对子代大鼠学习和记忆功能的影响

目的探讨孕早期母体丙泊酚暴露对子代大鼠学习和记忆功能的影响。方法选取孕5-7 d的SD大鼠40只,采用随机数字表法将其分为A、B、C、D组,每组各10只。A组为对照组,B、C和D组妊娠大鼠分别注射0.25%、0.5%和0.75%的丙泊酚。子代大鼠出生后,根据是否给予组蛋白脱乙酰酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)抑制剂将其分为CS组(A组子代大鼠给予HDAC2抑制剂)、I0.25S组(B组子代大鼠给予HDAC2抑制剂)、I0.5S组(C组子代大鼠给予HDAC2抑制剂)、I0.75S组(D组子代大鼠给予HDAC2抑制剂)、CN组(A组子代大鼠不给予HDAC2抑制剂)、I0.25N组(B组子代大鼠不给予HDAC2抑制剂)、I0.5N组(C组子代大鼠不给予HDAC2抑制剂)和I0.75N组(D组子代大鼠不给予HDAC2抑制剂),每组各10只。比较各组子代大鼠Morris水迷宫实验结果、海马HDAC2、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)、N-甲基-D-天冬氨酸-2B受体(N-methyl-D-aspartate receptor 2B subunits,NR2B)mRNA及NR2B蛋白表达水平。结果第1-4天I0.25N组、I0.5N组、I0.75N组子代大鼠的逃避潜伏期均显著长于CN组(均P<0.05),I0.75S组大鼠平台穿越次数显著少于CS组(P<0.05),I0.25S组、I0.5S组、I0.75S组子代大鼠目标象限停留时间分别显著长于I0.25N组、I0.5N组、I0.75N组(均P<0.05)。当丙泊酚的暴露剂量增加,细胞出现线粒体空泡和高尔基体肿胀,HDAC2抑制剂可减轻丙泊酚暴露引起的子代海马功能障碍。I0.25N组、I0.5N组、I0.75N组子代大鼠海马HDAC2 mRNA表达水平均显著低于CN组(均P<0.05),CS组、I0.25S组、I0.5S组、I0.75S组子代大鼠海马HDAC2 mRNA水平分别显著低于CN组、I0.25N组、I0.5N组、I0.75N组(均P<0.05);CS组、I0.25S组、I0.5S组、I0.75S组子代大鼠海马CREB mRNA水平分别显著高于CN组、I0.25N组、I0.5N组、I0.75N组(均P<0.05);I0.25S组、I0.5S组和I0.75S组子代大鼠海马NR2B mRNA和NR2B蛋白表达水平分别显著高于I0.25N组、I0.5N组和I0.75N组(均P<0.05)。结论孕早期母体丙泊酚暴露损害子代大鼠学习和记忆功能,机制与其调节子代大鼠海马HDAC2/CREB/NR2B蛋白表达有关。

饮料中天冬酰苯丙氨酸甲酯及其代谢物含量的测定方法

目的:建立快速测定饮料中天冬酰苯丙氨酸甲酯及其代谢物(L-苯丙氨酸)含量的系统分析方法。方法:采用高效液相色谱法,使用ZORBAX SB-C18色谱柱,以0.1%三氟乙酸-乙腈流动相(85:15,V/V)作为分离条件,在DAD检测器210nm波长处进行检测。结果:该方法的最低检出量分别为L-苯丙氨酸0.8ng,天冬酰苯丙氨酸甲酯2.4ng,标准曲线线性良好,相关系数分别为0.9998和0.9994,回收率在96.3%～98.5%之间,相对标准偏差小于2%。结论:该法简捷、快速且灵敏度高。