精氨酸代琥珀酸合成酶-1对胰岛β细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨精氨酸代琥珀酸合成酶⁃1(argininosuccinate synthetase 1,ASS1)对胰岛β细胞增殖与凋亡的影响及机制。方法:利用siRNA和慢病毒载体在胰岛β⁃TC6细胞中分别敲低和过表达ASS1;5⁃乙炔基⁃2′⁃脱氧尿嘧啶核苷(5⁃ethynyl⁃2′⁃deoxyuridine,EdU)和CCK⁃8检测细胞增殖能力;Annexin V⁃PI流式细胞术和原位末端转移酶标记技术(terminal dUTP nick⁃end labeling assay,TUNEL)检测细胞凋亡水平;Western blot检测B细胞淋巴瘤⁃2(B⁃cell leukaemia⁃2,Bcl⁃2)蛋白、Bcl⁃2相关X蛋白(Bcl⁃2 associated X protein,Bax)、半胱氨酸天冬氨酸酶3(Caspase3)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶⁃3(cleaved Caspase⁃3)、凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)、细胞核增殖抗原(Ki67)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian rapamycin target protein,mTOR)的表达水平;RT⁃qPCR检测AIF、Ki67和mTOR mRNA水平。结果:①与对照相比,敲低ASS1后,胰岛β细胞EdU阳性率和CCK⁃8细胞增殖活力降低,TUNEL阳性细胞数和AV/PI检测的细胞凋亡率升高。胰岛β细胞内AIF表达量明显升高,Bax/Bcl⁃2比值下降,Caspase⁃3活性降低。②过表达ASS1后,TUNEL阳性细胞数和AV/PI检测的细胞凋亡率均较对照组降低,伴随胰岛β细胞内Ki67和mTOR表达量升高。但胰岛β细胞EdU阳性率和CCK⁃8细胞增殖活力无明显变化。结论:ASS1过表达可能激活mTOR信号通路促进胰岛β细胞增殖;ASS1表达降低时,胰岛β细胞可通过AIF途径启动细胞凋亡。ASS1可能在胰岛β细胞的增殖和凋亡中发挥一定调控作用。

棉花精氨琥珀酸合成酶基因GhASS1的克隆及表达分析

【目的】克隆棉花精氨琥珀酸合成酶基因Gh ASS1的c DNA序列,并利用原核表达系统高效表达融合蛋白,检测融合蛋白的精氨琥珀酸合成酶活性及其表达对工程菌生长、耐盐能力及与游离L-瓜氨酸(L-Cit)和L-精氨酸(L-Arg)含量的影响,为解析该基因的功能及作用机制奠定基础。【方法】以拟南芥推断的精氨琥珀酸合成酶c DNA序列作为探针,利用电子克隆和RT-PCR技术,从棉花幼叶中获得c DNA片段,T/A克隆测序后得其序列信息,利用生物信息学软件分析其DNA结构、蛋白质结构、功能域和同源性,并构建系统进化树。利用q RT-PCR检测其在盐胁迫下的表达模式;将Gh ASS1的开放阅读框连接到原核表达载体p Cold-TF上,构建融合表达载体p Cold-Gh ASS1,转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)plys S中进行IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE法测定表达产物分子量,焦磷酸荧光法测定酶活性和比活力,HPLC法测定工程菌中L-Cit和L-Arg的含量,对比不同温度和不同Na Cl浓度下工程菌与对照菌的生长速度及其体内L-Cit、L-Arg含量及L-Arg/L-Cit。【结果】棉花Gh ASS1存在于D基因组的第1染色体上,由10个外显子和9个内含子构成,其c DNA全长序列共1 584 bp,其中5′非翻译区22 bp,开放阅读框1 485 bp,3′端非翻译区77 bp,编码产物由494个氨基酸组成,推断分子量为54 k D,等电点6.74;序列比对分析表明Gh ASS1与大肠杆菌、酵母和拟南芥中同源蛋白序列一致性分别为21.81%、41.1%和78.5%,且具有典型的精氨琥珀酸合成酶结构模序;系统进化分析显示Gh ASS1与番茄、马铃薯和烟草中同源蛋白亲缘关系最近,而与云杉、卷柏中同源蛋白亲缘关系最远;盐胁迫可上调叶片中Gh ASS1的表达,1 d时达到峰值,随后逐渐下降,推测Gh ASS1参与棉花对盐胁迫的早期响应。表达载体p Cold-Gh ASS1在工程菌中表达的融合蛋白分子量约108 k D,与预期相符,在体外具有精氨琥珀酸合成酶活性;与对照菌相比,p Cold-Gh ASS1工程菌中游离L-Cit含量下降,L-Arg含量上升,且在生长周期中较快进入对数生长期;在含高浓度Na Cl的培养基中p Cold-Gh ASS1工程菌表现出更强的生长活力和较高的L-Arg/L-Cit值,显示了其具有较强的L-Cit向L-Arg的代谢流。【结论】从棉花中克隆了植物精氨琥珀酸合成酶基因c DNA序列Gh ASS1,推测其在植物体内可参与植物的生长和耐盐能力的调控。

病毒诱导的精氨琥珀酸合成酶基因沉默对棉花氮代谢的影响

以棉花为研究对象,利用转录后基因沉默技术(VIGS)将棉花精氨琥珀酸合成酶(GhASS1)基因沉默,研究沉默后植物的氨基酸、多胺、一氧化氮(NO)等含氮化合物的代谢变化。结果表明:盐胁迫可以诱导棉花精氨琥珀酸合成酶(GhASS1)瞬时上调表达,GhASS1沉默严重影响氨基酸的合成,除天门冬氨酰(Ans)外,其他蛋白质组成型氨基酸质量分数显著降低,NO质量摩尔浓度和多胺(PAs)质量分数下降,棉花植株生长发育迟缓。GhASS1沉默对棉花精氨酸脱羧酶基因(GhADC)、棉花鸟氨酸脱羧酶基因(GhODC)表现出强烈的抑制作用,进而影响植物多胺的代谢和耐盐能力。高浓度盐环境下,沉默体系精氨酸(Arg)和NO质量摩尔浓度上升,GhARG1表达上调。GhASS1沉默对于植物是致命的,GhASS1是尿素循环和氨基酸代谢的关键环节,GhASS1沉默使GhARG1、GhADC和GhODC表达下调,严重影响整个氨基酸代谢,NO质量摩尔浓度,腐胺(Put)和精胺(Spm)质量分数显著降低,N代谢受阻,植株发育不良,生长迟滞,棉花中存在Arg-NO通路。

脐血单个核细胞甲基丙二酸单酰CoA变位酶基因和精氨酸琥珀酸合成酶基因基因突变与新生儿遗传性代谢病易感性的关系

目的 探讨脐血单个核细胞甲基丙二酸单酰CoA变位酶基因(MUT)、精氨酸琥珀酸合成酶基因(ASS1)基因突变与新生儿遗传性代谢病易感性的关系。方法 选取2015年5月-2020年6月在宁夏回族自治区妇幼保健院妇产科分娩的16 743例新生儿为研究对象,所有研究对象均采集脐带血行单个核细胞MUT、ASS1基因检测,且行遗传性代谢病筛查,根据筛查、确诊结果将所有新生儿分为遗传性代谢病组(疾病组)和无遗传性代谢病组(对照组)。比较两组研究对象MUT、ASS1基因突变情况,并采用logistic回归分析法分析脐血单个核细胞MUT、ASS1基因突变与新生儿遗传性代谢病易感性的关系。结果 16 743例新生儿中共检测出28例伴有MUT基因突变,24例伴有ASS1基因突变;16 743例新生儿最终确诊为45例发生遗传性代谢病,发生率为0.27%,其中有22例伴有MUT基因突变,有17例伴有ASS1基因突变。疾病组分娩周期(早产、过期产及足月产)、出生体质量(低出生体质量、巨大儿及正常体质量)占比与对照组比较,差异均无统计学意义(均P>0.05),疾病组MUT基因突变、ASS1基因突变及有家族史占比均明显高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,MUT基因突变、ASS1基因突变及家族史均是新生儿遗传性代谢病易感性的风险因素(Wald χ^(2)=26.460、21.221及14.632,OR=3.889、3.501及2.986,均P<0.05)。结论 脐血单个核细胞MUT基因突变和ASS1基因突变均可增加新生儿遗传性代谢病发病风险,临床中可在孕期通过检测MUT、ASS1基因情况而加强产前筛查,以减少缺陷患儿的出生。

精氨琥珀酸裂解酶及合成酶在人胃癌组织中表达的意义

目的探讨精氨琥珀酸裂解酶(ASL)及精氨琥珀酸合成酶(ASS)mRNA在人胃癌组织中的表达。方法收集胃癌组织15例及相应癌旁正常组织12例,采用RT-PCR方法分别检测其中ASL及ASSmRNA的表达,了解胃癌组织与癌旁正常组织中可能存在的ASS及ASL表达差异。结果胃癌组织中ASSmRNA的表达低于正常组织,具有统计学差异(P<0.05);但ASL的表达与正常组织相比无显著性差异。结论胃癌组织中ASSmRNA表达水平下降,提示了精氨酸耗竭原理用于胃癌治疗的可行性。

沉默精氨酸琥珀酸合成酶对SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨shRNA靶向沉默精氨酸琥珀酸合成酶(ASS1)基因后对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响。方法:应用RT-PCR及Western blot检测5种肝癌细胞系中ASS1的表达情况;将shRNA-ASS1转染入SMMC-7721细胞(shRNA-ASS1组),同时设空白对照组和阴性对照组,观察转染后细胞的生长变化,运用Western blot鉴定其对ASS1基因的沉默效果;采用CCK-8法检测各组转染3 d后的细胞增殖情况;流式细胞术检测各组转染24 h后细胞凋亡的情况。结果:ASS1 mRNA和蛋白在Changliver、SMMC-7721、QGY-7703、HepG2和Hep G3B细胞中的表达差异有统计学意义(F_(mRNA)=1 129.140,F_(蛋白)=1 114.240,P均<0.001),ASS1在SMMC-7721和Hep G3B肝癌细胞系中呈高表达。CCK-8实验显示,与阴性对照组及空白对照组相比,shRNA-ASS1组细胞增殖率降低(F=7.176,P=0.007)。细胞凋亡实验显示,shRNA-ASS1组细胞凋亡率高于阴性对照组和空白对照组(F=88.120,P<0.001)。结论:沉默ASS1基因可抑制SMMC-7721细胞增殖,诱导细胞凋亡。

精氨酸琥珀酸合成酶作为乳腺癌个体化治疗新靶点的研究

氨基酸代谢在细胞生理学中有着举足轻重的作用,因为它参与了大量的细胞代谢和信号通路。精氨酸琥珀酸合成酶(ASS1)是尿素循环中的关键酶,在ASS1缺乏或表达较低的乳腺癌细胞中精氨酸缺乏,减少或降低精氨酸体内含量可以有效抑制肿瘤进展。实验结果表明,聚乙二醇化精氨酸脱亚胺酶(ADIPEG20)促进精氨酸转变为瓜氨酸,从而降低精氨酸含量;同时mTOR抑制剂抑制CAD(氨甲酰磷酸合成酶2、天门冬氨酸转移酶和氨甲酰天冬氨酸脱水酶复合酶)的磷酸化,与ASS1竞争底物天冬氨酸,达到抑制乳腺癌细胞增殖生长的效果。提示ASS1可能成为抗癌新靶点。

蛋白精氨酸甲基转移酶5表达与非M3型急性髓系白血病疗效关系的临床观察

目的讨论蛋白精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)与急性髓系白血病(AML)患者低甲基化药物(HMA)治疗敏感性的关系。方法通过GEPIA和TCGA数据库分析AML患者PRMT5表达及其与AML患者生存的关系。收集2020年1月至2023年10月收治的81例AML患者,包括50例非M3型患者和31例M3型患者。采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测骨髓样本中PRMT5表达。采用全基因组重亚硫酸盐测序(WGBS)检测基因组甲基化水平。结果TCGA数据库中AML患者PRMT5表达显著高于健康对照人群(P<0.01);PRMT5高表达组患者总生存期更短(P=0.036)。进一步分析TCGA数据库,巩固期给予HMA后,PRMT5表达对无事件生存率(EFS)和OS的有明显影响(P<0.010)。81例新诊断AML患者PRMT5表达显著高于23例健康志愿者[3.25(1.69,5.16)vs.1.00(0.72,1.35),P<0.001]。非M3型AML患者PRMT5表达高于M3型患者[4.51(2.05,7.25)vs.2.01(1.53,3.35),(P<0.001)]。在非M3型AML患者中,PRMT5高表达与BM原始细胞百分率以及不良基因突变和高危患者比例更高有关(P<0.05)。与未接受HMA治疗患者比较,接受HMA治疗的PRMT5高表达非M3型AML患者CR率显著增加(P=0.003)。通过WGBS测序,PRMT5高表达组CpG岛甲基化比率以及转录起始位点、转录终止位点CpG岛甲基化比率高于PRMT5低表达组(P<0.001)。结论在非M3型AML患者中PRMT5高表达,PRMT5高表达预示着更多非M3型AML患者从HMA治疗中获益。PRMT5可能是评估肿瘤甲基化富集和预测疾病预后的潜在生物标志物。

精氨酸代琥珀酸合成酶1在肝细胞癌进展中的作用和潜在价值

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)占原发性肝癌的75%~85%,是一种起病隐匿、发展迅速、易复发、转移及耐药的恶性肿瘤。因此,探究HCC的复发、转移及有效的作用靶点是当前治疗的重中之重。肿瘤细胞进行代谢重编程使其在自身能量代谢、氨基酸代谢等方面具备了独特的特点。研究表明,尿素循环中的关键酶精氨酸代琥珀酸合成酶1(argininosuccinate synthase 1,ASS1)与HCC的侵袭和转移密切相关。本文结合该领域的最新研究进展探讨了ASS1的生化结构、功能调节及其在HCC进展中的作用和潜在价值,以期为HCC的精准治疗提供新的特异性分子治疗靶点,为新的治疗策略提供理论依据。

精氨酰琥珀酸尿症家系ASL基因内含子突变

目的对1个MS/MS检测表现为瓜氨酸(Cit)增高的遗传代谢性疾病家系进行基因检测和基因的突变分析。方法采集家系成员外周血,提取基因组DNA,用全外显子测序方法进行基因诊断。对未见报道的新突变构建pcDNA3.1(+)真核表达载体,并在体外培养细胞中用Mini-gene工具验证该突变的致病性。结果先证者精氨酰琥珀酸尿症临床诊断明确,在ASL基因上检测到2个致病突变c.281G>T(P.R94L丨p.Arg94Leu)和c.208-15 T>A,该2个突变均未见报道;Mini-gene体外表达证实c.208-15 T>A可造成剪切异常,导致2号内含子13 bp碱基滞留。结论在1个精氨酰琥珀酸尿症家系中发现了ASL基因2个新的致病突变c.208-15 T>A和c.281G>T,丰富了ASL基因的突变谱;Mini-gene对内含子突变研究是一种简单有效的工具。

4063例叶酸代谢关键酶基因多态性特点及其与同型半胱氨酸的相关性

目的探讨备孕夫妇叶酸代谢酶基因多态性分布特征及其与同型半胱氨酸(Hcy)的关系,为指导个体化叶酸增补方案提供理论依据。方法随机抽取2020年7月至2022年6月符合生育政策并计划怀孕的夫妇基本资料及外周血,最终4063例纳入研究,采集其外周血测定5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)rs1801133、rs1801131位点和甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)rs1801394位点的基因型及血清Hcy水平,进一步展开分析。结果本研究受检人群叶酸代谢酶基因多态性分布符合HW遗传平衡,其中MTHFR rs1801133和rs1801131位点存在连锁不平衡(D’=0.98,r2=0.14)。MTHFR基因rs1801133位点的CC、CT及TT基因型频率分别为42.31%、44.47%和13.22%;MTHFR基因rs1801131位点的AA、AC及CC基因型频率分别为62.15%、33.20%和4.65%;MTRR基因rs1801394的AA、AG及GG基因型频率分别为55.06%、38.59%和6.35%。不同叶酸代谢酶基因型/叶酸代谢障碍风险人群之间Hcy水平差异无统计学意义(P>0.05);男性在相同叶酸代谢酶基因型/叶酸代谢障碍风险下Hcy水平更高(P<0.001);35岁以下MTHFR rs1801133位点CC基因型、rs1801131位点AC和CC基因型的人群Hcy水平更高(P<0.05)。结论桃源县叶酸代谢酶基因多态性分布具有自身特点,未来需要结合遗传因素和环境因素格外关注备孕期男性及非高龄人群(<35岁)并进行叶酸补充指导和监测,这可能成为进一步降低新生儿出生缺陷的重要途径。

精氨酰琥珀酸尿症导致新生儿死亡1例报告

目的报道1例早发型精氨酰琥珀酸尿症病例。方法女性患儿,于出生第2天发病,入院后经临床及实验室检查、基因检测获得诊断。结果患儿血氨显著增高,肝功能异常,伴代谢性酸中毒,血钾、血钙降低。血液瓜氨酸显著增高(1 098.12μmol/L)、精氨酸降低,尿乳清酸、尿嘧啶、精氨酰琥珀酸显著增高。经精氨酸支持、低蛋白饮食治疗无效,病情进行性加重,于生后23 d死亡。基因分析证实精氨酰琥珀酸裂解酶ASL基因存在c.544C>T(p.R182X)和c.706C>T(p.R236W)复合杂合突变,父母各携带1个杂合突变。结论此例为国内首次报道的早发型精氨酰琥珀酸尿症,死亡后获得确诊。精氨酰琥珀酸尿症是严重的遗传代谢疾病,临床诊断困难,生化特点为血瓜氨酸及尿精氨酰琥珀酸显著增高,ASL基因检测是诊断的关键。

大别山野生油茶中茶氨酸检测与茶氨酸合成酶基因克隆

茶氨酸是茶树叶片中最丰富的游离氨基酸,具有重要的生理药理功能,但迄今仅在蘑菇、蕈和一些山茶科(属)植物中检测到茶氨酸。茶氨酸因有一种独特的风味特色"umami鲜爽味"而被人类营养学广泛研究,并发现合成茶氨酸的植物不仅在植物分类上具有积极意义,而且对于植物资源的有效发掘有巨大经济价值;同时还可以间接去研究茶树中茶氨酸的代谢机理以及茶氨酸合成酶的分离纯化和TS基因的克隆表达。该文运用HPLC、LC-TOF/MS对大别山地区野生幼年与成年油茶根、叶中茶氨酸进行检测,并结合分子生物学手段对油茶中茶氨酸合成酶(theanine synthetase,TS)基因进行克隆与生物信息学分析。结果表明:在幼年的油茶根中检测到茶氨酸,含量为0.08mg·g-1(鲜重),而在幼年的油茶叶片和成年油茶根、叶中均未检测到茶氨酸;在幼年油茶根中克隆出一条长为1 071bp油茶TS基因开放阅读框,其基因序列与茶树谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS,AB117934)基因和TS(DD410896)序列的同源性达到98%,氨基酸序列与茶树中GS(AB117934)和TS(DD410896)的相似性高达99%。经生物信息学分析,该序列编码的TS蛋白具有20个磷酸化位点,不存在信号肽序列与跨膜结构,含有卷曲螺旋结构的亲水性细胞质蛋白。该研究将为油茶新经济价值的发掘,为茶氨酸在油茶中合成代谢途径的研究提供一定的理论基础,同时也为进一步研究茶氨酸在茶树中代谢机理提供了新的研究思路。

冠心病并高同型半胱氨酸血症患者甲硫氨酸合成酶基因突变的研究

目的:研究中国人冠心病并高同型半胱氨酸血症患者甲硫氨酸合成酶(MS)基因突变的情况。方法:应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)以及DNA测序技术,检测60例患者MS基因中与结构和功能密切相关的10个外显子的点突变情况。结果:除已知的31外显子区3个SNP位点比较常见外,还发现了1个新的点突变,3 869位为A/G杂合子(A→G的错义突变可使1 195位氨基酸由异亮氨酸变为缬氨酸),此患者的血浆同型半胱氨酸血水平明显高于正常,为30.93μmol.L-1。此外发现32内含子1个新的G/T多态性。结论:MS某种基因突变可能是影响MS酶功能及高同型半胱氨酸血症的原因之一。

冠心病和深静脉血栓患者蛋氨酸合成酶基因A2756G多态性检测

目的检测冠心病(CHD)及深静脉血栓(DVT)形成患者蛋氨酸合成酶(MS)基因A2756G的多态性。方法运用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)对103例DVT患者、208例CHD患者和250例健康对照进行MS基因A2756G多态性分析。结果DVT组A/G+G/G型频率为10.7%,低于对照组的19.6%(χ2=4.114,P<0.05),但2组等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论A/G+G/G型可能对静脉血栓的形成具有保护性作用,该型的分布存在种族和地域差异。MS基因A2756G多态可能不是河南汉族人群CHD发生的遗传危险因素。

水稻中与盐碱适应性相关的VB_(12)不依赖型蛋氨酸合成酶基因的克隆和表达(英文)

VB12 不依赖型蛋氨酸合成酶广泛存在于高等植物中 ,它可催化高半光氨酸甲基化而生成蛋氨酸 ,为生物体内的甲基化反应和多胺、乙烯的合成提供中间产物。以水稻品种日本晴为材料 ,在碱性条件下利用cDNA RAPD法 ,在水稻中首次报道了VB12 不依赖型蛋氨酸合成酶基因的克隆和表达。结果表明 ,VB12 不依赖型蛋氨酸合成酶cDNA基因全长为 2 74 0bp ,在水稻基因组中以单或低拷贝存在 ,编码 76 5个氨基酸 ,与Mesembryanthemumcystallinum(U84 889)和Cathararanthusroseus (X83499)的同源性分别为 92 %和 83%。水稻在受到碳酸钠胁迫 12h和 2 4h后 ,其转录较氯化钠明显增强 ,而到 4 8h后下降 ,暗示它可能与水稻的盐碱适应性有关。

缺血性脑血管病患者蛋氨酸合成酶基因A2756G多态性检测

目的检测缺血性脑血管病患者蛋氨酸合成酶(MS)基因A2756G多态性。方法运用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)技术对512例缺血性脑血管病患者及500例健康对照者进行MS基因多态性检测。结果缺血性脑血管病患者组MSA2756GA/A、A/G、G/G基因型频率分别为88.9%、10.7%和0.4%,A和G等位基因频率分别为94.2%和5.8%。对照组A/A、A/G、G/G基因型频率分别为84.6%、15.0%和0.4%,A和G等位基因频率分别为92.1%和7.9%。2组基因型及等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论MS基因A2756G多态可能不足以构成河南汉族人群缺血性脑血管病发病中的一个独立的遗传危险因子。

水稻谷氨酰半胱氨酸合成酶基因的结构和表达分析

利用该实验室T-DNA标签的编号为L395的水稻突变体,克隆了一个编码水稻谷胱苷肽(GSH)合成途径中关键酶即谷氨酰半胱氨酸合成酶(GCS)的基因,将其命名为OsGCS(Genbank accession No.AJ508915)。该基因位于水稻第五染色体上,OsGCS基因含有15个外显子和14个内含子,编码492个氨基酸。该基因与拟南芥的GCS基因相比较,编码区域同源性较高,而启动子区域的序列没有显著的相似性。通过RT-PCR的方法确定OsGCS基因的转录起始位点可能位于翻译起始位点(ATG)上游211 bp处。在L395突变体中,T-DNA是单拷贝形式插入在OsGCS基因的第二内含子和外显子连接处,并且造成了3个碱基的缺失.在重金属耐受性、OsGCS基因表达以及体内GSH含量方面突变体L395和对照中花11之间没有明显的差别。

表达磷脂酰丝氨酸合成酶基因工程菌发酵条件的研究

研究表达磷脂酰丝氨酸合成酶基因工程菌的发酵条件。利用250mL三角瓶发酵,对携带磷脂酰丝氨酸合成酶基因重组质粒的工程菌进行诱导表达,研究培养基的pH值、装液量、转速、诱导时菌体浓度、诱导剂浓度、诱导时间和温度对磷脂酰丝氨酸合成酶酶活的影响。确定工程菌的最佳发酵条件为:培养基pH值为7.5,装液量为40mL,转速为200r/min,诱导时菌体浓度为A600≈0.4,诱导剂蔗糖的终浓度为60mmol/L,诱导时间为27h,诱导温度为37℃。在最佳发酵条件下,酶活可达2.56U/mL,是优化前的1.72倍,为中试放大提供了理论依据。

胱硫醚β-合成酶基因多态性及血浆同型半胱氨酸与新疆哈萨克族原发性高血压的关系

目的：探讨胱硫醚β-合成酶（Cystathione beta synthase，CBS）基因 T833C、G919A、844ins68多态性及血浆同型半胱氨酸（Homocysteine，Hcy）水平与新疆哈萨克族原发性高血压（Essential Hypertension，EH）的关系。方法选择新疆哈萨克族 EH 患者118例（EH 组）和住院体检者108例（对照组），使用扩增阻滞实变体系法检测 CBS T833C、G919A、844ins68多态性，并采用酶标免疫吸附检测法检测血浆 Hcy 水平，化学发光法检测血浆叶酸、维生素 B12（VitB12）水平。结果EH 组血浆 Hcy 水平均高于对照组（P ＜0．05）。CBS T833C、G919A 纯合型、杂合型血浆 Hcy 水平高于野生型，且差异有统计学意义（P ＜0．05）。EH 组 CBS 基因第833位点 C 等位基因频率、第919位点 A 等位基因频率高于对照组，差异有统计学意义（CBS 833位点 C 等位基因：χ^2＝5．917，P ＝0．015；CBS 919位点 A 等位基因：χ^2＝5．917，P ＝0．020）。通过 Logistic 多元回归去除混杂因素后显示：年龄（OR＝1．120，P ＝0．000，95％ CI 1．077～1．165）、肥胖（OR ＝1．086，P ＝0．040，95％ CI 1．004～1．174）、高同型半胱氨酸血症（OR ＝1．099，P ＝0．039，95％ CI 1．005～1．203）是新疆哈萨克族 EH 的独立危险因素。结论血浆 Hcy水平与新疆哈萨克族 EH 相关。CBS T833C、G919A、844ins68基因多态性可能与新疆哈萨克族 EH 无关。