激肽原1、精氨酸酶-1在儿童川崎病急性期外周血中的表达及临床意义

目的:检测急性期川崎病(KD)患儿外周血中激肽原1(KNG1)、精氨酸酶-1(Arg-1)的表达并探讨二者的临床意义。方法:选取深圳市儿童医院2020年12月1日至2022年12月31日确诊为川崎病的117例患儿进行研究。根据是否合并冠状动脉病变(CAL)将KD患儿分为CAL组(n=53)和非冠状动脉病变组(NCAL)组(n=64)。酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测急性期KD患儿外周血KNG1及Arg-1水平。应用二元Logistic回归分析和受试者工作特征(ROC)曲线分析急性期KD患儿合并CAL的危险因素及KNG1、Arg-1对其的预测价值。结果:CAL组的KNG1及Arg-1水平均高于NCAL组(P<0.01)。多因素Logistic回归分析提示KNG1、Arg-1和中性粒细胞百分比(N%)是KD并发CAL的独立危险因素。ROC分析显示,KNG1对CAL的最佳预测值为1.536 ng/mL,曲线下面积(AUC)为0.823(95%CI 0.750~0.896),而Arg-1≥7.028 ng/mL可用于预测CAL的发生,AUC为0.862(95%CI 0.792~0.931),N%对KD并发CAL的最佳预测值则为54.7%,AUC为0.610(95%CI 0.507~0.712)。此外还发现与单项指标相比,KNG1联合Arg-1及N%对急性期KD患儿并发CAL的预测价值最大(AUC=0.929,95%CI 0.881~0.977),灵敏度和特异度分别为84.9%和92.2%。结论:急性期KD患儿血清中高表达的KNG1和Arg-1均是发生CAL的独立危险因素,可能参与KD并发CAL的发生和发展。

脂多糖通过上调CYP1A1环氧化酶活性抑制巨噬细胞精氨酸酶-1的表达

目的探索细胞色素P4501A1(cytochrome P4501A1,CYP1A1)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导时巨噬细胞中精氨酸酶-1(Arginase-1,Arg-1)的调控作用及机制。方法使用LPS刺激小鼠单核巨噬细胞细胞系RAW264.7(RAW),分为0 h组、12 h组、24 h组(每组设3复孔,n=3),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及蛋白免疫印迹实验(Western blot)检测CYP1A1、Arg-1 mRNA及蛋白表达;构建阴性对照和高表达、敲除CYP1A1的RAW(NC/RAW、CYP1A1/RAW、CYP1A1 KO/RAW)细胞系以及突变CYP1A1羟化酶活性的RAW(CYP1A1m/RAW)细胞系,分为NC/RAW+LPS组、CYP1A1 KO/RAW+LPS组、CYP1A1/RAW+LPS组、CYP1A1m/RAW+LPS组,使用LPS刺激后检测Arg-1 mRNA、蛋白表达及信号转导和转录活化因子6(signal transducer and activators of transcription-6,STAT6)活化水平;使用STAT6抑制剂AS1517499作用CYP1A1敲除RAW细胞,设立NC/RAW+PBS+LPS组、NC/RAW+AS1517499+LPS组、CYP1A1 KO/RAW+PBS+LPS组、CYP1A1 KO/RAW+AS1517499+LPS组,检测Arg-1 mRNA、蛋白表达;使用CYP1A1环氧化酶活性抑制剂甲二氢愈创木酸(Nordihydroguaiaretic Acid,NDGA)及12(S)-羟基二十碳四烯酸[12(S)-HETE]作用RAW细胞,设立RAW+PBS+LPS组、RAW+12(S)-HETE+LPS组、RAW+NDGA+LPS组,检测Arg-1 mRNA、蛋白表达及STAT6活化水平。结果LPS可诱导RAW中的CYP1A1及Arg-1呈错峰高表达(P<0.05);CYP1A1高表达可抑制LPS诱导时RAW中Arg-1表达(P<0.05)及STAT6活化,敲除则可增强上述效应(P<0.05),而STAT6抑制剂AS1517499可消除CYP1A1敲除带来的增强效应(P<0.05);突变CYP1A1的羟化酶活性或使用其代谢产物12(S)-HETE刺激均不影响Arg-1表达(P>0.05),而使用CYP1A1环氧化酶抑制剂NDGA可增强Arg-1表达(P<0.05)及STAT6活化。结论CYP1A1可通过抑制LPS诱导时巨噬细胞中STAT6活化水平以降低Arg-1表达,但此效应与CYP1A1羟化酶活性及其致炎产物12(S)-HETE无关,而可能与CYP1A1环氧化酶活性有关。

精氨酸酶-1在肝细胞癌中的低表达及其临床意义

背景与目的:精氨酸酶-1(arginase-1,Arg-1)是肝脏鸟氨酸循环的催化酶,研究表明Arg-1表达改变显著影响细胞代谢和生长状态。本研究旨在探讨Arg-1在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达,分析Arg-1与HCC临床病理指标之间的相关性。方法:采用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)、蛋白印迹法(Western blot)检测31例HCC及癌旁肝组织、12例正常肝组织中Arg-1 mRNA及蛋白表达水平。采用组织芯片结合免疫组织化学法检测Arg-1在158例HCC及癌旁组织中的表达,结合临床病理资料统计分析。结果:Arg-1 mRNA和蛋白表达水平在HCC组织中明显低于癌旁和正常肝组织(F=57.83、160.89,P均<0.01),且与HCC的分化程度相关(F=10.41、30.03,P均<0.01)。Arg-1蛋白阳性定位于细胞质及部分细胞核;Arg-1在HCC组织、癌旁组织、正常肝组织中阳性表达率分别为88%、98.7%和100%,HCC组织中Arg-1蛋白表达明显低于癌旁(χ2=14.7416,P<0.01)及正常肝组织(χ2=4.1415,P<0.05)。Arg-1表达与HCC分化程度、血管侵犯、术后复发有关(χ2=22.8459、10.2639、10.6368,P均<0.05),而与HCC患者年龄、性别、HBsAg感染、血清AFP水平、有无肝硬化、肿瘤直径、肿瘤个数均无关。结论:HCC中Arg-1表达降低,并与HCC分化、转移及复发呈显著相关,提示Arg-1对HCC发生、进展发挥负性调控作用,检测HCC中Arg-1可作为评估患者预后的参考指标。

胃癌患者癌组织中精氨酸酶-1的表达及预后价值

目的探讨胃癌患者癌组织中精氨酸酶-1(Arg-1)的表达及预后价值。方法通过免疫组织化学检测92例胃癌患者癌组织中Arg-1的表达,采用卡方检验比较Arg-1表达水平与临床病理参数的关系,Kaplan-Meier曲线和Log-rank检验比较高、低Arg-1表达的胃癌患者预后差异,Cox比例风险模型分析影响胃癌预后的危险因素。结果92例胃癌组织样本中71例(77.2%)Arg-1呈高表达,21例(22.8%)呈Arg-1低表达。癌组织中Arg-1高表达与患者TNM分期、分化程度、局部浸润深度、Lauren分型、淋巴结转移和远处转移相关(均P<0.05)。Arg-1高表达组1年、3年、5年无瘤生存率为73.1%、48.3%及28.0%,Arg-1低表达组1年、3年、5年无瘤生存率为82.4%、61.2%及44.0%,Arg-1高表达组无瘤生存率低于Arg-1低表达组(均P<0.01)。Arg-1高表达组1年、3年、5年总生存率为78.3%、55.3%及35.1%,Arg-1低表达组1年、3年、5年总生存率为85.2%、70.2%及46.0%,Arg-1高表达组总生存率低于Arg-1低表达组(均P<0.01)。影响胃癌患者无瘤生存率的单因素为TNMⅢ~Ⅳ期、局部浸润深度、淋巴结转移、远处转移和Arg-1高表达(均P<0.05),多因素分析显示Arg-1高表达、TNMⅢ~Ⅳ期、远处转移及淋巴结转移是无瘤生存率的独立危险因子。TNMⅢ~Ⅳ期、局部浸润深度、淋巴结转移、远处转移和Arg-1高表达为影响总生存率的单因素(均P<0.05),多因素分析显示Arg-1高表达、TNMⅢ~Ⅳ期、淋巴结转移和远处转移是影响胃癌患者总生存率的独立危险因素。结论Arg-1高表达可作为胃癌患者术后预后不良的指标。

血浆精氨酸酶-1与肝细胞癌患者经导管动脉化疗栓塞抵抗及预后的关系

目的观察肝细胞癌患者经导管动脉化疗栓塞(transcatheter arterial chemoembolization,TACE)治疗前血浆精氨酸酶-1(arginase-1,Arg-1)水平,探讨其与患者TACE抵抗及预后的关系。方法112例不可切除肝细胞癌患者均行TACE治疗,首次TACE治疗前采用ELISA法检测血浆Arg-1水平,记录巴塞罗那分期、Child-Pugh分级、肿瘤数量、肿瘤最大直径、甲胎蛋白、红细胞计数、血小板计数等指标。112例患者根据随访1年内是否出现TACE抵抗分为抵抗组67例和无抵抗组45例,比较2组巴塞罗那分期、肿瘤数量等临床资料。采用多因素logistic回归分析肝细胞癌患者TACE治疗后1年内发生TACE抵抗的影响因素;采用限制性立方样条模型分析血浆Arg-1与肝细胞癌患者TACE治疗后1年内发生TACE抵抗风险的关系;绘制ROC曲线,评估血浆Arg-1预测肝细胞癌患者TACE治疗后1年内发生TACE抵抗的效能;以血浆Arg-1最佳截断值54.985μg/L为界,将112例患者分为Arg-1高表达组(Arg-1>54.985μg/L)47例和Arg-1低表达组(Arg-1≤54.985μg/L)65例,绘制Kaplan-Meier生存曲线,比较Arg-1高、低表达组TACE治疗后1年内无TACE抵抗生存率。结果112例患者随访截至2022年3月,失访19例,发生TACE抵抗93例(其中死亡15例)。抵抗组巴塞罗那分期B期(56.7%)、肿瘤数量≥3个(35.8%)比率均高于无抵抗组(22.2%、6.7%)(χ^(2)=13.079,P<0.001;χ^(2)=12.506,P<0.001),肿瘤最大直径[(7.25±3.91)cm]长于无抵抗组[(5.37±2.36)cm](t=2.876,P=0.005),血小板计数[(124.18±40.49)×10^(9)/L]、血浆Arg-1水平[(41.38±29.24)μg/L]均低于无抵抗组[(155.33±39.27)×10^(9)/L、(55.25±25.97)μg/L](t=-4.041,P<0.001;t=-2.571,P=0.011),Child-Pugh分级、肿瘤部位、TACE次数、甲胎蛋白≥400μg/L比率及红细胞计数、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、白蛋白水平与无抵抗组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。巴塞罗那分期B期(OR=0.342,95%CI:0.135~0.867,P=0.024)、血小板计数(OR=1.014,95%CI:1.003~1.025,P=0.014)、血浆Arg-1(OR=1.016,95%CI:1.000~1.031,P=0.046)是肝细胞癌患者TACE治疗后1年内发生TACE抵抗的影响因素。血浆Arg-1与肝细胞癌患者TACE治疗后1年内发生TACE抵抗风险呈线性关系,随血浆Arg-1水平增高,发生TACE抵抗的风险逐渐下降。血浆Arg-1以54.985μg/L为最佳截断值,预测肝细胞癌患者TACE治疗后1年内发生TACE抵抗的AUC为0.632(95%CI:0.528~0.735,P=0.018),灵敏度为57.8%,特异度为68.7%。Arg-1高表达组TACE治疗后1年内无TACE抵抗生存率(61.9%)高于Arg-1低表达组(31.7%)(χ^(2)=14.852,P<0.001)。结论巴塞罗那分期B期、血小板计数、血浆Arg-1是肝细胞癌患者TACE治疗后1年内发生TACE抵抗的影响因素;低血浆Arg-1水平提示肝细胞癌患者TACE抵抗风险增高,预后不良。

原发性肝癌T淋巴细胞浸润和精氨酸酶-1表达的相关性研究

目的观察原发性肝细胞癌(HCC)和癌旁组织中T淋巴细胞浸润和及其和精氨酸酶-1(Arg-1)之间的关系。方法利用肝癌组织芯片和免疫组化方法,检测原发性肝癌和癌旁组织中CD3、CD4、CD8和Arg-1蛋白的表达。纳入分析的共41例HCC、36例癌旁组织。结果 CD3、CD4、CD8和Arg-1在肝癌组织中的表达明显低于癌旁组织,癌旁组织中CD3的表达和淋巴结转移及血HBsAg阳性相关,未发现Arg-1的表达和T细胞标志物之间有明显的相关性。结论 HCC中T细胞浸润和Arg-1表达减少,癌旁组织中T细胞浸润和Arg-1表达增多可能和肝脏局部炎症反应和抗肿瘤免疫功能下调有关。

肝细胞癌SLeX和Arg-1表达的临床病理研究

目的探讨唾液酸化Lewis X(SLeX)和精氨酸酶-1(Arg-1)表达与肝细胞癌(HCC)临床病理特征及预后的关系。方法120例HCC手术切除标本及30例癌旁肝组织,应用EliVisionTMplus免疫组织化学染色二步法检测SLeX和Arg-1在HCC癌组织及癌旁肝组织中的表达,分析SLeX和Arg-1与HCC患者性别、年龄、肉眼类型、瘤体大小、分化等级、转移及5年生存期等临床病理特征的相关性。结果HCC癌组织SLeX和Arg-1阳性率分别为44.2%(53/120)和75.8%(91/120),癌旁肝组织分别为3.3%(1/30)和100.0%(30/30),差异有统计学意义(均P<0.05)。SLeX和Arg-1表达与性别、年龄、肉眼类型、瘤体大小无关(均P>0.05)。在低分化、有转移和5年内死亡患者中SLeX高表达,Arg-1低表达,呈负相关性(r=-0.31)。结论SLeX和Arg-1与HCC发生发展显著相关,SLeX表达上调和(或)Arg-1表达下调均预示HCC分化差、易转移、预后不良。

供肝自然杀伤细胞通过上调精氨酸酶-1表达减轻肝移植急性排斥反应

目的 探讨供体肝脏自然杀伤（NK）细胞减轻大鼠肝移植急性排斥反应的作用机制.方法 以Lewis大鼠为肝移植供体、BN大鼠为受体,采用改良“二袖套”法建立大鼠肝移植模型,并应用60Co射线照射清除供体免疫细胞以及经门静脉回输供肝NK细胞等技术,设立3个实验组：A：急性排斥组（Lewis-BN）,n=18;B：单纯60Co照射排斥组（Lewis-BN＋供体60Co照射）,n=18;C：60Co照射＋供肝NK门静脉回输排斥组（Lewis-BN＋供体60Co照射＋受体门静脉输注供肝NK细胞）,n=18.分别于术后第7天收集外周血清,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测转化生长因子-β1（TGF-β1）分泌水平,同时切取移植肝行病理学检查,Western blot法检测移植肝精氨酸酶-1（Arg-1）蛋白的表达.结果 与A组比较,B组移植肝组织急性排斥反应程度明显加重,外周血TGF-β1分泌水平[（28.00±6.08） μg/L比（11.00±0.57） μg/L）,P＜0.01]和移植肝组织Arg-1表达[（0.687±0.040）比（0.487 ±0.030）,P＜0.05]均降低;但是,经供肝NK细胞门静脉输注后的C组移植肝组织急性排斥反应程度较B组明显减轻,外周血TGF-β1分泌水平[（11.00±0.57）μg/L比（27.60±1.45） μg/L,P＜0.05]和移植肝组织Arg-1表达[（0.487±0.030）比（0.605±0.080）,P＜0.05]均升高.结论 供肝NK细胞可以减轻大鼠肝移植术后急性排斥反应,其机制可能与Arg-1蛋白的表达上调有关.

早期胃癌肿瘤浸润深度与癌组织PD-L1、Arg-1表达的关系

目的 探讨早期胃癌肿瘤浸润深度与癌组织程序性死亡配体-1(PD-L1)、精氨酸酶-1(Arg-1)表达的关系。方法 回顾性选取2020年1月至2022年1月在琼海市人民医院治疗的早期胃癌患者110例,采用免疫组织化学染色法检测胃癌组织和癌旁组织的PD-L1、Arg-1表达,内镜检查早期胃癌浸润深度情况,分析早期胃癌浸润深度的影响因素。结果 早期胃癌组织PD-L1和Arg-1阳性表达率分别为58.18%和76.36%,均明显高于癌旁组织(22.73%、30.91%),差异均有统计学意义(P<0.05)。合并溃疡、病变边缘有隆起、PD-L1阳性表达、Arg-1阳性表达组织黏膜下层深浸润比例分别为54.35%、51.16%、43.75%和39.29%,明显高于未合并溃疡、病变边缘无隆起、PD-L1阴性表达、Arg-1阴性表达组织(15.63%、19.40%、15.22%和7.69%),差异均有统计学意义(P<0.05)。肿瘤大小>1 cm、未分化型组织PD-L1阳性表达率分别为73.33%和97.67%,Arg-1阳性表达率分别为95.56%和93.02%,明显高于肿瘤大小≤1 cm(47.69%、63.08%)、分化型组织(32.84%、65.67%),差异均有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示合并溃疡、病变边缘隆起、PD-L1和Arg-1表达是黏膜下层深浸润的影响因素(OR=2.779,95%CI:1.540~5.013;OR=2.596,95%CI:1.667~4.043;OR=1.976,95%CI:1.378~2.834;OR=1.749,95%CI:1.321~2.315;P<0.05)。结论 早期胃癌肿瘤组织PD-L1、Arg-1表达上调,与肿瘤大小及组织分化有关,同时PD-L1、Arg-1表达是肿瘤浸润深度的影响因素。

Arginase-1联合Glypican-3在肝细胞肝癌和非肝脏来源肿瘤鉴别诊断中的意义

目的观察肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)、非肝脏来源肿瘤组织中精氨酸酶-1(Arginase-1,Arg-1)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(Glypican-3,GPC-3)的表达及在病理诊断和鉴别诊断中的作用。方法收集156例HCC、5例胆管细胞癌、20例肝脏转移癌和18例其他部位恶性肿瘤,应用免疫组化En Vision法检测两种蛋白的表达。结果 Arg-1在HCC及非肝脏来源肿瘤中的阳性率分别为93.6%(146/156)和0(0/43),在HCC中的阳性率随着肿瘤分化程度的降低而减少(r=-0.264,P=0.001);GPC-3在HCC及非肝脏来源肿瘤中的阳性率分别为90.4%(141/156)和14.0%(6/43),在HCC中的阳性率随着肿瘤分化程度的降低而增加(r=0.179,P=0.026)。Arg-1和GPC-3的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为93.6%、100%、100%、81.1%和90.4%、86.0%、96.0%、71.2%。结论 Arg-1是敏感和特异的肝细胞标志物,对鉴别肝脏源性和非肝脏源性肿瘤有显著优势;GPC-3是诊断HCC特异性较高的标志物,尤其在低分化HCC的鉴别诊断中更有优势;联合应用Arg-1和GPC-3,对于HCC与肝脏转移癌的诊断与鉴别诊断具有重要意义。

Arginase-1、Glypican-3、HepPar-1在肝细胞癌中的表达及意义

目的研究肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)、肝脏良性病变组织中精氨酸酶-1(arginase-1,Arg-1)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(glypican-3,GPC-3)、肝细胞抗原(Hep-1)的表达情况,探讨三种抗体及其他临床病理参数与肿瘤预后的相关性。方法回顾性分析156例HCC患者及146例肝脏良性病变患者的临床病理特征,免疫组织化学方法检测三种抗体的表达,并结合HCC患者随访资料行临床病理学参数与预后关系分析。结果 Arg-1、GPC-3、Hep-1在HCC及肝脏良性病变中的表达率分别为93.6%(146/156)、90.4%(141/156)、85.3%(133/156)和97.3%(142/146)、3.4%(5/146)、98.6%(144/146)。单因素分析显示肿瘤直径、肿瘤多发、脉管癌栓、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)及Arg-1是影响HCC患者术后总体生存率的预后因素;多因素COX回归分析结果显示,肿瘤直径与脉管瘤栓是影响HCC患者术后总体生存率的独立预后因素。结论联合应用Arg-1、GPC-3和Hep-1在HCC与肝脏良性结节性病变的鉴别诊断中具有重要意义。Arg-1可作为评估HCC患者预后的参考指标。

精氨酸酶1在原发性肝癌及肝转移癌鉴别中的作用

目的:探讨精氨酸酶-1(Arg-1)在原发性肝癌(PHC)和肝转移癌(HM)鉴别中的意义。方法:123例肝癌患者行超声引导下细针穿刺活检,标本制作成细胞块进行免疫组化染色,观察Arg-1表达情况。所有患者行手术切除后进行组织病理学诊断,结合细胞学、血清肿瘤标记物、临床及影像学随访结果进行最终判定。计算采用Arg-1鉴别PHC和HM的敏感度和特异性。结果:123例患者中PHC 78例,HM 45例。在PHC患者中,Arg-1呈高表达(83.3%)且以强染色为主(60.3%),高、中度分化肝细胞癌患者中阳性表达率(92.9%)高于低分化患者(76.9%),在胆管细胞型肝癌患者中不表达,在混合型肝癌患者中阳性表达率为75%;在HM患者中,Arg-1阳性表达率较低(8.9%),存在于结直肠癌、胰腺癌、乳腺癌肝转移患者中且均为弱染色,其他原发部位肝转移患者未见Arg-1阳性表达。Arg-1用于PHC和HM鉴别的敏感度为83.3%,特异性为91.1%。结论:细针穿刺活检标本行Arg-1免疫组化染色用于PHC和HM鉴别的敏感度和特异性均较高,值得进一步推广。

Arg-1在大肠炎症相关性肿瘤中的表达及意义

目的观察精氨酸酶-1(Arg-1)在小鼠及人的大肠炎症相关性肿瘤组织中的表达情况,分析其与大肠癌患者临床病理因素、增殖和预后的关系。方法采用免疫组化方法观察Arg-1在20例小鼠大肠炎-癌模型中的表达情况,同时观察Arg-1在20例患者大肠的癌旁组织、15例炎症组织、110例癌症组织中的表达情况。应用统计学分析Arg-1在小鼠及人的大肠组织中不同组间的差异表达情况。结果 Arg-1在小鼠大肠的正常组织、慢性炎症组织、腺瘤组织、炎癌组织中表达逐渐升高,具有统计学意义(P<0.05);Arg-1在患者大肠的癌旁组织、炎症组织、癌症组织中的表达也逐步增高,具有统计学意义(P<0.05)。结论 Arg-1蛋白与大肠癌的TNM分期密切相关,其可能参与大肠炎症相关性肿瘤的发生与发展过程,并可能成为评估结直肠癌增殖程度及判断预后的候选标志物。

CX3CR1通过调控巨噬细胞极化影响肾间质纤维化

目的:CX3C趋化因子受体1(CX3C chemokine receptor 1,CX3CR1)与CX3C趋化因子配体1(CX3C chemokine ligand 1,CX3CL1)结合后促使巨噬细胞等炎症细胞向受损部位迁移,巨噬细胞极化与肾间质纤维化相关。本研究旨在探讨CX3CR1是否通过调控巨噬细胞极化来影响肾间质纤维化的进展。方法:建立C57/B6小鼠单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)肾间质纤维化模型,并将其分为CX3CR1抑制剂组与模型组,分别连续5 d腹腔注射CX3CR1抑制剂AZD8797或生理盐水,于建模后第7天取小鼠建模侧肾脏。分别采用苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色和Masson染色观察肾间质炎症细胞浸润和胶原纤维沉积情况。采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)和蛋白质印迹法检测小鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)、CX3CR1的mRNA表达和CX3CR1蛋白质表达情况。采用全基因组测序鉴别2组肾组织的差异表达基因并用RT-PCR验证精氨酸酶-1(arginase-1,Arg-1)的差异表达。采用流式细胞术检测2组肾组织M2型巨噬细胞占比。结果:CX3CR1抑制剂组小鼠肾间质炎症细胞浸润明显减少,胶原纤维沉积明显减轻。CX3CR1抑制剂组小鼠肾组织中CX3CR1 mRNA及蛋白质水平、α-SMA和FN mRNA水平均明显低于模型组(均P<0.05)。全基因组测序显示2组肾组织中差异表达前5位的基因依次为Ugt1a6b、Serpina1c、Arg-1、Retnla和Nup62,RT-PCR证实CX3CR1抑制剂组Arg-1 mRNA水平明显高于模型组(P<0.001)。流式细胞术结果显示CX3CR1抑制剂组小鼠肾脏中Arg1+CD206+M2型巨噬细胞占比明显高于模型组(P<0.01)。结论:抑制CX3CR1的表达可有效缓解小鼠肾间质纤维化,其机制可能与巨噬细胞向M2型极化及Arg-1的表达上调有关。

miR-30a-5p通过调节靶基因ARG1对急性缺血性脑卒中免疫应答的影响

目的:探讨miR-30a-5p通过调节靶基因精氨酸酶-1(ARG1)对急性缺血性脑卒中免疫应答的影响。方法:选取急性缺血性脑卒中患者60例为病例组,同期体检健康者60例作为对照组。RT-qPCR检测外周血候选miRNAs,miR-30a-5p及靶基因ARG1表达情况;将miR-30a-5p模拟物、阴性对照模拟物及mock转染到HL-60或RAW264.7细胞中,荧光素酶报告基因分析miR-30a-5p与ARG1的作用关系;RT-qPCR和Western blot检测ARG1 mRNA和蛋白的表达情况。结果:miR-30a-5p、miR-579-3p和Let-7e表达水平在病例组和对照组存在统计学差异(P<0.001),生物信息学预测miR-579-3p和Let-7e没有免疫调节相关的靶基因,而ARG1是miR-30a-5p潜在靶基因。荧光素酶报告基因实验证实ARG1是miR-30a-5p直接作用靶点,ARG1 mRNA在缺血性脑卒中外周血中明显上调(P<0.05)。miR-30a-5p模拟物转染HL-60和/或RAW 264.7细胞24 h后,ARG1 mRNA和蛋白表达水平较mock和NC组明显降低(P<0.05)。miR-30a-5p对LPS处理后的RAW 264.7细胞48 h后,miR-30a-5p模拟物组NO水平较mock和NC组明显升高(P<0.05)。结论:miR-30a-5p及其靶基因ARG1是急性缺血性脑卒中重要的分子标志物之一,miR-30a-5p可能通过抑制靶向基因ARG1表达参与缺血性卒中免疫应答的病理生理过程。

雷公藤红素在实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)小鼠眼组织中的抗炎作用及其对小胶质细胞极化的影响

目的探讨雷公藤红素在实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)小鼠眼组织中的抗炎作用及其对小胶质细胞极化的影响。方法取健康6~8周龄B10.RIII小鼠36只,随机分为正常对照组、EAU溶剂对照组、雷公藤红素干预组,每组12只。将光感受器间维生素A类结合蛋白161-180和完全弗氏佐剂充分乳化混合后,注射于EAU溶剂对照组和雷公藤红素干预组小鼠双侧大腿和尾部皮下,总体积200μL,每只小鼠注射光感受器间维生素A类结合蛋白161-180的量为50μg。免疫后第7-14天,雷公藤红素干预组小鼠每天接受0.5 mg·kg^(-1)雷公藤红素腹腔注射治疗,EAU溶剂对照组小鼠注射同等剂量的无菌PBS缓冲溶液。免疫后第14天,通过裂隙灯显微镜观察各组小鼠眼前节表现及行组织切片HE染色,并参照Caspi分级标准对各组小鼠进行临床评分及组织病理学评分;免疫荧光染色观察小鼠眼内小胶质细胞活化情况;Western blot检测小鼠视网膜中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶-1(Arg1)蛋白表达水平;qRT-PCR检测小鼠视网膜中炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6 mRNA相对表达量。采用Graphpad Prism 9.0统计软件进行数据分析。结果免疫后第14天,通过裂隙灯显微镜观察发现,EAU溶剂对照组小鼠眼前节可见虹膜血管扩张充血明显、角膜水肿、前房渗出;而雷公藤红素干预组小鼠眼前节炎症明显减轻,可见虹膜血管轻度充血。与正常对照组相比,EAU溶剂对照组与雷公藤红素干预组小鼠临床评分均升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。雷公藤红素干预组小鼠临床评分低于EAU溶剂对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示,免疫后第14天,EAU溶剂对照组小鼠出现严重的视网膜皱褶和脱离,炎症细胞弥漫浸润;而雷公藤红素干预组小鼠视网膜结构破坏轻微,可见少量炎症细胞浸润。与正常对照组相比,EAU溶剂对照组与雷公藤红素干预组小鼠组织病理学评分均升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。雷公藤红素干预组小鼠组织病理学评分低于EAU溶剂对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。正常对照组、EAU溶剂对照组、雷公藤红素干预组小鼠眼内Iba1+细胞密度分别为(1.00±0.12)%、(36.07±4.57)%、(1.83±0.36)%,与正常对照组相比,EAU溶剂对照组及雷公藤红素干预组小鼠眼内Iba1+细胞数增加,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与EAU溶剂对照组相比,雷公藤红素干预组小鼠眼内Iba1+细胞数明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。与正常对照组相比,EAU溶剂对照组小鼠视网膜中iNOS、Arg1蛋白表达水平均升高,差异均有统计学意义(均为P<0.01);与EAU溶剂对照组相比,雷公藤红素干预组小鼠视网膜中iNOS蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与正常对照组相比,EAU溶剂对照组小鼠视网膜中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA相对表达量均升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与EAU溶剂对照组相比,雷公藤红素干预组小鼠视网膜中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA相对表达量均下降,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论雷公藤红素可抑制M1型小胶质细胞活化,减少EAU小鼠视网膜炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的产生,减轻炎症反应。

活动性肺结核患者Tim-3/Galectin-9的表达变化及其与巨噬细胞相关细胞因子的相关性

目的探究活动期肺结核(ATB)患者血清可溶性T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(sTim-3)和半乳糖凝集素-9(sGal-9)水平,以及外周血单个核细胞(PBMC)中Tim-3/Gal-9的表达变化,及其与M1型巨噬细胞特征因子诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和M2型巨噬细胞特征因子精氨酸酶-1(Arg-1)的相关性。方法选取ATB患者33例,31例潜伏期肺结核患者(LTBI)以及同期健康体检者30例。酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清sTim-3和sGal-9水平以及巨噬细胞特征因子iNOS和Arg-1;实时荧光定量PCR测定外周血单个核细胞(PBMC)表面Tim-3/Gal-9的表达变化。结果 ATB患者血清sTim-3、sGal-9、iNOS、Arg-1以及外周血PBMC上Tim-3和Gal-9 mRNA水平与LTBI组和对照组差异均有统计学意义(P <0.05);空洞型ATB患者血清iNOS、Arg-1以及PBMC上Tim-3 mRNA水平与非空洞型ATB患者间差异均具有统计学意义(P <0.05);相关性分析发现ATB患者血清sTim-3、Tim-3 mRNA与iNOS呈负相关(r=-0.333 7、-0.515 1,P <0.05),与Arg-1呈正相关(r=0.537 9、0.382 5,P <0.05);而sGal-9和Gal-9 mRNA与iNOS间无相关性,sGal-9与Arg-1间亦无相关性,Gal-9 mRNA与Arg-1间呈正相关(r=0.485 9,P <0.05);治疗后血清sTim-3、sGal-9和Arg-1及PBMC上Tim-3和Gal-9 mRNA表达水平较治疗前均显著下降,而iNOS则显著上调。结论 Tim-3/Gal-9在ATB患者治疗前后均中存在一定的变化,并与巨噬细胞极化特征标志物存在一定的相关性。

Arg1及FOXQ1在胃癌中的表达及其临床意义

目的探讨Arg1及FOXQ1与胃癌患者临床病理特征及预后的关系。方法选取胃癌患者102例,采用免疫组化法检测Arg1及FOXQ1蛋白的表达,分析其与胃癌临床病理特征及生存情况的关系等。结果胃癌组织的Arg1及FOXQ1高表达率显著高于癌旁组织(P<0.05);Arg1及FOXQ1在弥漫型胃癌、低分化胃癌、有淋巴结转移的胃癌患者中表达较高(P<0.05)。Arg1高表达及低表达患者的中位生存期分别为32.7个月、45.6个月,FOXQ1高表达及低表达患者的中位生存期分别为34.8个月、44.1个月。Cox比例风险模型多因素分析显示,淋巴结转移、Arg1高表达及FOXQ1高表达均是胃癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论Arg1及FOXQ1在胃癌中高表达,同时与淋巴结转移、低分化程度及弥漫型胃癌密切相关,并可作为预后指标来评估患者的生存期,值得临床推广应用。

雷公藤内酯醇对类风湿关节炎髓源性抑制细胞的作用

目的观察雷公藤内酯醇(triptolide,TPT)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)的影响,进一步探讨其免疫调控机制。方法分离RA患者和健康对照组外周血单个核细胞(PBMC),流式细胞术检测其外周血MDSCs细胞的比例。流式分选活动期RA患者的MDSCs,加入不同浓度的TPT干预48 h,采用RT-PCR和Western blot检测精氨酸酶-1(Arg-1)的mRNA和蛋白表达水平。结果 RA患者外周血MDSCs比例和Arg-1表达水平较健康对照组明显增加(P<0.05)。TPT能够呈剂量依赖性下调RA患者PBMC中MDSCs细胞的比例,并且抑制其Arg-1的mRNA和蛋白表达水平。结论 MDSCs在RA患者活动期显著增加。TPT能够下调MDSCs的比例,并且抑制其Arg-1的表达水平,提示TPT有可能调控MDSCs的Arg-1的表达而发挥抗RA炎症的作用。

慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者外周血中髓源性抑制细胞的变化及临床意义

目的:研究慢性鼻窦炎伴鼻息肉(chronic sinusitis with nasal polyps,CRSwNP)患者外周血中髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)及其亚群比例和功能的变化,探讨MDSCs对CRSwNP疾病进展的影响。方法:采用流式细胞术检测CRSwNP组(31例)及对照组(36例)外周血中HLA-DR-CD11b+CD33+MDSCs,HLA-DR-CD11b+CD33+CD14-CD15+粒细胞性MDSCs(PMN-MDSCs)和HLA-DR-CD11b+CD33+CD14+CD15-单核细胞性MDSCs(M-MDSCs)的比例和功能分子精氨酸酶-1(arginase-1,ARG-1)的表达情况,同时采用ELISA检测血浆中IL-6的浓度。结果:CRSwNP患者外周血总MDSCs比例明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);与对照组比较,CRSwNP组PMN-MDSCs比例明显升高(P<0.05),而M-MDSCs比例下降(P<0.05)。CRSwNP组总MDSCs中ARG-1的平均荧光强度升高(P<0.05),血浆IL-6浓度增加(P<0.05)。结论:CRSwNP患者中总MDSCs的表达升高且以PMN-MDSCs为主,其功能分子ARG-1表达增强,提示MDSCs可能参与了慢性鼻窦炎的发病过程。