人精液凝固蛋白SgI-52的表达与抗菌活性研究

以人精囊腺cDNA为模板,用嵌套式PCR技术扩增出编码成熟人精液凝固蛋白I(semenogelin I,SgI)第85–136位氨基酸(SgI-52)的核苷酸序列并将其插入载体pMAL-p2X中,成功构建的表达载体pMAL-p2X/SgI-52转化大肠杆菌DH5α后,重组融合蛋白诱导表达于大肠杆菌周质中。经第X因子剪切及超滤处理,得到表达的重组SgI-52。质谱分析结果证明重组SgI-52为目的肽。重组人SgI-52对大肠杆菌ATCC25922标准株以及耐氨苄标准株ML-35P的最低抑制浓度MIC分别为32.45以及46.30?μg/mL。我们的结果及相关研究提示在人精液液化过程中人精液凝固蛋白I的不同降解产物可能行使不同的生物学功能,值得进行深入研究。

人精液凝固蛋白Ⅰ衍生合成肽在不同pH值及Zn^(2+)浓度下的抗菌活性研究

目的研究5种人精液凝固蛋白Ⅰ衍生合成肽在不同PH值及Zn2+浓度下的抗菌活性,探讨人精液凝固蛋白Ⅰ衍生抗菌肽在不同条件下的抗菌机理。方法在前期研究新发现的人精液凝固蛋白Ⅰ衍生肽SgI29及其衍生合成肽(SgI14、SgI19、SgI22及SgI25)具有抗菌活性的基础上,设置不同pH值及不同Zn2+浓度,通过琼脂糖弥散法抗菌试验进一步测定其在此环境下对泌尿生殖道感染常见细菌抗菌活性。结果 SgI29及其衍生合成肽在pH值为4时,无明显抗菌活性,pH值为6和7时,其抗菌活性最强。在试验所设置的不同Zn2+浓度下,各培养皿中均未见细菌生长。结论 pH值是影响人精液凝固蛋白Ⅰ衍生肽抗菌活性的重要因素之一。游离态Zn2+具有较强的抗菌活性,精液中Zn2+的抗菌活性值得进一步研究。

精液凝固蛋白Semenogelin对精子运动抑制机制的研究进展

精液的液化和精子的获能是精子取得向前运动的关键,精液凝固蛋白Semenogelin(Sg)在这个过程中起着至关重要的作用,它们直接参与了精液凝胶的形成,并协同其他一些来源于男性生殖道的蛋白酶类和金属离子等,与精子细胞表面发生作用,参与调控精液液化和精子获能,最终使精子取得向前运动。本文综述了当前Sg对精子活动抑制机制的研究进展。

人精液凝固蛋白Ⅰ衍生合成肽的抗菌活性

SgI-29是作者最新发现的有抗菌活性的人精液凝固蛋白I衍生抗菌肽。以SgI-29为模板,合成4种不同肽链长度的SgI-29衍生小肽,利用理化性质分析软件及螺旋轮作图法对SgI-29及其衍生物进行了理化性质及结构的预测,结合琼脂糖弥散法抗菌试验得到的不同合成肽段对大肠杆菌标准菌株(Escherichia coli ATCC 25922)以及绿脓杆菌标准株(Pseudomonas aeruginosaATCC27853)的抗菌活性实验结果,探讨了SgI-29及其衍生物的结构-功能关系。结果表明:SgI-22在所有的SgI-29及其衍生物中有最好的抗菌活性,是进行进一步结构优化的良好模板。

精液凝固蛋白Ⅰ活性片段的精子抑制活性分析

目的制备重组精液凝固蛋白(Sg)及其小分子衍生肽,并分析其对精子活动的抑制作用。方法通过分子克隆及PCR扩增等技术得到实验用重组蛋白,从而对有正常生育能力的男性精子活动进行抑制实验分析。结果在生理条件下,精液Sg的N和C端片段均对精子运动存在抑制作用,其中以N端片段更为显著。结论精液Sg中存在能够抑制精子运动的氨基酸片段,而Sg24~163的作用最为显著。

精液凝固蛋白在肾癌中的表达及其临床意义

目的探讨精液凝固蛋白(Sg)在肾癌患者癌旁组织及癌组织中的表达及临床意义。方法收集具有明确病理诊断的20例肾癌组织及癌旁组织,应用qRT-PCR和Western blot方法检测Sg基因和蛋白水平的表达,并进一步研究了Sg与临床分期之间的相关性。结果肾癌组织标本中Sg mRNA的相对表达量为(0.71±0.48),明显低于癌旁组织中的(1.07±0.44)(P<0.05)。在Ⅲ/Ⅳ期癌组织中Sg mRNA的表达量为(0.40±0.19),明显低于Ⅰ/Ⅱ期癌组织的(0.92±0.51)(P<0.05);Sg蛋白表达亦表现出相同趋势。结论 Sg基因在肾癌中的异常表达与肾癌的发生发展关系密切。

人精浆小分子抗菌肽的分离鉴定

目的从人精浆中分离小分子抗菌肽,探讨精浆的抗菌机制。方法收集正常人精液,室温液化后10000r/min离心10min去除精子得到精浆。采用琼脂糖弥散法检测抗菌活性,采用对大肠杆菌(ATCC25922)的抗菌活性作为检测指标,通过阳离子交换柱SP-Sepharose分离,将有抗菌活性的洗脱产物冻干后用去离子水溶解,经过AKTA Superdex 75柱分离,收集小分子部分,应用反相高效液相色谱技术分离纯化多肽(RP-HPLC分离),检测各峰抗菌活性,基质辅助激光解吸质谱法检测相对分子质量,并鉴定其抗菌活性。结果从人精浆中初步分离出多个相对分子质量小于10×103的肽混合物,其中部分与精液凝固蛋白Ⅰ片段相对分子质量大小一致,命名为HSLAMs(Human semen low-molecular-mass antibacterial mixtures),具有抗大肠杆菌的活性。结论HSLAMs可能是人精浆天然免疫机制中重要的效应分子,精液凝固蛋白Ⅰ可能是其来源之一。

人精浆的抗菌活性研究进展

射精后，人类精液沉积于女性阴道内。精液液化，精子获能并穿越女性生殖道到达输卵管与卵细胞结合，完成受精。在此过程中，精子将不可避免地与女性生殖道内的病原微生物相接触。人体如何保护精子免受外界损害一直是大家关心的问题，从上个世纪七十年代至今，多种抗菌物质陆续被发现存在于人类精浆中，它们溶于精浆中或附着于精子膜，通过直接或间接作用抑制、杀灭细菌，使精液显示出抗菌活性。