精源性卵母细胞激活因子缺乏导致ICSI受精失败的研究进展

受精是一个复杂的生物学过程,其中任意一个环节出现异常都会导致受精问题的出现。虽然卵胞质内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)技术的出现极大改善了男性精子因素引起的不孕问题,但临床医生仍会遇到一些不明原因的ICSI受精失败问题。随着基因检测技术的迅猛发展,临床科研人员已先后在此类ICSI受精失败患者人群中发现了导致精源性卵母细胞激活因子(sperm-borne oocyte activation factor,SOAF)减少的致病基因PLCZ1、ACTL7A、ACTL9及IQCN,但目前尚缺乏对此类受精失败的系统总结。本文将结合近期的相关报道,对SOAF缺乏导致ICSI受精失败的遗传因素及治疗方法作系统综述。

脑源性神经营养因子及其受体在小鼠卵母细胞第一极体释放中的作用

目的:探讨脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)在卵母细胞第一极体释放中的作用。方法:用Affymetrix基因芯片分析在模拟卵母细胞成熟过程中BDNF及其受体TrkB在卵巢组织中的表达变化,用实时定量荧光PCR(RT-PCR)分析卵泡组织中BDNF及其受体TrkB的表达,并利用TrkB抑制剂K252a探讨BDNF在卵母细胞释放第一极体中作用。结果:在模拟卵母细胞成熟过程中,BDNF的表达出现2个峰值,第2个峰值比第1个峰值显著;TrkB的表达同样也出现2个峰值,但峰值均非常低。BDNF在卵丘细胞、壁层颗粒细胞和卵母细胞中均有表达,而TrkB仅在卵母细胞中表达。不同浓度(1,3,10,30ng/ml)BDNF均促使卵母细胞第一极体释放率升高(P<0.05),以3ng/ml组升高更显著。体内实验发现不同剂量K252a均能抑制卵母细胞第一极体释放率(P<0.05),但不同剂量组无统计学差异。结论:BDNF在卵母细胞的第一极体的释放过程中发挥重要作用。

脑源性神经营养因子在卵母细胞成熟过程中的表达与作用

卯泡发育及卵母细胞成熟是一个非常复杂的过程,是一种多种因子相互作用、相互协调的结果。近年来研究脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)不仅广泛分布于神经系统,对神经元的分裂和发育发挥重要作用,而且在生殖系统也有表达。并认为BDNF能够通过某种旁分泌或自分泌的方式促进卵母细胞成熟,尤其是胞浆成熟,从而促进移植前胚胎的发育。但其具体作用机制还不甚清楚,有待于进一步研究。

电针对完全性脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠脊髓组织中Caspase-9、细胞色素C及凋亡蛋白酶激活因子-1表达的影响

目的观察电针对完全性脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠膀胱功能及脊髓组织中Caspase-9、细胞色素C(Cyt-C)及凋亡蛋白酶激活因子-1(Apaf-1)表达的影响。方法雌性Sprague-Dawley大鼠60只,随机抽取36只,采用改良T_(10)脊髓横断法制作完全性脊髓损伤后神经源性膀胱模型,取24只成功模型分为模型组和电针组各12只,其余未造模大鼠24只随机分为假手术组和空白组各12只。于造模后第19天取次髎、中极、三阴交、大椎行电针,连续7 d后行尿流动力学检测,TUNEL法测定细胞凋亡率,Western blotting测定脊髓组织中Caspase-9、Cyt-C和Apaf-1蛋白的表达情况。结果与空白组和假手术组比较,模型组和电针组膀胱最大容量及膀胱顺应性均明显降低(P<0.01),膀胱基础压力和漏尿点压力增加(P<0.05);脊髓组织TUNEL阳性率显著升高(P<0.001);脊髓组织中Caspase-9、Cyt-C和Apaf-1蛋白表达升高(P<0.05)。与模型组比较,电针组的膀胱最大容量及膀胱顺应性明显增加(P<0.01),膀胱基础压力和漏尿点压力降低(P<0.05);脊髓组织TUNEL阳性率明显降低(P<0.01);脊髓组织中Caspase-9、Cyt-C及Apaf-1蛋白表达量降低(P<0.05)。结论电针次髎、中极、三阴交、大椎可改善完全性脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠膀胱功能,其作用机制可能与脊髓组织中Caspase-9、Cyt-C和Apaf-1的表达下调,凋亡减少有关。

胶质细胞源性神经营养因子对哺乳动物精原干细胞增殖及分化的影响

胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)是转化因子β(TGF-β)超家族的一个相关成员,在哺乳动物睾丸中由支持细胞分泌,对精原干细胞(SSCs)的增殖和分化具有非常重要的作用。体外培养SSCs时培养液中添加适量的GDNF能够促进SSCs的增殖。GDNF介导多种信号通路调节SSCs的自我更新和分化。本文就GDNF对哺乳动物精原干细胞增殖与分化的作用及其所介导的信号通路进行了综述。

胶质细胞源性神经营养因子受体基因GFRα1在小鼠精子再生过程中的表达和意义

目的 :探讨胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)受体基因GFRα1在小鼠精子再生过程中的表达和意义。方法 :间隔 2 4d 2次腹腔注射白消安建立小鼠精子再生动物模型。根据第二次给药后的不同时间随机分为 1、2、3、4、6、8、10周共 7组 (8只 /组 ) ,8只正常小鼠作对照组 ,分别于相应时点取材 ,进行光镜和电镜的研究。采用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测不同时间GFRα1mRNA的表达变化 ;并采用原位杂交技术检测GFRα1mRNA表达定位。 结果 :2次给药后第 1～ 2周 ,GFRα1mRNA的表达明显增强 ,在第 2周达到高峰 ;在给药后第 3～ 4周明显下降 ,比正常表达水平明显减弱 ,并在第 4周达到低谷 ;随后几周内表达又逐渐增强 ,于第 10周恢复到正常水平。原位杂交显示 ,GFRα1主要表达于未分化的精原细胞。 结论 :在小鼠精子再生过程中 ,GFRα1的表达参与调节精原干细胞的去向调节 ,高表达时促进其进行自我更新 ,低表达时降低对GDNF的反应性 ,促进其分化 。

胶质细胞源性神经营养因子在小鼠生精恢复过程中的表达和意义

目的:分析并探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)在小鼠恢复生精过程中的表达变化,及其与精原干细胞增殖与分化的关系。方法:间隔24 d 2次腹腔注射白消安建立小鼠生精恢复过程的动物模型。根据第二次给药后的不同时间随机分为1、2、3、4、6、8、10周共7组(8只/组),8只正常小鼠作对照组,分别于相应时点取材,进行光镜和电镜的研究。采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同时间GDNF mRNA的表达变化;并采用原位杂交技术检测GDNFmRNA表达定位。结果:2次给药后第1-2周,GDNF mRNA的表达明显增强,在第2周达到高峰;在给药后第3-4周明显下降,并在第4周达到低谷;随后几周内表达又逐渐增强,于第10周恢复到正常水平。原位杂交显示,GDNF由sertoli细胞表达。结论:在小鼠生精恢复过程中,GDNF的高水平表达促进精原干细胞自我更新,对于维持生精上皮干细胞数量的稳定具有十分重要的意义。

胶质细胞源性神经营养因子促进精原干细胞增殖的信号通路

胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)是Tgf-β家族的一个新亚族,其通过以下途径促进精原干细胞(SSCs)的增殖:GDNF与GFR-α1特异性结合,活化Ret蛋白酪氨酸激酶,随后激活PI3K/Akt、Src、Ras/ERK1/2等信号通路,引起通路下游转录因子Pou3f1、Etv5、Bcl6b、Lhx1和基因H19、A-myb、N-myc、C-fos表达的上调,进而促进SSCs的增殖。同时,在该过程中还存在着信号通路间的交联现象。

胶质细胞源性神经营养因子受体α1基因在小鼠生精恢复过程中的表达变化

目的 :探讨胶质细胞源性神经营养因子受体α1 (GFRα1 )基因在小鼠生精恢复过程中的表达变化及其与精原干细胞自增殖和分化的关系。方法 :间隔 2 4d 2次腹腔注射白消安建立小鼠生精恢复过程的动物模型 ,第二次给药后随机分为 1 ,2 ,3,4 ,6 ,8,1 0周 7组 ,于相应时点及给药前取材 ,进行光镜和电镜研究 ,半定量逆转录聚合酶链反应和原位杂交检测。结果 :在生精恢复过程的第 1～ 2周 ,GFRα1mRNA的表达较给药前增强 ,其差异分别有显著 (P <0 .0 5 )和非常显著 (P <0 .0 1 )意义 ,其中第 2周达高峰 ,为 (1 0 4 .72± 2 4 .4 0 ) % ;第 3～ 4周 ,GFRα1mRNA的表达较给药前减弱 ,其差异也分别有显著 (P <0 .0 5 )和非常显著 (P <0 .0 1 )意义 ,其中第 4周达低谷 ,为(2 0 .77± 4 .2 5 ) % ;之后逐渐上升 ,于第 1 0周恢复至正常水平。GFRα1mRNA主要由未分化精原细胞表达。结论 :GFRα1在小鼠生精恢复过程中以剂量相关性调控着胶质细胞源性神经营养因子信息传入 ,从而调控着精原干细胞的去向 :高剂量时诱导其增殖 。

遗忘型轻度认知功能损害患者血清脑源性神经营养因子及血浆组织型纤溶酶原激活剂水平变化及其临床意义

目的探讨遗忘型轻度认知功能损害（aMCI）患者血清脑源性神经营养因子（BDNF）和血浆组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）水平变化及其与aMCI发病的关系。方法应用多维度神经心理测试评估99例aMCI患者和99名正常对照者的神经认知功能;采用酶联免疫吸附法测定血清BDNF和血浆t-PA水平,并进行相关性分析。结果（1）aMCI组神经认知功能测试成绩明显低于正常对照组（均P〈0.01）,尤以反映情节记忆的听觉词语记忆测试（AVMT）的延迟回忆受损最明显。（2）aMCI组血清BDNF水平[4.37（0.02-14.54）ng/ml]明显低于正常对照组[4.82（1.06-33.12）ng/ml]（P〈0.05）,血浆t-PA水平[（6.98±3.25）ng/ml]明显高于正常对照组[（6.18±2.32）ng/ml]（P〈0.05）。（3）aMCI患者血清BDNF水平与血浆t-PA不相关;血清BDNF和血浆t-PA水平均与AVMT的延迟回忆显著相关（r=0.264,P〈0.01;r=-0.216,P〈0.05）。结论aMCI患者AVMT延迟回忆受损最明显;血清BDNF和血浆t-PA水平的变化与aMCI的认知功能损害密切相关。

脑源性神经营养因子在体外诱导SH-SY5Y细胞分化过程中的作用

目的探讨不同浓度的脑源性神经营养因子(BDNF)在体外诱导SH-SY5Y细胞分化时,对G2期及其前后细胞周期相关蛋白mRNA表达的影响。方法采用全反式维甲酸(RA)和低(1μg/L)、中(10μg/L)、高(100μg/L)3种不同浓度BDNF在无血清培养液中相继诱导SH-SY5Y细胞分化,形成均一的具有神经元形态的细胞。以一步法实时定量RT-PCR检测其G2期细胞周期相关蛋白mRNA的表达,荧光激活细胞分类术(FACS)检测各组细胞时相。结果在各浓度BDNF组中周期蛋白B1(cyclinB1)的mRNA含量与对照组及RA组比较均明显降低(P<0.05);仅高浓度组cyclinB2和周期蛋白依赖性激酶1(Cdk1)的mRNA含量显著降低(P<0.05),;低浓度和中浓度BDNF组Cdk5 mRNA含量均高于RA组(P<0.05)。BDNF各浓度组处于G1期的细胞百分率均显著高于RA和对照组(P<0.01),而处于S期的细胞百分率均显著低于对照组(P<0.01),且低浓度及高浓度组同时低于对照组(P<0.01)。结论提示BDNF在有效促进SH-SY5Y细胞进一步分化的同时,没有引起G2期及其前后细胞周期相关蛋白mRNA表达的异常升高,BDNF无诱导细胞凋亡的危险,可能有减缓AD进程的作用,并且呈剂量依赖性。

急性冠状动脉综合征患者巨噬细胞表达过氧化体增殖物激活型受体γ及炎症相关因子的变化

目的探讨急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞源性巨噬细胞表达过氧化体增殖物激活型受体γ、核因子κB、基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的变化及其间的关系。方法选取急性冠状动脉综合征患者48例、稳定型心绞痛患者22例为研究对象,抽取外周动脉血20mL,分离单个核细胞,加巨噬细胞集落刺激因子培养得单核细胞源性巨噬细胞;用CD40配体刺激后,酶联免疫吸附法测定上清液中基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1浓度,逆转录聚合酶链反应检测过氧化体增殖物激活型受体γ、基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1mRNA表达,免疫组织化学法检测核因子κB亚单位P65表达。结果急性冠状动脉综合征组过氧化体增殖物激活型受体γmRNA表达低于稳定型心绞痛组(0.24±0.04比0.39±0.06,P<0.001),核因子κBP65表达高于稳定型心绞痛组(0.42±0.06比0.27±0.02,P<0.001),基质金属蛋白酶9在上清液中的浓度及其mRNA表达明显高于稳定型心绞痛组(231.11±51.47μg/L比126.02±13.26μg/L和0.674±0.11比0.24±0.05,P<0.001),组织型基质金属蛋白酶抑制剂1在上清液中的浓度及其mRNA表达强度高于稳定型心绞痛组(139.80±31.54μg/L比112.25±12.68μg/L和0.42±0.09比0.33±0.06,P<0.05)。过氧化体增殖物激活型受体γmRNA表达与核因子κBP65和基质金属蛋白酶9的表达强度呈负相关(P<0.001),与组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的表达强度不相关(P>0.05);核因子κBP65与基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的表达强度呈正相关(P<0.001)。结论急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞源性巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ表达下调,核因子κB活性增强,基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1表达上调;过氧化体增殖物激活型受体γ可能通过调节核因子κB活性而调节基质金属蛋白酶9基因转录;但组织型基质金属蛋白酶抑制剂1表达可能不受过氧化体增殖物激活型受体γ调节。

阿司匹林和肿瘤坏死因子α对脂肪细胞脂肪源性细胞因子表达的影响

目的观察阿司匹林和肿瘤坏死因子α(TNF α)对脂肪细胞脂肪源性细胞因子表达的影响。方法5 mmol/L阿司匹林和/或5 ng/ml TNF α处理3T3 L1脂肪细胞48 h后抽提总RNA,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)和Northern印迹检测脂肪细胞脂源性细胞因子的表达。结果TNF α抑制了抵抗素、脂联素基因的表达,促进了白细胞介素6(IL 6)、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI 1)基因的表达;阿司匹林对上述基因的表达并无影响,但部分拮抗了TNF α对抵抗素、脂联素基因的抑制。结论TNF α抑制了抵抗素、脂联素基因的表达,促进了IL 6、PAI 1 基因的表达,可能引起机体的胰岛素抵抗(IR)和相关的心血管并发症;阿司匹林部分拮抗了TNF α对抵抗素、脂联素基因的抑制可能与其改善IR及相关心血管并发症有关。

第二线粒体源性Caspases激活因子与非小细胞肺癌术后辅助化疗患者预后转归和生存期限的相关性

目的评价第二线粒体源性Caspases激活因子(Smac、Survivin、Bax和Bcl-2蛋白)与非小细胞肺癌术后辅助化疗患者预后转归和生存期限的相关性。方法选取2015年6月至2017年10月我院治疗的70例非小细胞肺癌患者作为研究对象,正常肺部组织为由疑似肺癌患者经皮穿刺肺活检法取得并经病理分析无异常的组织。术后辅助化疗采用DP方案。Western Blot法检测Smac、Survivin、Bax和Bcl-2蛋白表达量;采用Kaplan-Meier法计算患者3年生存率。结果不同TNM分期患者的Smac蛋白表达情况比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。Cox多因素回归模型分析结果显示,Smac蛋白表达情况为影响非小细胞肺癌患者预后的独立指标(P<0.05)。Western Blot结果显示,与正常肺部组织相比,非小细胞肺癌组织中的Smac、Bax蛋白表达量降低,Caspase 9、Bcl-2蛋白表达量升高(P<0.01)。结论第二线粒体源性Caspases激活因子(Smac、Survivin、Bax和Bcl-2蛋白)可作为非小细胞肺癌术后辅助化疗患者预后转归和生存期限的评估标志。

钙激活钾通道在高糖所致内皮源性超极化因子介导的内皮舒张功能障碍中的作用

目的研究血管内皮细胞(VEC)钙激活钾通道(KCa)在高糖所致内皮源性超极化因子(EDHF)介导的内皮舒张功能障碍中的作用。方法采用离体血管张力实验,观察高糖孵育大鼠肠系膜三级动脉3h后,IKCa和SKCa在EDHF介导的内皮舒张功能变化中的作用;采用Western blot技术,观察高糖孵育人脐静脉内皮细胞(HUVEC)48h对KCa3.1和KCa2.3蛋白表达的影响。结果 30mmol/L葡萄糖孵育大鼠肠系膜三级动脉3h可显著降低乙酰胆碱(ACh)诱导的内皮舒张反应、EDHF介导的内皮舒张反应及IKCa和SKCa介导的EDHF舒张反应。30mmol/L葡萄糖孵育HUVEC 48h显著降低KCa3.1和KCa2.3通道蛋白表达。而渗透压对照组30mmol/L甘露醇孵育大鼠肠系膜三级动脉和HUVEC对上述指标无明显影响。结论高糖损伤大鼠肠系膜三级动脉EDHF介导的内皮舒张功能,其机制与降低血管内皮细胞上KCa的表达和功能有关。

内皮源性舒张因子对肺血管张力的调节及其与血小板激活因子引起肺动脉压升高的关系

本实验采用一氧化氮（ＮＯ）合成酶抑制剂Ｎｗ－硝基－Ｌ－精氨酸甲酯（Ｌ－ＮＡＭＥ）、ＮＯ前体Ｌ－精氨酸和ＮＯ直接供体硝普钠研究内皮源性舒张因子（ＥＤＲＦ）对离体灌注豚鼠肺基础血管张力的调节作用及其与血小板激活因子（Ｐｌａｔｅｌｅｔ－ａｃｔｉｖａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ，ＰＡＦ）所致肺动脉压增高的关系。结果表明：Ｌ－ＮＡＭＥ可以明显增高肺动脉压、肺微血管压和肺动脉阻力，精氨酸对基础血管张力没有明显影响，但可阻断Ｌ－ＮＡＭＥ引起的变化。ＰＡＦ可明显增高肺动脉压、肺微血管压和肺动脉阻力，与Ｌ－ＮＡＭＥ合用有叠加效应，不被Ｌ－精氨酸和硝普钠阻断，说明基础状态下肺血管内皮释放一定量的ＥＤＲＦ维持肺循环的低压、低阻状态。ＰＡＦ增高肺血管压力和阻力的机制不是通过抑制ＥＤＲＦ合成的途径，ＥＤＲＦ不能阻断ＰＡＦ引起的肺血管张力升高。

基于脑源性神经营养因子信号通路探讨针刺干预抑郁症的作用机制

通过检索相关数据库,对近年来针刺通过调控脑源性神经营养因子(BDNF)介导的信号通路及作用机制来干预抑郁的基础研究进行总结,发现针刺主要通过调节BDNF/酪氨酸激酶受体B(TrKB)、组织纤溶酶激活因子(tPA)/BDNF信号通路,调控突触可塑性、BDNF表观遗传等发挥抗抑郁作用。但当前大部分研究缺乏对BDNF通路进行反向验证,并且对通路或作用机制的研究仅限于经典的上下游靶点,同时局部的穴位与BDNF通路和疾病靶器官之间的特异性机制有待进一步阐明。

多囊卵巢综合征患者血清中脑源性神经营养因子水平与体外受精-胚胎移植结局相关性研究

目的探讨多囊卵巢综合征（PCOS）患者脑源性神经营养因子（BDNF）与卵母细胞成熟之间的相关性。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测60例PCOS患者和45例排卵正常不孕患者中的血清BDNF水平，分析血清BDNF水平与获卵数、成熟卵数、卵母细胞成熟率、卵裂率和优质胚胎率之间的相关性。结果①P—COS组血清BDNF水平高于对照组（P〈0．01）；②PCOS组在获卵数和成熟卵数方面显著高于对照组（P〈0．01），而受精率、优质胚胎率和卵母细胞成熟率显著低于对照组（P〈0．01）；③BDNF水平与获卵数、成熟卵数和卵母细胞成熟率成呈正相关（P〈0．05）。结论PCOS患者血清中BDNF水平升高，高水平BDNF能促进卵母细胞成熟和早期胚胎的发育。

养精种玉汤对小鼠卵母细胞体外成熟及PDGFA和PDGFRα表达的影响

目的:探讨养精种玉汤对小鼠卵母细胞体外成熟及血小板源性生长因子A亚基(platelet-derived growth factor subunit A,PDGFA)和血小板源性生长因子受体α(platelet-derived growth factor receptorα,PDGFRα)表达的影响。方法:SPF级雌性KM小鼠灌胃养精种玉汤后取血制备血清,养精种玉汤血清用于未成熟卵母细胞-颗粒细胞复合体培养。体外培养后,观察并计算小鼠卵母细胞成熟率、受精率和卵裂率,采用Western blot和real-time PCR分别检测卵母细胞PDGFA和PDGFRα的蛋白及mRNA表达情况。结果:养精种玉汤能明显提高卵母细胞体外成熟率和受精率(P<0.05或P<0.01),下调PDGFA和PDGFRα的蛋白和mRNA表达(P<0.01)。结论:养精种玉汤可能通过下调PDGFA和PDGFRα的表达促进小鼠卵母细胞体外成熟。

尼莫地平治疗对于蛛网膜下腔出血患者脑源性神经营养因子及组织型纤溶酶原激活物水平的影响

目的观察尼莫地平治疗对于蛛网膜下腔出血(SAH)患者血浆组织型纤溶酶原激活物(t-PA)和脑源性神经营养因子(BDNF)浓度的影响,并分析其与神经功能恢复情况的关系。方法纳入SAH患者共106例,按照是否接受尼莫地平治疗分为尼莫地平组(57例)和对照组(49例)。患者入院后即刻、7 d、14 d、21 d和28 d时检测血浆t-PA和BDNF水平,发病后6个月时应用NIHSS量表和Barthel指数分别评价神经功能缺损和患者生存质量。结果与治疗前相比,治疗后7 d、14 d、21 d,两组t-PA水平均逐渐增加,至21 d达峰值后,28 d明显下降,尼莫地平组各时间点水平均明显高于对照组,差异有显著性(P<0.05);两组BDNF水平均明显增加,且随治疗时间延长逐渐增加,治疗后21 d、28 d尼莫地平组明显高于对照组,差异有显著性(P<0.05)。应用尼莫地平显著改善患者NIHSS和BARTHEL指数,提示预后良好,生活质量较高。结论与未接受莫地平治疗的SAH患者相比,接受尼莫地平治疗患者血浆t-PA和BDNF水平升高,且预后良好,生活质量较高。