生精相关基因Znf230在小鼠睾丸及精子中的表达和定位研究

目的:应用小鼠Znf230多克隆抗血清,对Znf230在小鼠睾丸及精子中的表达及定位进行研究。方法:用RT-PCR分析、Western blot检测、免疫组织化学和免疫荧光染色方法研究Znf230在小鼠不同发育阶段睾丸组织及精子中的表达及亚细胞定位情况。结果:小鼠从出生到成年的发育过程中,Znf230的表达水平基本上是稳定的。小鼠出生6 d和12 d时,该蛋白在精原细胞核中表达,从出生18 d到精子发育成熟这个阶段,该蛋白转移到圆形精子细胞、延长精子细胞和精子中表达,具体定位于顶体区域和精子的尾部。结论:Znf230可能在小鼠生精过程中起着重要的作用。

2型糖尿病患者血清共激活剂相关的精氨酸甲基转移酶1水平与非酒精性脂肪性肝病的相关性研究

目的探讨2型糖尿病(T_(2)DM)患者血清共激活剂相关的精氨酸甲基转移酶1(CARM1)水平与非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的相关性。方法选取甘肃省人民医院内分泌科2020年12月至2021年12月收治的T_(2)DM患者185例,将合并NAFLD的患者纳入NAFLD组(93例)、未合并的患者纳入非NAFLD组(92例)。另选取同期本院体检健康人群91例作为对照组。测定受试者血清CARM1、生化指标水平等。通过腹部超声定量分析测定NAFLD组患者肝脏脂肪含量(LFC)。分析T_(2)DM患者血清CARM1水平与NAFLD的相关性。结果对照组、非NAFLD组和NAFLD组血清CARM1水平比较差异有统计学意义[分别为(2.0±1.6)、(3.4±1.7)、(7.0±4.2)μg/L](P<0.001)。多重线性逐步回归分析结果显示,总胆固醇是CARM1的独立影响因子(P<0.001)。Pearson相关性分析结果显示,NAFLD组LFC与CARM1呈正相关(P<0.05)。卡方线性趋势检验结果显示,随着血清CARM1水平升高NAFLD患病率呈线性递增趋势(Z=70.070,P<0.001)。二元Logistic回归分析结果显示,调整性别、年龄及其他相关因素后,血清CARM1水平与T_(2)DM患者发生NAFLD相关,比值比=1.400,95%置信区间:1.185~1.653,P<0.001;影响T_(2)DM患者发生NAFLD的独立危险因素包括体重指数、三酰甘油、总胆固醇、CARM1。由体重指数、三酰甘油、总胆固醇和CARM1组成风险评估模型,Hosmer-Lemeshow检验结果表明预测模型的预测结果与实际NAFLD患病结果一致(P=0.693)。与ZJU指数(曲线下面积为0.858)相比,该模型(曲线下面积为0.955)对T_(2)DM患者发生NAFLD风险具有良好的识别能力。结论T_(2)DM患者血清CARM1水平显著升高,且其水平与NAFLD相关。CARM1、体重指数、三酰甘油和总胆固醇组成的风险评估模型可用于评估T_(2)DM患者发生NAFLD的风险。

精子线粒体基因片段缺失及点突变与弱精症相关性研究进展

弱精症是导致男性不育的主要因素之一,然而其发病机制尚待研究。近年来,线粒体的研究在生殖领域逐步开展,mt DNA与人类男性不育症的相关性研究己成热点。一系列研究发现线粒体基因片段缺失如4977bp等以及发生在POLG、ND4、t RNA、ATPase6等线粒体基因上的点突变与弱精症存在相关性。为进一步阐述弱精症的分子机制,明确弱精症的诊断和靶向治疗提供依据。

人类无精症相关新基因ZNF313启动子的初步分析

采用PCR方法扩增了ZNF313基因的启动子序列,构建了含人ZNF313基因启动子不同片断的荧光素酶报告基因表达体系.以pRLTK为内参照质粒,瞬时转染HEK293T细胞,48h后收集细胞,测定荧光素酶的相对表达活性.结果发现,在ZNF313基因的启动子区域构建了4种荧光素酶报告基因表达体系,即pGL3215(-215bp～+38bp)、pGL3160(-160bp～+38bp)、pGL3133(-133bp～+128bp)和pGL38(-8bp～+128bp).其中pGL3215表达载体的荧光素酶相对表达活性最高;pGL3160和pGL3133表达载体的荧光素酶相对表达活性几乎相同,且是pGL3215的75%;而pGL38的荧光素酶相对表达活性急剧下降,接近于零.这表明,-133bp～-8bp区域内含有人ZNF313基因转录所必需的启动子序列.生物信息学的分析表明,两个SP1、一个AP2和一个TAg是人ZNF313基因启动子所必需的.

神经黏液样变性与精索静脉曲张相关阴囊疼痛相关性研究

目的研究精索静脉曲张伴阴囊和(或)腹股沟区疼痛患者精索内神经是否存在病理学改变。方法选取2019年1月至6月南京大学医学院附属鼓楼医院收治的62例因精液问题拟行手术的原发性精索静脉曲张患者作为研究对象。根据患者是否伴有阴囊和(或)腹股沟区疼痛不适分为疼痛组(n=28)和非疼痛组(n=34)。搜集患者的基线资料,术中留取精索筋膜、精索内脂肪组织标本。显微镜观察标本内神经是否存在病理学改变。随访患者术后疼痛缓解、精液质量等情况。结果疼痛组中4例精索筋膜内神经存在黏液样变性改变;非疼痛组中未发现病变神经。病史对病变情况有显著影响(P<0.05,OR=1.163)。患者术后疼痛及精液质量均得到改善。结论伴有阴囊和(或)腹股沟区疼痛不适的部分精索静脉曲张患者,其精索筋膜内的神经存在黏液样变性。精索静脉曲张性的阴囊和(或)腹股沟区疼痛不适可能与精索筋膜内神经的病变有关,精索筋膜内神经的变性可能是精索静脉曲张疼痛的病因之一。

一种应用于射频系统群时延测量的相关峰精化算法

该文提出一种应用于射频系统群时延测量的相关峰精化算法,用于提高调制法测量群时延的测量精度。该算法通过对信号进行预先插值而后相关的方式,降低了对采样率的要求;获得比传统算法更高的精度,并利用小波去噪增强了低信噪比条件下的鲁棒性。基于matlab的仿真表明,该算法能够更精确地获得一个采样间隔以内的时延部分,验证了其有效性及优势。

多站雷达航迹相关的工程实现

针对多站雷达航迹自动融合在工程上难以实现的问题,提出了一种应用工程实现的多站雷达航迹自动相关方法.该方法可大大减少计算量,工程实现方便实用,经过国家地(市)级边海防系统中的应用证明其有效性和可靠性.

急性脑梗死病人血清中环状RNA Carm1的表达情况及与脑损伤严重程度的关系

目的:探究急性脑梗死(ACI)病人血清中环状RNA共激活因子相关的精氨酸甲基转移酶1(circCarm1)的表达情况及与脑损伤严重程度的关系。方法:选取我院2021年1月-2022年1月收治的115例ACI病人为研究对象,即ACI组,选取同期的健康体检者100名为对照组。ACI病人根据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分分为轻度组(39例)、中度组(40例)、重度组(36例);根据梗死灶体积分为小梗死亚组(38例)、中梗死亚组(41例)、大梗死亚组(36例)。采用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测血清中circCarm1 RNA表达水平;Pearson或Spearman法分析circCarm1 RNA表达水平与NIHSS评分、梗死范围的相关性。结果:ACI组circCarm1 RNA表达水平高于对照组(P<0.05);重度组circCarm1 RNA表达水平、NIHSS评分高于中度组及轻度组,中度组高于轻度组(P<0.05);circCarm1 RNA的表达水平与NIHSS评分呈正相关(P<0.05);ACI病人大梗死亚组circCarm1 RNA表达水平高于中梗死亚组和小梗死亚组,中梗死亚组高于小梗死亚组(P<0.05);ACI病人circCarm1 RNA表达与梗死范围呈正相关(r=0.325,P<0.05)。结论:ACI病人血清circCarm1 RNA表达水平异常增加,其水平与脑损伤严重程度有关。

时差法超声波流量检测三步互相关算法研究

对时差法超声波流量检测中互相关算法计算量大的问题进行了研究，指出了减少计算量的3个方面———参与运算的数据容量、每次相关运算乘加次数和相关运算的累计次数，提出了一种采用预处理、粗相关和精相关三步相关算法，将计算量减少3～5个数量级；并以λ型超声波流量检测方法中的三步互相关算法为例，将整体运算时间控制在ms级，达到了实时性要求，为Z型、V型等时差法超声波流量检测的互相关算法大幅度减少计算量提供了一种有效的解决方案。

DA、CARM1、25-(OH)-D 3在糖尿病患者外周血中的表达及与NAFLD发生的关系

目的探讨多巴胺(DA)、共激活剂相关精氨酸甲基转移酶1(CARM1)、25-羟维生素D 3[25-(OH)-D 3]在糖尿病患者外周血中的表达及与非酒精性脂肪肝(NAFLD)发生的关系。方法选取2021年5月至2023年2月在该院治疗的2型糖尿病(T2DM)合并NAFLD患者70例作为T2DM合并NAFLD组,同时选取单纯T2DM患者66例作为T2DM组,选取体检健康者70例作为健康组,比较各组外周血DA、CARM1、25-(OH)-D 3水平,同时分析T2DM合并NAFLD组不同血糖控制、严重程度患者外周血DA、CARM1、25-(OH)-D 3水平。采用Pearson相关分析外周血DA、CARM1、25-(OH)-D3水平与糖化血红蛋白(HbA1c)、受控衰减参数(CAP)的相关性,受试者工作特征曲线分析外周血DA、CARM1、25-(OH)-D 3诊断重度NAFLD的价值。结果T2DM合并NAFLD组外周血DA和25-(OH)-D 3水平明显低于T2DM组和健康组(P<0.05),而CARM1水平明显高于T2DM组和健康组(P<0.05);T2DM组外周血DA和25-(OH)-D 3水平明显低于健康组(P<0.05),而CARM1水平明显高于健康组(P<0.05)。T2DM合并NAFLD组血糖控制差者DA和25-(OH)-D 3水平明显低于血糖控制好者(P<0.05),而CARM1水平明显高于血糖控制好者(P<0.05)。重度患者DA和25-(OH)-D 3水平明显低于轻中度患者(P<0.05),而CARM1水平明显高于轻中度患者(P<0.05)。外周血DA、25-(OH)-D 3水平与HbA1c、CAP呈负相关(P<0.05),CARM1水平与HbA1c、CAP呈正相关(P<0.05)。CARM1、25-(OH)-D 3、DA诊断重度NAFLD的曲线下面积分别为0.858(95%CI 0.768~0.948)、0.922(95%CI 0.856~0.989)、0.571(95%CI 0.427~0.715)。结论DA和25-(OH)-D 3水平在T2DM患者外周血中降低,而CARM1水平升高,尤其在T2DM合并NAFLD患者中变化更加明显;DA、CARM1、25-(OH)-D 3水平与血糖控制、NAFLD严重程度存在相关性,其中CARM1、25-(OH)-D 3水平在诊断重度NAFLD方面有一定应用价值。

LncRNA SNHG11通过抑制miR-184/CARM1信号轴促进卵巢癌生长

目的探讨长链非编码RNA核仁小分子RNA宿主基因11(LncRNA SNHG11)靶向调控miR-184/CARM1信号轴对卵巢癌细胞的影响及其机制。方法实时荧光定量PCR检测卵巢癌组织与细胞中LncRNA SNHG11表达及卵巢癌细胞miR-184表达。将卵巢癌SKOV3细胞分为si-NC组、si-SNHG11组、si-SNHG11+anti-NC组、si-SNHG11+anti-miR-184组、miR-NC组、miR-184 mimics组、miR-184 mimics+pcDNA组、miR-184 mimics+CARM1组,分别检测各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及CARM1、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达,裸鼠成瘤实验检测各组细胞在动物体内成瘤能力,双荧光素酶报告基因实验检验miR-184与LncRNA SNHG11、CARM1的靶向关系。结果LncRNA SNHG11在卵巢癌组织与细胞中表达升高,miR-184在卵巢癌细胞中表达降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-SNHG11组SKOV3细胞增殖、迁移与侵袭能力下降,瘤体质量与体积减小,N-cadherin表达降低,细胞凋亡率与E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);与si-SNHG11+anti-NC组比较,si-SNHG11+anti-miR-184组SKOV3细胞增殖、迁移与侵袭细胞能力升高,瘤体质量与体积增大,N-cadherin蛋白表达升高,细胞凋亡率与E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-184 mimics组SKOV3细胞增殖、迁移与侵袭能力下降,瘤体质量与体积减小,N-cadherin蛋白表达降低,细胞凋亡率与E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);与miR-184 mimics+pcDNA组比较,miR-184mimics+CARM1组SKOV3细胞增殖、迁移与侵袭能力升高,瘤体质量与体积增大,N-cadherin蛋白表达升高,细胞凋亡率与E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05);LncRNA SNHG11靶向调控miR-184/CARM1信号轴。结论LncRNA SNHG11通过调节miR-184/CARM1信号轴,促进卵巢癌生长。

促性腺激素抑制激素的研究进展

促性腺激素抑制激素(GnIH)是近年在鸟类首先发现的一种神经肽,C端具有精氨酰-苯丙酰胺(RF酰胺),GnIH及其受体在脑和多种器官分布,具有抑制促性腺激素合成和分泌、刺激摄食等作用。在哺乳动物发现C端具有RF酰胺的多肽,为鸟类GnIH类似物,具有相似的作用和组织分布。本文对GnIH的发现、结构、受体、分布定位、生理功能和作用机制进行了综述。

多囊卵巢综合征大鼠模型AR与CARM1及其产物的表达

目的:探讨脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)诱导的SD大鼠多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)模型效果,检测该模型中雄激素受体(androgen receptor,AR)与共激活因子相关的精氨酸甲基转移酶1(coactivator-associated arginine methyltransferase 1,CARM1)表达情况,研究PCOS模型中胰岛素抵抗、激素改变、AR与CARM1及其产物非对称二甲精氨酸(asymmetric dimethylarginines,ADMA)之间的关系。方法:将40只23日龄雌性SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组20只,实验组每日皮下注射DHEA 0.6 mg/kg,对照组同时同位置注射等量注射用油。连续20 d后观察大鼠卵巢组织学形态及体质量、性激素、空腹血糖、胰岛素(insulin,Ins)及血清ADMA变化,评价胰岛素抵抗情况,并用免疫组化确定CARM1在卵巢组织中的表达情况,Western blot及荧光定量PCR检测卵巢AR、CARM1蛋白及m RNA转录表达情况。结果:PCOS实验组最终体质量、增加体质量、卵巢重量均明显高于对照组(P<0.05);血清空腹血糖、胰岛素、胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment index,HOMA index)、ADMA、睾酮(testosterone,T)、雌二醇(estrodiol,E2)均明显高于对照组(P<0.05);实验组卵巢出现大量闭锁卵泡、囊状卵泡,颗粒细胞层减少,卵母细胞消失等特征;卵巢组织中的CARM1主要由颗粒细胞表达;AR、CARM1蛋白量及m RNA表达量实验组明显高于对照组(P<0.05)。结论:CARM1及其产物ADMA与PCOS高雄激素血症、排卵功能障碍和胰岛素抵抗之间存在相关性,但二者与PCOS上述三大病理生理特点之间的内在联系及其具体机理仍需要进一步验证。

miR-149靶向调控CARM1基因对直肠癌细胞放疗敏感性

目的研究miR-149对直肠癌细胞活性、凋亡及辐照敏感性的影响及作用机制。方法运用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人结直肠上皮细胞HCEpiC、直肠癌细胞HT29中miR-149的表达;将miR-con组(转染miR-con)、miR-149组(转染miR-149 mimics)、miR-149+pcDNA组(共转染miR-149 mimics和pcDNA)、miR-149+pcDNA-共激活相关精氨酸甲基转移酶(CARM)1(共转染miR-149 mimics和pcDNA-CARM1)、IR+miR-con组(转染miR-con)、IR+miR-149组(转染miR-149 mimics)、IR+miR-149+pcDNA组(共转染miR-149 mimics和pcDNA)、IR+miR-149+pcDNA-CARM1(共转染miR-149 mimics和pcDNA-CARM1)均用脂质体法转染至HT29细胞,各IR组再进行4 Gy照射;噻唑盐(MTT)法检测各组细胞的活性;Western印迹检测各组细胞中CARM1、B细胞淋巴瘤(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;克隆形成试验检测各组细胞的存活分数;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与人结直肠上皮细胞HCEpiC组相比,直肠癌细胞HT29中miR-149表达明显下调,CARM1表达明显上调(P<0.05);过表达CARM1可逆转过表达miR-149对HT29细胞的活性抑制,凋亡促进及辐照增敏作用。miR-149可抑制野生型CARM1细胞的荧光活性,又可负向调控CARM1的蛋白表达。结论miR-149可抑制直肠癌细胞的活性,促进细胞凋亡,增强其对放射治疗的敏感性,其机制可能与靶向CARM1有关。

胚胎发育相关基因精子转录本在白血病细胞系中的表达及其调节

目的探讨胚胎发育相关基因(EDAG)在白血病细胞中的调控机制。方法用半定量RT-PCR方法检测白血病细胞系中EDAG精子转录本EDAG-t的表达;使用不同的分化诱导剂诱导K562和U937细胞分化,检测EDAG-t的表达改变情况。结果在白血病细胞系K562和U937中也可检测到EDAG-t的表达;使用不同的分化诱导剂诱导K562和U937细胞分化,发现EDAG精子转录本和造血转录本的表达都会随细胞分化而下调,但它们的下调步伐不一致,总的说来,EDAG-t的减弱较EDAG-h慢。结论EDAG精子转录本在白血病细胞中的异常表达值得进一步研究。

miRNA-543调控DAZAP2基因对胃癌细胞5-氟尿嘧啶耐药的影响及其机制

目的 检测微小RNA-543(miR-543)在胃癌中的表达及预后价值,进一步探讨miR-543对胃癌细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的影响和作用机制。方法 选取河北医科大学第四医院2019-06-01-2021-10-31收治的50例胃癌组织和癌旁正常黏膜组织作为研究对象,采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测50例胃癌和癌旁正常黏膜组织中miR-543的表达,记录患者术后接受替吉奥(5-FU衍生物)联合奥沙利铂(SOX)方案化疗的无病生存期(DFS)。培养正常胃上皮细胞株GES-1、胃癌细胞株AGS和对5-FU耐药细胞株AGS/5-FU,用qRT-PCR法检测miR-543的表达;在miR-543抑制物转染AGS/5-FU细胞株后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测AGS/5-FU对5-FU的敏感性;qRT-PCR和蛋白质印迹法检测转染前后AGS/5-FU细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、无精症相关蛋白2(DAZAP2)、p53、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和胸苷酸合成酶(TS)的表达。生物信息学分析miR-543的靶向基因,并用双荧光素酶报告基因分析对其进行验证。通过DAZAP2回复实验进一步验证miR-543的作用。采用配对t检验比较miR-543在胃癌组织与癌旁正常组织的表达差异;采用独立样本t检验比较抑制miR-543后胃癌5-FU敏感性的差异;采用单因素方差分析探究调控miR-543表达后,Bcl-2、Bax、DAZAP2、p53、MRP1、TS的表达差异。结果 miR-543在胃癌组织中的表达水平(1.031±0.408)高于癌旁正常组织(0.236±0.056),t=13.640,P<0.001;高表达miR-543的患者DFS短于低表达miR-543患者,P=0.008。qRT-PCR法结果显示:miR-543在AGS/5-FU细胞中的表达水平(7.223±1.260)高于GES-1(1.306±0.285)和AGS细胞(3.286±1.166),F=16.050,P=0.004;抑制AGS/5-FU细胞株中miR-543的表达后,AGS/5-FU细胞对5-FU的敏感性(0.452±0.168)增加,F=12.003,P=0.008。生物信息学分析结果显示,DAZAP2是miR-543的直接靶基因。蛋白质印迹法和qRT-PCR法结果显示,在抑制miR-543表达后,AGS/5-FU细胞中Bcl-2、TS表达减少,Bax、DAZAP2、p53表达增加,MRP1表达无明显变化。双荧光素酶报告基因分析证实miR-543对DAZAP2有直接调控功能。在AGS/5-FU细胞中抑制miR-543的同时过表达DAZAP2,发现对5-FU的敏感性增加,Bcl-2、TS、Bax、p53等蛋白的表达有所恢复。结论 miR-543可能通过抑制DAZAP2基因参与胃癌细胞5-FU耐药的形成。

CARM1表达与食管癌细胞增殖和迁移相关性的研究

为探讨共激活相关精氨酸甲基转移酶1(coactivator-associated arginine methyltransferase 1,CARM1)对食管癌细胞增殖和迁移能力的影响,采用免疫组织化学方法检测食管癌组织和癌旁组织中CARM1的表达情况,利用特异的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)分别敲低食管癌细胞株KYSE510和TE-1中CARM1的表达,通过过表达质粒上调食管癌细胞株KYSE150和ECA9706中CARM1的表达,采用CCK-8生长曲线试验和平板克隆形成试验检测CARM1敲低和上调后的食管癌细胞增殖能力的变化情况,并采用Transwell细胞迁移试验检测细胞迁移能力的变化情况。结果显示,与癌旁组织比较,CARM1蛋白在食管癌组织中高表达(P<0.01);敲低CARM1后食管癌细胞的迁移和增殖能力减弱(P<0.05);过表达CARM1后食管癌细胞的迁移和增殖能力增强(P<0.05)。提示CARM1在促进食管癌细胞生长和恶性肿瘤进展过程中发挥重要作用。

CARM1在恶性肿瘤中的作用与机制研究进展

共激活蛋白相关的精氨酸甲基转移酶1(coactivator-associated arginine methyltransferase 1,CARM1)是蛋白质精氨酸甲基转移酶(protein arginine methyltransferase,PRMT)家族的成员,又称PRMT4。近年来,CARM1作为一种辅助转录调节因子已被广泛研究,并被发现在肿瘤、炎性疾病、糖尿病等疾病中具有重要作用。一方面,CARM1通过调节翻译后甲基化修饰参与表观遗传调控,另一方面通过RNA代谢、代谢重编程等形式调控基因表达过程。随着研究的深入,CARM1在恶性肿瘤中的调控作用及分子机制逐步被揭示,但其在不同肿瘤中的调控效应不尽相同,目前需进一步探索其在恶性肿瘤中的调控网络机制。本文就近年来恶性肿瘤中CARM1的作用及其分子机制展开综述,以期为今后的研究提供新思路。