精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽表面修饰多孔钽对软骨细胞黏附、增殖和分泌功能的促进作用

目的:研究精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)多肽表面修饰多孔钽(Ta)对软骨细胞黏附、增殖和分泌功能等生物学行为的影响,探讨RGD/软骨细胞/多孔钽复合物作为软骨组织工程支架材料修复软骨缺损、促进软骨再生的可行性。方法:通过物理吸附的方法将不同浓度RGD肽及Ⅱ型胶原(ColⅡ)吸附于多孔钽表面,分为Ta-RGD组、Ta-ColⅡ组、Ta-RGD/ColⅡ0.2g·L-1组、Ta-RGD/ColⅡ1.0g·L-1组、Ta-RGD/ColⅡ5.0g·L-1组、Ta-RGD/ColⅡ10.0g·L-1组及纯Ta组。分离培养新西兰幼兔关节软骨细胞,取第2代细胞种植于修饰前后多孔钽使其成为RGD/软骨细胞/多孔钽复合物;扫描电镜观察RGD/软骨细胞/多孔钽复合物形貌特征以及软骨细胞生长状态,沉淀法检测多孔钽修饰前后软骨细胞黏附率,MTT法检测多孔钽修饰前后软骨细胞的增殖水平,羟脯氨酸法测定软骨细胞分泌功能。结果:多孔钽经RGD修饰后各组软骨细胞黏附率均高于修饰前(P<0.05),其中黏附效果最好的是4h的Ta-RGD/ColⅡ5.0g·L-1组,同时各组间黏附率比较差异有统计学意义(P<0.05)。扫描电镜下各组软骨细胞在修饰后的多孔钽表面生长状态良好,细胞在多孔钽表面及孔隙内生长,分泌细胞外基质覆盖于多孔钽表面;MTT检测,多孔钽经RGD修饰后各组软骨细胞增殖水平均高于修饰前(P<0.05),其中增殖效果最好的是13d的Ta-RGD/ColⅡ1.0g·L-1组;羟脯氨酸检测,Ta-RGD/ColⅡ1.0g·L-1组羟脯氨酸水平高于其他各组(P<0.05)。结论:RGD多肽可有效加强软骨细胞在多孔钽表面及孔隙内的黏附及增殖,对软骨细胞的分泌有促进作用。

精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽类似物与新生血管内皮靶向治疗

背景:血管内皮是缺血、血栓、炎症、水肿、氧化应激等病理损伤中的重要部位,选择特异性的内皮细胞靶点成为药物介入治疗的关键。目的:分析和总结近年来精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽及精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽类似物作为特异性的内皮细胞靶点的研究。方法:分别以"RGD、整合素、靶向治疗","RGD、integrin、targetedtherapy"为检索词,应用计算机检索Pubmed数据库1998年1月至2011年12月有关文章。纳入有关血管新生的文献。排除与研究目的无关和内容重复者。保留42篇文献做进一步分析。结果与结论:整合素αvβ3是内皮细胞病理损伤及血管新生时的特异靶点,参与内皮细胞的迁移、增殖、分化过程。精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽及精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽类似物作为整合素和其配体相互作用的识别位点,能结合肿瘤或者病理损伤时新生血管表达增高的整合素αvβ3,介导细胞与细胞外基质及细胞之间的相互作用,可在新生血管显影、靶向药物递送、载体材料修饰中发挥重要作用。

近红外量子点连接的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽段荧光探针对口腔鳞状细胞癌的活体可视化成像

目的探索用精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）肽段连接的近红外量子点荧光探针对口腔鳞状细胞癌（OSCC）的原位可视化成像情况。方法将含有RGD序列的肽段与发射波长为800 nm的近红外量子点（QD800）偶联,制备QD800-RGD荧光探针。将人颊鳞状细胞癌BcaCD885细胞植入裸鼠颊部皮下建立OSCC模型。用QD800-RGD探针和CD105单克隆抗体对OSCC冰冻切片行直接免疫荧光双重染色,用激光扫描共聚焦显微镜观察QD800-RGD探针与肿瘤新生血管内皮细胞表达的整合素αvβ3的结合情况。将QD800-RGD探针通过尾静脉注射入OSCC模型动物,在不同时间点通过活体成像观察QD800-RGD对OSCC活体原位可视化动态成像情况。在12 h后处死荷瘤鼠取出肿瘤,检测QD800-RGD在体内与肿瘤新生血管内皮细胞表达的整合素αvβ3的结合情况。结果 QD800-RGD探针在体内和体外均能与OSCC肿瘤新生血管内皮细胞表达的整合素αvβ3特异性靶向结合。静脉注射QD800-RGD探针后能对体内OSCC进行清楚地可视化成像,在注射QD800-RGD后0.5-6 h内肿瘤成像最完整,信噪比最高,9 h时肿瘤荧光强度显著减低,但在12 h时仍能看到明显的肿瘤成像。结论以肿瘤新生血管内皮细胞表达的整合素αvβ3为靶点,利用QD800-RGD探针经静脉注射后能对OSCC进行清晰地可视化成像,在OSCC的诊断和个体化治疗等方面有巨大的发展前景。

精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸多肽层层自组装修饰钛片对小鼠成骨样细胞MC3T3-E1的影响

目的研究层层自组装精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸(RGD)多肽修饰钛片对小鼠成骨样细胞MC3T3-E1的影响。方法将纯钛试件随机分为3组:纯钛组(PT组)、NaOH处理钛片组(NT组)、RGD修饰钛片组(RT组)。根据分组对纯钛试件进行相应表面处理,扫描电子显微镜(SEM)观察试件表面形貌。将MC3T3-E1细胞在试件表面培养,采用SEM、3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测细胞的黏附和增殖能力,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测成骨细胞骨钙素、骨保护素mRNA的表达。结果 SEM观察到PT组试件表面存在均匀、较清晰的划痕结构,NT组试件表面出现微孔结构,RT组试件表面有类似小凸起结构,似网状。SEM观察到RT组细胞呈多边形且有大量丝状伪足,细胞伸展状态明显好于其余2组;MTT法显示RT组细胞的黏附率最高,无钛片对照组和PT组的细胞黏附率的差异无统计学意义,NT组细胞黏附率最低;RT组的细胞增殖率均高于其余3组(P<0.05),在1和3 d最为明显;RT-qPCR检测14 d时RT组骨钙素mRNA和骨保护素mRNA均高表达。结论 RGD多肽修饰钛片能促进小鼠成骨样细胞MC3T3-E1的黏附和增殖,并且能够上调骨钙素mRNA和骨保护素mRNA的表达。

细胞外信号调节激酶在精-甘-天冬-丝氨酸四肽诱导肝星状细胞凋亡中的作用

目的 探讨细胞外信号调节激酶 (ERK)在精 甘 天冬 丝氨酸 (RGDS)四肽诱导肝星状细胞 (HSC)凋亡中的作用。方法 将培养的HSC细胞分为 6组 :①空白对照组 ,②纤维连接蛋白 (FN)组 ,③FN +RGDS(2 5mg/L)组 ,④FN +RGDs(5 0mg/L)组 ,⑤FN +RGDS(10 0mg/L)组 ,⑥FN +精 甘 谷 丝氨酸 (RGES ,10 0mgL)组。采用3 H 胸腺嘧啶核苷 (3 H TdR)掺入法测定HSC增生 ;透射电镜和末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记 (TUNEL)方法测定HSC凋亡 ;甲苯胺兰染色法测定细胞粘附率 ;分别应用Western印迹和逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术测定ERK蛋白及其mRNA表达。结果 ① 2 5、5 0、10 0mg/L浓度的RGDS四肽呈剂量依赖性抑制HSC增生并诱导HSC凋亡 (P <0 .0 5 )。②RGDS四肽作用于HSC 2h ,HSC粘附率下降 (P <0 .0 1)。③在RGDS四肽干预组 ,HSC的ERK及其mRNA表达下调。结论 RGDS四肽可抑制HSCs增生并诱导其凋亡 ;RGDS四肽诱导HSCs凋亡的效应与其抗粘附作用、抑制ERK蛋白和ERK1mRNA表达有关。

四氢-β-咔啉-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸类肽缀合物对心脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨四氢-β-咔啉-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸类肽缀合物（THBCB-RGD）的自由基清除和抗血栓形成特性，并通过建立心脏缺血再灌注模型，观察其在心肌缺血再灌注损伤中的作用及影响。方法使用高效液相色谱法检测THBCB—RGD的稳定性；应用PC12细胞存活实验和乙酰胆碱诱发内皮细胞介导血管舒张实验评估THBCB—RGD自南基清除能力；应用体外抗血小板聚集实验评价THBCB—RGD抗血小板聚集活性；通过体内实验评价THBCB—RGD抗血栓活性；构建心脏缺血再灌注模型，观察THBCB—RGD干预对心肌氧化应激和心肌梗死的影响。结果高效液相色谱法结果显示我们所合成的THBCB—RGD自身稳定性较高（目标峰的消失时间分别为240、180、240min，平均220min，远高于文献所报道的四氢-β-咔啉前体的30min。P=0．005）。同时它们具有很强的清除NO、H2O2和·OH的能力（与前体比较P=0．004、0．000），亦可抑制血小板的聚集和血栓的形成（血小板的聚集率和血栓湿重合血栓千重差异均达到P=0．003或P=0．000）；心脏缺血再灌注损伤前给予THBCB—RGD预处理可降低心肌中MDA含量并减少心肌梗死面积。结论THBCB—RGD表现出强的自由基清除能力和抗血栓形成活性，并可通过抑制氧化应激反应和减少心肌梗死面积，从而在心脏缺血再灌注损伤中发挥保护作用。

采用^99Tcm标记的新精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽序列显示胶原诱导性关节炎大鼠滑膜血管翳形成的研究

目的观察放射性^99Tcm标记的新精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽序列（^99Tcm-3P4-RGD2）在胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠体内的分布与显像，探索单光子放射型计算机断层扫描仪（SPECT）下^99Tcm-3P4-RGD2成为RA治疗前后监测滑膜血管翳新生血管新标记物的可能性。方法建立Ⅱ型胶原诱导性鼠关节炎模型，分别设贝伐单抗（bevacizumab，商品名Avastin）治疗组、重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体．抗体融合蛋白（rhTNFR：Fc）治疗组和空白对照组，观察治疗前后3组大鼠足垫厚度变化，评估关节炎指数积分和^99Tcm-3P4-RGD2体内分布情况，计算四肢放射性核素平均计数率靶区摄取计数／纵隔摄取计数（T/NT）。酶联免疫吸附试验（ELISA）同步检测不同治疗组CIA大鼠治疗前后血清血管内皮生长因子（VEGF）表达水平。治疗完毕后将大鼠处死行后足远端趾间关节病理切片，分别做苏木素-伊红（HE）、番红O染色并评价关节炎病理损伤评分。免疫组织化学法检测3组大鼠滑膜组织中VEGF表达水平，半定量积分法评价VEGF染色结果。统计方法采用配对样本t检验。结果3组造模成功CIA大鼠四肢关节部位可出现异常放射性浓聚，其值分别为1．40±0．17，1．32±0．20，1．30±0．08，经过贝伐单抗和rhTNFR：Fc治疗后删T值均下降，分别为0．43±0．14，0．40±0．12差异有统计学意义（t=17．710，16．812，P〈0．05）。随着贝伐单抗和rhTNFR：Fc治疗后，滑膜血管翳新生血管减少，大鼠足垫厚度变化、关节炎指数积分和血清VEGF表达水平均随之下降，其T／NT值与上述指标呈正相关（贝伐单抗治疗组r=0．753，0．800，0．892，P〈0．01；rhTNFR：Fc治疗组r=0．701，0．502，0．481，P=0．001，0．024，0．032）。结论CIA大鼠尾静脉注射99Tcm-3P4-RGD2后，可较好地显示大鼠四肢关节病变部位，99Tcm-3P4-RGD2有可能会成为新型的RA治疗前后监测滑膜血管翳新生血管的显像剂。

精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽/肝素复合涂层在钛表面改性的研究

目的 利用层层自组装技术,在钛表面构建精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）肽/肝素复合涂层,提高其血液相容性,探讨该技术在人工材料表面改性领域的应用前景.方法 采用层层自组装技术,在预处理的钛试件表面构建RGD肽/肝素复合涂层;对钛表面涂层进行物理表征分析,评价其体内外血液相容性.结果 RGD肽/肝素复合涂层的体外溶血率为0.76％,该涂层可延长部分活化凝血酶原时间到（24.5±0.6）s,减少纤维蛋白原的吸附,减少血小板的黏附与激活,体内动物实验证实该涂层可减少表面血栓形成.结论 利用层层自组装技术形成的RGD肽/肝素复合涂层血液相容性高,有望成为一种新型的生物化钛表面.

精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽介导截短组织因子治疗大肠癌的实验研究

目的以精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）多肽重复序列作为截短组织因子（tTF）的载体，表达（RGD）3－tTF融合蛋白，研究（RGD）3-tTF融合蛋白对大肠癌的治疗作用。方法用3个串联的RGD多肽作为tTF的载体，构建（RGD）3-tTF融合基因，在大肠杆菌BL21（DE3）上表达并用镍柱纯化（RGD）3-fTF融合蛋白。在体外通过凝血实验检测（RGD）3-tTF融合蛋白的凝血活性。建立大肠癌小鼠动物模型，异硫氰酸罗丹明B（RBITC）标记（RGD）3-tTF、fTF融合蛋白，运用活体成像技术和共聚焦显微镜观察分析融合蛋白在大肠癌小鼠模型体内的定位。观察检测（RGD）3-tTF融合蛋白抑制肿瘤生长的能力。结果在Ca^2＋存在时，随着（RGD）3－tTF融合蛋白浓度的增加，凝血时间相应缩短，浓度为6μmol／L时凝血时间是（8．6±0．2）min，而浓度为0μmol／L时凝血时间〉30min（P〈0．05）。（RGD）3-tTF融合蛋白的凝血活性与tTF相仿（F=0．09，P〉0．05）。活体成像技术和共聚焦显微镜观察结果显示，注射标记了RBITC荧光的（RGD）3－tTF融合蛋白富集在小鼠的肿瘤血管腔。抑瘤实验中，（RGD）3－tTF融合蛋白能诱导肿瘤血管形成血栓，给药后第1、3、5天，（RGD）3-tTF组的肿瘤体积分别为（120．8±4．8）mm^3、（93．8±3．4）mm^3、（132．2±7．7）mm^3，均显著小于tTF组[（181．4±13．8）mm^3、（333．0±32．0）mm^3、（514．0±11．5）mm^3]和磷酸缓冲液（PBS）组[（182．6±11．5）mm^3、（332．8±21．0）mm^3、（524．2±16．7）mm^3]（P〈0．05），而tTF组和PBS组之间的肿瘤体积差异无统计学意义（P〉0．05）。结论成功制备的（RGD）3-tTF融合蛋白保留了组织因子的凝血活性并靶向定位在肿瘤血管，能诱导肿瘤血管形成血栓从而抑制肿瘤生长，有望成为治疗大肠癌的一种新方法。

纤维连接蛋白及精-甘-天冬-丝氨酸多肽对肝癌细胞化疗敏感性的影响

目的探讨纤维连接蛋白（FN）和精-甘-天冬-丝氨酸多肽（RGDS多肽）对肝癌细胞化疗敏感性的影响。方法将肝癌细胞株7721分为胎牛血清BSA处理组（BO组）、纤维连接蛋白FN处理组（FO组）、精-甘-天冬-丝氨酸RGDS多肽处理组（RO组）、FN＋RGDS多肽共同处理组（FR组），加入不同浓度的丝裂霉素C（MMC）作用2h、12h和24h，用MTT比色法检测不同时间肿瘤细胞的存活率，用荧光染色法和流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡，比较FN和RGDS对化疗作用结果的影响。结果不同浓度MMC作用2h后，FO组及BO组、FO组与FR组之间的存活率比较，差异无统计学意义（P〉0．05），而作用12h、24h后，FO组及BO组、FO组与FR组之间的存活率比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论药物作用一定时间后，FN能使MMC对肝癌细胞的促凋亡作用下降，产生药物耐受；而RGDS多肽上调肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。

(RGD)_3-tTF融合蛋白选择性结合结肠癌裸鼠模型肿瘤血管的实验研究

背景与目的:肿瘤血管作为肿瘤分子靶向治疗的靶点受到广泛的关注,近年来有报道称利用抗体(Ab@作为组织因子(TF@胞外区截短组织因子(truncated tissue factor,tTF@的载体,表达的抗体--截短组织因子(Ab-tTF@融合蛋白能够选择性结合肿瘤血管,诱发实体肿瘤组织血管栓塞,导致肿瘤衰退,但是该方法存在一些弊端。本实验旨在研究以精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(GRGDSP,RGD@多肽作为tTF载体所表达的(RGD@3-tTF融合蛋白选择性结合结肠癌裸鼠模型肿瘤血管的能力。方法:用3个串联的RGD多肽与tTF合成融合基因(RGD@3-tTF,表达于大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli@BL21(DE3@,用镍柱纯化融合蛋白。用RGD-tTF融合蛋白作对照,通过凝血实验和凝血因子Ⅹ(FⅩ@活化实验检测(RGD@3-tTF融合蛋白的凝血活性,运用间接酶联免疫吸附试验(ELISA@方法分析其特异性结合肿瘤血管标志物整合素αvβ3的能力。结肠癌裸鼠模型分为3组(每组1只@,肿瘤组织分别用异硫氰酸荧光素(FITC@标记的(RGD@3-tTF、RGD-tTF融合蛋白、tTF进行荧光染色,免疫荧光实验分析融合蛋白在结肠癌裸鼠模型组织的定位。结果:(RGD@3-tTF融合蛋白保留了组织因子的凝血活性,在Ca2+存在时随着融合蛋白浓度的增加,凝血时间相应缩短,浓度为6μmol/L时,凝血时间为(9.96±0.56@min(与对照组比较,P<0.01@。(RGD@3-tTF融合蛋白的浓度在1μmol/L以上时能有效活化FⅩ,其活化能力与RGD-tTF相似(F=0.147,P>0.05@。同浓度(RGD@3-tTF融合蛋白与整合素αvβ3的结合能力强于RGD-tTF(F=164.81,P<0.01@,当融合蛋白浓度为0.24μmol/L时,(RGD@3-tTF融合蛋白和RGD-tTF融合蛋白的A405nm分别为1.25和0.95。免疫荧光实验显示,(RGD@3-tTF融合蛋白富集于结肠癌裸鼠模型的肿瘤血管。结论:(RGD@3-tTF融合蛋白在保留组织因子凝血活性的同时通过高效、特异地结合肿瘤血管标志物整合素αvβ3,选择性地定位在结肠癌裸鼠模型的肿瘤血管上,为发展tTF作为效应因子的结肠癌分子靶向治疗奠定了基础。

99Tcm-3PRGD2SPECT显像用于胰腺癌荷瘤裸鼠动物实验及临床转化研究

本工作探讨了新型示踪剂99 Tcm-HYNIC-3PEG4-E[c(RGDfK)]2(99 Tcm-3PRGD2)用于胰腺癌的诊断价值及临床转化可行性。用免疫组化实验测定PANC-1胰腺癌细胞以及肿瘤组织中的整合素αvβ3的表达。将PANC-1胰腺癌细胞种植于BALB/c裸鼠肩部,建立合格的动物模型。以联肼尼克酰胺(HYNIC)作为双功能连接剂,采用无亚锡一步法制备99 Tcm-3PRGD2。在0.5~6.0h,每隔0.5h行一次荷瘤鼠99 Tcm-3PRGD2全身平面显像,观察全身分布情况,于肿瘤及健侧勾画感兴趣区(ROI,region of interest),计算肿瘤与本底(T/NT)的比值。对6例胰腺肿瘤患者行99 Tcm-3PRGD2单光子发射的计算机断层显像(SPECT),评估对胰腺癌的检出率。结果表明:PANC-1胰腺癌细胞以及肿瘤组织中高表达整合素αvβ3。99 Tcm-3PRGD2标记率大于99%。荷瘤鼠显像显示肿瘤对示踪剂摄取好,0.5h时即可见肿瘤显影,1.5h时T/NT达最大值,6.0h时肿瘤仍可清晰显示。99 Tcm-3PRGD2SPECT显像可检出6例患者的胰腺肿瘤原发灶和肝转移灶,检出率为100%。99 Tcm-3PRGD2是一种安全有效的示踪剂,特异性结合整合素αvβ3,99 Tcm-3PRGD2SPECT对胰腺癌的临床诊断具有潜在的应用前景。

PEG-PLA-PGL/RGD涂层支架对冠脉支架置入术后再狭窄的影响

目的探PEG-PLA-PGL/RGD涂层支架置入后对猪冠状动脉内皮化及内膜增生的影响。方法以PEGPLA-PLG聚脂肪酸为载体,通过载体接枝精氨酸-甘-天冬氨酸三肽聚合物(RGD),制成生物可降解高分子载RGD冠脉支架。实验分为裸支架组、紫杉醇涂层支架组、PEG-PLA-PGL/RGD涂层支架组,每组实验小型猪6只,将相应支架分别置入到每组猪的冠状动脉损伤段,分别4周及12周后处死,取出支架段血管行病理学观察及计算机图像分析测定管腔面积(lumen area,LA)、内弹力膜面积(internal elastic membrane area,IEMA),并根据LA及IEMA计算出新生内膜面积(neointima area,NA)及面积狭窄百分数(percentage of area stenosis,%AS)。结果 PEG-PLA-PGL/RGD涂层支架组内膜增生面积较裸支架组明显减低(P<0.05),PEG-PLA-PGL/RGD涂层支架组内膜增生面积与紫杉醇涂层支组无明显差别(P>0.05)。结论 PEG-PLA-PGL/RGD涂层支架较裸支架,可明显加速内皮修复,明显降低再狭窄的发生,是一极具前景研究方向。

经微弧氧化/碱处理并加载RGD肽涂层多孔钛合金支架的制备及其生物学特性

目的:通过3D打印技术打印多孔钛合金支架,研究其表面微弧氧化(MAO)/碱处理并加载精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)肽涂层对前成骨细胞生物学行为的影响。方法:设计并打印3D多孔钛合金支架,对其进行不同表面处理后分为MAO组、MAO/碱处理(MN)组、MAO/碱处理加载RGD肽(MNR)组,另设空白对照组。检测各组多孔钛合金支架的弹性模量,扫描电子显微镜(SEM)观察各组多孔钛合金支架表面微观结构,能谱分析仪(EDS)检测各组多孔钛合金支架表面元素构成,接触角测量仪检测各组多孔钛合金支架表面水滴接触角大小。将小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1细胞)与各组支架共培养,CCK-8法检测各组多孔钛合金支架表面细胞增殖活性,Live/Dead细胞染色法检测各组多孔钛合金支架的生物相容性,细胞黏附实验观察各组细胞在多孔钛合金支架表面黏附情况,采用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测各组细胞ALP活性,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中Runt相关转录因子2(Runx2)、骨桥素(OPN)和骨钙素(OCN)mRNA表达水平。结果:3D打印多孔钛合金支架的弹性模量为(1.17±0.62)GPa。SEM观察,MAO处理后的多孔钛合金支架表面呈现火山口样形貌,碱处理后出现细小裂纹并呈现纳米级鱼鳞结构,加载RGD肽涂层的多孔钛合金支架表面观察到散在的RGD颗粒。EDS检测,MNR组支架表面RGD涂层成功加载。接触角测量仪检测,多孔钛合金支架表面接触角MAO组>MN组>MNR组。CCK-8法,培养第1、3和5天时3组细胞增殖活性均呈增长趋势,培养第3和5天时各组细胞增殖活性组间比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。Live/Dead细胞染色,3组支架均具备良好的体外相容性。细胞黏附实验,共培养48 h后,MNR组细胞数量和形态伸展均优于MAO组和MN组。培养第7天时,与MAO组比较,MNR组细胞ALP活性明显升高(P<0.01),培养第14天时3组细胞ALP活性组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。RT-qPCR法检测,培养第7天时,与空白对照组和MAO组比较,MN组和MNR组细胞中Runx2和OPN mRNA表达水平均明显升高(P<0.01),MNR组细胞中OCN mRNA表达水平明显升高(P<0.05);培养第14天时,MAO组、MN组和MNR组细胞中Runx2和OPN mRNA表达水平组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),与空白对照组比较,MAO组、MN组和MNR组细胞中OCN mRNA表达水平均明显升高(P<0.01)。结论:3D打印多孔钛合金支架具有与人体骨组织匹配的弹性模量,支架表面MAO/碱处理并加载RGD肽涂层对MC3T3-E1细胞无毒性且对其成骨分化有促进作用。

RGD肽与肿瘤诊治的研究进展

目的 介绍精氨酸 甘氨酸 天冬氨酸 (RGD)肽在肿瘤诊治领域的研究现状、价值及发展前景。方法 对RGD肽在肿瘤诊治领域的实验研究新进展进行综述。结果 RGD肽存在于多种生物细胞外基质中 ,能特异性识别细胞表面整和素并与之结合 ,从而介导多种重要的生命活动。外源性RGD肽与肿瘤细胞表面整和素结合后 ,可作为体内RGD肽类物质的竞争性抑制剂 ,从而能抑制肿瘤细胞与细胞外基质的黏附与迁移、抑制肿瘤血管形成、诱导肿瘤细胞凋亡 ,且具有靶向性标记肿瘤显像以及与其他方法联合治疗肿瘤的潜在价值。结论 RGD肽能从多个环节对肿瘤起到抑制作用 。

RGD肽联合丝裂霉素C对荷人膀胱癌T24裸鼠肿瘤生长的抑制作用

目的:探讨纤维连接蛋白(FN)拮抗剂精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸三肽(RGD)联合丝裂霉素C(MMC)对荷膀胱癌T24裸鼠肿瘤生长的抑制作用。方法:建立荷膀胱癌T24裸鼠模型(n=32)。全部成瘤后随机分为4组:对照组(n=8):瘤体局部注射生理盐水,1次/3d;RGD组(n=8):瘤体局部注射RGD6μg/g,1次/3d;MMC组(n=8):瘤体局部注射MMC2μg/g,1次/3d;RGD+MMC组(n=8):瘤体局部注射RGD6μg/g和MMC2μg/g,1次/3d。连续治疗5周后处死动物,取出肿瘤称重,计算抑瘤率。结果:RGD+MMC、MMC组抑瘤率分别为77.6%和67.4%;与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);RGD+MMC组、MMC组肿瘤生长速度明显慢于对照组和RGD组;RGD+MMC组、MMC组肿瘤体积分别为(351.4±86.5)mm3及(520.6±121.9)mm3,均明显小于对照组(1613.9±460.2)mm3(P<0.05);RGD+MMC组、MMC组肿瘤重量分别为(366.5±93.4)mg及(534.7±135.6)mg,均明显小于对照组(1639.5±479.2)mg(P<0.05)。结论:FN拮抗剂RGD肽可协同MMC抑制荷膀胱癌T24裸鼠肿瘤的生长;RGD肽联合MMC治疗膀胱移行细胞癌可能有较好的临床应用前景。

RGD肽修饰PEEK表面及其与成骨细胞的相容性

采用丙烯酸等离子体处理聚醚醚酮(PEEK)表面,引入羧基(—COOH),并利用—COOH将具有生物活性的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)肽化学键合在PEEK的表面;通过X射线光电子能谱仪、水接触角测量仪、表面轮廓仪和万能材料试验机对表面处理前后的PEEK进行表征,并采用MC3T3-E1成骨细胞来评价表面修饰的PEEK的细胞相容性。结果表明,—COOH被成功地引入至PEEK表面,并且RGD肽成功地键合在等离子体羧基化的PEEK表面;丙烯酸等离子体处理和RGD肽的修饰均改善了PEEK表面的亲水性,增加了其表面的粗糙度;等离子体处理和RGD肽的修饰均未影响PEEK的拉伸强度及弯曲强度;等离子体处理和RGD肽的修饰均能改善PEEK表面成骨细胞的黏附、铺展与增殖,但RGD肽修饰的PEEK表面对于促进细胞黏附、铺展与增殖的效果明显优于等离子体羧基化的PEEK表面。

负载RGD的PLA-HA骨仿生支架促进骨缺损早期修复的研究

目的:使用精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽(RGD)修饰骨仿生支架并探究其应用于大鼠股骨缺损区的成骨性能。方法:通过三维(3D)打印技术制备聚乳酸-羟基磷灰石支架(PLA-HA),在其表面修饰甲基丙烯酰化明胶(GelMA)和RGD构建复合水凝胶支架PLA-HA/GelMA/RGD(PHD),扫描电镜(SEM)表征支架表面形貌,CCK-8实验评估骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖能力。将18只SD大鼠随机均分为3组(n=6)制备股骨缺损模型,分别植入PLA-HA/GelMA(PHG)、PHD支架,空白对照组不植入。于术后4周拍摄Micro-CT测算骨缺损面积和新生骨指标,并对缺损区的股骨样本进行HE染色和Masson三色染色观察组织学形态。结果:SEM观察到支架和水凝胶孔径明显,同时水凝胶稳健的连接到支架表面;CCK-8结果显示与PHG组相比,PHD组显示细胞增殖活性更佳。术后4周,Micro-CT三维重建图像显示空白组和PHG组新骨形成较少,PHD组骨缺损内部见大量新骨形成,同时定量分析发现该组骨体积分数、骨小梁厚度均显著大于空白组和PHG组。组织学染色结果显示PHD组形成连续且致密的骨组织。结论:负载RGD的PLA-HA骨仿生支架在体外具有促进成骨细胞增殖的能力,同时在体内诱导大鼠股骨缺损区新骨形成,成功地实现了早期骨缺损修复。

RGD和泊洛沙姆F127共修饰载多西紫杉醇脂质体的制备及体外抗卵巢癌的初步研究

目的制备精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸三肽序列(RGD)和泊洛沙姆F127共修饰载多西紫杉醇脂质体(DTX-F127-RGD-LP)并研究其对卵巢癌体外抗肿瘤效应。方法采用薄膜水化法制备DTX-F127-RGD-LP,通过电镜测定其形态,并进行粒径、电位、包封率、载药量等表征的测定及体外稳定性的考察;以香豆素6为荧光探针考察SKOV3细胞对修饰的脂质体的摄取情况,通过加入不同的内吞抑制剂研究修饰的脂质体的摄取机制;采用MTT法及结晶紫染色法考察修饰的脂质体对SKOV3细胞的毒性。结果DTX-F127-RGD-LP粒径为(107.2±0.67)nm,电位为-(19.7±0.4)mV,包封率为86.4%,载药量为2.7%,体外稳定性良好。RGD和泊洛沙姆F127修饰后显著增加SKOV3细胞对脂质体的摄取量,DTX-F127-RGD-LP的内吞主要通过小窝蛋白、巨胞饮以及整合素蛋白途径摄取进入细胞。与未修饰的脂质体相比,DTX-F127-RGD-LP对SKOV3细胞毒性最大,结晶紫染色法的结果与MTT结果一致,经计算DTX-F127-RGD-LP的IC50值为0.039μg·mL^(-1)。结论DTX-F127-RGD-LP能显著增强体外卵巢癌细胞的摄取,提高体外抗卵巢癌效应。